CN107625771A - 一种miR‑17基因抑制剂及用于治疗胃癌的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种miR‑17基因抑制剂及用于治疗胃癌的用途。本发明证实，磺酰胺衍生物A、C能有效抑制miR‑17表达，可以制备成miR‑17表达抑制剂；该磺酰胺衍生物通过抑制miR‑17表达可以有效抑制胃癌细胞增殖，可以开发成抑制胃癌生长的药物。现有技术未见该磺酰胺衍生物在抑制miR‑17表达和抑制胃癌生长方面的报道。
Description
技术领域
本发明涉及基因药物领域，尤其涉及一种miR-17基因抑制剂及用于治疗胃癌的用途。
背景技术
已知miR-17在多种肿瘤细胞中表达异常，如在胃癌细胞株中表达明显上调，miR-17抑制剂可以有效抑制胃癌细胞的增殖，并促进其凋亡(参考文献：特异性微小RNA抑制剂对胃癌细胞增殖的影响，中国病理生理杂志，2009)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种miR-17基因抑制剂及用于治疗胃癌的用途。
为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：
一种磺酰胺衍生物用于制备miR-17抑制剂的用途，其化学结构如下：
其中，R为(CH2)n，n为1或3。
一种miR-17抑制剂组合物，包含上述的磺酰胺衍生物，还包含药学上可以接受的载体，制成药学上可以接受的剂型。
优选地，所述药学上可以接受的载体包括一种或多种固体、半固体或液体辅料等。
优选地，所述药学上可以接受的剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂等。
上述的磺酰胺衍生物在制备抑制胃癌增殖的药物中的应用。
上述的组合物在制备抑制胃癌增殖的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明证实，磺酰胺衍生物A、C能有效抑制miR-17表达，可以制备成miR-17表达抑制剂；该衍生物通过抑制miR-17表达可以有效抑制胃癌细胞增殖，可以开发成抑制胃癌生长的药物。现有技术未见该磺酰胺衍生物在抑制miR-17表达和抑制胃癌生长方面的报道。
附图说明
图1是磺酰胺衍生物A-C对SGC-7901细胞中miR-17表达水平(miR-17/U6)的影响。
图2是磺酰胺衍生物A、C对SGC-7901细胞的半数抑制浓度IC50值(μM)。
具体实施方式
实施例1：
一、实验材料
磺酰胺衍生物A、B、C参照文献方法自制，化学结构如下表：
人胃癌SGC-7901细胞株由本公司长期冻存，使用前进行复苏。
RPMI-1640培养基、胎牛血清均购于美国GIBCO公司。
二、实验方法
1、细胞培养和分组
人胃癌细胞株SGC-7901培养于含10％小牛血清的RPMI1640培养液中，置于37℃、CO2体积分数为5％的培养箱中培养。1-2d换液，每3-4d传代1次，实验时选用对数生长期细胞。
取对数生长期的SGC-7901细胞，调整细胞密度为1×106个/ml，随机分组如下：
磺酰胺衍生物A组：使用含0.5、2、5、25、50μM磺酰胺衍生物A的培养基孵育24h；
磺酰胺衍生物B组：使用含0.5、2、5、25、50μM磺酰胺衍生物B的培养基孵育24h；
磺酰胺衍生物C组：使用含0.5、2、5、25、50μM磺酰胺衍生物C的培养基孵育24h；
对照组：使用不添加药物的空白培养基孵育24h。
2、RT-PCR法测定miR-17表达水平
提取总RNA：收集各组培养24h的SGC-7901细胞，按德国QIAGEN有限公司产品miRNeasy Mini kit试剂盒说明书进行样本总RNA提取。用超微量核酸蛋白测定仪(Thermo美国)测定提取样本的总RNA浓度及纯度，待用于后续实验。
逆转录合成cDNA：按照QIAGEN miScriptⅡRT kit反转录试剂盒说明书进行，反应体系20μl：5×HIFlex Buffer 4μl，10×Nucleics Mix 2μl，RT Enzyme Mix 2μl，TotalRNA(浓度约20ng/μl)+RNase-Free H2O2共12μl。反应条件：37℃60min，95℃5min。反应在美国Bio-Rad C1000Touch PCR仪上进行。
实时荧光定量PCR反应：采用QIAGEN miScript SYBR Green PCRkit试剂盒，反应体系20μl：2×Quantitect SYBR Green PCR Master Mix 10μl，10×miScript PrimerAssay 2μl，10×miScript Universal Primer 2μl，RNase-FreeH2O25μl，模板cDNA 1μl。miR-17特异性引物及U6内参引物均购自德国QIAGEN有限公司产品。反应在荧光定量PCR仪(Rotor Gene-Q德国)上进行，反应条件：95℃15min，1个循环；94℃15s，55℃30s，70℃30s，40个循环。每个样本做3个复孔，在相同反应条件下同时检测miR-17和U6的扩增情况，程序运行结束后利用Rotor-Gene Q Series Software软件进行数据分析，计算miR-17相对U6表达量。
3、MTT法检测胃癌细胞增殖率
将SGC-7901细胞密度调整为1.0×106个/mL，接种于96孔培养板中，每孔200μL。置于37℃、CO2体积分数为5％及饱和湿度的培养箱内培养。待细胞贴壁后按照上述分组方法于给药组加入磺酰胺衍生物A或B或C，使其终浓度分别为0.5、2、5、25、50μM。培养24h后，每孔加入MTT(50mg/mL)20μL，继续培养4h后，吸去培养液，每孔加入二甲基亚砜150μL，在酶标仪波长570nm处测定吸光度(A)值。每组实验重复3次，取均值。计算细胞抑制率，细胞抑制率＝(1-A给药组/A对照组)×100％。
使用改良寇氏法计算药物半数抑制浓度IC50值。
二、实验结果
1、药物孵育处理对miR-17表达水平的影响
如表1和图1所示，与对照组相比，磺酰胺衍生物A、C各剂量组均可见miR-17表达水平显著下调(P＜0.05)，磺酰胺衍生物B各剂量组miR-17表达量均未见明显下调(P＞0.05)。
表1磺酰胺衍生物A-C对SGC-7901细胞中miR-17表达水平(miR-17/U6)的影响
该结果表明，磺酰胺衍生物A、C均可以下调SGC-7901细胞中miR-17表达水平，磺酰胺衍生物B在测试浓度范围内不能下调SGC-7901细胞中miR-17表达水平，磺酰胺衍生物A、C为SGC-7901细胞中miR-17表达水平的有效抑制剂。
2、药物孵育处理对SGC-7901细胞增殖的影响
细胞增殖抑制试验结果显示，磺酰胺衍生物A、C以剂量依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞的增殖，各剂量组SGC-7901细胞的存活率与对照组存在显著性差异(P＜0.05)；磺酰胺衍生物B各剂量组对SGC-7901细胞的增殖抑制作用不明显，SGC-7901细胞的存活率与对照组的差异不显著(P＞0.05)。磺酰胺衍生物A、C的IC50值如表2和图2。
表2磺酰胺衍生物A、C对SGC-7901细胞的半数抑制浓度IC50值(μM)
| 磺酰胺衍生物A | 磺酰胺衍生物C | |
| IC50值(μM) | 5.6 | 4.9 |
上述实施例证明，磺酰胺衍生物A、C能有效抑制miR-17表达，可以制备成miR-17表达抑制剂；该衍生物通过抑制miR-17表达可以有效抑制胃癌细胞增殖，可以开发成抑制胃癌生长的药物。现有技术未见该磺酰胺衍生物在抑制miR-17表达和抑制胃癌生长方面的报道。
实施例2：
发明人研究发现，磺酰胺衍生物A、C在光照条件下会发生下述降解反应：
其中，R为(CH2)n，n为1或3。
发明人发现，羧基麦芽糖铁可以抑制磺酰胺衍生物A、C光降解。
NO.1注射液：取磺酰胺衍生物A用灭菌水配制成磺酰胺衍生物A浓度为20mg/mL的注射液，盐酸调节pH至4.6；
NO.2注射液：取磺酰胺衍生物A、羧基麦芽糖铁用灭菌水配制成磺酰胺衍生物A浓度为20mg/mL、羧基麦芽糖铁浓度为5mg/mL的注射液，盐酸调节pH至4.6；
NO.3注射液：取磺酰胺衍生物B用灭菌水配制成磺酰胺衍生物B浓度为20mg/mL的注射液，盐酸调节pH至4.6；
NO.4注射液：取磺酰胺衍生物B、羧基麦芽糖铁用灭菌水配制成磺酰胺衍生物B浓度为20mg/mL、羧基麦芽糖铁浓度为5mg/mL的注射液，盐酸调节pH至4.6。
将上述注射液分别置于光照箱中于4500±500Lx光照强度下光照10天(温度为25±2℃)，分别测定光照前后磺酰胺衍生物A、C降解百分比，结果如表3：
表3光照对磺酰胺衍生物A或C降解的影响
本领域技术人员应当知道，上述具体实施方式仅用于解释本发明，本发明的保护范围并不局限于上述具体实施方式。
Claims (6)
1.一种磺酰胺衍生物用于制备miR-17抑制剂的用途，其化学结构如下：
其中，R为(CH2)n，n为1或3。
2.一种miR-17抑制剂组合物，其特征在于：包含权利要求1所述的磺酰胺衍生物，还包含药学上可以接受的载体，制成药学上可以接受的剂型。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述药学上可以接受的载体包括一种或多种固体、半固体或液体辅料等。
4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述药学上可以接受的剂型包括注射剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂等。
5.权利要求1所述的磺酰胺衍生物在制备抑制胃癌增殖的药物中的应用。
6.权利要求3或4所述的组合物在制备抑制胃癌增殖的药物中的应用。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2006060533A2 (en) * | 2004-12-01 | 2006-06-08 | Genentech, Inc. | Conjugates of 1, 8-bis-naphthalimides with an antibody |
| WO2008007262A2 (en) * | 2006-06-19 | 2008-01-17 | Universidade Do Porto | Bisnaphthalimidopropyl derivative compounds with anti-parasite and anti-cancer activity |
| US20140057936A1 (en) * | 2012-08-27 | 2014-02-27 | University Of Tennessee Research Foundation | LPA2 Receptor-Specific Benzoic Acid Derivatives |
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|---|---|---|---|---|
| WO2006060533A2 (en) * | 2004-12-01 | 2006-06-08 | Genentech, Inc. | Conjugates of 1, 8-bis-naphthalimides with an antibody |
| WO2008007262A2 (en) * | 2006-06-19 | 2008-01-17 | Universidade Do Porto | Bisnaphthalimidopropyl derivative compounds with anti-parasite and anti-cancer activity |
| US20140057936A1 (en) * | 2012-08-27 | 2014-02-27 | University Of Tennessee Research Foundation | LPA2 Receptor-Specific Benzoic Acid Derivatives |
| WO2014036038A1 (en) * | 2012-08-27 | 2014-03-06 | University Of Tennessee Research Foundation | Lpa2 receptor-specific benzoic acid derivatives |
Non-Patent Citations (1)
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| RENUKADEVI PATIL,ET AL.: "Design and Synthesis of Sulfamoyl Benzoic Acid Analogues with Subnanomolar Agonist Activity Specific to the LPA2 Receptor", 《JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY》 * |
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