CN107595715A - 一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品及其制备方法 - Google Patents
一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品及其制备方法，所述护肤品的粒径为50～200nm，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物0.50％～2.00％、余甘子提取物0.50％～1.60％、银杏叶提取物0.10％～1.20％、绞股蓝提取物0.30％～1.50％、三七根提取物0.10％～0.70％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。本发明制备的护肤品具有强大的抗氧化和抗衰老活性，减少肌肤细纹，且容易穿透皮肤表面，增加抗衰老活性物质的穿透力，更好发挥有效成分的活性。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品领域，具体涉及一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品及其制备方法。
背景技术
人体皮肤是一道抵御外来有害物质的天然屏障，然而，紫外线的照射导致胶原蛋白流失，从而加速皮肤老化，体内氧自由基的攻击导致皮肤损伤，皮肤中的成纤维细胞自然老化，以及空气中的灰尘、熬夜以及衰老等因素，导致面部肌肤各种问题，皮肤干燥，逐渐老化，真皮层萎缩缺水，皮肤的弹力纤维和胶原纤维退化变形，皮肤失去弹性变得松弛，容易出现皱纹。
市面上销售的抗衰祛皱护肤品大多为乳状液，其粒径一般都大于400nm，粒径比较大，不容易穿过皮肤，不易吸收，难以达到抗衰祛皱的功效。另一方面，在市面上的抗衰祛皱护肤品中，可以添加植物提取物等对皮肤进行抗皱处理，植物提取物副作用小，但抗衰祛皱短期效果不明显。
干细胞是植物体内未分化的细胞，是生长发育的源泉和信号调控中心，具有很植物强的自我更新和持续分裂能力。高丽参干细胞具有强大的抗氧化和抗衰老活性，可以作为人体干细胞的激活剂，为人类抗衰祛皱提供一个新方法。
将纳米乳化技术引入化妆品中作为功能性成分的控制释放系统，纳米乳化体粒径小，可以防止絮凝物质的产生，使体系达到均一，分散均匀，且乳化体系比表面积比较大，有效成分在皮肤表面的透过性好，使其更容易穿透皮肤表面，增加活性物质的穿透力，更好发挥有效成分的活性。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品。
本发明的另一个目的在于提供一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，所述护肤品的粒径为50～200nm，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物0.50％～2.00％、余甘子提取物0.50％～1.60％、银杏叶提取物0.10％～1.20％、绞股蓝提取物0.30％～1.50％、三七根提取物0.10％～0.70％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
上述护肤品中与一般的高丽参提取物相比，高丽参干细胞提取物具有更强大的抗氧化和抗衰老活性，清除或者抑制自由基生成，能够有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，能够增加皮肤弹性，减少肌肤细纹；余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物具有抗氧化和抗衰老功效；所述护肤品的粒径为50～200nm，属于纳米乳，乳化体系比表面积比较大，有效成分在皮肤表面的透过性好，使其更容易穿透皮肤表面，增加抗衰老活性物质的穿透力，更好发挥有效成分的活性；纳米乳由于粒径小可以克服在存储中由于重力和布朗运动导致的分层、沉降和絮凝问题，提高护肤品的长期稳定性。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物1.00％～1.50％、余甘子提取物0.80％～1.20％、银杏叶提取物0.60％～1.00％、绞股蓝提取物0.50％～1.30％、三七根提取物0.25％～0.50％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物1.30％、余甘子提取物0.90％、银杏叶提取物0.75％、绞股蓝提取物0.60％、三七根提取物0.35％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，所述霍霍巴油与表面活性剂的质量比为1.2:1。
上述技术方案中霍霍巴油与表面活性剂的质量比为1.2:1时，能够获得粒径较小的纳米乳，增加抗衰祛皱活性物质的穿透力，有利于实现深层肌肤的抗衰祛皱。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，所述高丽参干细胞为高丽参形成层干细胞。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，所述表面活性剂为吐温-80、椰油酸二乙醇酰胺、油酸单甘油酯或聚氧乙烯蓖麻油。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的优选实施方式，所述保湿剂为甘油、丙二醇和山梨醇中的至少一种。
本发明还提供了任一项所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法，包括以下步骤：
(1)将培养高丽参干细胞后的高丽参干细胞培养基和高丽参干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物；
(2)按比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛；
(3)将霍霍巴油、表面活性剂在70～80℃下恒温搅拌均匀，得到油相；
(4)将保湿剂溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相；
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以400～500r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机均质，均质压力为80～100MPa，均质6～10次，得到所述护肤品。
上述技术方案通过调整的均质压力和均质次数，能够获得粒径较小的纳米乳，增加抗衰祛皱活性物质的穿透力，使其更容易穿透皮肤表面，更好发挥有效成分的活性。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法的优选实施方式，所述培养基在冷冻干燥前，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分。
作为本发明所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法的优选实施方式，所述超滤膜的孔径为50～150nm。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明制备的护肤品以高丽参干细胞提取物、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物作为抗衰祛皱的功效成分，清除或者抑制自由基生成，能够有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，能够增加皮肤弹性，减少肌肤细纹。
(2)本发明制备的护肤品比表面积比较大，有效成分在皮肤表面的透过性好，使其更容易穿透皮肤表面，增加抗衰老活性物质的穿透力，更好发挥高丽参干细胞提取物、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物的活性。
(3)本发明制备的护肤品粒径小，可以克服在存储中由于中由于重力和布朗运动导致的分层、沉降和絮凝问题，提高护肤品的长期稳定性。
附图说明
图1实施例1和对比例2制备的护肤品的渗透性实验结果图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
余甘子提取物购自陕西昊晨生物科技有限公司；银杏叶提取物购自西安泽朗生物科技有限公司；绞股蓝提取物购自西安清藤生物科技有限公司；三七根提取物购自陕西泰克生物科技有限公司。
实施例1
本发明高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品制备方法的一种实施例，本实施例所述高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法为：
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为50nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物1.30％、余甘子提取物0.90％、银杏叶提取物0.75％、绞股蓝提取物0.60％、三七根提取物0.35％、霍霍巴油24.00％、吐温-80 20.00％、甘油4.00％、丙二醇5.00％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油、吐温-80在75℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将甘油和丙二醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以500r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为100MPa，均质10次，得到所述护肤品。
实施例2
本发明高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品制备方法的一种实施例，本实施例所述高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法为：
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为150nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物2.00％、余甘子提取物0.50％、银杏叶提取物0.10％、绞股蓝提取物0.30％、三七根提取物0.10％、霍霍巴油25.00％、椰油酸二乙醇酰胺14.00％、山梨醇3.00％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油、椰油酸二乙醇酰胺在70℃下恒温搅拌均匀，得到油相；
(4)将山梨醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以400r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为80MPa，均质6次，得到所述护肤品。
实施例3
本发明高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品制备方法的一种实施例，本实施例所述高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法为：
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为140nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物1.00％、余甘子提取物1.60％、银杏叶提取物1.20％、绞股蓝提取物1.50％、三七根提取物0.70％、霍霍巴油3.00％、油酸单甘油酯29.00％、山梨醇9.00％、去离子水余量。
(3)将霍霍巴油、油酸单甘油酯在80℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将山梨醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以500r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为80MPa，均质7次，得到所述护肤品。
实施例4
本发明高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品制备方法的一种实施例，本实施例所述高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法为：
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为100nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物0.50％、余甘子提取物0.80％、银杏叶提取物1.00％、绞股蓝提取物1.30％、三七根提取物0.25％、霍霍巴油15％、聚氧乙烯蓖麻油17％、丙二醇5％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油、聚氧乙烯蓖麻油在70～80℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将丙二醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以450r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为90MPa，均质6次，得到所述护肤品。
实施例5
本发明高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品制备方法的一种实施例，本实施例所述高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法为：
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为120nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物1.50％、余甘子提取物1.20％、银杏叶提取物0.60％、绞股蓝提取物0.50％、三七根提取物0.50％、霍霍巴油18％、聚氧乙烯蓖麻油25％、甘油8％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油和聚氧乙烯蓖麻油在70～80℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将甘油溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以450r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为90MPa，均质8次，得到所述护肤品。
对比例1
(1)制备高丽提取物
称取高丽参300g，在500mL体积分数为80％的乙醇溶液中浸泡3h，在50℃水浴中回流提取6h。提取后抽滤分离残渣，将残渣浸泡在2000mL的去离子水，保鲜膜封口后在90℃的水浴锅中水浴3h，抽滤，合并提取液，离心分离，将上清液旋转蒸干，得到所述高丽参水溶性提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物1.30％、余甘子提取物0.90％、银杏叶提取物0.75％、绞股蓝提取物0.60％、三七根提取物0.35％、霍霍巴油24.00％、吐温-80 20.00％、甘油4.00％、丙二醇5.00％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油和吐温-80在75℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将甘油和丙二醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干提取物、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以500r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机(APV-100，德国)均质，均质压力为100MPa，均质10次，得到所述护肤品。
对比例2
(1)制备高丽参干细胞提取物
1)高丽参形成层干细胞的分离及培养
将高丽参的块根经过消毒处理后，切下包括形成层在内的半圆切片；
将半圆型切片放置在WPM培养基上，25℃下黑暗培养；
两周后将形成层明显增殖的外增殖体取出，分离形成层干细胞并转移到继代培养基中培养，每两周继代一次，得到高丽参形成层干细胞；
2)收集培养高丽参形成层干细胞后的培养基，经孔径为50nm的超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分；将培养基和高丽参形成层干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物。
(2)按以下重量比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛，其中，高丽参干细胞提取物1.30％、余甘子提取物0.90％、银杏叶提取物0.75％、绞股蓝提取物0.60％、三七根提取物0.35％、霍霍巴油24.00％、吐温-80 20.00％、甘油4.00％、丙二醇5.00％和去离子水余量。
(3)将霍霍巴油、吐温-80在75℃下恒温搅拌均匀，得到油相。
(4)将甘油和丙二醇溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相。
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以500r/min的转速搅拌均匀，得到护肤品。
护肤品性能测试
一、粒径测定
使用激光粒度仪(马尔文，英国)纳米ZS90通过动态光散射对对比例1～5和对比例1～2的平均粒径进行测定。在固定角度为173°的样品池中测定护肤品，以乳液的液滴大小作为描述累积测定值的平均直径。各组护肤品的平均粒径测定结果如表1所示。
表1
由表1结果可知，对比例1～5和对比1经过纳米乳化得到护肤品具有比较的粒径，相比之下，对比例2得到的护肤品没有经过纳米乳化，粒径较大为473nm，不利于护肤品有效成分透过皮肤表层，进入深层肌肤。
二、护肤品稳定性测定
以实施例1制备得到的护肤品作为实验组，以对比例2制备得到的护肤品作为对照组，分别在4℃和常温下放置10天和60天后，使用激光粒度仪(马尔文，英国)纳米ZS90通过动态光散射对护肤品的平均粒径进行测定，结果如表2所示
表2
由表2结果可知，4℃储存条件下，实验组和对照组的粒径均有增大，但对照组增大趋势更明显，常温储存条件下实验组的纳米乳护肤品粒径变化不明显，表明实施例1制备的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品具有良好的长期稳定性。
三、渗透性实验
以实施例1制备的护肤品作为实验组，对比例2制备的护肤品作为对照组进行渗透性实验。渗透性实验方法步骤参照相关文献(陈良红.含乳木果油纳米乳液的制备技术及其应用研究[D].上海应用技术学院,2015.)，实验结果如图1所示。
由图1可知，实施例1经过纳米乳化的护肤品的渗透性优于对照组。结果表明，本发明经过纳米乳化的护肤品在皮肤表面的透过性好，使其更容易穿透皮肤表面，增加抗衰老活性物质的穿透力，更好发挥高丽参干细胞提取物、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物的活性。
四、超氧阴离子清除测定
将实施例1～5和对比例1～2所制备的护肤品分别配制成浓度为50mg/mL的水溶液。取0.1mL分别加入1mL含557μmol/L的NaOH的16mmol/L Tris-HCl(pH＝8.0),1mL含45μmol/L PMS的16mmol/L Tris-HCl(pH 8.0)，以及含108μmol/L的NBT的16mmol/L Tris-HCl(pH＝8.0)。25℃温浴5min，在酶标仪560nm下测吸光值，根据公式(1)计算超氧阴离子清除率，结果如表3所示。
超氧阴离子清除率＝(1-样品管A560/对照管A560)×100％ (1)
表3
超氧阴离子是机体代谢过程产生的一种活性自由基，与皮肤老化有着密切的联系。由表2结果可知，实施例制备的护肤品的超氧阴离子清除率明显高于对比例，与一般的高丽参提取物相比，高丽参干细胞提取物具有更强大的抗氧化和抗衰老活性，清除超氧阴离子，能够有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，具有良好的抗衰祛皱功效。
(2)羟自由基清除测定
将实施例1～5和对比例1～2所制备的护肤品分别配制成浓度为50mg/mL的水溶液。取0.1mL分别加入0.6mL反应缓冲液(含2.67mmol/L脱氧核糖和0.13mmol/L EDTA的0.2mol/L pH＝7.4的磷酸盐缓冲液)，0.4mmol/L硫酸亚铁0.2mL，2.0mmol/L抗坏血酸0.05mL，以及20mmol/L的H2O2 0.05mL，37℃温浴15min，取出后加入1％硫代巴比妥酸1mL和2％三氯乙酸1mL，沸水浴15min，取出后在冰上冷却，在酶标仪532nm下测吸光值，根据公式(2)计算羟自由基清除率，结果如表4所示。
羟自由基清除率＝(1－样品管A532/对照管A532)×100％ (2)
表4
羟自由基作为活性氧自由基，是造成生物有机体过氧化损伤的主要因素。由表4可知，实施例制备的护肤组合物的羟自由基清除率明显高于对比例，表明与一般的高丽参提取物相比，高丽参干细胞提取物具有更强大的抗氧化和抗衰老活性，清楚或抑制自由基的生成，有利于皮肤抗衰老，祛除皱纹。。
五、皮肤祛皱测定
实施例1～5和对比例1～2制得的护肤品，每组分别选100名年龄在35～55岁的女性志愿者，这些志愿者面部具有细纹或者某些部位皱纹明显，志愿者每日早、晚洁面后在脸上涂抹本发明制备的护肤品，连续使用6个月。
评价标准：肉眼直接观察皮肤纹理。有效：皮肤纹理明显变得细腻，细纹减少，皱纹变浅；无效：皮肤纹理和细纹数量没有任何变化。结果如表5所示。
表5
由表5结果可知，实施例制备的护肤品祛皱效果明显优于对比例。与一般的高丽参提取物相比，高丽参干细胞提取物具有更强大的抗氧化和抗衰老活性，清除或者抑制自由基生成，能够有效促进肌肤细胞的自我分化和新陈代谢，能够增加皮肤弹性，减少肌肤细纹；余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物具有抗氧化和抗衰老功效；经过纳米乳化的护肤品的粒径为50～200nm，乳化体系比表面积比较大，有效成分在皮肤表面的透过性好，使其更容易穿透皮肤表面，增加抗衰老活性物质的穿透力，更好发挥有效成分的活性，具有良好抗衰祛皱的功效。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (10)
1.一种高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，所述护肤品的粒径为50～200nm，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物0.50％～2.00％、余甘子提取物0.50％～1.60％、银杏叶提取物0.10％～1.20％、绞股蓝提取物0.30％～1.50％、三七根提取物0.10％～0.70％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
2.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物1.00％～1.50％、余甘子提取物0.80％～1.20％、银杏叶提取物0.60％～1.00％、绞股蓝提取物0.50％～1.30％、三七根提取物0.25％～0.50％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
3.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，由下述质量百分比的原料制成：高丽参干细胞提取物1.30％、余甘子提取物0.90％、银杏叶提取物0.75％、绞股蓝提取物0.60％、三七根提取物0.35％、霍霍巴油3.00％～25.00％、表面活性剂14.00％～29.00％、保湿剂3.00％～9.00％和去离子水余量。
4.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，所述霍霍巴油与表面活性剂的质量比为1.2:1。
5.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，所述高丽参干细胞为高丽参形成层干细胞。
6.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，所述表面活性剂为吐温-80、椰油酸二乙醇酰胺、油酸单甘油酯或聚氧乙烯蓖麻油。
7.根据权利要求1所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品，其特征在于，所述保湿剂为甘油、丙二醇和山梨醇中的至少一种。
8.根据权利要求1～7任一项所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将培养高丽参干细胞后的高丽参干细胞培养基和高丽参干细胞的裂解物冷冻干燥，得到高丽参干细胞提取物；
(2)按比例称取各原料，将原料进行破碎，过筛；
(3)将霍霍巴油、表面活性剂在70～80℃下恒温搅拌均匀，得到油相；
(4)将保湿剂溶于去离子水中，搅拌均匀得到水相；
(5)将步骤(4)得到的水相边搅拌边加入到步骤(3)得到的油相中，冷却到45℃后，加入高丽参干细胞、余甘子提取物、银杏叶提取物、绞股蓝提取物和三七根提取物，以400～500r/min的转速搅拌均匀，得到粗乳液。
(6)将粗乳液加入高压均质机均质，均质压力为80～100MPa，均质6～10次，得到所述护肤品。
9.根据权利要求8所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法，其特征在于，所述培养基在冷冻干燥前，经超滤膜过滤，浓缩滤液，去除培养基中的酚红，保留培养基中的活性成分。
10.根据权利要求9所述的高丽参干细胞提取物纳米乳抗衰祛皱护肤品的制备方法，其特征在于，所述超滤膜的孔径为50～150nm。
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| CN110241068A (zh) * | 2019-07-25 | 2019-09-17 | 成都清科生物科技有限公司 | 一种去除细胞培养废液中酚红的方法 |
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| CN102631300A (zh) * | 2012-04-05 | 2012-08-15 | 北京工商大学 | 具有改善皮肤纹理功效的外用中药组合物、面膜及其制备方法 |
| CN102988253A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-27 | 王忠举 | 一种含有当归和玫瑰花的美白面膜 |
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