CN107206106A

CN107206106A - 2型多巴胺受体特异性启动子和其使用方法

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Publication number: CN107206106A
Application number: CN201580074112.4A
Authority: CN
Inventors: K·A·狄塞罗斯; C·拉马克里施南; K·扎卢促斯基
Original assignee: Leland Stanford Junior University
Current assignee: Leland Stanford Junior University
Priority date: 2014-12-04
Filing date: 2015-12-03
Publication date: 2017-09-26
Also published as: US10435709B2; WO2016090172A1; US20200032291A1; EP3226913A1; JP2017536130A; AU2015358382A1; US20170327841A1; CA2969453A1; EP3226913A4

Abstract

提供了一种含有2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸。在某些实施方案中，所述核酸包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。还提供了表达载体、经遗传修饰的宿主细胞和包括本发明核酸的试剂盒。

Description

2型多巴胺受体特异性启动子和其使用方法

交叉引用

本申请要求2014年12月4日提交的美国临时专利申请号62/087,603的权益，所述申请以全文引用的方式并入本文中。

引言

多巴胺是一种儿茶酚胺神经递质，其参与大脑和全身细胞之间的信号转导。多巴胺通过结合至其受体G蛋白偶联的七跨膜受体而对靶细胞发挥其细胞和生物化学作用。2型多巴胺(D2)受体是已经鉴定的几种多巴胺受体之一。表达D2受体的细胞，包括神经元，参与许多精神病症，包括药物成瘾、肥胖症和赌博症。

概述

提供了一种包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸。在某些实施方案中，所述核酸包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。在一些情况下，所述Kozak序列在所述D2SP的3'末端处。在一些情况下，所述D2SP包含BamHI限制位点。在某些实施方案中，所述BamHI限制位点位于所述Kozak序列的5'处。在一些情况下，所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少98％序列同一性的核苷酸序列。

在上文或下文所述的任何实施方案中，所述D2SP可操作地连接至编码提供可检测信号的基因产物的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述提供可检测信号的基因产物是荧光蛋白。在一些实施方案中，所述荧光蛋白选自由绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、青色荧光蛋白、钙指示剂和电压指示剂组成的组。

在上文或下文所述的任何实施方案中，所述D2SP可操作地连接至编码光响应性多肽的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述光响应性多肽是去极化光响应性多肽，其中所述去极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:4-23中的任一者具有至少75％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述光响应性多肽是超极化光响应性多肽，其中所述超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:24-54中的任一者具有至少75％序列同一性的氨基酸序列。

在上文或下文所述的任何实施方案中，所述D2SP可操作地连接至编码重组酶的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述重组酶是选自由Cre重组酶和FLP重组酶组成的组。

本文中还提供了一种包含任何上述实施方案的核酸的重组表达载体。

本文中还提供了一种包含任何上述核酸实施方案的核酸的经遗传修饰的宿主细胞，或任何上述表达载体实施方案的重组表达载体。在某些实施方案中，所述宿主细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述宿主细胞是祖细胞。在某些实施方案中，所述祖细胞是干细胞。

本文中还提供了一种调节靶神经元的活性的方法，所述方法包括向所述靶神经元中引入任何上述核酸实施方案中任一者的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至光响应性多肽，所述光响应性多肽在被光激活时诱导所述靶神经元的超极化或去极化。

本文中还提供了一种荧光标记靶细胞的方法，所述方法包括向所述靶细胞中引入任何上述实施方案中任一者的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白在被表达时荧光标记所述靶细胞。在某些实施方案中，所述靶细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述靶细胞是祖细胞。在某些实施方案中，所述祖细胞是干细胞。

本文中还提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含：a)重组表达载体，所述重组表达载体包含含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列；和b)用于将所述重组表达载体引入靶细胞的说明书。

在上文或下文所描述的任何试剂盒实施方案中，所述试剂盒还包含对照表达载体，所述对照表达载体包含含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。

附图简述

图1示出了根据本公开的一个实施方案的常规2型多巴胺受体(D2R)启动子和D2特异性启动子(D2SP)的示意图。

图2示出了根据本公开的一个实施方案的D2SP(SEQ ID NO:1)和常规D2受体启动子(D2R；SEQ ID NO:2)的比对核苷酸序列。

图3示出了使用标准方案(左)和修改方案(右)用D2受体特异性抗体对组织切片进行的染色。

图4示出了根据本公开的一个实施方案使用改良染色方案在D2SP和针对D2受体染色的抗体下表达eNpHR 3.0-EYFP的大鼠海马体原代神经元。

图5示出了根据本公开的一个实施方案在D2SP和常规D2受体启动子(D2R)以及针对D2受体染色的抗体下的eNpHR 3.0-EYFP表达。

图6-14示出了根据本公开的一个实施方案的含有D2SP的重组表达载体的示意图。

图15示出了大鼠D2受体的外显子1的核苷酸序列。

图16示出了根据本公开的一个实施方案的去极化光响应性多肽和其衍生物的氨基酸序列(SEQ ID NO:4-23)。

图17示出了根据本公开的一个实施方案的超极化光响应性多肽和其衍生物的氨基酸序列(SEQ ID NO:24-54)。

图18示出了根据本公开的一个实施方案的可用于增强宿主细胞或靶细胞中的光响应性多肽表达的肽序列(SEQ ID NO:55-66)。

定义

术语“多核苷酸”、“核苷酸”、“核苷酸序列”、“核酸”、“核酸分子”、“核酸序列”和“寡核苷酸”可互换使用而且还可以包括每一者的复数形式，分别取决于使用这些术语的上下文。它们是指任何长度的核苷酸聚合形式，即脱氧核糖核苷酸(DNA)或核糖核苷酸(RNA)或其类似物。多核苷酸可以具有任何三维结构，并且可以执行任何已知或未知的功能。以下是多核苷酸的非限制性实例：基因或基因片段的编码区或非编码区、由连锁分析定义的基因座、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转移RNA(tRNA)、核糖体RNA、核糖体、小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、小核RNA(snRNA)、cDNA、重组多核苷酸、支链多核苷酸、质粒、载体、具有任何序列的分离的DNA(A、B和Z结构)、PNA、锁核酸(LNA)、TNA(丙糖核酸)、具有任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。LNA，经常被称为不可及RNA，是一种经过修饰的RNA核苷酸。LNA核苷酸的核糖部分经过修饰而具有连接2'和4'碳的额外桥连。所述桥连“锁定”3'端结构构象中的核糖，其经常见于A型DNA或RNA中，可以显著提高热稳定性。

术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文可互换使用，以指任何长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是线性的，它可以包含经过修饰的氨基酸，而且它可以间杂有非氨基酸。这些术语还包括已经被修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，诸如与标记组分缀合。如本文中所使用，术语“氨基酸”是指天然的和/或非天然的或合成的氨基酸，包括甘氨酸，和D或L光学异构体，以及氨基酸类似物和肽模拟物。

如本文中所使用，在两个核酸序列的情形下，“序列同一性”或“同一性”是指该两个序列中有指定百分比的残基在比对以便在指定比较窗上获得最大对应性时相同，如通过序列比较算法或通过目视检查所测量。当序列同一性百分比关于蛋白质使用时，认为不相同的残基位置通常由于保守氨基酸取代而不同，其中氨基酸残基被取代为具有类似化学性质(例如，电荷或疏水性)的其他氨基酸残基并且因此不改变该分子的功能性质。当序列在保守取代方面有所不同时，可以向上调节序列同一性百分比，以修正取代的保守性质。因此类保守取代而不同的序列被称为具有“序列相似性”或“相似性”。可以使用任何合适的手段来进行这种调节。这可能涉及将保守取代作为部分而非完全错配来进行评分，由此增加序列同一性百分比。因此，举例来说，当相同的氨基酸被给予评分1而非保守取代被给予评分0时，保守取代被给予在0和1之间的评分。保守取代的评分是例如像程序PC/GENE(Intelligenetics，Mountain View，Calif.)中所实施的那样来计算。

如本文中所使用，“序列同一性百分比”意指通过在比较窗上比较两个最佳比对序列而确定的值，其中与不包括添加或缺失的参考序列相比，多核苷酸序列在比较窗中的部分可以包括添加或缺失(即，缺口)，以实现所述两个序列的最佳比对。所述百分比是通过以下方式进行计算：确定两个序列中出现相同的核酸碱基或氨基酸残基的位置数以得到匹配位置数，用匹配位置数除以比较窗中的位置总数，和将结果乘以100以得到序列同一性百分比。

可以采用任何合适的用于比对供比较的序列的方法。因此，可以使用数学算法来实现任何两个序列之间的同一性百分比的确定。此类数学算法的优选非限制性实例是：Myers和Miller,CABIOS,4:11(1988)的算法，其以全文引用的方式并入在此；Smith等,Adv.Appl.Math.,2:482(1981)的局部同源性算法，其以全文引用的方式并入在此；Needleman和Wunsch,JMB,48:443(1970)的同源性比对算法，其以全文引用的方式并入在此；Pearson和Lipman,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:2444(1988)的搜索相似性方法，其以全文引用的方式并入在此；Karlin和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:2264(1990)的算法，其以全文引用的方式并入在此；如Karhn和Altschul,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:5873(1993)中加以改良，其以全文引用的方式并入在此。

这些数学算法的计算机实现可以用于比较序列以确定序列同一性。此类实现包括但不限于：PC/Gene程序(可得自Intelligenetics，Mountain View，Calif.)中的CLUSTAL；ALIGN程序(版本2.0)；以及威斯康星遗传学软件包版本8(可得自Genetics ComputerGroup(GCG),575Science Drive,Madison,Wis.,USA)中的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA和TFASTA。使用这些程序进行的比对可以使用默认参数执行。以下文献详细描述了CLUSTAL程序：Higgins等,Gene,73:237(1988)；Higgins等,CABIOS,5:151(1989)；Corpet等,Nucl.Acids Res.,16:10881(1988)；Huang等,CABIOS,8:155(1992)；和Pearson等,Meth.Mol.Biol.,24:307(1994)，所述文献以全文引用的方式并入在此。ALIGN程序基于Myers和Miller,同上的算法。以下文献的BLAST程序：Altschul等,JMB,215:403(1990)；Nucl.Acids Res.,25:3389(1990)，所述文献以全文引用的方式并入在此，基于Karlin和Altschul同上的算法。

用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(NCBI；worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov)公开获得。

如本文中所使用，“表达”是指多核苷酸转录成mRNA和/或经过转录的mRNA(也称为“转录物”)随后被翻译成肽、多肽或蛋白质的过程。取决于上下文，转录物和编码多肽总称为“基因产物”。

“基因”是指包括产生多肽或前体所必需的控制序列和编码序列的多核苷酸序列。多肽可以由全长编码序列或编码序列的任何部分编码。基因可以构成不间断的编码序列，或者其可以包含通过适当的剪接点结合的一个或多个内含子。此外，基因可以在可能影响表达产物的生物活性或化学结构、表达速率或表达控制方式的编码区或非翻译区中包含一个或多个修饰。此类修饰包括但不限于一个或多个核苷酸的突变、插入、缺失和取代。在这方面，此类修饰基因可以称为“天然”基因的“变体”。

术语“遗传修饰”是指在异源核酸(即，细胞的外源核酸)引入细胞后在细胞中诱导的永久性或暂时性遗传变化。可以通过将异源核酸并入宿主细胞的基因组中，或者通过暂时或稳定维持异源核酸作为染色体外元件来实现遗传变化(“修饰”)。当细胞是真核细胞时，可以通过将核酸引入细胞的基因组中来实现永久性遗传变化。合适的遗传修饰方法包括病毒感染、转染、缀合、原生质体融合、电穿孔、粒子枪技术、磷酸钙沉淀、直接显微注射等。

如本文中所使用，术语“启动子”是指指导基因表达(转录)的DNA序列。启动子可以指导原核或真核生物基因的转录。启动子可以是“诱导型”，响应于诱导剂而启动转录，或相反地，启动子可以是“组成型”，借此，诱导剂不调节转录速率。可以用组织特异性或组织优选方式调节启动子，使其仅在转录特定组织类型中的可操作连接的编码区时具有活性。

术语“可操作地连接的”是指调节序列和编码序列之间的功能键连。因此，如此描述的组件处于一种允许它们以其预定方式发挥功能的关系。举例来说，将编码序列置于启动子的调节控制之下意味着定位编码序列，使得编码序列的表达受启动子控制。

如本文中所使用，关于核苷酸或氨基酸序列的末端或端的“末端”或“端”是指核苷酸序列的5'或3'端，或者氨基酸序列的氨基或羧基端。因此，核苷酸序列或多肽序列末端的序列是包含核苷酸序列的最5'或最3'核苷酸或者多肽序列的氨基或羧基端的序列。

关于光响应性多肽或蛋白质的术语“光激活”、“光响应性”可互换使用，并且包括如本文中所描述的光响应性离子通道或视蛋白和离子泵。此类光响应性蛋白质可以对质膜上表达有所述蛋白质的细胞具有去极化或超极化作用，这取决于激活的蛋白质的离子渗透性和越过质膜存在的电化学梯度。

在进一步描述本发明之前，应当理解，本发明不限于所描述的特定实施方案，因此当然可以变化。还应当理解，本文中所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不意图具有限制性，因为本发明的范围将仅受所附权利要求书限制。

在提供值的范围的情况下，应当理解，除非上下文另外清楚指示，否则本发明内涵盖所述范围的上限与下限之间的各插入值(直至下限单位的十分之一)以及在所陈述范围内的任何其他所述值或插入值。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在所述较小的范围内，并且也包含在本发明内，服从所述范围内的任何明确排除的限值。在所述范围包括所述限值中的一个或两个的情况下，本发明中还包括排除那些所包括的限值中的任一个或两个的范围。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的一般技术人员通常理解的含义相同的含义。虽然与本文中所描述的那些相似或等同的任何方法和材料也可以用于本发明的实践或测试中，但是现在描述优选的方法和材料。本文中提及的所有出版物都以引用的方式并入本文中，以便结合所引用的出版物来公开和描述方法和/或材料。

必须指出，除非上下文另外明确指出，否则如本文中和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括多个指示物。因此，举例来说，提及“经遗传修饰的宿主细胞”包括多个此类经遗传修饰的宿主细胞，并且提及“神经元细胞”包括提及一个或多个神经元细胞和本领域技术人员已知的其等同物，等等。还应当注意，可以撰写权利要求书以排除任何可选要素。因而，这种陈述意图充当结合权利要求要素的叙述来使用诸如“仅仅”、“仅”等排他性术语或使用“否定”限制的前提基础。

应当了解，为了清楚起见，在单独实施方案的上下文中描述的本发明的某些特征还可以组合提供于单个实施方案中。相反，为简洁起见，在单个实施方案的上下文中描述的本发明的各种特征还可以单独地或以任何合适的子组合形式提供。属于本发明的所有实施方案的所有组合都明确被本发明涵盖并且被公开于本文中，就好像各个和每个组合都被单独地且明确地公开。另外，各种实施方案和其要素的所有子组合也明确被本发明涵盖并且被公开于本文中，就好像各个和每个此类子组合被单独地和明确地公开于本文中。

提供本文中所讨论的公布仅仅是因为其公开在本申请的提交日期之前。本文中的任何内容都不应被视为承认本发明由于在先发明的原因而无权先于此类公布。此外，所提供的公布日期可能不同于实际公布日期，实际公布日期可能需要独立地确认。

详述

提供了包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸和使用其在目标靶细胞中表达多肽的方法。本公开内容的各方面包括一种包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列(图2)。

在一些实施方案中，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。

在某些实施方案中，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。

在某些实施方案中，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，并且其中所述D2SP可操作地连接至编码基因产物的核苷酸序列。在一些情况下，所述基因产物是多肽。在一些情况下，所述基因产物是多核苷酸。在一些情况下，所述基因产物是提供可检测信号的多肽，诸如荧光蛋白；遗传编码指示剂；光响应性多肽；重组酶；或其组合。

在某些实施方案中，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，并且其中所述D2SP可操作地连接至编码光响应性多肽的核苷酸序列，所述光响应性多肽选自具有SEQ ID NO:4-54的多肽。

在某些实施方案中，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，并且其中所述D2SP可操作地连接至编码荧光蛋白的核苷酸序列，所述荧光蛋白是选自绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、青色荧光蛋白、钙指示剂和电压指示剂。

本文中还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。

在某些实施方案中，所述重组表达载体包含含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，并且其中所述D2SP可操作地连接至编码基因产物的核苷酸序列。在一些情况下，所述基因产物是提供可检测信号的多肽，诸如荧光蛋白；遗传编码指示剂；光响应性多肽；重组酶；或其组合。

本文中还提供了一种经遗传修饰的宿主细胞，所述经遗传修饰的宿主细胞包含含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。在一些情况下，所述核酸被包含在经遗传修饰的宿主细胞中的重组表达载体中。

在某些实施方案中，本公开内容的经遗传修饰的宿主细胞包含重组表达载体，所述重组表达载体包含含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列，其中所述D2SP包含位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，并且其中所述D2SP可操作地连接至编码基因产物的核苷酸序列。在一些情况下，所述基因产物是提供可检测信号的多肽，诸如荧光蛋白；遗传编码指示剂；光响应性多肽；重组酶；或其组合。

本文中还提供了一种调节靶神经元的活性的方法，所述方法包括向所述靶神经元中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至光响应性多肽，所述光响应性多肽当被光激活时诱导靶神经元的超极化或去极化。

本文中还提供了一种调节靶神经元的活性的方法，所述方法包括向所述靶神经元中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至光响应性多肽，所述光响应性多肽包含SEQ ID NO:4-23中的任一者中所示的氨基酸序列并且当被光激活时诱导靶神经元的去极化。

本文中还提供了一种调节靶神经元的活性的方法，所述方法包括向所述靶神经元中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至光响应性多肽，所述光响应性多肽包含SEQ ID NO:24-54中的任一者中所示的氨基酸序列并且当被光激活时诱导靶神经元的超极化。

本文中还提供了一种荧光标记靶细胞的方法，所述方法包括向所述靶细胞中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白当被表达时荧光标记所述靶细胞。

在某些实施方案中，本公开内容的荧光标记靶细胞的方法包括向靶神经元中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白当被表达时荧光标记所述靶神经元。

在某些实施方案中，本公开内容的荧光标记靶细胞的方法包括向靶祖细胞中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白当被表达时荧光标记所述靶祖细胞。

在某些实施方案中，本公开内容的荧光标记靶细胞的方法包括向靶干细胞中引入包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白当被表达时荧光标记所述靶干细胞。

现在，将在下文更详细地描述本公开内容的其他方面。

核酸

2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)

如上文所概述，本公开内容的各方面包括包含D2SP的核酸，即，指导可操作地连接至启动子的基因在表达2型多巴胺(D2)受体的细胞中表达的启动子序列。在某些实施方案中，所述D2SP来源于基因组中D2受体第一外显子的5'的基因组序列。

在某些实施方案中，所述D2受体来源于哺乳动物基因组，诸如但不限于大鼠、小鼠、猴、非人灵长类动物或人基因组。

在一些实施方案中，所述D2SP来源于D2受体第一外显子的5'的基因组序列。因此，在一些实施方案中，所述D2SP来源于从D2受体第一外显子起始点的5'开始3.0千碱基(kb)以下，例如2.5kb以下，诸如2.0kb以下，包括1.6kb以下的基因组序列。在其他实施方案中，所述D2SP来源于从D2受体第一外显子起始点的5'开始0.5千碱基(kb)以上，例如1.0kb以上，诸如1.2kb以上，包括1.5kb以上的基因组序列。在某些实施方案中，所述D2SP来源于从D2受体第一外显子起始点或转录起始位点的5'开始在3.0kb至0.5kb，例如2.5kb至1.0kb或2.0kb至1.2kb范围内的基因组序列。

如本文中可互换使用的转录起始位点或基因第一外显子起始点可以定义为从编码该基因的基因座转录而来的成熟RNA(mRNA)的5'端。因此，在某些实施方案中，所述D2受体第一外显子起始点由从D2受体基因组基因座转录而来的mRNA的5'端定义。在某些实施方案中，所述D2受体第一外显子起始点由以下GenBank登录号表示的序列定义：NM_012547(褐家鼠(Rattus norvegicus))、NM_010077(小家鼠(Mus musculus))或NM_000795(智人(Homosapiens))。

在某些实施方案中，所述D2SR的长度是500碱基对(bp)至2500bp，例如750bp至2250bp、1000bp至2000bp，包括1250bp至1750bp。在一些情况下，所述D2SR的长度是500bp以上，例如750bp以上、1000bp以上、1250bp以上、1350bp以上、1450bp以上、1500bp以上、1510bp以上、1520bp以上或者1530bp以上。在一些情况下，所述D2SR的长度是2000bp以下，例如1750bp以下、1700bp以下、1650bp以下、1600bp以下、1590bp以下、1580bp以下、1570bp以下、1560bp以下或者1550bp以下。在另一个实施方案中，所述D2SR的长度是约1540bp。

本公开内容的各方面包括包含D2SP的核酸，所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1(图1)。D2受体基因可以是任何哺乳动物D2受体基因，包括但不限于大鼠D2受体基因(GeneID 24318)、小鼠D2受体基因(GeneID 13489)或人D2受体基因(GeneID 1813)。其他哺乳动物D2受体基因包括猴和非人灵长类D2受体基因。可以使用任何合适的用于确定D2受体基因的第一外显子的方法。在某些实施方案中，大鼠D2受体基因外显子1由与SEQ ID NO:3中所示的序列(图15)具有80％以上，例如85％以上、90％以上、95％以上、98％以上、99％以上或者100％同一性的序列定义。因此，在某些实施方案中，所述D2SP不包含与SEQ ID NO:3中所示的序列(图15)具有80％以上，例如85％以上、90％以上、95％以上、98％以上、99％以上或者100％同一性的序列。在某些实施方案中，所述D2SP不包含与SEQ ID NO:3中所示的序列(图15)的核苷酸1-313，例如核苷酸1-300、核苷酸1-250、核苷酸1-200、核苷酸1-150、核苷酸1-100、核苷酸1-90、核苷酸1-80、核苷酸1-70、核苷酸1-60、核苷酸1-50、核苷酸1-40，包括核苷酸1-30具有90％以上，例如95％以上、98％以上、99％以上或者100％同一性的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述D2SP不包含与SEQ ID NO:3中所示的序列(图15)的核苷酸1-270具有90％以上，例如95％以上、98％以上、99％以上或者100％同一性的核苷酸序列。

本公开内容的其他方面包括包含含Kozak序列的D2SP的核酸。术语“Kozak序列”是指促进mRNA与核糖体小亚基的初始结合以启动翻译的序列。示例性Kozak序列是GCCRCC，其中R是嘌呤(A或G)。在某些实施方案中，所述Kozak序列是GCCACC。在某些实施方案中，示例性Kozak序列中的一个、两个、三个或更多个核苷酸可以被取代，而不显著影响Kozak序列发挥功能的能力。(Kozak,M.,Cell,44(2):283-92,1986；Kozak,M.Nucleic Acids Res.,10月26日；15(20):8125-48,1987；Kozak,M,J.Biol.Chem.,266(30):19867-19870,1991。)

在某些实施方案中，所述Kozak序列在所述D2SP的3'末端或端处。因此，在所述D2SP指导编码多肽的RNA转录物的表达的某些实施方案中，所述多肽的编码序列直接从所述D2SP的3'末端开始。如本文中在提及与第二序列直接相邻的第一序列时所使用，“直接”表示在第一序列与第二序列之间不存在插入的序列(即，不存在核苷酸或氨基酸)。因此，在某些实施方案中，所述Kozak序列的3'直接跟着编码序列的起始密码子(即，核苷酸序列ATG)。

在某些实施方案中，所述D2SP包含限制核酸酶的识别位点。在某些实施方案中，所述限制核酸酶是BamHI。BamHI识别位点是GGATCC。因此，在某些实施方案中，所述D2SP包含由序列GGATCC定义的BamHI识别位点。在某些实施方案中，所述BamHI限制位点位于所述Kozak序列的5'处。在某些实施方案中，所述BamHI位点就位于所述Kozak序列的5'处。在一些实施方案中，所述Bam HI限制位点位于所述D2SP来源的D2受体基因组基因座的基因组序列的3'。因此，在某些实施方案中，所述Bam HI限制位点位于所述D2SP来源的D2受体基因组基因座的基因组序列的3'和所述Kozak序列的5'。

在某些实施方案中，所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列(图2)具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。因此，本公开内容的一个方面包括一种包含D2SP的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。在另一个方面，本发明核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列和BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述核酸包含D2SP，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含处在所述D2SP的3'末端处的Kozak序列和位于所述Kozak序列的5'处的BamHI限制位点，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少75％，例如至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的核苷酸序列。

在某些实施方案中，所述D2SP可操作地连接至编码基因产物的核苷酸序列。所述基因产物可以是任何合适的用于在表达D2受体的靶细胞中特异性表达的基因产物。在一些情况下，所述基因产物是多肽。在一些情况下，所述基因产物是多核苷酸。在某些实施方案中，所述基因产物是光响应性多肽。在某些实施方案中，所述光响应性多肽是当被表达在靶细胞的细胞膜上并且因暴露于具有适当波长和强度的光而被激活时，去极化或激活所述靶细胞的多肽。在某些实施方案中，所述光响应性多肽是当被表达在靶细胞的细胞膜上并且因暴露于具有适当波长和强度的光而被激活时，超极化或抑制所述靶细胞的多肽。下文进一步描述可以可操作地连接至本发明D2SP的示例性光响应性多肽。

在某些实施方案中，可操作地连接至D2SP的基因产物提供可检测信号。可检测信号可以是荧光、化学发光、酶活性等。在某些实施方案中，所述D2SP可操作地连接其上至并且提供可检测信号的基因产物是荧光蛋白，包括但不限于绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、青色荧光蛋白等。在一些实施方案中，所述D2SP可操作地连接其上并且提供可检测信号的基因产物是遗传编码指示剂，诸如但不限于钙指示剂或电压指示剂。钙指示剂是被工程改造以结合一个或多个钙离子的荧光多肽，其中所述钙离子的结合将改变荧光性质，诸如多肽的强度、激发和/或发射波长等。任何合适的钙指示剂都可以用于在靶细胞中提供可检测信号。在一些情况下，所述钙指示剂是比率计钙指示剂，例如Cameleon和其衍生物。其他目标钙指示剂包括但不限于GCaMP1、GCaMP2、GCaMP3和其衍生物，以及美国专利号8,629,256和Tian等,2012Prog Brain Res,196:79中引用的那些，所述文献以引用的方式并入本文中。电压指示剂是被工程改造以响应膜电位变化的荧光多肽，其中膜电位变化将改变荧光性质，诸如多肽的强度、激发和/或发射波长等。任何合适的电压指示剂都可以用于在靶细胞中提供可检测信号。目标电压指标剂包括但不限于QuasAr1、QuasAr2、VSFP和其衍生物，以及以下文献中引用的那些：美国申请公布号20130224756；Hochbaum等,Nat Methods 201411:825；Baker等,Brain Cell Biol 2008 36:53；和Mutoh等,Exp Physiol 2011 96:13，所述文献以引用的方式并入本文中。

在某些实施方案中，所述D2SP可操作地连接至编码重组酶的核苷酸序列。可以使用任何合适的可以可操作地连接至所述D2SP的重组酶。合适的重组酶包括但不限于Cre和Flp重组酶和其衍生物。重组酶和其在诱导与靶核酸发生位点特异性重组中的用途描述于例如以下文献中：美国申请公布号20130019325和20060003443；美国专利号8,518392；和Wu等,PLoS One 2009 4:e8054，所述文献以引用的方式并入本文中。

光响应性多肽

如以上所概述，本公开内容的各方面包括可操作地连接至编码光响应性多肽的核苷酸序列的D2SP。光激活离子通道多肽适于当多肽被激活波长的光照射时允许一个或多个离子通过靶细胞的质膜。光激活蛋白质可以被表征为促进少量离子根据光的光子而通过质膜的离子泵蛋白质，或为当通道打开时允许离子流自由流过质膜的离子通道蛋白质。在一些实施方案中，当被具有激活波长的光激活时，所述光响应性多肽使靶细胞去极化。在一些实施方案中，当被具有激活波长的光激活时，所述光响应性多肽使靶细胞超极化。

在一些实施方案中，所述光响应性多肽被蓝光激活。在一些实施方案中，所述光响应性多肽被绿光激活。在一些实施方案中，所述光响应性多肽被黄光激活。在一些实施方案中，所述光响应性多肽被橙光激活。在一些实施方案中，所述光响应性多肽被红光激活。

在一些实施方案中，细胞中表达的光响应性多肽可以被融合至一个或多个氨基酸序列基序，所述氨基酸序列基序选自由信号肽、内质网(ER)输出信号、膜运输信号和/或N末端高尔基体输出信号组成的组。增加对哺乳动物细胞质膜的光响应性蛋白质转运的一个或多个氨基酸序列基序可以被融合至光响应性多肽的N末端、C末端或N末端与C末端二者。在一些情况下，增加对哺乳动物细胞质膜的光响应性多肽转运的一个或多个氨基酸序列基序被内部融合在光响应性多肽内。任选地，所述光响应性多肽和一个或多个氨基酸序列基序可能被接头分开。

在一些实施方案中，所述光响应性多肽可以通过加入增加蛋白质转运至细胞质膜的运输信号而加以修饰。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号可以包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

运输序列可以具有约10个氨基酸至约50个氨基酸，例如约10个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸或约40个氨基酸至约50个氨基酸的长度。

适合与光响应性多肽一起使用的ER输出序列包含例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)；VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ IDNO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。ER输出序列可以具有约5个氨基酸至约25个氨基酸，例如约5个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸或约20个氨基酸至约25个氨基酸的长度。

适合使用的信号序列可以包含与诸如以下项之一的氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列：1)hChR2的信号肽(例如MDYGGALSAVGRELLFVTNPVVVNGS(SEQ ID NO:62))；2)神经元烟碱乙酰胆碱受体的β2亚基信号肽(例如MAGHSNSMALFSFSLLWLCSGVLGTEF(SEQ ID NO:63))；3)烟碱乙酰胆碱受体信号序列(例如MGLRALMLWLLAAAGLVRESLQG(SEQ ID NO:64))；和4)烟碱乙酰胆碱受体信号序列(例如MRGTPLLLVVSLFSLLQD(SEQ ID NO:65))。

信号序列可以具有约10个氨基酸至约50个氨基酸，例如约10个氨基酸至约20个氨基酸、约20个氨基酸至约30个氨基酸、约30个氨基酸至约40个氨基酸或约40个氨基酸至约50个氨基酸的长度。

在一些实施方案中，蛋白质中的信号肽序列可以经过缺失或取代而具有来自不同蛋白质的信号肽序列。

示例性光响应性多肽描述于例如PCT申请号PCT/US2011/028893中，该案以引用的方式并入本文中。下面进一步描述在本公开内容中使用的代表性光响应性多肽。

去极化光响应性多肽

ChR

在一些方面，去极化光响应性多肽来源于莱茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)，其中当细胞被光照射时，所述多肽能够转运阳离子越过细胞膜。在另一个实施方案中，所述光响应性多肽包含与SEQ ID NO:4中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。用于激活所述来源于莱茵衣藻的光响应性阳离子通道蛋白的光可以具有在约460与约495nm之间的波长，或者可以具有约480nm的波长。另外，可以使用具有约100Hz时间频率的光脉冲来激活光响应性蛋白质。在一些实施方案中，用具有约100Hz时间频率的光脉冲激活来源于莱茵衣藻的光响应性阳离子通道可以引起表达光响应性阳离子通道的神经元的去极化。所述光响应性阳离子通道蛋白质可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低光响应性阳离子通道蛋白质调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述光响应性阳离子通道蛋白质可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的光响应性质子泵蛋白质适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的T159C取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的L132C取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的E123T取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQID NO:4中所示的氨基酸序列的E123A取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的T159C取代和E123T取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的T159C取代和E123A取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的T159C取代、L132C取代和E123T取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ IDNO:4中所示的氨基酸序列的T159C取代、L132C取代和E123A取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的L132C取代和E123T取代。在一些实施方案中，所述光响应性阳离子通道包含SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的L132C取代和E123A取代。

在一些实施方案中，ChR2蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述ChR2蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述ChR2蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ChR2蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ChR2蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以包含约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号可以包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述ChR2蛋白可以具有与SEQ ID NO:5中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在其他实施方案中，所述光响应性多肽是可以在蛋白质的视网膜结合袋中的关键位置具有特定氨基酸取代的阶跃函数视蛋白(SFO)蛋白质或稳定化阶跃函数视蛋白(SSFO)蛋白质。在一些实施方案中，所述SFO蛋白可以在SEQ ID NO:4的氨基酸残基C128处具有突变。在其他实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ ID NO:4中具有C128A突变。在其他实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ ID NO:4中具有C128S突变。在另一个实施方案中，所述SFO蛋白在SEQID NO:4中具有C128T突变。

在一些实施方案中，所述SSFO蛋白可以在SEQ ID NO:4的氨基酸残基D156处具有突变。在其他实施方案中，所述SSFO蛋白可以在SEQ ID NO:4的氨基酸残基C128和D156二者处都具有突变。在一个实施方案中，所述SSFO蛋白在SEQ ID NO:4中具有C128S和D156A突变。在另一个实施方案中，所述SSFO蛋白可以包含与SEQ ID NO:6中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；而且在氨基酸128处包括丙氨酸、丝氨酸或苏氨酸；并且在氨基酸156处包括丙氨酸。在另一个实施方案中，所述SSFO蛋白可以在SEQ ID NO:4中包含C128T突变。在一些实施方案中，所述SSFO蛋白在SEQ ID NO:6中包含C128T和D156A突变。

在一些实施方案中，本文中提供的SFO或SSFO蛋白质可以在细胞被蓝光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在其他实施方案中，所述光可以具有约445nm的波长。另外，在一些实施方案中，由于SFO和SSFO光电流的长期稳定性，光可以作为单次光脉冲或作为间隔光脉冲来递送。在一些实施方案中，用单次光脉冲或间隔光脉冲激活SFO或SSFO蛋白可以导致表达所述SFO或SSFO蛋白的神经元的去极化。在一些实施方案中，所公开的阶跃函数视蛋白和稳定化阶跃函数视蛋白蛋白质中各自可以具有用于响应于光而使神经元细胞膜去极化的特定性质和特征。

关于SFO或SSFO蛋白的进一步公开内容可见于国际专利申请公布号WO 2010/056970，其公开内容以全文引用的方式并入在此。

在一些情况下，基于ChR2的SFO或SSFO包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述SSFO蛋白包含与SEQ ID NO:7中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

团藻光响应性多肽

在一些实施方案中，合适的光响应性多肽是来源于团藻的阳离子通道(VChR1)，并且通过用具有约500nm至约600nm，例如约525nm至约550nm，例如545nm的波长的光进行照射而被激活。在一些实施方案中，所述光响应性离子通道蛋白质包含与SEQ ID NO:8中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述光响应性离子通道蛋白质可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低光响应性离子通道蛋白质调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述光响应性离子通道蛋白质可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的光响应性离子通道蛋白质适当地保留了响应于光而转运离子越过神经元细胞的细胞膜的能力。

在一些情况下，VChR1光响应性阳离子通道蛋白质包含与SEQ ID NO:8中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对哺乳动物细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述光响应性质子离子通道包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述光响应性离子通道蛋白质包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述光响应性离子通道蛋白质包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述光响应性离子通道蛋白质包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些实施方案中，所述运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述VChR1蛋白包含与SEQ ID NO:9中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

基于VChR1的阶跃函数视蛋白和稳定阶跃函数视蛋白

在其他实施方案中，所述光响应性多肽基于VChR1的SFO或SSFO。在一些实施方案中，所述SFO蛋白可以在SEQ ID NO:8的氨基酸残基C123处具有突变。在其他实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ ID NO:8中具有C123A突变。在其他实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ IDNO:8中具有C123S突变。在另一个实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ ID NO:8中具有C123T突变。

在一些实施方案中，所述SFO蛋白可以在SEQ ID NO:8的氨基酸残基D151处具有突变。在其他实施方案中，所述SFO蛋白可以在SEQ ID NO:8的氨基酸残基C123和D151二者处都具有突变。在一个实施方案中，所述SFO蛋白在SEQ ID NO:8中具有C123S和D151A突变。

在一些实施方案中，SFO或SSFO蛋白质在细胞被蓝光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光具有约560nm的波长。另外，在一些实施方案中，由于SFO和SSFO光电流的长期稳定性，光作为单次光脉冲或作为间隔光脉冲来递送。在一些实施方案中，用单次光脉冲或间隔光脉冲激活SFO或SSFO蛋白可以导致表达所述SFO或SSFO蛋白的神经元的去极化。在一些实施方案中，所公开的阶跃函数视蛋白和稳定化阶跃函数视蛋白蛋白质中各自可以具有用于响应于光而使神经元细胞膜去极化的特定性质和特征。

在一些情况下，基于VChR1的SFO或SSFO包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

C1V1嵌合阳离子通道

在其他实施方案中，所述光响应性阳离子通道蛋白质是来源于团藻的VChR1蛋白和来自莱茵衣藻的ChR1蛋白的C1V1嵌合蛋白，其中所述蛋白质包含至少第一和第二跨膜螺旋被ChR1的第一和第二跨膜螺旋置换的VChR1氨基酸序列；对光有反应；并且当细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述C1V1蛋白还包含在位于所述嵌合光响应性蛋白质的第二和第三跨膜螺旋之间的细胞内环结构域内的置换，其中所述细胞内环结构域的至少一部分被来自ChR1的相应部分置换。在另一个实施方案中，所述C1V1嵌合蛋白的细胞内环结构域的所述部分可以被来自ChR1的延伸至ChR1的氨基酸残基A145的相应部分置换。在其他实施方案中，所述C1V1嵌合蛋白还包含在所述嵌合光响应性蛋白质的第三跨膜螺旋内的置换，其中所述第三跨膜螺旋的至少一部分被ChR1的相应序列置换。在又另一个实施方案中，所述C1V1嵌合蛋白的细胞内环结构域的所述部分可以被来自ChR1的延伸至ChR1的氨基酸残基W163的相应部分置换。在其他实施方案中，所述C1V1嵌合蛋白包含与SEQ ID NO:10中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，所述C1V1蛋白在细胞被绿光照射时介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光具有在约540nm至约560nm之间的波长。在一些实施方案中，所述光可以具有约542nm的波长。在一些实施方案中，所述C1V1嵌合蛋白在细胞被紫光照射时不能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白在细胞被具有约405nm波长的光照射时不能够介导细胞中的去极化电流。另外，在一些实施方案中，可以使用具有约100Hz时间频率的光脉冲来激活所述C1V1蛋白。

在一些情况下，所述C1V1多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ IDNO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述C1V1蛋白包含与SEQ ID NO:11中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

C1V1变体

在一些方面，合适的光响应性多肽包含被取代或突变的氨基酸序列，其中突变多肽保留前体C1V1嵌合多肽的特征性光可激活性质，但在一些特定方面，还可以具有改变的性质。举例来说，本文中所描述的突变光响应性C1V1嵌合蛋白质可以在动物细胞中或在动物细胞质膜上表现出增加的表达水平；当暴露于不同波长的光，特别是红光时，反应性发生改变；和/或借以使所述嵌合C1V1多肽具有低脱敏、快速失活、低紫光激活以便与其他光响应性阳离子通道存在最小程度的交叉激活和/或在动物细胞中的强表达等性质的性状的组合。

因此，合适的光响应性蛋白质包括可以在嵌合多肽的VChR1部分的整个视网膜结合袋的关键位置具有特定氨基酸取代的C1V1嵌合光响应性蛋白质。在一些实施方案中，所述C1V1蛋白在SEQ ID NO:10的氨基酸残基E122处包含氨基酸取代。在一些实施方案中，所述C1V1蛋白在SEQ ID NO:10的氨基酸残基E162处包含取代。在其他实施方案中，所述C1V1蛋白在SEQ ID NO:10的氨基酸残基E162和E122二者处包含取代。

在一些方面，所述C1V1-E122突变嵌合蛋白在细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光是绿光。在其他实施方案中，所述光具有在约540nm至约560nm之间的波长。在一些实施方案中，所述光具有约546nm的波长。在其他实施方案中，所述C1V1-E122突变嵌合蛋白在细胞被红光照射时介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光具有约630nm的波长。在一些实施方案中，所述C1V1-E122突变嵌合蛋白在细胞被紫光照射时不介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白在细胞被具有约405nm波长的光照射时不介导细胞中的去极化电流。另外，在一些实施方案中，可以使用具有约100Hz时间频率的光脉冲来激活所述C1V1-E122突变嵌合蛋白。在一些实施方案中，用具有100Hz频率的光脉冲激活C1V1-E122突变嵌合蛋白可能导致表达所述C1V1-E122突变嵌合蛋白的神经元的去极化。

在其他方面，所述C1V1-E162突变嵌合蛋白在细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光可以是绿光。在其他实施方案中，所述光可以具有在约535nm至约540nm之间的波长。在一些实施方案中，所述光可以具有约542nm的波长。在其他实施方案中，所述光可以具有约530nm的波长。在一些实施方案中，所述C1V1-E162突变嵌合蛋白在细胞被紫光照射时不介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白在细胞被具有约405nm波长的光照射时不介导细胞中的去极化电流。另外，在一些实施方案中，可以使用具有约100Hz时间频率的光脉冲来激活所述C1V1-E162突变嵌合蛋白。在一些实施方案中，用具有100Hz频率的光脉冲激活C1V1-E162突变嵌合蛋白可能导致表达所述C1V1-E162突变嵌合蛋白的神经元发生去极化诱导的突触消耗。

在又其他方面，所述C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白在细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述光可以是绿光。在其他实施方案中，所述光可以具有在约540nm至约560nm之间的波长。在一些实施方案中，所述光可以具有约546nm的波长。在一些实施方案中，所述C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白在细胞被紫光照射时不介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白在细胞被具有约405nm波长的光照射时不介导细胞中的去极化电流。在一些实施方案中，当暴露于紫色光时，相对于缺乏E122/E162处的突变的C1V1嵌合蛋白或者相对于其他光响应性阳离子通道蛋白，所述C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白可以表现出更少激活。另外，在一些实施方案中，可以使用具有约100Hz时间频率的光脉冲来激活所述C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白。在一些实施方案中，用具有100Hz频率的光脉冲激活C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白可能导致表达所述C1V1-E122/E162突变嵌合蛋白的神经元发生去极化诱导的突触消耗。

在一些情况下，所述C1V1变体多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

C1C2嵌合阳离子通道

在其他实施方案中，所述光响应性阳离子通道蛋白质是来源于来自莱茵衣藻的ChR1蛋白和ChR2蛋白的C1C2嵌合蛋白，其中所述蛋白质对光有反应并且当细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在另一个实施方案中，所述光响应性多肽包含与SEQ IDNO:12中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述光响应性阳离子通道蛋白质可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低光响应性阳离子通道蛋白质调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述光响应性阳离子通道蛋白质包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的光响应性质子泵蛋白质适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，C1C2蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述C1C2蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述C1C2蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述C1C2蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述C1C2蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在某些实施方案中，所述C1C2蛋白包含与SEQ ID NO:13中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

ReaChR

在一些方面，去极化光响应性多肽是来源于莱茵衣藻的去极化光响应性多肽的红移变体；此类光响应性多肽在本文中被称为“ReaChR多肽”或“ReaChR蛋白”或“ReaChR”。在另一个实施方案中，所述光响应性多肽包含与SEQ ID NO:14中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。用于激活所述ReaChR多肽的光可以具有在约590和约630nm之间的波长，或可以具有约610nm的波长。所述ReaChR蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低光响应性阳离子通道蛋白质调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述ReaChR蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的ReaChR适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，ReaChR蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述ReaChR蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述ReaChR蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ReaChR蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ReaChR蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在某些实施方案中，所述ReaChR蛋白包含与SEQ ID NO:15中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

SdChR

在一些方面，去极化光响应性多肽是来源于Scherffelia dubia的SdChR多肽，其中当细胞被光照射时，所述SdChR多肽能够转运阳离子越过细胞膜。在一些情况下，所述SdChR多肽包含与SEQ ID NO:16中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。用于激活所述SdChR多肽的光可以具有在约440和约490nm之间的波长，或可以具有约460nm的波长。所述SdChR蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述SdChR蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。在一些情况下，所述SdChR蛋白包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的SdChR蛋白适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，SdChR蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述SdChR蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述SdChR蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述SdChR蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述SdChR蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ IDNO:56)。适合使用的运输序列包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述SdChR蛋白包含与SEQ ID NO:17中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

CnChR1

在一些方面，去极化光响应性多肽可以是例如来源于夜配衣藻(Chlamydomonasnoctigama)的CnChR1，其中当细胞被光照射时，所述CnChR1多肽能够转运阳离子越过细胞膜。在一些情况下，所述CnChR1多肽包含与SEQ ID NO:18中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。用于激活所述CnChR1多肽的光可以具有在约560和约630nm之间的波长，或可以具有约600nm的波长。所述CnChR1蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述CnChR1蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。在一些情况下，所述CnChR1蛋白包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的CnChR1蛋白适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，CnChR1蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述CnChR1蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述CnChR1蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述CnChR1蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述CnChR1蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在某些实施方案中，所述CnChR1蛋白包含与SEQ ID NO:19中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

CsChrimson

在其他实施方案中，所述光响应性阳离子通道蛋白质是来源于Chloromonassubdivisa的CsChR蛋白和来自夜配衣藻的CnChR1蛋白的CsChrimson嵌合蛋白，其中所述蛋白质的N末端包含CsChR的氨基酸序列的残基1-73，接着是CnChR1的氨基酸序列的残基79-350；对光有反应；并且当细胞被光照射时能够介导细胞中的去极化电流。在另一个实施方案中，所述CsChrimson多肽包含与SEQ ID NO:20中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述CsChrimson蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述CsChrimson蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述CsChrimson蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的CsChrimson蛋白适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，CsChrimson蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述CsChrimson蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述CsChrimson蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述CsChrimson蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述CsChrimson蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在某些实施方案中，所述CsChrimson蛋白包含与SEQ ID NO:21中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

ShChR1

在一些方面，去极化光响应性多肽可以是例如来源于淡黄毛枝藻(Stigeocloniumhelveticum)的ShChR1，其中当细胞被光照射时，所述ShChR1多肽能够转运阳离子越过细胞膜。在一些情况下，所述ShChR1多肽包含与SEQ ID NO:22中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。用于激活所述来源于淡黄毛枝藻的ShChR1蛋白的光可以具有在约480和约510nm之间的波长，或可以具有约500nm的波长。所述ShChR1蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述ShChR1蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述ShChR1蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的ShChR1蛋白适当地保留了转运阳离子越过细胞膜的能力。

在一些实施方案中，ShChR1蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述ShChR1蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述ShChR1蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ShChR1蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述ShChR1蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ IDNO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述ShChR1蛋白包含与SEQ ID NO:23中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

其他合适的去极化光响应性多肽描述于例如Klapoetke等,Nat Methods 201411:338中。

超极化光响应性多肽

Arch

在一些实施方案中，合适的光响应性多肽是古紫质(Arch)质子泵(例如，来源于苏打盐红菌(Halorubrum sodomense)的质子泵)，当细胞被光照射时，其可以转运一个或多个质子越过细胞的质膜。所述光可以具有在约530和约595nm之间的波长，或可以具有约560nm的波长。在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含与SEQ ID NO:24中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述Arch蛋白可以另外具有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述Arch蛋白转运离子越过靶细胞的质膜的能力。另外，所述Arch蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的Arch蛋白适当地保留了响应于光而转运离子越过靶细胞的质膜的能力。

在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自信号肽、ER输出信号和膜运输信号的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Arch蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些实施方案中，所述运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号可以包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ IDNO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述Arch蛋白包含与SEQ ID NO:25中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

ArchT

在一些实施方案中，合适的光激活蛋白质是古紫质(ArchT)质子泵(例如，来源于盐红菌属某种(Halorubrum sp.)TP009的质子泵)，在细胞被光照射时，其可以转运一个或多个质子越过所述细胞的质膜。所述光可以具有在约530和约595nm之间的波长，或可以具有约560nm的波长。在一些实施方案中，所述ArchT蛋白包含与SEQ ID NO:26(ArchT)中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述ArchT蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述ArchT蛋白转运离子越过靶细胞的质膜的能力。另外，所述ArchT蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的ArchT蛋白适当地保留了响应于光而转运离子越过靶细胞的质膜的能力。

在一些情况下，所述ArchT多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述ArchT蛋白包含与SEQ ID NO:27中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

GtR3

在一些实施方案中，所述光响应性多肽响应于蓝光，并且是来源于蓝隐藻(Guillardia theta)的质子泵，其中当用蓝光照射细胞时，所述质子泵蛋白能够介导细胞中的超极化电流；这样的蛋白质在本文中被称为“GtR3蛋白”或“GtR3多肽”。所述光可以具有在约450和约495nm之间的波长，或可以具有约490nm的波长。在一些实施方案中，所述GtR3蛋白包含与SEQ ID NO:28(GtR3)中所示的序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述GtR3蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述GtR3蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述GtR3蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的GtR3蛋白适当地保留了响应于光而使神经元细胞的质膜超极化的能力。

在一些情况下，GtR3蛋白包含与SEQ ID NO:28中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对哺乳动物细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述GtR3蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述GtR3蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述光响应性质子泵蛋白质包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述GtR3蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述信号肽包含氨基酸序列MDYGGALSAVGRELLFVTNPVVVNGS(SEQ ID NO:62)。在一些实施方案中，前19个氨基酸被MDYGGALSAVGRELLFVTNPVVVNGS(SEQ ID NO:62)置换。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述GtR3蛋白还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在某些实施方案中，GtR3蛋白包含与SEQ ID NO:29中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

Oxy

在一些实施方案中，光激活蛋白是尖尾藻(Oxyrrhis marina，Oxy)质子泵，当细胞被光照射时，其可以转运一个或多个质子越过所述细胞的质膜。所述光可以具有在约500和约560nm之间的波长，或可以具有约530nm的波长。在一些实施方案中，所述Oxy蛋白包含与SEQ ID NO:30中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述Oxy蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述Oxy蛋白转运离子越过靶细胞的质膜的能力。另外，所述Oxy蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的Oxy蛋白适当地保留了响应于光而转运离子越过靶细胞的质膜的能力。

在一些实施方案中，Oxy蛋白包含至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对靶细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述Oxy蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述Oxy蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Oxy蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Oxy蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述Oxy蛋白还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些情况下，所述Oxy多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述Oxy蛋白包含与SEQ ID NO:31中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

Mac

在一些实施方案中，所述光响应性质子泵蛋白(在本文中被称为“Mac蛋白”)对光有反应，并且来源于斑点小球腔菌(Leptosphaeria maculans)，其中当用520nm至560nm光照射细胞时，所述Mac质子泵蛋白能够泵送质子越过细胞膜。所述光可以具有在约520nm至约560nm之间的波长。在一些情况下，Mac蛋白包含与SEQ ID NO:32或SEQ ID NO:33(Mac；Mac 3.0)中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述Mac蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述Mac蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述Mac蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的Mac蛋白适当地保留了响应于光而泵送质子越过神经元细胞的质膜的能力。

在其他方面，Mac蛋白包含与SEQ ID NO:32中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对哺乳动物细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述Mac蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述Mac蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Mac蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述Mac蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以包含约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述Mac蛋白还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些情况下，所述Mac多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

关于光激活质子泵蛋白的进一步公开内容可见于国际专利申请号PCT/US2011/028893，其公开内容以全文引用的方式并入在此。

NpHR

在一些情况下，合适的光响应性氯离子泵蛋白质来源于法老嗜盐碱单胞菌(Natronomonas pharaonis)；这样的蛋白质在本文中被称为“NpHR蛋白”或“NpHR多肽”。在一些实施方案中，当所述NpHR蛋白被琥珀色或红色光照射时，所述NpHR蛋白可以响应于琥珀色光以及红光，并且可以介导神经元中的超极化电流。可以激活所述NpHR蛋白的光的波长可以在约580和630nm之间。在一些实施方案中，所述光可以在约589nm的波长下，或者所述光可以具有大于约630nm(例如小于约740nm)的波长。在另一个实施方案中，所述光具有约630nm的波长。在一些实施方案中，当暴露于连续脉冲光时，所述NpHR蛋白可以使神经膜超极化达至少约90分钟。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。另外，所述NpHR蛋白可以包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述NpHR蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白包含一个或多个保守氨基酸取代。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白包含一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的NpHR蛋白适当地保留了响应于光而使神经元细胞的质膜超极化的能力。

在一些情况下，NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和内质网(ER)输出信号。该ER输出信号可以融合至所述核心氨基酸序列的C末端，或者可以融合至所述核心氨基酸序列的N末端。在一些实施方案中，所述ER输出信号通过接头连接至所述核心氨基酸序列。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列FXYENE(SEQ ID NO:60)，其中X可以是任何氨基酸。在另一个实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列VXXSL，其中X可以是任何氨基酸。在一些实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列FCYENEV(SEQ ID NO:61)。

适合使用的内质网(ER)输出序列包含例如VXXSL(其中X是任何氨基酸))(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。ER输出序列可以具有约5个氨基酸至约25个氨基酸，例如约5个氨基酸至约10个氨基酸、约10个氨基酸至约15个氨基酸、约15个氨基酸至约20个氨基酸或约20个氨基酸至约25个氨基酸的长度。

在其他方面，NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和运输信号(例如，其可以增加所述NpHR蛋白向质膜的转运)。所述运输信号可以融合至所述核心氨基酸序列的C末端，或者可以融合至所述核心氨基酸序列的N末端。在一些实施方案中，所述运输信号可以通过接头连接至所述核心氨基酸序列，所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述NpHR蛋白还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述运输信号可以来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号可以包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。

在一些方面，NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对哺乳动物细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述NpHR蛋白还可以进一步包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在其他实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述信号肽包含氨基酸序列MTETLPPVTESAVALQAE(SEQ ID NO:66)。在另一个实施方案中，所述NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:35具有至少95％同一性的氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:36具有至少95％同一性的氨基酸序列。

此外，在其他方面，NpHR蛋白的核心氨基酸序列与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性，其中SEQ ID NO:34的N末端信号肽被缺失或取代。在一些实施方案中，可以使用其他信号肽(诸如来自其他视蛋白的信号肽)。所述光响应性蛋白质还可以包含本文中所描述的ER转运信号和/或膜运输信号。

在一些实施方案中，所述光响应性蛋白质是包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少75％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列的NpHR蛋白。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白还包含内质网(ER)输出信号和/或膜运输信号。举例来说，所述NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列和内质网(ER)输出信号。在一些实施方案中，所述与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列通过接头连接至所述ER输出信号。在一些实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列FXYENE(SEQ ID NO:60)，其中X可以是任何氨基酸。在另一个实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列VXXSL，其中X可以是任何氨基酸。在一些实施方案中，所述ER输出信号包含氨基酸序列FCYENEV(SEQ IDNO:61)。在一些实施方案中，所述NpHR蛋白包含与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列、ER输出信号和膜运输信号。在其他实施方案中，所述NpHR蛋白从N末端到C末端包含所述与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列、所述ER输出信号和所述膜运输信号。在其他实施方案中，所述NpHR蛋白从N末端到C末端包含所述与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列、所述膜运输信号和所述ER输出信号。在一些实施方案中，所述膜运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述膜运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。在一些实施方案中，所述膜运输信号通过接头连接至与SEQ ID NO:34中所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述膜运输信号通过接头连接至所述ER输出信号。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述接头还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述光响应性蛋白质还包含N-末端信号肽。

关于光响应性氯离子泵蛋白的进一步公开内容可见于美国专利申请公布号2009/0093403和2010/0145418以及国际专利申请号PCT/US2011/028893，各自的公开内容以全文引用的方式并入在此。

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)光响应性多肽

在一些实施方案中，合适的光响应性离子通道蛋白是例如来源于盐生杜氏藻的DsChR蛋白，其中当细胞被光照射时，所述离子通道蛋白能够介导细胞中的超极化电流。所述光可以具有在约470和约510nm之间的波长，或可以具有约490nm的波长。在一些实施方案中，DsChR蛋白包含与SEQ ID NO:37中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。所述DsChR蛋白可以另外包含引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入以增加或降低对光的敏感度，增加或降低对特定波长的光的敏感度，和/或增加或降低所述DsChR蛋白调节细胞质膜的偏振状态的能力。另外，所述DsChR蛋白可以包含一个或多个保守氨基酸取代和/或一个或多个非保守氨基酸取代。含有引入天然氨基酸序列中的取代、缺失和/或插入的DsChR蛋白适当地保留了响应于光而转运离子越过神经元细胞的质膜的能力。

在一些情况下，DsChR蛋白包含与SEQ ID NO:37中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的核心氨基酸序列和至少一个(诸如一个、两个、三个或更多个)选自由信号肽、ER输出信号和膜运输信号组成的组的增加对哺乳动物细胞质膜的转运的氨基酸序列基序。在一些实施方案中，所述DsChR蛋白包含N末端信号肽和C末端ER输出信号。在一些实施方案中，所述DsChR蛋白包含N末端信号肽和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述DsChR蛋白包含N末端信号肽、C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施方案中，所述DsChR蛋白包含C末端ER输出信号和C末端运输信号。在一些实施例中，所述C末端ER输出信号和所述C末端运输信号通过接头连接。所述接头可以是约5、10、20、30、40、50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、400或500个氨基酸中的任一长度。所述DsChR蛋白还可以包含荧光蛋白，例如但不限于黄色荧光蛋白、红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白或青色荧光蛋白。在一些实施方案中，所述ER输出信号位于比所述运输信号更靠近C末端处。在一些实施方案中，所述运输信号位于比所述ER输出信号更靠近C末端处。

在一些情况下，所述DsChR多肽包含膜运输信号和/或ER输出信号。在一些实施方案中，所述运输信号来源于人内向整流钾通道Kir2.1的氨基酸序列。在其他实施方案中，所述运输信号包含氨基酸序列KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56)。适合使用的运输序列可以包含与诸如人内向整流钾通道Kir2.1的运输序列(例如KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56))等氨基酸序列具有至少85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述ER输出信号是例如VXXSL(其中X是任何氨基酸)(例如VKESL(SEQ ID NO:57)、VLGSL(SEQ ID NO:58)等)；NANSFCYENEVALTSK(SEQ ID NO:59)；FXYENE(SEQ ID NO:60)(其中X是任何氨基酸)，例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61)；等等。

在某些实施方案中，所述DsChR蛋白包含与SEQ ID NO:38中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

基于C1C2的阴离子通道多肽

在一些实施方案中，光响应性阴离子通道多肽是C1C2蛋白。在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述C1C2蛋白的氨基酸序列是通过将一个或多个以下突变引入所述氨基酸序列中而加以修饰：T98S、E129S、E140S、E162S、V156K、H173R、T285N、V281K和/或N297Q。在一些实施方案中，C1C2蛋白包含具有以上列出的所有9个氨基酸取代的蛋白质C1C2氨基酸序列，使得所述C1C2多肽的氨基酸序列是SEQ IDNO:39中所示的那个。

在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于C1C2的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)，包含1、2、3、4、5、6、7、8或9个选自T98S、E129S、E140S、E162S、V156K、H173R、T285N、V281K和/或N297Q的氨基酸取代。在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ IDNO:39中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于C1C2的氨基酸序列，包含T98S、E129S、E140S、E162S和T285N取代。在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于C1C2的氨基酸序列，包含V156K、H173R、V281K和N297Q取代。

在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:39中所示。在一些实施方案中，C1C2多肽包含与SEQ ID NO:39中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:39中所示。在这些实施方案中的任一个中，C1C2多肽可以包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，C1C2多肽可以包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，C1C2多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述C1C2蛋白包含与SEQ ID NO:40中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，C1C2多肽基于蛋白质C1C2的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)，其中所述氨基酸序列已经通过用来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11(MDYGGALSAVG)(SEQ ID NO:55)置换C1C2的前50个N末端氨基酸而加以修饰。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽被称为“ibC1C2”，并且包含与SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:43中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ IDNO:43中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:43中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含SEQ IDNO:43中所示的氨基酸序列。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述ibC1C2蛋白包含与SEQ ID NO:44中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽基于蛋白质C1C2的氨基酸序列(SEQ ID NO:12)，其中167位的半胱氨酸氨基酸残基已经被苏氨酸残基置换。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽，例如SwiChR_CT，包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含T167。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含T167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，光响应性阴离子通道多肽包含SEQ IDNO:5中所提供的氨基酸序列。在这些实施方案中的一些中，所述光响应性多肽表现出长期光电流稳定性。在一些实施方案中，前50个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ ID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽基于蛋白质C1C2的氨基酸序列，其中167位的半胱氨酸氨基酸残基已经被丙氨酸残基置换。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽，SwiChR_CA，包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含A167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含A167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，前50个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ ID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽基于蛋白质C1C2的氨基酸序列，其中167位的半胱氨酸氨基酸残基已经被丝氨酸残基置换。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽，SwiChR_CS，包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含S167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含S167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，前50个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ ID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在某些实施方案中，所述SwiChR蛋白包含与SEQ ID NO:42中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽，SwiChR，包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；包含N195或A195；而且包含A167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:41中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；包含A167；而且包含N195或A195，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:41中所示。在一些实施方案中，前50个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质C1C2氨基酸序列，其中195位的天冬氨酸氨基酸残基已经被丙氨酸残基置换。在所述蛋白质的前50个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:12中所示的C1C2氨基酸序列的原始位置195)被丙氨酸残基置换。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质C1C2氨基酸序列，其中原始195位的天冬氨酸氨基酸残基已经被天冬酰胺残基置换。在所述蛋白质的前50个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:12中所示的C1C2氨基酸序列的原始位置195)被天冬酰胺残基置换。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含A128、T128或S128，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:43中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:43中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含A128、T128或S128，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:43中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

基于ChR2的阴离子通道蛋白

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于蛋白质ChR2的氨基酸序列。ChR2的氨基酸序列如SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，所述ChR2蛋白的氨基酸序列已经通过将一个或多个以下突变引入所述氨基酸序列中而加以修饰：A59S、E90S、E101S、E123S、Q117K、H134R、V242K、T246N和/或N258Q。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含具有以上列出的所有9个氨基酸取代的蛋白质ChR2氨基酸序列，使得所述多肽的氨基酸序列被提供在SEQ ID NO:45(iChR2)中。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽iChR2包含与SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于ChR2的氨基酸序列(SEQ ID NO:4)，包含1、2、3、4、5、6、7、8或9个选自A59S、E90S、E101S、E123S、Q117K、H134R、V242K、T246N和/或N258Q的氨基酸取代。

在一些实施方案中，合适的光响应性多肽(“iChR2”)包含与SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、K242、N246和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:45中所示。在一些实施方案中，iChR2多肽包含与SEQID NO:45中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、K242、N246、Q258，和N156或A156二选一以及T128、A128或S128三选一，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:45中所示。在一些实施方案中，iChR2多肽包含与SEQ ID NO:45中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、K242、N246和Q258，其中氨基酸编号如SEQ IDNO:45中所示。在这些实施方案中的任一个中，iChR2多肽可以包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，iChR2多肽可以包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，iChR2多肽可以包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述iChR2蛋白包含与SEQ IDNO:46中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

基于C1V1的阴离子通道多肽

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于蛋白质C1V1的氨基酸序列。C1V1的氨基酸序列如SEQ ID NO:10中所示。在一些实施方案中，所述C1V1蛋白的氨基酸序列已经通过将一个或多个以下突变引入所述氨基酸序列中而加以修饰：T98S、E129S、E140S、E162S、V156K、H173R、A285N、P281K和/或N297Q。在一些实施方案中，超极化光响应性多肽包含具有以上列出的所有9个氨基酸取代的蛋白质C1V1氨基酸序列，使得所述多肽的氨基酸序列被提供在SEQ ID NO:47中。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽iC1V1包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于C1V1的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)，包含1、2、3、4、5、6、7、8或9个选自T98S、E129S、E140S、E162S、V156K、H173R、A285N、P281K和/或N297Q的氨基酸取代。

在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽iC1V1包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:47中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽(被称为“iC1V1”)包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297，并且包含N195，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:47中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:47中所示。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。在某些实施方案中，所述iC1V1蛋白可以具有与SEQ ID NO:48中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于蛋白质C1V1的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)，其中所述氨基酸序列已经通过用来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11(MDYGGALSAVG)(SEQ ID NO:55)置换C1V1的前50个N末端氨基酸而加以修饰。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽ibC1V1包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽(被称为”ibC1V1”)包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，而且包含N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在一些实施方案中，合适的光响应性阴离子通道多肽包含SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述ibC1V1蛋白包含与SEQ ID NO:50中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于蛋白质C1V1的氨基酸序列(SEQ ID NO:10)，其中167位的半胱氨酸氨基酸残基已经被苏氨酸残基置换。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；并且包含T167。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含T167、S167或A167，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:47中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:47中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S98、S129、S140、S162、K156、R173、N285、K281和Q297；而且包含T167、S167或A167；而且包含A195或N195，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:47中所示。在一些实施方案中，前50个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ ID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，合适的超极化光响应性多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的超极化光响应性多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的超极化光响应性多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质C1V1氨基酸序列，其中原始195位的天冬氨酸氨基酸残基已经被丙氨酸残基置换。在所述蛋白质的前50个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:10中所示的C1V1氨基酸序列的原始位置195)被丙氨酸残基置换。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质C1V1氨基酸序列，其中原始195位的天冬氨酸氨基酸残基已经被天冬酰胺残基置换。在所述蛋白质的前50个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:10中所示的C1V1氨基酸序列的原始位置195)被天冬酰胺残基置换。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽ibC1V1包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128、A128或S128，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128、A128或S128，其中氨基酸编号如SEQ IDNO:49中所示。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，合适的阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128、A128或S128；而且包含A156或N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在一些实施方案中，合适的超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:49中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128、A128或S128；而且包含A156或N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:49中所示。在这些实施方案中的任一个中，合适的超极化光响应性多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，合适的超极化光响应性多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

基于ReaChR的阴离子通道多肽

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于蛋白质ReaChR的氨基酸序列。ReaChR的氨基酸序列如SEQ ID NO:14中所示。在一些实施方案中，所述ReaChR蛋白的氨基酸序列已经通过将一个或多个以下突变引入所述氨基酸序列中而加以修饰：T99S、E130S、E141S、E163S、V157K、H174R、A286N、P282K和/或N298Q。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含具有以上列出的所有9个氨基酸取代的蛋白质ReaChR氨基酸序列，使得所述多肽的氨基酸序列被提供在SEQ ID NO:51中。

在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且相对于ReaChR的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)，包含1、2、3、4、5、6、7、8或9个选自T99S、E130S、E141S、E163S、V157K、H174R、A286N、P282K和/或N298Q的氨基酸取代。

在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽iReaChR包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ IDNO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述iReaChR蛋白包含与SEQ ID NO:52中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽iReaChR包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298，而且包含N196，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298，而且包含N196，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于蛋白质ReaChR的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)，其中所述氨基酸序列已经通过用来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11(MDYGGALSAVG)(SEQ ID NO:55)置换ReaChR的前51个N末端氨基酸而加以修饰。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽ibReaChR包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在一些实施方案中，本发明光响应性阴离子通道多肽包含SEQ IDNO:53中所示的氨基酸序列。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。因此，在某些实施方案中，所述ibReaChR蛋白可以具有与SEQ ID NO:54中所示的序列具有至少75％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于蛋白质ReaChR的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)，其中所述氨基酸序列已经通过用来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11(MDYGGALSAVG)(SEQ ID NO:55)置换ReaChR的前51个N末端氨基酸而加以修饰。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，而且包含N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258，而且包含N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于蛋白质ReaChR的氨基酸序列(SEQ ID NO:14)，其中168位的半胱氨酸氨基酸残基已经被苏氨酸残基置换。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298；而且包含T168、S168或A168。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:60中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298；而且包含T168、S168或A168，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在一些实施方案中，前51个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ IDNO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽iReaChR包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298；包含A196或N196；而且包含T168、S168或A168，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:51中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S99、S130、S141、S163、K157、R174、N286、K281和Q298；包含A196或N196；而且包含T168、S168或A168，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:51中所示。在一些实施方案中，前51个氨基酸被MDYGGALSAVG(SEQ ID NO:55)置换。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质ReaChR氨基酸序列，其中原始196位的天冬氨酸氨基酸残基已经被丙氨酸残基置换。在所述蛋白质的前51个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:14中所示的ReaChR氨基酸序列的原始位置196)被丙氨酸残基置换。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽基于具有一个或多个上述修饰的蛋白质ReaChR氨基酸序列，其中原始196位的天冬氨酸氨基酸残基已经被天冬酰胺残基置换。在所述蛋白质的前51个N末端氨基酸被来自蛋白质ChR2的氨基酸1-11置换的某些实施方案中，156位的天冬氨酸氨基酸残基(其对应于SEQ ID NO:14中所示的ReaChR氨基酸序列的原始位置196)被天冬酰胺残基置换。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽ibReaChR包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128、S128或A128，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；而且包含T128，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽ibReaChR包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含以下项中的1、2、3、4、5、6、7、8或9个：S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；包含T128、S128或A128；而且包含A156或N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在一些实施方案中，本发明超极化光响应性多肽包含与SEQ ID NO:53中所示的氨基酸序列具有至少58％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；并且包含S59、S90、S101、S123、K117、R134、N246、K242和Q258；包含T128、S128或A128；而且包含A156或N156，其中氨基酸编号如SEQ ID NO:53中所示。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ IDNO:61))。在这些实施方案中的任一个中，本发明阴离子通道多肽包含膜运输信号(例如，KSRITSEGEYIPLDQIDINV(SEQ ID NO:56))和ER输出信号(例如，FCYENEV(SEQ ID NO:61))二者。

表达载体

如上所述，本公开的各方面包括重组表达载体，所述重组表达载体包含含D2SP的核酸。合适的表达载体包括包含编码RNA(例如mRNA)的核苷酸序列的载体，当从载体的多核苷酸转录时，所述RNA将引起本发明基因产物的表达。在一些情况下，所述基因产物是多肽。在一些情况下，所述表达载体中编码的基因产物是表达在靶细胞的质膜上的光响应性多肽。在其他情况下，所述表达载体中编码的基因产物是表达在靶细胞的胞质溶胶中的荧光蛋白。可以使用的载体包括但不限于慢病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒和腺相关病毒(AAV)载体。慢病毒载体包括但不限于基于人免疫缺陷病毒(HIV)的载体。慢病毒载体可以用其他病毒的包膜蛋白进行假型化，包括但不限于水泡性口炎病毒(VSV)、狂犬病毒、猴-鼠白血病病毒(MLV)、杆状病毒和埃博拉病毒。此类载体可以使用本领域中的标准方法来制备。

其他目标载体包括质粒载体。如本文中所使用的术语质粒可以指核酸，例如来源于质粒载体、粘粒、噬菌粒或噬菌体的DNA，其中可以插入或克隆一个或多个编码特定基因的核酸片段。这包括由染色体外遗传物质构成的结构，通常是可以独立于宿主细胞中的染色体DNA进行复制的DNA环状双链体。

在某些实施方案中，所述重组表达载体包含多个克隆位点，所述多个克隆位点有助于将编码目标基因产物的核苷酸序列亚克隆到所述重组表达载体中，从而使编码目标基因产物的核苷酸序列可操作地连接至D2SP。

在一些实施方案中，载体可以是重组AAV载体。AAV载体是大小相对较小的DNA病毒，其可以以稳定和位点特异性方式整合至其感染的细胞的基因组中。它们能够感染多种细胞，而不会对细胞生长、形态或分化产生任何影响，并且它们似乎并不参与人的病理学。已经对AAV基因组进行了克隆、测序和表征。它涵盖大约4700个碱基，并且在每个端包含具有大约145个碱基的反向末端重复(ITR)区，其用作病毒的复制起点。基因组的其余部分可以分成两个携带包封功能的必需区域：该基因组的左手边部分，其包含参与病毒复制和病毒基因表达的rep基因；和该基因组的右手边部分，其含有编码病毒衣壳蛋白的cap基因。

AAV载体可以使用本领域的标准方法来制备。任何血清型的腺相关病毒都是合适的(参见例如Blacklow,“Parvoviruses and Human Disease”第165-174页,J.R.Pattison编,(1988)；Rose,Comprehensive Virology 3:1,1974；P.Tattersall“The Evolution ofParvovirus Taxonomy”,In Parvoviruses(JR Kerr,SF Cotmore.ME Bloom,RM Linden,CRParrish编)第5-14页,Hudder Arnold,London,UK(2006)；和DE Bowles,JE Rabinowitz,RJSamulski“The Genus Dependovirus”(JR Kerr,SF Cotmore.ME Bloom,RM Linden,CRParrish编)第15-23页,Hudder Arnold,London,UK(2006)，各文献的公开内容以全文引用的方式并入在此)。用于纯化载体的方法可见于例如美国专利号6,566,118、6,989,264和6,995,006，以及标题为“Methods for Generating High Titer Helper-free Preparationof Recombinant AAV Vectors”的WO/1999/011764中，所述美国专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。用于在杆状病毒系统中制备AAV载体的方法描述于例如WO 2008/024998中。AAV载体可以是自身互补的或单链的。杂交载体的制备描述于例如PCT申请号PCT/US2005/027091中，该申请的公开内容以全文引用的方式并入本文中。已经描述了来源于AAV的载体用于在体外和体内转移基因的用途(参见例如国际专利申请公布号91/18088和WO 93/09239；美国专利号4,797,368、6,596,535和5,139,941；以及欧洲专利号0488528，全部以全文引用的方式并入本文中)。这些公布描述了rep和/或cap基因缺失和被目标基因置换的各种AAV来源构建体，以及这些构建体用于在体外转移(至培养细胞中)或体内转移(直接至生物体中)目标基因的用途。根据本公开内容的复制缺陷型重组AAV可以通过将包含侧接两个AAV反向末端重复(ITR)区的目标核酸序列的质粒和携带AAV包封基因(rep和cap基因)的质粒共转染至被人辅助病毒(例如腺病毒)感染的细胞系中来制备。然后通过标准技术来纯化所产生的AAV重组体。

在一些实施方案中，供用于本公开内容的方法中的载体被包封至病毒颗粒(例如AAV病毒颗粒，包括但不限于AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV13、AAV14、AAV15和AAV16)中。因此，本公开内容包括包含本文所描述的任何载体的重组病毒颗粒(重组体，因为其含有重组多核苷酸)。用于产生此类颗粒的方法是本领域中已知的，并且描述在美国专利号6,596,535中，所述美国专利的公开内容以全文引用的方式并入在此。在一些情况下，使用AAV6。在一些情况下，使用AAV1。

在一些实施方案中，本发明D2SP可以可操作地连接至编码各种光响应性多肽(LRP)、荧光蛋白(XFP)和遗传编码指示剂(GEI)的核苷酸序列，以便靶向哺乳动物脑中表达D2受体的神经元群体。举例来说，可以没有限制地使用以下腺相关载体(AAV)和其组分：AAV-D2SP-LRP-XFP、AAV-D2SP-GEI、AAV-D2SP-FLEX-LRP-XFP、AAV-D2SP-FLEX-GEI。可以与多核苷酸联合使用的其他AAV载体包括具有允许在诸如Cre和Flp的重组酶控制下表达蛋白质的双侧装接loxP反向阅读框(DIO)的那些：AAV-D2SP-DIO(Cre)-LRP-XFP(Cre依赖性表达)、AAV-D2SP-DIO(Flp)-LRP-XFP(Flp依赖性表达)、AAV-D2SP-DIO(Cre)-DIO(Flp)-LRP-XFP(Cre和Flp依赖性表达)。

经遗传修饰的宿主细胞

本公开内容提供了分离的经遗传修饰的宿主细胞(例如，体外细胞)，其用本发明核酸进行遗传修饰。在一些实施方案中，本发明的分离的经遗传修饰的宿主细胞可以产生由本公开的可操作地连接至D2SP的核苷酸序列编码的基因产物。

合适的宿主细胞包括真核宿主细胞，诸如哺乳动物细胞。目标哺乳动物细胞包括人细胞、啮齿动物细胞，诸如大鼠细胞和小鼠细胞。将本发明核酸引入宿主细胞可以例如通过磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖介导的转染、脂质体介导的转染、电穿孔、病毒感染或其他已知方法来实现。

合适的哺乳动物细胞包括原代细胞和祖细胞，诸如干细胞。在一些情况下，所述哺乳动物细胞是神经元，例如非永生化(原代)神经元。在一些实施方案中，所述细胞是神经元细胞或神经元样细胞。所述细胞可以具有人、非人灵长类动物、小鼠或大鼠来源，或者来源于除人、非人灵长类动物、大鼠或小鼠以外的哺乳动物。合适的细胞系包括但不限于人神经胶质瘤细胞系，例如SVGp12(ATCC CRL-8621)、CCF-STTG1(ATCC CRL-1718)、SW 1088(ATCCHTB-12)、SW 1783(ATCC HTB-13)、LLN-18(ATCC CRL-2610)、LNZTA3WT4(ATCC CRL-11543)、LNZTA3WT11(ATCC CRL-11544)、U-138MG(ATCC HTB-16)、U-87MG(ATCC HTB-14)、H4(ATCCHTB-148)和LN-229(ATCC CRL-2611)；人成神经管细胞瘤来源的细胞系，例如D342 Med(ATCC HTB-187)、Daoy(ATCC HTB-186)、D283 Med(ATCC HTB-185)；人肿瘤来源的神经元样细胞，例如PFSK-1(ATCC CRL-2060)、SK-N-DZ(ATCCCRL-2149)、SK-N-AS(ATCC CRL-2137)、SK-N-FI(ATCC CRL-2142)、IMR-32(ATCC CCL-127)等；小鼠神经元细胞系，例如BC3H1(ATCCCRL-1443)、EOC1(ATCC CRL-2467)、C8-D30(ATCC CRL-2534)、C8-S(ATCC CRL-2535)、Neuro-2a(ATCC CCL-131)、NB41A3(ATCC CCL-147)、SW10(ATCC CRL-2766)、NG108-15(ATCCHB-12317)；大鼠神经元细胞系，例如PC-12(ATCC CRL-1721)、CTX TNA2(ATCC CRL-2006)、C6(ATCC CCL-107)、F98(ATCC CRL-2397)、RG2(ATCC CRL-2433)、B35(ATCC CRL-2754)、R3(ATCC CRL-2764)、SCP(ATCC CRL-1700)、OA1(ATCC CRL-6538)。

在一些情况下，所述宿主细胞是祖细胞或干细胞。如本文中所使用，“干细胞”是指兼具在被诱导后分化成多个细胞谱系的能力(多潜能性或多能性)和在细胞分裂后维持其多潜能性或多能性的能力(自我更新能力)的细胞。干细胞涵盖例如造血干细胞、神经干细胞、肝干细胞、真皮干细胞、胚芽干细胞和胚胎干(ES)或诱导型多能干(iPS)细胞，以及由这些细胞诱导的干细胞等。干细胞可以获自胚胎、出生后、青少年或成年人组织。“祖细胞”是指一种未分化的细胞，其来源于干细胞，而本身不是干细胞。一些祖细胞可以产生能够分化成超过一种细胞类型的后代。

在一些实施方案中，所述宿主细胞是人ES细胞。在某些实施方案中，所述人ES细胞可以分化成神经元。用于使ES细胞生长和诱导其分化的任何合适的方法都可以使用，其中一些描述于例如以下文献中：美国专利号8,460,931和7,892,835；美国申请公布号20130252335和20100075416；PCT申请公布号WO2001/088100；和Kawasaki等,Neuron 200028:31，所述文献以引用的方式并入本文中。在其他实施方案中，所述宿主细胞是iPS细胞，其更详细描述于例如PCT申请公布号WO2007/069666中，该申请以引用的方式并入本文中。

方法

如以上所概述，本公开内容的各方面包括一种将包含可操作地连接至基因产物的D2SP的核酸引入靶细胞的方法，所述基因产物在被表达时执行目标功能，例如光诱导去极化/超极化和/或荧光标记。将核酸引入靶细胞可以通过任何方便的方法来进行，如上文针对经遗传修饰的宿主细胞所描述。靶细胞可以在体外培养物中，或者可以位于体内，例如体内组织中的细胞，诸如脑中的神经元细胞。

在某些实施方案中，所述靶细胞是祖细胞，诸如神经祖细胞。在一些情况下，所述靶细胞是干细胞。用于将核酸引入祖细胞或干细胞的任何方便的方法都可以用于引入包含可操作地连接至基因产物的D2SP的核酸，如上文关于经遗传修饰的宿主细胞所描述。

在一些实施方案中，靶神经元是例如感觉神经元、运动神经元或中间神经元。本公开内容的靶神经元可以包括中枢神经系统的神经元和/或周围神经系统的细胞。在一些实施方案中，靶组织可以包括多个神经纤维、神经、神经细胞神经节、神经肌肉接头、由神经支配的组织，包括但不限于肌肉、皮肤或内分泌组织，或解剖区，诸如脑或脊髓的部分或次部分。在一些实施方案中，靶组织可以是单个细胞的一部分，例如神经细胞的特定轴突。

示例性靶细胞、脑区和组织包括但不限于：基底神经节、伏隔核、皮层、松果体缰、腹侧被盖区、黑质、嗅结节、隔膜、杏仁核、海马体、小脑、丘脑、化学感受器触发区、垂体腺、下丘脑、交感神经节、肾上腺、外周传入神经、肠神经、胃肠粘膜、心脏、肺组织、血管组织、肾皮质和肾髓质以及成胶质细胞瘤。

可以通过任何方便的手段将包含编码可操作地连接至D2SP的基因产物的核苷酸序列的核酸引入神经元中。举例来说，可以将包含编码可操作地连接至D2SP的基因产物的核苷酸序列的核酸引入(例如，注入)至神经束或神经纤维中，使得所述核酸进入神经元，其中可操作地连接至D2SP的基因产物是在神经元中产生的。可以将包含编码可操作地连接至D2SP的基因产物的核苷酸序列的核酸引入(例如，注入)至神经近侧。可以使用立体定向注射；参见例如Stein等,J.Virol,73:34243429,1999；Davidson等,PNAS,97:3428-3432,2000；Davidson等,Nat.Genet.3:219-223,1993；以及Alisky和Davidson,Hum.GeneTher.11:2315-2329,2000，各自的内容以全文引用的方式并入在此。

一旦本发明多核苷酸已经被递送至靶神经元或组织，所述多核苷酸便进入靶细胞并且被表达。在一些实施方案中，由靶核酸表达仅发生在其中D2SP具有活性的靶细胞中。以这种方式，如果将本发明多核苷酸递送至除靶细胞以外的细胞，则所述多核苷酸将不会表达在非靶细胞中，因为D2SP在那些细胞中将不具活性。在一些情况下，所述D2SP以高特异性驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。启动子的特异性可以表述为表达可操作地连接至所述启动子的基因产物并且在D2受体特异性抗体(诸如Millipore ab1558；图3)下发生阳性染色的细胞数除以表达可操作地连接至所述启动子的基因产物的细胞总数。在一些情况下，所述D2SP以91％以上，例如92％以上、93％以上、94％以上、95％以上、95.5％以上、96％以上、96.5％以上、97％以上、97.5％以上、98％以上、98.1％以上、98.2％以上、98.3％以上、98.4％以上、98.5％以上的特异性驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以99％以下，例如99.5％以下、99.3％以下、99.1％以下、99.0％以下、98.9％以下、98.8％以下、98.7％以下、98.6％以下、98.5％以下、98.4％以下、98.3％以下、98.2％以下的特异性驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以在91％至99％范围内，例如92％至99％，包括93％至99％、94％至98.5％或95％至98.5％的特异性驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以约98.2％的特异性驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。

在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其特异性百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1的D2受体启动子，诸如与SEQID NO:2中所示的序列(图2)具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸)驱动的基因产物表达特异性百分比相比高出5％以上，例如6％以上、7％以上、8％以上，包括9％以上。在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其特异性百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1，诸如与SEQID NO:2中所示的序列(图2)具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸的D2受体启动子)驱动的基因产物表达特异性百分比相比高出9％以下，例如9.5％以下、9.0％以下、8.5％以下，包括8％以下。在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其特异性百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1的D2受体启动子，诸如与SEQ ID NO:2中所示的序列(图2)具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸)驱动的基因产物表达特异性百分比相比高出的程度在5％至9％的范围内，例如6％至9.5％、6.5％至9.0％、7％至8.5％，包括7.5％至8.0％。

在一些情况下，所述D2SP以高外显率驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。启动子的外显率可以表述为表达可操作地连接至所述启动子的基因产物并且在D2受体特异性抗体(诸如Millipore ab1558；图3)下发生阳性染色的细胞数除以在D2受体特异性抗体(诸如Millipore ab1558；图3)下发生阳性染色的细胞总数。在一些情况下，所述D2SP以70％以上，例如72％以上、74％以上、76％以上、78％以上、79％以上、80％以上、81％以上、82％以上、83％以上、84％以上、85％以上、86％以上、86.5％以上、86.8％以上或87％以上的外显率驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以99％以下，例如95％以下、94％以下、93％以下、92％以下、91％以下、90％以下、89.5％以下、89％以下、89.5％以下、89％以下、88.5％以下、88％以下、87.5％以下或87％以下的外显率驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以在70％至95％范围内，例如75％至95％，包括78％至93％、79％至91％、80％至90％、81％至89％或82％至87％的外显率驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。在一些情况下，所述D2SP以约86.8％的外显率驱动可操作地连接至其的基因产物的表达。

在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其外显率百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1的D2受体启动子，诸如与SEQID NO:2中所示的序列具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸)驱动的基因产物表达外显率百分比相比高出5％以上，例如8％以上、10％以上、12％以上、14％以上、16％以上、17％以上，包括18％以上。在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其外显率百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1的D2受体启动子，诸如与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸)驱动的基因产物表达外显率百分比相比高出35％以下，例如30％以下、25％以下、24％以下、23％以下、22％以下、21％以下、20％以下、19％以下，包括18％以下。在一些情况下，所述D2SP驱动可操作地连接至其的基因产物的表达，其外显率百分比与由常规D2受体启动子(例如，包含D2受体基因的外显子1的D2受体启动子，诸如与SEQ ID NO:2中所示的序列具有至少90％，例如至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的核酸)驱动的基因产物表达外显率百分比相比高出的程度在5％至35％的范围内，例如8％至30％、10％至25％、12％至20％、14％至19％，包括16％至18％。

在某些情况下，引入靶细胞的核酸中可操作地连接至D2SP的基因产物是如上文和本文其他部分所描述的光响应性多肽。当基因产物是可操作地连接至D2SP的光响应性多肽时，靶细胞(诸如靶神经元)中表达的光响应性多肽可以在多肽被光激活时通过诱导靶细胞的超极化或去极化来调节靶细胞的活性。在一些情况下，受光响应性多肽的激活调节的活性是靶神经元中的动作电位放电的模式或幅度、静息电位、膜电位的亚阈值变化、基因的活性依赖性转录和/或翻译等。

在一些实施方案中，当被表达在细胞膜(例如哺乳动物细胞)上时并且当被暴露于具有激活波长的光时，光激活的多肽使膜超极化。在一些实施方案中，光激活的多肽表现出长期光电流稳定性。在一些实施方案中，光激活的多肽在培养的神经元中表现出增加的细胞膜表达和更大的光电流。在一些实施方案中，本发明光激活多肽表现出减速的通道动力学/减速的通道闭合。在一些实施方案中，在以较低光强度进行简短光刺激之后，光激活多肽传导阴离子并且抑制神经元中的动作电位形成，持续较长时间段(例如，约0.5小时、多达约0.75小时、多达约1小时、多达约1.25小时、多达约1.5小时、多达约1.75小时、多达约2小时、多达约2.25小时、多达约2.5小时、多达约2.75小时、多达约3小时或更久)。

在一些情况下，引入靶细胞的核酸中可操作地连接至D2SP的基因产物是如上文和本文其他部分所描述的荧光蛋白多肽。当基因产物是可操作地连接至D2SP的荧光蛋白时，靶细胞(诸如靶神经元)中表达的荧光蛋白在所述蛋白质被如以上所描述的具有适当波长的光刺激时可以通过发光来对靶细胞进行荧光标记。在某些实施方案中，所述荧光蛋白是遗传编码的指示剂，诸如钙指示剂或电压指示剂。当基因产物是可操作地连接至D2SP的遗传编码指示剂时，靶细胞(诸如靶神经元)中表达的遗传编码指示剂改变其荧光性质，例如强度、激发和/或发射波长等。

任何方便的手段都可以用于将光递送至表达可操作地连接至D2SP的基因产物的靶细胞或神经元，从而调节或荧光标记靶细胞。可以使用荧光显微镜对培养物或离体组织切片中的靶细胞进行光照，可以使用荧光激活细胞分选(FACS)装置或荧光计等对悬浮液中的靶细胞进行光照射。

在一些情况下，所述光被透皮或经皮递送到体内的靶细胞或神经元。在一些情况下，使用了可植入光源；并且所述光被递送到体内的部位。在一些情况下，所述光被递送到体内的治疗部位。在一些情况下，所述光在颅内递送。

在一些情况下，用于激活神经元中表达的光响应性多肽的光具有约0.05mW/mm²至约0.1mW/mm²、约0.1mW/mm²至约0.2mW/mm²、约0.2mW/mm²至约0.3mW/mm²、约0.3mW/mm²至约0.4mW/mm²、约0.4mW/mm²至约0.5mW/mm²、约0.5mW/mm²至约0.6mW/mm²、约0.6mW/mm²至约0.7mW/mm²、约0.7mW/mm²至约0.8mW/mm²、约0.8mW/mm²至约0.9mW/mm²或约0.9mW/mm²至约1.0mW/mm²的强度。在一些情况下，用于激活神经元中表达的光响应性多肽的光具有约1.0mW/mm²至约1.1mW/mm²、约1.1mW/mm²至约1.2mW/mm²、约1.2mW/mm²至约1.3mW/mm²、1.3mW/mm²至约1.4mW/mm²、约1.4mW/mm²至约1.5mW/mm²、约1.5mW/mm²至约1.6mW/mm²、约1.6mW/mm²至约1.7mW/mm²、约1.7mW/mm²至约1.8mW/mm²、约1.8mW/mm²至约1.9mW/mm²、约1.9mW/mm²至约2.0mW/mm²、约2.0mW/mm²至约2.5mW/mm²、约2.5mW/mm²至约3mW/mm²、约3mW/mm²至约3.5mW/mm²、约3.5mW/mm²至约4mW/mm²、约4mW/mm²至约4.5mW/mm²、约4.5mW/mm²至约5mW/mm²、约5mW/mm²至约5.5mW/mm²、约5.5mW/mm²至约6mW/mm²、约6mW/mm²至约7mW/mm²或约7mW/mm²至约10mW/mm²的强度。在一些情况下，用于激活神经元中表达的光响应性多肽的光具有约0.05mW/mm²至约0.1mW/mm²的强度。在一些情况下，用于激活神经元中表达的光响应性多肽的光具有约0.25mW/mm²的强度。在一些情况下，用于激活神经元中表达的光响应性多肽的光具有约1mW/mm²的强度。

效用

本发明的核酸、遗传修饰的宿主细胞和方法可用于更广泛的应用，包括转染、鉴定、靶向和分离来源于健康或受影响的人和动物受试者群体的表达D2R的活细胞，以及转染、鉴定和分离来自健康或受影响的受试者的干/祖细胞群体的表达D2R的细胞，以用于体外/离体遗传学、蛋白质组学、转录组学、电生理学和药理学分析。

包含D2SP的核酸可用于通过诸如荧光激活细胞分选(FACS)等细胞分选技术来富集表达D2R的细胞，不仅用于与数十种多巴胺相关病症相关的细胞群体的分析和表征，而且还用于表达D2R的细胞的治疗性移植的目的。

在一些实施方案中，参与诱导细胞分化成多巴胺受体神经元的因子可以使用D2SP来鉴定，以研究表达D2R的培养细胞和表达D2R的人源干细胞以及非人源干细胞。在某些实施方案中，可以使用D2SP从未分化细胞获得针对药物成瘾、肥胖症、赌博障碍和其他病症的移植细胞，以鉴定相关细胞群体用于移植。在其他情况下，可以基于使用基于D2SP驱动的荧光蛋白表达鉴定的细胞鉴定的多巴胺受体神经元分化和诱导因子来开发用于治疗的新颖药物。本发明的核酸和其使用方法使得能够在患者群体中单独地和与药理学直接刺激或基于抗体的干预组合地靶向病毒介导的光遗传构建体、进行基于RNA或DNA的治疗以及其他基因治疗方法。

在一些实施方案中，本发明的核酸和方法可以用来靶向用于研究和治疗中枢和外周病症的基因产物的表达，所述病症包括但不限于：精神分裂症、赌博障碍、药物成瘾、图雷特综合征(Tourette's syndrome)、多发性系统萎缩、核上性麻痹、帕金森氏病(parkinson's disease)、痴呆、自闭症、ADHD、抑郁症、迟发性运动障碍、成胶质细胞瘤、强迫性/冲动性性行为、强迫性消费、肥胖症、功能性消化不良、胃潴留、呕吐、糖尿病性胃轻瘫、肠易激综合征、库兴氏病(Cushing's disease)、高血压和肾炎症/损伤，以及高泌乳素血症伴随相关改变，诸如男性乳房发育症、乳溢、闭经和阳痿。还可以表征表达D2R的细胞以提供这些疾病的动物模型，可以对所述动物模型进行更详细的表征和药物/治疗筛选。

试剂盒

本公开内容的其他方面包括一种试剂盒，所述试剂盒包括重组表达载体，如以上所描述，所述重组表达载体包含本发明核酸，即，包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包括Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述本发明试剂盒的重组表达载体包含多个克隆位点或其等同物，所述多个克隆位点有助于将编码使用者的目标基因产物的核苷酸序列亚克隆到所述重组表达载体中，从而使编码目标基因产物的核苷酸序列可操作地连接至D2SP。

在某些实施方案中，所述本发明试剂盒的重组表达载体包含可操作地连接至D2SP的编码光响应性多肽的核苷酸序列、遗传编码指示剂和/或荧光蛋白。

所述试剂盒还可以包括对照表达载体，诸如阳性对照表达载体和/或阴性对照表达载体。在一些实施方案中，所述阳性对照表达载体包含可操作地连接至D2SP的编码诸如以上所描述的光响应性多肽或荧光多肽等已知基因产物的核酸。在一些情况下，所述阳性对照表达载体含有编码诸如绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或红色荧光蛋白等荧光蛋白的核酸。

本发明试剂盒的组件可以在单独的容器中；或者可以组合在单个容器中。

除了上述组分以外，本发明试剂盒还可以包括关于使用所述试剂盒的组分和用于实践本发明方法的说明书。用于实践本发明方法的说明书一般被记录在合适的记录介质上。举例来说，所述说明书可以印刷在诸如纸张或塑料等基材上。因此，所述说明书可以作为包装插页存在于试剂盒中、存在于试剂盒或其组分的容器的标签中(即，与包装或子包装相关联)等。在其他实施方案中，所述说明书是作为电子存储数据文件存在于合适的计算机可读存储介质(例如CD-ROM、软盘、闪存驱动器等)上。在又其他实施方案中，试剂盒中不存在实际说明书，而是提供了用于从远程源(例如，经由互联网)获取说明书的手段。该实施方案的一个实例是包括可以查看说明书和/或下载说明书的网址的试剂盒。与指令一样，这种用于获得指令的装置被记录在合适的基板上。

实施例

提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的完整公开内容和描述，而不意在限制诸位发明人看待其发明的范围，也不意在表示以下实验是所进行的全部或仅有的实验。虽然已经努力确保所用数字(例如量、温度等)的准确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。除非另外指出，否则份数是重量份，分子量是重均分子量，温度是摄氏度(℃)，并且压力是大气压或接近大气压。可以使用标准缩写，例如，bp，碱基对；kb，千碱基；pl，皮升；s或sec，秒；min，分钟；h或hr，小时；aa，氨基酸；kb，千碱基；bp，碱基对；nt，核苷酸；i.m，肌内；i.p，腹膜内；s.c，皮下；等等。

实施例1：用于对表达2型多巴胺受体的细胞进行抗体染色的方案

使用以下方案使用2型多巴胺(D2)受体特异性抗体对固定组织切片中的细胞进行染色。

A.标准染色方案：

1)在磷酸盐缓冲盐水(PBS)(pH 7.4)中冲洗40μm切片，3×10分钟。

2)在PBS+3％正常驴血清+0.3％Triton-X中阻断30分钟(PBS++)

3)在4℃下在旋转振荡器上在含一抗(兔抗D2R，millipore ab1558)1:500的PBS++中孵育过夜。

4)在PBS中将切片洗涤4×15分钟

5)在室温下在含二抗(Alexa-fluor 647，山羊抗兔，Life Technologies A-21245)1:500的PBS++中孵育3小时。

6)在PBS中洗涤15分钟

7)在1:50000 4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI):PBS中洗涤15分钟

8)在PBS中洗涤15分钟

上述方案产生了图3A中所见的染色图案。

B.改良的染色方案：

1)在PBS(pH 7.4)中冲洗40μm切片，3×10分钟。

2)在PBS+3％正常驴血清+0.3％Triton-X中阻断30分钟(PBS++)

3)在室温下在旋转振荡器上在含一抗(兔抗D2R，millipore ab1558)1:200的PBS++中孵育过夜。

4)在PBS中将切片洗涤4×15分钟

5)在室温下在含二抗(Alexa-fluor 647，山羊抗兔，Life Technologies A-21245)1:500的PBS++中孵育8小时。

6)在PBS中将切片洗涤4×15分钟

7)在室温下在含三抗(Alexa-fluor 647，驴抗山羊，Life Technologies A-21447)1:500的PBS++中孵育8小时。

8)在PBS中洗涤15分钟

9)在1:50000DAPI:PBS中洗涤15分钟

10)在PBS中洗涤15分钟

上述方案产生了图3B中所见的染色图案。

实施例2：D2SP驱动在大鼠海马体原代神经元中的表达

将大鼠海马体原代神经元用D2SP-eNpHR 3.0-EYFP转染，并且使用实施例1中所描述的改良染色程序对D2R进行染色(图4)。绿色来自于EYFP，表明表达D2SP-eNpHR 3.0-EYFP的细胞，而蓝色示出了所有多巴胺受体2细胞。

实施例3：对eNpHR 3.0-EYFP在D2SP和D2R下的表达的比较

参考图5，中图示出了EYFP，表明表达D2SP-eNpHR 3.0-EYFP(上)或D2R-eNpHR3.0-EYFP(下)的细胞，而左图示出了所有多巴胺受体2细胞。每一个启动子构建体的右图示出了前两个图的合并图。

还比较了两种启动子的特异性和外显率，并且示于表1中。

表1

	特异性	外显率
			D2SP::NY	112/114＝98.2％	112/129＝86.8％
D2R::NY	76/84＝90.5％	76/110＝69％

实施例4：含有D2SP的重组表达载体

构建了含有可操作地连接至编码一种或多种基因产物的核苷酸序列的D2SP的以下重组表达载体：

pAAV-D2SP-hChR2(H134R)-EYFP(图6)；

pAAV-D2SP-ehChR2(H134R)-EYFP(图7)；

pAAV-D2SP-eNpHR 3.0-EYFP(图8)；

pAAV-D2SP-SwiChRca-TS-EYFP(图9)；

pAAV-D2SP-EYFP(图10)；

pAAV-D2SP-GCaMP 6f(图11)；

pAAV-D2SP-GCaMP 6m(图12)；

pAAV-D2SP-mCherry-IRES-Cre(图13)；和

pAAV-D2SP-mCherry-IRES-Flpo(图14)。

尽管已经参考本发明的具体实施方案对其进行了描述，但是本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，可以进行各种改变而且可以替换等同方案。另外，可以进行许多修改以使特定情形、材料、物质组成、工艺、工艺步骤适应本发明的目标、精神和范围。所有此类修改都意在处于所附权利要求书的范围内。

序列表

<110> K·A·狄塞罗斯.

C·拉马克里施南

K·扎卢促斯基

<120> 2型多巴胺受体特异性启动子和其使用方法

<130> STAN-1158WO

<150> US 62/087,603

<151> 2014-12-04

<160> 66

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 1552

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成核酸

<400> 1

ttatcctcgg tgcatctcag agaaataagc attgcttgga ccaatgtgga ccggatgtta 60

acacctagag ccagagagat taaaaaattt aatcaacatc tacaactggc aagggataga 120

cataggacac acgactgggt ggaaaacgta tagaggtgat gggttgagaa gaacaaaatc 180

cctgtttaag taggttattt cttgggaaga acatgtccag ggcacatagg aaaatagtgg 240

ggattcaacc atgtctgtaa tgtgtgagtg ccttaaaagc aaatgtgaaa aattctaatg 300

tttctggtag ttctaacact tccctaccat gcctatagag agccatgaat agaccatacc 360

ccaagaataa tgaatagggg aaggggaggc tagttcccct tttcttaaat gcctccataa 420

ctggccacat ctaagaaaaa tgtgctgtgt atagggactg ttccactgct ggttccccgt 480

gaggtttgga ggggcatgcc tctttgggtc ccagattcca cctttgaaat caaacagggg 540

ttagttgaat attagtgtct gtctttccaa ccttaatttt ccaggattgt gtggatcaat 600

ggaaggagtt tcttctttgt ggctaagtgg catgactgcc ggctatatgc agactgtcct 660

ctgtgctcct gcccttggaa ttctgtggtg ccttctcctt ggggacttga attggccaat 720

ggccagctcc tgtgaggtct ccggagctgt cggtactcca cagcacctat ttaagctaca 780

agtatttgga agactctact ctggattgac cccatgcatt ctgaatctca tgtagaagct 840

ggccaaggca ggacagaggg acagaaagca ccagctggat ttgagaagaa gaggatggaa 900

agggttgtag gttccctggg tgggagatga ccctggacag ggctgaagaa gatcacattt 960

ctcttcctcc tgctcctcag tgcagacgga agggtgagct agaattttca cggccttctt 1020

tatcattccc atcttagatc tgctctgccc aagtcttcct ctcagaaagc acaacagcag 1080

aacgaactgc tgtgattttc agacctgagg tctgtacacc gactctggat atccttccgg 1140

aatctatttc tcctttaaag acttgatgta ccacacgtag tgcttcagct agcccttggc 1200

cctgactcct caaaggaggg gatcgacccg ctggtgttgt gattgctaga ccagagtagg 1260

tttggatggg cagggtgtta cttaaaaagt ataggatgac accggcgagc agtccggagc 1320

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ccccaggccc cacagtgcag agatagttct ggggccctgg gtgggtgggg cctctgtaca 1440

aggggcgggg ttcccgggcg cctcgtggcc agggtgaccc cgccccctcc tcctgcgcag 1500

cgctctgatt ccgcggagct gtccagcctc agtgccgggg ggatccgcca cc 1552

<210> 2

<211> 1810

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成核酸

<400> 2

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tttctggtag ttctaacact tccctaccat gcctatagag agccatgaat agaccatacc 360

ccaagaataa tgaatagggg aaggggaggc tagttcccct tttcttaaat gcctccataa 420

ctggccacat ctaagaaaaa tgtgctgtgt atagggactg ttccactgct ggttccccgt 480

gaggtttgga ggggcatgcc tctttgggtc ccagattcca cctttgaaat caaacagggg 540

ttagttgaat attagtgtct gtctttccaa ccttaatttt ccaggattgt gtggatcaat 600

ggaaggagtt tcttctttgt ggctaagtgg catgactgcc ggctatatgc agactgtcct 660

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ggccagctcc tgtgaggtct ccggagctgt cggtactcca cagcacctat ttaagctaca 780

agtatttgga agactctact ctggattgac cccatgcatt ctgaatctca tgtagaagct 840

ggccaaggca ggacagaggg acagaaagca ccagctggat ttgagaagaa gaggatggaa 900

agggttgtag gttccctggg tgggagatga ccctggacag ggctgaagaa gatcacattt 960

ctcttcctcc tgctcctcag tgcagacgga agggtgagct agaattttca cggccttctt 1020

tatcattccc atcttagatc tgctctgccc aagtcttcct ctcagaaagc acaacagcag 1080

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aatctatttc tcctttaaag acttgatgta ccacacgtag tgcttcagct agcccttggc 1200

cctgactcct caaaggaggg gatcgacccg ctggtgttgt gattgctaga ccagagtagg 1260

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acaggctatc cccactcaaa gccagagatg gattctcggt ctcagctctc aaggttcctt 1380

ccccaggccc cacagtgcag agatagttct ggggccctgg gtgggtgggg cctctgtaca 1440

aggggcgggg ttcccgggcg cctcgtggcc agggtgaccc cgccccctcc tcctgcgcag 1500

cgctctgatt ccgcggagct gtccagcctc agtgccgggg ctggtcccct cttgtgcgcg 1560

gcgcctcctg gccggcttcc cgcctggttc ccgcgctggg ctcccgtcct cccgccccgc 1620

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aagcctcgag 1810

<210> 3

<211> 313

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成核酸

<400> 3

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<210> 4

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 4

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Arg Glu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Val Thr Asn Pro Val Val Val Asn Gly Ser Val Leu Val Pro Glu Asp

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Gln Cys Tyr Cys Ala Gly Trp Ile Glu Ser Arg Gly Thr Asn Gly Ala

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Glu Phe Phe Phe Glu Phe Lys Asn Pro Ser Met Leu Tyr Leu Ala Thr

100 105 110

Gly His Arg Val Gln Trp Leu Arg Tyr Ala Glu Trp Leu Leu Thr Cys

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Tyr Ser Arg Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile

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Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Ala Thr Gly Tyr Val Lys Val Ile

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Ala Lys Ala Tyr Ile Glu Gly Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

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Ser Val Tyr Gly Ser Thr Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

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<210> 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 5

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Val Thr Asn Pro Val Val Val Asn Gly Ser Val Leu Val Pro Glu Asp

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Gln Cys Tyr Cys Ala Gly Trp Ile Glu Ser Arg Gly Thr Asn Gly Ala

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Gln Thr Ala Ser Asn Val Leu Gln Trp Leu Ala Ala Gly Phe Ser Ile

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<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 6

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Ala Lys Ala Tyr Ile Glu Gly Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

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Ser Val Tyr Gly Ser Thr Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

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<211> 340

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 7

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1 5 10 15

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Gln Cys Tyr Cys Ala Gly Trp Ile Glu Ser Arg Gly Thr Asn Gly Ala

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340

<210> 8

<211> 300

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 8

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 9

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Ser Ala Met Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser

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Leu Ser Tyr Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile

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Glu Ala Phe His Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys Arg Glu Leu Val Arg

195 200 205

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Phe Leu Leu Gly Thr Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Pro Tyr Gly Ser

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 10

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Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys

195 200 205

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210 215 220

Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His

225 230 235 240

Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp

245 250 255

Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly

260 265 270

Thr Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Pro Tyr Gly Ser Ala Ile Gly His

275 280 285

Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Asn Met Trp Gly Val Leu Gly Asn

290 295 300

Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile

305 310 315 320

Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp

340

<210> 11

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 11

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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50 55 60

Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys

65 70 75 80

Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp

85 90 95

Ile Thr Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile

115 120 125

Glu Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Glu Phe Asp Glu Pro

130 135 140

Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Val Trp Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Ala Glu Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Leu Leu Ile His Leu Ser Asn

165 170 175

Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu

180 185 190

Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys

195 200 205

Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly

210 215 220

Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His

225 230 235 240

Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp

245 250 255

Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly

260 265 270

Thr Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Pro Tyr Gly Ser Ala Ile Gly His

275 280 285

Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Asn Met Trp Gly Val Leu Gly Asn

290 295 300

Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile

305 310 315 320

Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr

340 345 350

Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe

355 360 365

Cys Tyr Glu Asn Glu Val

370

<210> 12

<211> 348

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 12

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His Glu

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50 55 60

Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys

65 70 75 80

Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp

85 90 95

Ile Thr Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile

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Glu Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Glu Phe Asp Glu Pro

130 135 140

Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Val Trp Leu Arg Tyr

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Ala Glu Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Ile Leu Ile His Leu Ser Asn

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180 185 190

Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile Val Trp Gly Thr Thr Ala Ala Leu Ser

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Lys Gly Tyr Val Arg Val Ile Phe Phe Leu Met Gly Leu Cys Tyr Gly

210 215 220

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Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly

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Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 13

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Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His Glu

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Ile Thr Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

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275 280 285

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Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu

325 330 335

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<211> 350

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 14

Met Val Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val

20 25 30

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100 105 110

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195 200 205

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Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val

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<220>

<223> 合成多肽

<400> 15

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 16

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<220>

<223> 合成多肽

<400> 17

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 18

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<211> 380

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 19

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<210> 20

<211> 345

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 20

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1 5 10 15

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Trp Leu Lys Trp Leu Leu Tyr Ile Val Ser Cys Ile Tyr Gly Gly Tyr

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Pro Lys Gly His Cys Arg Met Val Val Lys Leu Met Ala Tyr Ala Tyr

245 250 255

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Gly Leu Leu Lys Leu Ser Pro Tyr Ala Asn Ser Ile Gly His Ser Ile

275 280 285

Cys Asp Ile Ile Ala Lys Glu Phe Trp Thr Phe Leu Ala His His Leu

290 295 300

Arg Ile Lys Ile His Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys

305 310 315 320

Thr Thr Lys Met Glu Ile Gly Gly Glu Glu Val Glu Val Glu Glu Phe

325 330 335

Val Glu Glu Glu Asp Glu Asp Thr Val

340 345

<210> 21

<211> 375

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 21

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Trp Leu Lys Trp Leu Leu Tyr Ile Val Ser Cys Ile Tyr Gly Gly Tyr

210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

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260 265 270

Gly Leu Leu Lys Leu Ser Pro Tyr Ala Asn Ser Ile Gly His Ser Ile

275 280 285

Cys Asp Ile Ile Ala Lys Glu Phe Trp Thr Phe Leu Ala His His Leu

290 295 300

Arg Ile Lys Ile His Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys

305 310 315 320

Thr Thr Lys Met Glu Ile Gly Gly Glu Glu Val Glu Val Glu Glu Phe

325 330 335

Val Glu Glu Glu Asp Glu Asp Thr Val Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile

340 345 350

Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val

355 360 365

Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

370 375

<210> 22

<211> 325

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 22

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1 5 10 15

Ser Ala Glu Ala Thr Ile Arg Gly Leu Leu Ser Ala Ala Ala Val Val

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50 55 60

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65 70 75 80

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85 90 95

Gly Trp Glu Glu Val Tyr Val Cys Val Ile Glu Leu Val Lys Cys Phe

100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

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145 150 155 160

Glu Tyr Ser Lys Arg Thr Met Thr Ile Leu Val Thr Asp Ile Gly Asn

165 170 175

Ile Val Trp Gly Ile Thr Ala Ala Phe Thr Lys Gly Pro Leu Lys Ile

180 185 190

Leu Phe Phe Met Ile Gly Leu Phe Tyr Gly Val Thr Cys Phe Phe Gln

195 200 205

Ile Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ser Tyr His Thr Leu Pro Lys Gly Val

210 215 220

Cys Arg Lys Ile Cys Lys Ile Met Ala Tyr Val Phe Phe Cys Ser Trp

225 230 235 240

Leu Met Phe Pro Val Met Phe Ile Ala Gly His Glu Gly Leu Gly Leu

245 250 255

Ile Thr Pro Tyr Thr Ser Gly Ile Gly His Leu Ile Leu Asp Leu Ile

260 265 270

Ser Lys Asn Thr Trp Gly Phe Leu Gly His His Leu Arg Val Lys Ile

275 280 285

His Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Thr Ile

290 295 300

Asn Val Ala Gly Glu Asn Met Glu Ile Glu Thr Phe Val Asp Glu Glu

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Glu Glu Gly Gly Val

325

<210> 23

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 23

Met Glu Thr Ala Ala Thr Met Thr His Ala Phe Ile Ser Ala Val Pro

1 5 10 15

Ser Ala Glu Ala Thr Ile Arg Gly Leu Leu Ser Ala Ala Ala Val Val

20 25 30

Thr Pro Ala Ala Asp Ala His Gly Glu Thr Ser Asn Ala Thr Thr Ala

35 40 45

Gly Ala Asp His Gly Cys Phe Pro His Ile Asn His Gly Thr Glu Leu

50 55 60

Gln His Lys Ile Ala Val Gly Leu Gln Trp Phe Thr Val Ile Val Ala

65 70 75 80

Ile Val Gln Leu Ile Phe Tyr Gly Trp His Ser Phe Lys Ala Thr Thr

85 90 95

Gly Trp Glu Glu Val Tyr Val Cys Val Ile Glu Leu Val Lys Cys Phe

100 105 110

Ile Glu Leu Phe His Glu Val Asp Ser Pro Ala Thr Val Tyr Gln Thr

115 120 125

Asn Gly Gly Ala Val Ile Trp Leu Arg Tyr Ser Met Trp Leu Leu Thr

130 135 140

Cys Pro Val Ile Leu Ile His Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu His Glu

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Glu Tyr Ser Lys Arg Thr Met Thr Ile Leu Val Thr Asp Ile Gly Asn

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Ile Val Trp Gly Ile Thr Ala Ala Phe Thr Lys Gly Pro Leu Lys Ile

180 185 190

Leu Phe Phe Met Ile Gly Leu Phe Tyr Gly Val Thr Cys Phe Phe Gln

195 200 205

Ile Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ser Tyr His Thr Leu Pro Lys Gly Val

210 215 220

Cys Arg Lys Ile Cys Lys Ile Met Ala Tyr Val Phe Phe Cys Ser Trp

225 230 235 240

Leu Met Phe Pro Val Met Phe Ile Ala Gly His Glu Gly Leu Gly Leu

245 250 255

Ile Thr Pro Tyr Thr Ser Gly Ile Gly His Leu Ile Leu Asp Leu Ile

260 265 270

Ser Lys Asn Thr Trp Gly Phe Leu Gly His His Leu Arg Val Lys Ile

275 280 285

His Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Thr Ile

290 295 300

Asn Val Ala Gly Glu Asn Met Glu Ile Glu Thr Phe Val Asp Glu Glu

305 310 315 320

Glu Glu Gly Gly Val Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly

325 330 335

Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu

340 345 350

Asn Glu Val

355

<210> 24

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 24

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1 5 10 15

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Gly Thr Phe Tyr Phe Leu Val Arg Gly Trp Gly Val Thr Asp Lys Asp

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50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Val Asp Arg Val Thr Ile Gly Thr Leu Val Gly Val Asp Ala Leu Met

115 120 125

Ile Val Thr Gly Leu Ile Gly Ala Leu Ser His Thr Ala Ile Ala Arg

130 135 140

Tyr Ser Trp Trp Leu Phe Ser Thr Ile Cys Met Ile Val Val Leu Tyr

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Gly Asp Thr Glu Ala Pro Glu Pro Ser Ala Gly Ala Asp Val Ser Ala

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<211> 293

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 25

Met Asp Pro Ile Ala Leu Gln Ala Gly Tyr Asp Leu Leu Gly Asp Gly

1 5 10 15

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20 25 30

Gly Thr Phe Tyr Phe Leu Val Arg Gly Trp Gly Val Thr Asp Lys Asp

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65 70 75 80

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100 105 110

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130 135 140

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145 150 155 160

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195 200 205

Val Gly Leu Gly Ile Glu Thr Leu Leu Phe Met Val Leu Asp Val Thr

210 215 220

Ala Lys Val Gly Phe Gly Phe Ile Leu Leu Arg Ser Arg Ala Ile Leu

225 230 235 240

Gly Asp Thr Glu Ala Pro Glu Pro Ser Ala Gly Ala Asp Val Ser Ala

245 250 255

Ala Asp Arg Pro Val Val Ala Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser

260 265 270

Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys

275 280 285

Tyr Glu Asn Glu Val

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<210> 26

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 26

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Tyr Ser Trp Trp Leu Phe Ser Thr Ile Cys Met Ile Val Val Leu Tyr

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Gly Asp Thr Glu Ala Pro Glu Pro

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<210> 27

<211> 278

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 27

Met Asp Pro Ile Ala Leu Gln Ala Gly Tyr Asp Leu Leu Gly Asp Gly

1 5 10 15

Arg Pro Glu Thr Leu Trp Leu Gly Ile Gly Thr Leu Leu Met Leu Ile

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Gly Thr Phe Tyr Phe Ile Val Lys Gly Trp Gly Val Thr Asp Lys Glu

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115 120 125

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Tyr Ser Trp Trp Leu Phe Ser Thr Ile Cys Met Ile Val Val Leu Tyr

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165 170 175

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<211> 242

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 28

Met Leu Val Gly Glu Gly Ala Lys Leu Asp Val His Gly Cys Lys Thr

1 5 10 15

Val Asp Met Ala Ser Ser Phe Gly Lys Ala Leu Leu Glu Phe Val Phe

20 25 30

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50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

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115 120 125

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130 135 140

Val Trp Trp Phe Phe Gly Met Cys Trp Phe Leu His Ile Ile Phe Ala

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Leu Gly Lys Ser Trp Ala Glu Ala Ala Lys Ala Lys Gly Gly Asp Ser

165 170 175

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180 185 190

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Ser Ile

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 29

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1 5 10 15

Val Asp Met Ala Ser Ser Phe Gly Lys Ala Leu Leu Glu Phe Val Phe

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Ile Val Phe Ala Cys Ile Thr Leu Leu Leu Gly Ile Asn Ala Ala Lys

35 40 45

Ser Lys Ala Ala Ser Arg Val Leu Phe Pro Ala Thr Phe Val Thr Gly

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Val Ser Arg Trp Asp Ile Met Ala Leu Cys Leu Ser Asp Val Leu Met

115 120 125

Ile Ala Thr Gly Ala Phe Gly Ser Leu Thr Val Gly Asn Val Lys Trp

130 135 140

Val Trp Trp Phe Phe Gly Met Cys Trp Phe Leu His Ile Ile Phe Ala

145 150 155 160

Leu Gly Lys Ser Trp Ala Glu Ala Ala Lys Ala Lys Gly Gly Asp Ser

165 170 175

Ala Ser Val Tyr Ser Lys Ile Ala Gly Ile Thr Val Ile Thr Trp Phe

180 185 190

Cys Tyr Pro Val Val Trp Val Phe Ala Glu Gly Phe Gly Asn Phe Ser

195 200 205

Val Thr Phe Glu Val Leu Ile Tyr Gly Val Leu Asp Val Ile Ser Lys

210 215 220

Ala Val Phe Gly Leu Ile Leu Met Ser Gly Ala Ala Thr Gly Tyr Glu

225 230 235 240

Ser Ile Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile

245 250 255

Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

260 265 270

<210> 30

<211> 262

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 30

Met Ala Pro Leu Ala Gln Asp Trp Thr Tyr Ala Glu Trp Ser Ala Val

1 5 10 15

Tyr Asn Ala Leu Ser Phe Gly Ile Ala Gly Met Gly Ser Ala Thr Ile

20 25 30

Phe Phe Trp Leu Gln Leu Pro Asn Val Thr Lys Asn Tyr Arg Thr Ala

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Leu Thr Ile Thr Gly Ile Val Thr Leu Ile Ala Thr Tyr His Tyr Phe

50 55 60

Arg Ile Phe Asn Ser Trp Val Ala Ala Phe Asn Val Gly Leu Gly Val

65 70 75 80

Asn Gly Ala Tyr Glu Val Thr Val Ser Gly Thr Pro Phe Asn Asp Ala

85 90 95

Tyr Arg Tyr Val Asp Trp Leu Leu Thr Val Pro Leu Leu Leu Val Glu

100 105 110

Leu Ile Leu Val Met Lys Leu Pro Ala Lys Glu Thr Val Cys Leu Ala

115 120 125

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130 135 140

Gly Glu Ile Gln Asp Asp Leu Ser Val Arg Trp Phe Trp Trp Ala Cys

145 150 155 160

Ala Met Val Pro Phe Val Tyr Val Val Gly Thr Leu Val Val Gly Leu

165 170 175

Gly Ala Ala Thr Ala Lys Gln Pro Glu Gly Val Val Asp Leu Val Ser

180 185 190

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210 215 220

Glu Gln Ile Gly Tyr Ser Ala Ala Asp Val Thr Ala Lys Ala Val Phe

225 230 235 240

Gly Val Leu Ile Trp Ala Ile Ala Asn Ala Lys Ser Arg Leu Glu Glu

245 250 255

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260

<210> 31

<211> 292

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 31

Met Ala Pro Leu Ala Gln Asp Trp Thr Tyr Ala Glu Trp Ser Ala Val

1 5 10 15

Tyr Asn Ala Leu Ser Phe Gly Ile Ala Gly Met Gly Ser Ala Thr Ile

20 25 30

Phe Phe Trp Leu Gln Leu Pro Asn Val Thr Lys Asn Tyr Arg Thr Ala

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Leu Ile Leu Val Met Lys Leu Pro Ala Lys Glu Thr Val Cys Leu Ala

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130 135 140

Gly Glu Ile Gln Asp Asp Leu Ser Val Arg Trp Phe Trp Trp Ala Cys

145 150 155 160

Ala Met Val Pro Phe Val Tyr Val Val Gly Thr Leu Val Val Gly Leu

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Gly Ala Ala Thr Ala Lys Gln Pro Glu Gly Val Val Asp Leu Val Ser

180 185 190

Ala Ala Arg Tyr Leu Thr Val Val Ser Trp Leu Thr Tyr Pro Phe Val

195 200 205

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Gly Val Leu Ile Trp Ala Ile Ala Asn Ala Lys Ser Arg Leu Glu Glu

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Glu Gly Lys Leu Arg Ala Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu

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Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr

275 280 285

Glu Asn Glu Val

290

<210> 32

<211> 313

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 32

Met Ile Val Asp Gln Phe Glu Glu Val Leu Met Lys Thr Ser Gln Leu

1 5 10 15

Phe Pro Leu Pro Thr Ala Thr Gln Ser Ala Gln Pro Thr His Val Ala

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Pro Leu Leu Leu Leu Asp Leu Gly Leu Leu Ala Gly Met Ser Gly Ala

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His Ile Phe Met Ala Ile Val Ala Asp Leu Ile Met Val Leu Thr Gly

165 170 175

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Tyr Thr Ile Ala Cys Ile Ala Tyr Ile Phe Val Val Trp His Leu Val

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Leu Asn Gly Gly Ala Asn Ala Arg Val Lys Gly Glu Lys Leu Arg Ser

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Phe Phe Val Ala Ile Gly Ala Tyr Thr Leu Ile Leu Trp Thr Ala Tyr

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Pro Ile Val Trp Gly Leu Ala Asp Gly Ala Arg Lys Ile Gly Val Asp

245 250 255

Gly Glu Ile Ile Ala Tyr Ala Val Leu Asp Val Leu Ala Lys Gly Val

260 265 270

Phe Gly Ala Trp Leu Leu Val Thr His Ala Asn Leu Arg Glu Ser Asp

275 280 285

Val Glu Leu Asn Gly Phe Trp Ala Asn Gly Leu Asn Arg Glu Gly Ala

290 295 300

Ile Arg Ile Gly Glu Asp Asp Gly Ala

305 310

<210> 33

<211> 351

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 33

Met Ile Val Asp Gln Phe Glu Glu Val Leu Met Lys Thr Ser Gln Leu

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Phe Pro Leu Pro Thr Ala Thr Gln Ser Ala Gln Pro Thr His Val Ala

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Pro Val Pro Thr Val Leu Pro Asp Thr Pro Ile Tyr Glu Thr Val Gly

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65 70 75 80

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His Ile Phe Met Ala Ile Val Ala Asp Leu Ile Met Val Leu Thr Gly

165 170 175

Leu Phe Ala Ala Phe Gly Ser Glu Gly Thr Pro Gln Lys Trp Gly Trp

180 185 190

Tyr Thr Ile Ala Cys Ile Ala Tyr Ile Phe Val Val Trp His Leu Val

195 200 205

Leu Asn Gly Gly Ala Asn Ala Arg Val Lys Gly Glu Lys Leu Arg Ser

210 215 220

Phe Phe Val Ala Ile Gly Ala Tyr Thr Leu Ile Leu Trp Thr Ala Tyr

225 230 235 240

Pro Ile Val Trp Gly Leu Ala Asp Gly Ala Arg Lys Ile Gly Val Asp

245 250 255

Gly Glu Ile Ile Ala Tyr Ala Val Leu Asp Val Leu Ala Lys Gly Val

260 265 270

Phe Gly Ala Trp Leu Leu Val Thr His Ala Asn Leu Arg Glu Ser Asp

275 280 285

Val Glu Leu Asn Gly Phe Trp Ala Asn Gly Leu Asn Arg Glu Gly Ala

290 295 300

Ile Arg Ile Gly Glu Asp Asp Gly Ala Arg Pro Val Val Ala Val Ser

305 310 315 320

Lys Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro

325 330 335

Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

340 345 350

<210> 34

<211> 291

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 34

Met Thr Glu Thr Leu Pro Pro Val Thr Glu Ser Ala Val Ala Leu Gln

1 5 10 15

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Leu Leu Ala Ser Ser Leu Tyr Ile Asn Ile Ala Leu Ala Gly Leu Ser

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50 55 60

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Glu Val Asp Gly Val Val Thr Met Trp Gly Arg Tyr Leu Thr Trp Ala

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Leu Ser Thr Pro Met Ile Leu Leu Ala Leu Gly Leu Leu Ala Gly Ser

130 135 140

Asn Ala Thr Lys Leu Phe Thr Ala Ile Thr Phe Asp Ile Ala Met Cys

145 150 155 160

Val Thr Gly Leu Ala Ala Ala Leu Thr Thr Ser Ser His Leu Met Arg

165 170 175

Trp Phe Trp Tyr Ala Ile Ser Cys Ala Cys Phe Leu Val Val Leu Tyr

180 185 190

Ile Leu Leu Val Glu Trp Ala Gln Asp Ala Lys Ala Ala Gly Thr Ala

195 200 205

Asp Met Phe Asn Thr Leu Lys Leu Leu Thr Val Val Met Trp Leu Gly

210 215 220

Tyr Pro Ile Val Trp Ala Leu Gly Val Glu Gly Ile Ala Val Leu Pro

225 230 235 240

Val Gly Val Thr Ser Trp Gly Tyr Ser Phe Leu Asp Ile Val Ala Lys

245 250 255

Tyr Ile Phe Ala Phe Leu Leu Leu Asn Tyr Leu Thr Ser Asn Glu Ser

260 265 270

Val Val Ser Gly Ser Ile Leu Asp Val Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

275 280 285

Ala Asp Asp

290

<210> 35

<211> 320

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 35

Met Thr Glu Thr Leu Pro Pro Val Thr Glu Ser Ala Val Ala Leu Gln

1 5 10 15

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20 25 30

Leu Leu Ala Ser Ser Leu Tyr Ile Asn Ile Ala Leu Ala Gly Leu Ser

35 40 45

Ile Leu Leu Phe Val Phe Met Thr Arg Gly Leu Asp Asp Pro Arg Ala

50 55 60

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65 70 75 80

Ser Tyr Thr Gly Leu Ala Ser Gly Leu Thr Ile Ser Val Leu Glu Met

85 90 95

Pro Ala Gly His Phe Ala Glu Gly Ser Ser Val Met Leu Gly Gly Glu

100 105 110

Glu Val Asp Gly Val Val Thr Met Trp Gly Arg Tyr Leu Thr Trp Ala

115 120 125

Leu Ser Thr Pro Met Ile Leu Leu Ala Leu Gly Leu Leu Ala Gly Ser

130 135 140

Asn Ala Thr Lys Leu Phe Thr Ala Ile Thr Phe Asp Ile Ala Met Cys

145 150 155 160

Val Thr Gly Leu Ala Ala Ala Leu Thr Thr Ser Ser His Leu Met Arg

165 170 175

Trp Phe Trp Tyr Ala Ile Ser Cys Ala Cys Phe Leu Val Val Leu Tyr

180 185 190

Ile Leu Leu Val Glu Trp Ala Gln Asp Ala Lys Ala Ala Gly Thr Ala

195 200 205

Asp Met Phe Asn Thr Leu Lys Leu Leu Thr Val Val Met Trp Leu Gly

210 215 220

Tyr Pro Ile Val Trp Ala Leu Gly Val Glu Gly Ile Ala Val Leu Pro

225 230 235 240

Val Gly Val Thr Ser Trp Gly Tyr Ser Phe Leu Asp Ile Val Ala Lys

245 250 255

Tyr Ile Phe Ala Phe Leu Leu Leu Asn Tyr Leu Thr Ser Asn Glu Ser

260 265 270

Val Val Ser Gly Ser Ile Leu Asp Val Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro

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Ala Asp Asp Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr

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Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

305 310 315 320

<210> 36

<211> 303

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 36

Met Val Thr Gln Arg Glu Leu Phe Glu Phe Val Leu Asn Asp Pro Leu

1 5 10 15

Leu Ala Ser Ser Leu Tyr Ile Asn Ile Ala Leu Ala Gly Leu Ser Ile

20 25 30

Leu Leu Phe Val Phe Met Thr Arg Gly Leu Asp Asp Pro Arg Ala Lys

35 40 45

Leu Ile Ala Val Ser Thr Ile Leu Val Pro Val Val Ser Ile Ala Ser

50 55 60

Tyr Thr Gly Leu Ala Ser Gly Leu Thr Ile Ser Val Leu Glu Met Pro

65 70 75 80

Ala Gly His Phe Ala Glu Gly Ser Ser Val Met Leu Gly Gly Glu Glu

85 90 95

Val Asp Gly Val Val Thr Met Trp Gly Arg Tyr Leu Thr Trp Ala Leu

100 105 110

Ser Thr Pro Met Ile Leu Leu Ala Leu Gly Leu Leu Ala Gly Ser Asn

115 120 125

Ala Thr Lys Leu Phe Thr Ala Ile Thr Phe Asp Ile Ala Met Cys Val

130 135 140

Thr Gly Leu Ala Ala Ala Leu Thr Thr Ser Ser His Leu Met Arg Trp

145 150 155 160

Phe Trp Tyr Ala Ile Ser Cys Ala Cys Phe Leu Val Val Leu Tyr Ile

165 170 175

Leu Leu Val Glu Trp Ala Gln Asp Ala Lys Ala Ala Gly Thr Ala Asp

180 185 190

Met Phe Asn Thr Leu Lys Leu Leu Thr Val Val Met Trp Leu Gly Tyr

195 200 205

Pro Ile Val Trp Ala Leu Gly Val Glu Gly Ile Ala Val Leu Pro Val

210 215 220

Gly Val Thr Ser Trp Gly Tyr Ser Phe Leu Asp Ile Val Ala Lys Tyr

225 230 235 240

Ile Phe Ala Phe Leu Leu Leu Asn Tyr Leu Thr Ser Asn Glu Ser Val

245 250 255

Val Ser Gly Ser Ile Leu Asp Val Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Ala

260 265 270

Asp Asp Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile

275 280 285

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<210> 37

<211> 365

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 37

Met Arg Arg Arg Glu Ser Gln Leu Ala Tyr Leu Cys Leu Phe Val Leu

1 5 10 15

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Glu Arg Arg Pro Pro Ser Glu Arg Asn Thr Pro Tyr Ala Asn Ile Lys

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65 70 75 80

Trp Val Val Gly Pro Ser Asp Gln Cys Tyr Cys Arg Ala Trp Ser Lys

85 90 95

Ser His Gly Thr Asp Arg Glu Gly Glu Ala Ala Val Val Trp Ala Tyr

100 105 110

Ile Val Phe Ala Ile Cys Ile Val Gln Leu Val Tyr Phe Met Phe Ala

115 120 125

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130 135 140

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Ala Met Leu Tyr Leu Asn Asp Gly Gln Met Val Pro Trp Leu Arg Tyr

165 170 175

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195 200 205

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Pro Pro Asn His Val Lys Val Ile Leu Phe Thr Ile Gly Leu Leu Tyr

225 230 235 240

Gly Leu Phe Thr Phe Phe Thr Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Tyr

245 250 255

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<211> 395

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 38

Met Arg Arg Arg Glu Ser Gln Leu Ala Tyr Leu Cys Leu Phe Val Leu

1 5 10 15

Ile Ala Gly Trp Ala Pro Arg Leu Thr Glu Ser Ala Pro Asp Leu Ala

20 25 30

Glu Arg Arg Pro Pro Ser Glu Arg Asn Thr Pro Tyr Ala Asn Ile Lys

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Lys Val Pro Asn Ile Thr Glu Pro Asn Ala Asn Val Gln Leu Asp Gly

50 55 60

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65 70 75 80

Trp Val Val Gly Pro Ser Asp Gln Cys Tyr Cys Arg Ala Trp Ser Lys

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Ser His Gly Thr Asp Arg Glu Gly Glu Ala Ala Val Val Trp Ala Tyr

100 105 110

Ile Val Phe Ala Ile Cys Ile Val Gln Leu Val Tyr Phe Met Phe Ala

115 120 125

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165 170 175

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180 185 190

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Pro Pro Asn His Val Lys Val Ile Leu Phe Thr Ile Gly Leu Leu Tyr

225 230 235 240

Gly Leu Phe Thr Phe Phe Thr Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Tyr

245 250 255

His Thr Val Pro Lys Gly Gln Cys Arg Asn Leu Val Arg Ala Met Ala

260 265 270

Trp Thr Tyr Phe Val Ser Trp Ala Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu

275 280 285

Gly Arg Glu Gly Phe Gly His Ile Thr Tyr Phe Gly Ser Ser Ile Gly

290 295 300

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305 310 315 320

His Gly Leu Arg Tyr Arg Ile Arg Gln His Ile Ile Ile His Gly Asn

325 330 335

Leu Thr Lys Lys Asn Lys Ile Asn Ile Ala Gly Asp Asn Val Glu Val

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Glu Glu Tyr Val Asp Ser Asn Asp Lys Asp Ser Asp Val Ala Ala Ala

355 360 365

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<210> 39

<211> 348

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 39

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile

115 120 125

Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro

130 135 140

Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn

165 170 175

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180 185 190

Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile Val Trp Gly Thr Thr Ala Ala Leu Ser

195 200 205

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305 310 315 320

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Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala Glu Ala Gly Ala Val

340 345

<210> 40

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 40

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro

130 135 140

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165 170 175

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180 185 190

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210 215 220

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225 230 235 240

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245 250 255

Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly

260 265 270

Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His

275 280 285

Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His

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325 330 335

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355 360 365

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370 375

<210> 41

<211> 348

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (167)..(167)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 41

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

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Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

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180 185 190

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195 200 205

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275 280 285

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290 295 300

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305 310 315 320

Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala Glu Ala Gly Ala Val

340 345

<210> 42

<211> 378

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (167)..(167)

<223> Xaa是任何氨基酸。

<400> 42

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

20 25 30

Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His Glu

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Arg Met Leu Phe Gln Thr Ser Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val

50 55 60

Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys

65 70 75 80

Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp

85 90 95

Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

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Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro

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Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Ala Ser Trp Leu Leu Thr Xaa Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn

165 170 175

Leu Thr Gly Leu Ala Asn Asp Tyr Asn Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu

180 185 190

Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile Val Trp Gly Thr Thr Ala Ala Leu Ser

195 200 205

Lys Gly Tyr Val Arg Val Ile Phe Phe Leu Met Gly Leu Cys Tyr Gly

210 215 220

Ile Tyr Thr Phe Phe Asn Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Tyr His

225 230 235 240

Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys Arg Gln Val Val Thr Gly Met Ala Trp

245 250 255

Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly

260 265 270

Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His

275 280 285

Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His

290 295 300

Tyr Leu Arg Val Leu Ile His Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile

305 310 315 320

Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala Glu Ala Gly Ala Val Ala Ala Ala Lys

340 345 350

Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp

355 360 365

Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

370 375

<210> 43

<211> 309

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 43

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

1 5 10 15

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Val Trp Gly Thr Thr Ala Ala Leu Ser Lys Gly Tyr Val Arg Val Ile

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Phe Phe Leu Met Gly Leu Cys Tyr Gly Ile Tyr Thr Phe Phe Asn Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

195 200 205

Arg Gln Val Val Thr Gly Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

245 250 255

Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His Tyr Leu Arg Val Leu Ile His

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Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn

275 280 285

Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala

290 295 300

Glu Ala Gly Ala Val

305

<210> 44

<211> 339

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 44

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

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Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu

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Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile

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100 105 110

Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Ala Asn Asp

130 135 140

Tyr Asn Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Thr Thr Ala Ala Leu Ser Lys Gly Tyr Val Arg Val Ile

165 170 175

Phe Phe Leu Met Gly Leu Cys Tyr Gly Ile Tyr Thr Phe Phe Asn Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

195 200 205

Arg Gln Val Val Thr Gly Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

245 250 255

Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His Tyr Leu Arg Val Leu Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn

275 280 285

Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala

290 295 300

Glu Ala Gly Ala Val Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly

305 310 315 320

Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu

325 330 335

Asn Glu Val

<210> 45

<211> 310

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 45

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Arg Glu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Val Thr Asn Pro Val Val Val Asn Gly Ser Val Leu Val Pro Glu Asp

20 25 30

Gln Cys Tyr Cys Ala Gly Trp Ile Glu Ser Arg Gly Thr Asn Gly Ala

35 40 45

Gln Thr Ala Ser Asn Val Leu Gln Trp Leu Ser Ala Gly Phe Ser Ile

50 55 60

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65 70 75 80

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100 105 110

Gly His Arg Val Lys Trp Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Ser Asn Asp

130 135 140

Tyr Ser Arg Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Ala Thr Gly Tyr Val Lys Val Ile

165 170 175

Phe Phe Cys Leu Gly Leu Cys Tyr Gly Ala Asn Thr Phe Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Ala Tyr Ile Glu Gly Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

195 200 205

Arg Gln Val Val Thr Gly Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

245 250 255

Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His Tyr Leu Arg Val Leu Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn

275 280 285

Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala

290 295 300

Glu Ala Gly Ala Val Pro

305 310

<210> 46

<211> 340

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 46

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Arg Glu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Val Thr Asn Pro Val Val Val Asn Gly Ser Val Leu Val Pro Glu Asp

20 25 30

Gln Cys Tyr Cys Ala Gly Trp Ile Glu Ser Arg Gly Thr Asn Gly Ala

35 40 45

Gln Thr Ala Ser Asn Val Leu Gln Trp Leu Ser Ala Gly Phe Ser Ile

50 55 60

Leu Leu Leu Met Phe Tyr Ala Tyr Gln Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Ile Tyr Val Cys Ala Ile Ser Met Val Lys Val Ile Leu

85 90 95

Glu Phe Phe Phe Ser Phe Lys Asn Pro Ser Met Leu Tyr Leu Ala Thr

100 105 110

Gly His Arg Val Lys Trp Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Ser Asn Asp

130 135 140

Tyr Ser Arg Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Ile Gly Thr Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Ala Thr Gly Tyr Val Lys Val Ile

165 170 175

Phe Phe Cys Leu Gly Leu Cys Tyr Gly Ala Asn Thr Phe Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Ala Tyr Ile Glu Gly Tyr His Thr Val Pro Lys Gly Arg Cys

195 200 205

Arg Gln Val Val Thr Gly Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Ile Leu Phe Ile Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly Val Leu

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Val Gly His Thr Ile Ile Asp Leu Met Ser

245 250 255

Lys Gln Cys Trp Gly Leu Leu Gly His Tyr Leu Arg Val Leu Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Ile His Gly Asp Ile Arg Lys Thr Thr Lys Leu Asn

275 280 285

Ile Gly Gly Thr Glu Ile Glu Val Glu Thr Leu Val Glu Asp Glu Ala

290 295 300

Glu Ala Gly Ala Val Pro Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu

305 310 315 320

Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr

325 330 335

Glu Asn Glu Val

340

<210> 47

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 47

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

20 25 30

Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His Glu

35 40 45

Arg Met Leu Phe Gln Thr Ser Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val

50 55 60

Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys

65 70 75 80

Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp

85 90 95

Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile

115 120 125

Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro

130 135 140

Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser Asn

165 170 175

Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu

180 185 190

Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys

195 200 205

Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly

210 215 220

Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His

225 230 235 240

Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp

245 250 255

Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly

260 265 270

Thr Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His

275 280 285

Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn

290 295 300

Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile

305 310 315 320

Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp

340

<210> 48

<211> 374

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 48

Met Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala Leu

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val Pro

20 25 30

Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His Glu

35 40 45

Arg Met Leu Phe Gln Thr Ser Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val

50 55 60

Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys

65 70 75 80

Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp

85 90 95

Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln

100 105 110

Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile

115 120 125

Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro

130 135 140

Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr

145 150 155 160

Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser Asn

165 170 175

Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu

180 185 190

Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys

195 200 205

Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly

210 215 220

Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His

225 230 235 240

Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp

245 250 255

Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly

260 265 270

Thr Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His

275 280 285

Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn

290 295 300

Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile

305 310 315 320

Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu

325 330 335

Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr

340 345 350

Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe

355 360 365

Cys Tyr Glu Asn Glu Val

370

<210> 49

<211> 305

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 49

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

1 5 10 15

Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly

20 25 30

Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu

35 40 45

Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala

50 55 60

Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile

85 90 95

Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn

100 105 110

Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp

130 135 140

Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu

165 170 175

Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys

195 200 205

Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly Thr Glu Gly Phe Gly His Ile

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala

245 250 255

Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr

275 280 285

Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu

290 295 300

Asp

305

<210> 50

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 50

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

1 5 10 15

Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly

20 25 30

Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu

35 40 45

Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp Ile Ser Phe Ala Leu Ser Ala

50 55 60

Leu Cys Leu Met Phe Tyr Gly Tyr Gln Thr Trp Lys Ser Thr Cys Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Ile Tyr Val Ala Thr Ile Ser Met Ile Lys Phe Ile Ile

85 90 95

Glu Tyr Phe His Ser Phe Asp Glu Pro Ala Val Ile Tyr Ser Ser Asn

100 105 110

Gly Asn Lys Thr Lys Trp Leu Arg Tyr Ala Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Leu Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp

130 135 140

Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu

165 170 175

Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His Thr Val Pro Lys Gly Ile Cys

195 200 205

Arg Glu Leu Val Arg Val Met Ala Trp Thr Phe Phe Val Ala Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly Thr Glu Gly Phe Gly His Ile

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala

245 250 255

Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr

275 280 285

Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu

290 295 300

Asp Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro

305 310 315 320

Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

325 330 335

<210> 51

<211> 350

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 51

Met Val Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val

20 25 30

Pro Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His

35 40 45

Glu Arg Met Leu Phe Gln Thr Ser Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser

50 55 60

Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu

65 70 75 80

Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln

85 90 95

Trp Val Ser Phe Ala Leu Ser Val Ala Cys Leu Gly Trp Tyr Ala Tyr

100 105 110

Gln Ala Trp Arg Ala Thr Cys Gly Trp Glu Glu Val Tyr Val Ala Leu

115 120 125

Ile Ser Met Met Lys Ser Ile Ile Glu Ala Phe His Ser Phe Asp Ser

130 135 140

Pro Ala Thr Leu Trp Leu Ser Ser Gly Asn Gly Val Lys Trp Met Arg

145 150 155 160

Tyr Gly Ser Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser

165 170 175

Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu

180 185 190

Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met

195 200 205

Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr

210 215 220

Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe

225 230 235 240

His Thr Val Pro Lys Gly Leu Cys Arg Gln Leu Val Arg Ala Met Ala

245 250 255

Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu

260 265 270

Gly Pro Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly

275 280 285

His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly

290 295 300

Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp

305 310 315 320

Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val

325 330 335

Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp Lys Tyr Glu Ser Ser

340 345 350

<210> 52

<211> 380

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 52

Met Val Ser Arg Arg Pro Trp Leu Leu Ala Leu Ala Leu Ala Val Ala

1 5 10 15

Leu Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Ser Thr Gly Ser Asp Ala Thr Val

20 25 30

Pro Val Ala Thr Gln Asp Gly Pro Asp Tyr Val Phe His Arg Ala His

35 40 45

Glu Arg Met Leu Phe Gln Thr Ser Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser

50 55 60

Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu

65 70 75 80

Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln

85 90 95

Trp Val Ser Phe Ala Leu Ser Val Ala Cys Leu Gly Trp Tyr Ala Tyr

100 105 110

Gln Ala Trp Arg Ala Thr Cys Gly Trp Glu Glu Val Tyr Val Ala Leu

115 120 125

Ile Ser Met Met Lys Ser Ile Ile Glu Ala Phe His Ser Phe Asp Ser

130 135 140

Pro Ala Thr Leu Trp Leu Ser Ser Gly Asn Gly Val Lys Trp Met Arg

145 150 155 160

Tyr Gly Ser Trp Leu Leu Thr Cys Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser

165 170 175

Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu

180 185 190

Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met

195 200 205

Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr

210 215 220

Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe

225 230 235 240

His Thr Val Pro Lys Gly Leu Cys Arg Gln Leu Val Arg Ala Met Ala

245 250 255

Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu

260 265 270

Gly Pro Glu Gly Phe Gly His Ile Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly

275 280 285

His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly

290 295 300

Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp

305 310 315 320

Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val

325 330 335

Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu Asp Lys Tyr Glu Ser Ser Ala Ala

340 345 350

Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln

355 360 365

Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

370 375 380

<210> 53

<211> 310

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 53

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

1 5 10 15

Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly

20 25 30

Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu

35 40 45

Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp Val Ser Phe Ala Leu Ser Val

50 55 60

Ala Cys Leu Gly Trp Tyr Ala Tyr Gln Ala Trp Arg Ala Thr Cys Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Val Tyr Val Ala Leu Ile Ser Met Met Lys Ser Ile Ile

85 90 95

Glu Ala Phe His Ser Phe Asp Ser Pro Ala Thr Leu Trp Leu Ser Ser

100 105 110

Gly Asn Gly Val Lys Trp Met Arg Tyr Gly Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp

130 135 140

Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu

165 170 175

Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His Thr Val Pro Lys Gly Leu Cys

195 200 205

Arg Gln Leu Val Arg Ala Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly His Ile

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala

245 250 255

Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr

275 280 285

Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu

290 295 300

Asp Lys Tyr Glu Ser Ser

305 310

<210> 54

<211> 340

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 54

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Leu Phe Gln Thr Ser

1 5 10 15

Tyr Thr Leu Glu Asn Asn Gly Ser Val Ile Cys Ile Pro Asn Asn Gly

20 25 30

Gln Cys Phe Cys Leu Ala Trp Leu Lys Ser Asn Gly Thr Asn Ala Glu

35 40 45

Lys Leu Ala Ala Asn Ile Leu Gln Trp Val Ser Phe Ala Leu Ser Val

50 55 60

Ala Cys Leu Gly Trp Tyr Ala Tyr Gln Ala Trp Arg Ala Thr Cys Gly

65 70 75 80

Trp Glu Glu Val Tyr Val Ala Leu Ile Ser Met Met Lys Ser Ile Ile

85 90 95

Glu Ala Phe His Ser Phe Asp Ser Pro Ala Thr Leu Trp Leu Ser Ser

100 105 110

Gly Asn Gly Val Lys Trp Met Arg Tyr Gly Ser Trp Leu Leu Thr Cys

115 120 125

Pro Val Ile Leu Ile Arg Leu Ser Asn Leu Thr Gly Leu Lys Asp Asp

130 135 140

Tyr Ser Lys Arg Thr Met Gly Leu Leu Val Ser Asp Val Gly Cys Ile

145 150 155 160

Val Trp Gly Ala Thr Ser Ala Met Cys Thr Gly Trp Thr Lys Ile Leu

165 170 175

Phe Phe Leu Ile Ser Leu Ser Tyr Gly Met Tyr Thr Tyr Phe His Ala

180 185 190

Ala Lys Val Tyr Ile Glu Ala Phe His Thr Val Pro Lys Gly Leu Cys

195 200 205

Arg Gln Leu Val Arg Ala Met Ala Trp Leu Phe Phe Val Ser Trp Gly

210 215 220

Met Phe Pro Val Leu Phe Leu Leu Gly Pro Glu Gly Phe Gly His Ile

225 230 235 240

Ser Lys Tyr Gly Ser Asn Ile Gly His Ser Ile Leu Asp Leu Ile Ala

245 250 255

Lys Gln Met Trp Gly Val Leu Gly Asn Tyr Leu Arg Val Lys Ile His

260 265 270

Glu His Ile Leu Leu Tyr Gly Asp Ile Arg Lys Lys Gln Lys Ile Thr

275 280 285

Ile Ala Gly Gln Glu Met Glu Val Glu Thr Leu Val Ala Glu Glu Glu

290 295 300

Asp Lys Tyr Glu Ser Ser Ala Ala Ala Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu

305 310 315 320

Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile Asp Ile Asn Val Phe Cys Tyr

325 330 335

Glu Asn Glu Val

340

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 55

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly

1 5 10

<210> 56

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 56

Lys Ser Arg Ile Thr Ser Glu Gly Glu Tyr Ile Pro Leu Asp Gln Ile

1 5 10 15

Asp Ile Asn Val

20

<210> 57

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 57

Val Lys Glu Ser Leu

1 5

<210> 58

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 58

Val Leu Gly Ser Leu

1 5

<210> 59

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 59

Asn Ala Asn Ser Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val Ala Leu Thr Ser Lys

1 5 10 15

<210> 60

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<220>

<221> 尚未归类的特征

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是任何氨基酸。

<400> 60

Phe Xaa Tyr Glu Asn Glu

1 5

<210> 61

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 61

Phe Cys Tyr Glu Asn Glu Val

1 5

<210> 62

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 62

Met Asp Tyr Gly Gly Ala Leu Ser Ala Val Gly Arg Glu Leu Leu Phe

1 5 10 15

Val Thr Asn Pro Val Val Val Asn Gly Ser

20 25

<210> 63

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 63

Met Ala Gly His Ser Asn Ser Met Ala Leu Phe Ser Phe Ser Leu Leu

1 5 10 15

Trp Leu Cys Ser Gly Val Leu Gly Thr Glu Phe

20 25

<210> 64

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 64

Met Gly Leu Arg Ala Leu Met Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ala Gly Leu

1 5 10 15

Val Arg Glu Ser Leu Gln Gly

20

<210> 65

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 65

Met Arg Gly Thr Pro Leu Leu Leu Val Val Ser Leu Phe Ser Leu Leu

1 5 10 15

Gln Asp

<210> 66

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 66

Met Thr Glu Thr Leu Pro Pro Val Thr Glu Ser Ala Val Ala Leu Gln

1 5 10 15

Ala Glu

Claims

1.一种核酸，其包含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP含有Kozak序列，并且其中所述D2SP含有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的核酸，其中所述Kozak序列在所述D2SP的3'末端处。

3.如权利要求1和2中任一项所述的核酸，其中所述D2SP含有BamHI限制位点。

4.如权利要求3所述的核酸，其中所述BamHI限制位点位于所述Kozak序列的5'处。

5.如权利要求1至4中任一项所述的核酸，其中所述D2SP含有与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少98％序列同一性的核苷酸序列。

6.如权利要求1至5中任一项所述的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至编码提供可检测信号的基因产物的核苷酸序列。

7.如权利要求6所述的核酸，其中所述提供可检测信号的基因产物是荧光蛋白。

8.如权利要求7所述的核酸，其中所述荧光蛋白选自由绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白、青色荧光蛋白、钙指示剂和电压指示剂组成的组。

9.如权利要求1至8中任一项所述的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至编码光响应性多肽的核苷酸序列。

10.如权利要求9所述的核酸，其中所述光响应性多肽是去极化光响应性多肽，其中所述去极化光响应性多肽含有与SEQ ID NO:4-37中的任一者具有至少75％序列同一性的氨基酸序列。

11.如权利要求9所述的核酸，其中所述光响应性多肽是超极化光响应性多肽，其中所述超极化光响应性多肽含有与SEQ ID NO:38-56中的任一者具有至少75％序列同一性的氨基酸序列。

12.如权利要求1至11中任一项所述的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至编码重组酶的核苷酸序列。

13.如权利要求12所述的核酸，其中所述重组酶是选自由Cre重组酶和FLP重组酶组成的组。

14.一种重组表达载体，其包含如权利要求1至13中任一项所述的核酸。

15.一种经遗传修饰的宿主细胞，其包含如权利要求1至13中任一项所述的核酸或如权利要求14所述的重组表达载体。

16.如权利要求15所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞是神经元细胞。

17.如权利要求15所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞是祖细胞。

18.如权利要求17所述的经遗传修饰的宿主细胞，其中所述祖细胞是干细胞。

19.一种调节靶神经元的活性的方法，所述方法包括向所述靶神经元中引入如权利要求1至13中任一项所述的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至光响应性多肽，所述光响应性多肽在被光激活时诱导所述靶神经元的超极化或去极化。

20.一种荧光标记靶细胞的方法，所述方法包括向所述靶细胞中引入如权利要求1至13中任一项所述的核酸，其中所述D2SP可操作地连接至荧光蛋白，所述荧光蛋白在被表达时荧光标记所述靶细胞。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述靶细胞是神经元细胞。

22.如权利要求20所述的方法，其中所述靶细胞是祖细胞。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述祖细胞是干细胞。

24.一种试剂盒，其包括：

重组表达载体，所述重组表达载体包含含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP含有Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列；和

用于将所述重组表达载体引入靶细胞的说明书。

25.如权利要求24所述的试剂盒，其中所述试剂盒还包括对照表达载体，所述对照表达载体含有含2型多巴胺受体特异性启动子(D2SP)的核酸，其中所述D2SP不包含D2受体基因的外显子1，其中所述D2SP包含Kozak序列，并且其中所述D2SP包含与SEQ ID NO:1中所示的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。