CN106769289A - 一种粪便样品贮存液的配置方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种粪便样品贮存液的配制方法及应用，所述稳定液成分包括缓冲剂：20‑50mM的Tris buffer(pH 7.4)，封闭剂：5‑15％的牛血清蛋白、0.10‑0.20％Tween‑20、120‑160mM氯化钠，金属离子螯合剂：10‑20mM EDTA，防腐剂：0.090‑0.15％叠氮化钠、10‑20μg/mL庆大霉素。本发明可将新鲜粪便与上述收集液按10mg:2mL‑50mg:2mL比例混合均匀后可置于常温保存7天。本发明配制的样品稳定液可在常温下有效保持粪便样品成分的稳定性，从而使采样者在任何时候自助取样，也能够用于粪便样本的长途运输。

Description

一种粪便样品贮存液的配置方法及应用

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，特别涉及一种用于粪便贮存液中配制及其应用。

背景技术

粪便检测是临床常规化验检查项目之一，通过此项检查可较直观地了解胃肠道一些病理现象，间接地判断消化道、胰腺、肝胆的功能状况，特别是结直肠癌的检测，近些年结肠癌患者数目逐年急剧增加，其占居癌症死亡率的前几位。结肠癌的早期诊断治疗，治愈率可达100％，其早期癌诊察意义重大。

传统的用于早期发现结肠癌的检查方法为，钡灌肠：从肛门注入稀释钡剂然后再打入少量气体，使得直肠、全部结肠及盲肠显影，观察大肠的表面；结肠镜检查：通过内窥镜直接观察大肠内部的检查。其特点在于灵敏度和特异性高，然而，成本高、给受试者带来的负担大、伴随并发症的风险。

“大便隐血”指的是每日消化道出血量小于5mL，是结直肠癌的早期症状。大便隐血检查方法简便，可以在普通家庭简单地进行，且属于一种非侵入性对病患不会造成任何压力，其成本低，不会为病患家庭造成经济负担。但是粪便样品不稳定，保存时间短，收到新鲜样本后必须立即送检，给病人造成了不便，给医护人员造成可工作负担。且样品质量直接影响检测结果，及后续相关医疗实验的有效性。但是对于检测机构人员，收集到的新鲜标本往往需要放置1天或更长时间，这对于粪便贮存液就提出了更高的。本发明开发的粪便贮存液，对粪便中的组分有较好的保护作用，新鲜收集的样本在常温下可以放置7天，提高了检测的准确性，减轻了病人及医护人员的负担。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以保护粪便样品各组分稳定性的贮存液的配方。

本发明用于保护粪便样品各组分稳定性的贮存液包括缓冲剂、封闭剂、金属离子螯合剂、防腐剂，各组成分分别如下，缓冲剂：20-50mM的Tris buffer(pH 7.4)，封闭剂：5-15％的牛血清蛋白、0.10-0.20％Tween-20、120-160mM氯化钠，金属离子螯合剂：10-20mMEDTA，防腐剂：0.090-0.15％叠氮化钠、10-20μg/mL庆大霉素。

本发明所述的制备粪便贮存液的配制方法，具体步骤如下：

1.按配方准确称取各组分；

2.将Tise溶解于700mL的纯化水中，用盐酸调节pH至7.4，定容至1L，制得Tris-HCl溶液；

3.将步骤1)中的各组分按照以下顺序依次加入配制好的Tris-HCl中，混匀后，高压灭菌，得到粪便贮存液。

本发明还涉及使用所述贮存液进行粪便贮存的方法，步骤如下：

1.采集10-50mg新鲜粪便样品置于2mL粪便贮存液中，混合均匀室温下密封保存。

2.粪便检测是临床常规化验检查项目之一，可直观地了解胃肠道一些病理现象，间接地判断消化道、胰腺、肝胆的功能状况，特别是用于结肠癌的早期诊断。

3.新鲜粪便样品的贮存是影响检测成功与否的重要因素，也是限制粪便检测的关键原因，因此，本发明提供的粪便样品的贮存液配方，不仅可以保持粪便样品被检成分的稳定性，减轻医患和医护人员的负担。

本发明具有以下有益效果：

1.提供了用于新鲜粪便样品贮存液的有效配方，制备的粪便样品贮存液可用于粪便样品检测；

2.提供粪便样品贮存液常温先可有效保持粪便样品稳定性长达七天，增加了粪便样品检测的有效性，减轻了患者和医护人员的负担。

附图说明

图1：贮存液对粪便中DNA含量的影响

图2：贮存液对大便隐血的影响

具体实施方式

以下实施例用于解释本发明，而不用于限制本发明。

实施例一：贮存液对粪便样品中DNA含量的影响

1.称取Tris121.14g溶解于700mL的纯化水中，用盐酸调节pH至7.4,定容至1L,制得Tris-HCl溶液，将10g牛血清蛋白，1.5ml Tween-20,4.383gEDTA,0.1g叠氮化钠,15mg庆大霉素依次加入配制好的Tris-HCl中，混匀后，高压灭菌，得到粪便贮存液。

2.取目前市面上常规使用的粪便收集液，配方由EDTA和氯化钠组成，其中浓度分别为3～10g/L和5～20g/lL。

分别取20mg新鲜粪便样品加入到上述2ml粪便收集液中，常温放置7天，通过琼脂糖凝胶电泳检测DNA含量。

3.由图1可知本发明配制的粪便贮存液DNA条带明显，市售的粪便收集液DNA已基本降解，表明本发明的粪便贮存液可以很好的保护核酸。

实施例二：贮存液对大便隐血的影响

1.分别将5份新鲜大便隐血阳性粪便样本分别取20mg加入到2ml市售粪便收集液及本发明配制的粪便贮存液中，于常温条件下放置7天，并于0天、7天检测大便隐血。

2.结果见图2。常温保存7天后，5份粪便样品，本发明制备粪便贮存液保存的粪便大便隐血检出均为阳性，然而市售的收集液仅有一份检出阳性。本发明制备的粪便贮存液可以常温保持粪便样品长达7天。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (6)

1.一种粪便样品贮存液，其特征在于包括缓冲剂、封闭剂、金属离子螯合剂、防腐剂。

2.权利要求1所述粪便样品贮存液，其特征在于，缓冲剂、封闭剂、金属离子螯合剂、防腐剂各组成分分别如下，缓冲剂：20-50mM的Tris buffer(pH 7.4)，封闭剂：5-15％的牛血清蛋白、0.10-0.20％Tween-20、120-160mM氯化钠，金属离子螯合剂：10-20mM EDTA，防腐剂：0.090-0.15％叠氮化钠、10-20μg/mL庆大霉素。

3.权利要求1-2所述的贮存液的制备方法，其特征在于，按照以上配方称取各成分，无菌去离子水溶解后，高压灭菌，室温保存即得。

4.权利要求1-3所述粪便样品贮存液，其特征在于，用于新鲜粪便样品检测贮存。

5.权利要求4所述的应用，其特征在于将新鲜粪便与权利要求1所述的贮存液按10mg:2mL-50mg:2mL比例混合均匀后可置于常温、4℃或-20℃下保存。

6.权利要求5所述的应用，其特征在于在常温下保存的时间长达7天；在2～8℃下保存的时间长达1个月；在-20℃下保存的时间长达6个月。