CN1066923A - 用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 - Google Patents
用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1066923A CN1066923A CN 91105525 CN91105525A CN1066923A CN 1066923 A CN1066923 A CN 1066923A CN 91105525 CN91105525 CN 91105525 CN 91105525 A CN91105525 A CN 91105525A CN 1066923 A CN1066923 A CN 1066923A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sample
- freezing
- making
- microscope observation
- liquid nitrogen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本发明所研制的用于电子显微镜观察液态样品
的冷冻溶蚀制样方法，其主要特点是该方法对于微乳
液样品亦即液体样品利用深冷速冻的方法，选用实验
室使用的一般有机溶剂及粘合剂，结合一定的操作方
法进行冷冻溶蚀，得到了很好的效果。
Description
本发明属于电子显微镜领域。
冷冻蚀刻技术是研究生物组织微观结构的较成熟的电子显微镜制样技术;对于液态样品采用深冷快速封固和实施蚀刻的制样方法是人们直接想到的可利用的方法，特别是微乳液体系的液态样品的冷冻蚀刻方法，但以往报导的这类方法所用设备复杂，同时需采用丙烷作溶剂。众所周知液体丙烷不易保存，需要在低温、高压条件下操作，而且有易燃易爆的危险性，这样对一般实验室势必难于操作，并有一定的困难。针对这些问题本发明特研制了一种较简单的方法，即选用实验室使用的一般有机溶剂，结合特殊的操作方法用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀样品制备技术，并且得到了理想的效果。
本发明的目的在于对于一个微乳液样品亦即液体样品，其中即含有油又含有水及其他物质的液体样品，使用深冷速冻的方法和特殊的溶蚀方法的制样技术，得到了满意的结果。
本发明的任务是，根据以往的报道采用电子显微镜观察液态样品的冷冻蚀刻技术所用设备复杂，同时需采用丙烷作溶剂，这样对于一般实验室来说很困难，因此，针对存在的问题，研制出一种简单的方法，同时选用了实验室使用的一般有机溶剂，以及普通的粘合剂，从而提高了经济效益。
本发明研制的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其主要是对于微乳液样品，即含有油又含有水以及其他物质的液体样品，利用深冷速冻溶蚀的制样技术，同时选用了实验室使用的一般有机溶剂即：1、2-二氯乙烷，四氯化碳，氯仿，二氯甲烷，异丙醇，乙醇，丙酮，乙醚;粘合剂即：正庚烷、苯、甲苯、乙醇、异丙醇、甘油，水结合一定的操作方法进行冷冻溶蚀。具体方法是：将取得的液体样品直接滴入液氮中，使之骤冷至液氮温度（-196℃），样品即成固态，将固态样品放入予先涂有正庚烷、苯、甲苯、乙醇、异丙醇、甘油、水作粘合剂的样品台孔中，使样品快速粘结在孔中，之后即投入液氮中，待样品冷却到液氮温度时，检查样品是否粘结牢固，并保存于液氮中。按常规冷冻蚀刻法磨制碳棒和烧制铂珠，并调好碳棒和铂珠蒸发点的角度及距离，然后从液氮中取出样品台，用预冷的刀片将样品外露的部分割断，注意保护断面不受任何的擦伤和污染。将割断的样品连同样品台放入予冷的1、2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿、二氯甲烷、异丙醇、乙醇、丙酮、乙醚中浸泡处理，溶剂的予冷温度控制在0-95℃范围。浸泡处理后的样品再度放入液氮中，保持温度。从液氮中取出冷冻块和样品台，迅速将样品台放入冷冻块中样品台的位置，然后将它们放入真空喷镀仪的钟罩中抽至真空，抽真空操作在10-50分钟之间完成。设定与样品断面成45°角进行喷铂投影，再与样品断面成垂直方向喷碳5-8次，多次的喷碳是为加固复型膜;给钟罩通大气将冷冻块提出，从其中取出样品台，把经过复型的面扣在预备好的带膜的电镜铜网上，（操作时要使复型膜对准铜网），待样品台升到室温时，复型膜连同样品台上的少量剩余液态样品一同附在了铜网膜上，待铜网上的液态样品干燥后，即可放在50-98%的异丙醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮的水溶液中充分漂洗，尽可能使沾在复型膜上的样品漂洗干净，以利于复型膜的观察与拍照，同时可减少对电子显微镜的污染，为使复型膜铜网上的福尔膜瓦膜沾得更牢，不被轻易洗掉，洗膜时要掌握好时机，洗膜后的附有复型膜的铜网干燥后，即可进入电子显微镜观察和拍照。
实施例：将1.5%的十二烷基硫酸钠，2.7%的苯氧基乙醇，15.4%的氯化钠的水溶液与正庚烷按1∶1的比例混合而形成的油、微乳、盐水三相体系，静置30天取样采用本发明所研制的方法经制样过程得到样品结果令人非常满意。
附图
Claims (6)
1、一种用于电子显微镜观察的液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于该方法是对于微乳液样品，即含有油又含有水以及其他物质的液体样品，利用深冷速冻溶蚀的制样技术，同时选用了实验室使用的一般有机溶剂1、2-二氯乙烷，四氯化碳，氯仿，二氯甲烷，异丙醇，乙醇、丙酮，乙醚；粘合剂即正庚烷，苯、甲苯，乙醇，异丙醇，甘油，水；漂洗剂异丙醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮；结合一定的操作方法进行冷冻溶蚀。
2、根据权利要求1所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于将取得的液体样品直接滴入液氮中，使之骤冷至液氮温度（-196℃）样品即成固态，将固态样品放入予先涂有正庚烷，苯，甲苯，乙醇，异丙醇，甘油，水作粘合剂的样品台孔中，使样品快速粘结在孔中，之后立即投入液氮中，将样品冷却到液氮温度，检查样品是否粘结牢固并保存于液氮中。
3、根据权利要求2所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于从液氮中取出样品台，用预冷的刀片将样品外露部分割断，将割断的样品连同样品台放入予冷的1、2-二氯乙烷，四氯化碳，氯仿，二氯甲烷，异丙醇，乙醇，丙酮，乙醚溶剂中浸泡，溶剂的予冷温度控制在0-95℃范围，处理后的样品再度放入液氮中保持温度。
4、根据权利要求3所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于，从液氮中取出冷冻块和样品台，迅速将样品放入冷冻块中的样品台的位置，之后将其放入真空喷镀仪的钟罩中抽真空，时间为10-50分钟;设定与样品断面成45°角进行喷铂投影;再与样品的断面成垂直方向喷碳5-8次加固复型膜。
5、根据权利要求4所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于将钟罩通大气之后，将冷冻块提出，从中取出样品台，把经过复型的面扣在预备好的带膜的电镜铜网上（一定要使复型膜对准铜网），待样品台升至室温时复型膜连同样品台上少量剩余液态样品一同附在了铜网膜上，待铜网上的液态样品干燥后，放在50-98%的异丙醇，甲醇，乙醇，乙醚，丙酮的水溶液中充分漂洗，尽可能使沾在复型膜上的样品漂洗干净，以利于复型膜的观察与拍照。
6、根据权利要求5所述的用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法，其特征在于洗膜后的附有复型膜的铜网干燥后即可进入电子显微镜观察和拍照。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 91105525 CN1032028C (zh) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 91105525 CN1032028C (zh) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1066923A true CN1066923A (zh) | 1992-12-09 |
| CN1032028C CN1032028C (zh) | 1996-06-12 |
Family
ID=4907211
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 91105525 Expired - Fee Related CN1032028C (zh) | 1991-08-07 | 1991-08-07 | 用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1032028C (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103323476A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-09-25 | 中国石油大学(北京) | 一种聚合物的水化分子形态的环境扫描电镜检测方法 |
| CN106226896A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-12-14 | 湖南省天骑医学新技术股份有限公司 | 一种可以透明微孔滤膜的显微镜镜油配制方法 |
| CN107960118A (zh) * | 2015-07-06 | 2018-04-24 | 巴塞尔大学 | 用于高分辨率电子显微镜的无损冷冻-网格制备台 |
| CN109916942A (zh) * | 2019-04-18 | 2019-06-21 | 攀钢集团攀枝花钢铁研究院有限公司 | 捕收剂的电子显微镜表征方法 |
-
1991
- 1991-08-07 CN CN 91105525 patent/CN1032028C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103323476A (zh) * | 2013-06-18 | 2013-09-25 | 中国石油大学(北京) | 一种聚合物的水化分子形态的环境扫描电镜检测方法 |
| CN103323476B (zh) * | 2013-06-18 | 2015-12-09 | 中国石油大学(北京) | 一种聚合物的水化分子形态的环境扫描电镜检测方法 |
| CN107960118A (zh) * | 2015-07-06 | 2018-04-24 | 巴塞尔大学 | 用于高分辨率电子显微镜的无损冷冻-网格制备台 |
| CN107960118B (zh) * | 2015-07-06 | 2022-07-26 | 巴塞尔大学 | 用于高分辨率电子显微镜的无损冷冻-网格制备台 |
| US11422074B2 (en) | 2015-07-06 | 2022-08-23 | Universitat Basel | Lossless cryo-grid preparation stage for high-resolution electron microscopy |
| CN106226896A (zh) * | 2016-08-08 | 2016-12-14 | 湖南省天骑医学新技术股份有限公司 | 一种可以透明微孔滤膜的显微镜镜油配制方法 |
| CN106226896B (zh) * | 2016-08-08 | 2019-08-20 | 湖南省天骑医学新技术股份有限公司 | 一种可以透明微孔滤膜的显微镜镜油配制方法 |
| CN109916942A (zh) * | 2019-04-18 | 2019-06-21 | 攀钢集团攀枝花钢铁研究院有限公司 | 捕收剂的电子显微镜表征方法 |
| CN109916942B (zh) * | 2019-04-18 | 2021-09-21 | 攀钢集团攀枝花钢铁研究院有限公司 | 捕收剂的电子显微镜表征方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1032028C (zh) | 1996-06-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bird et al. | The tylenchid (Nematoda) egg shell: structure, composition and permeability | |
| Taylor et al. | The use of Evan's blue stain to test the survival of plant cells after exposure to high salt and high osmotic pressure | |
| Neumann et al. | Evaluation of surfactants for use in the spray treatment of iron chlorosis in citrus trees | |
| CN106596217A (zh) | 高氮不锈钢的金相腐蚀剂及金相组织显示方法 | |
| CN1032028C (zh) | 用于电子显微镜观察液态样品的冷冻溶蚀制样方法 | |
| Cross | A reliable epoxy resin mixture and its application in routine biological transmission electron microscopy | |
| Moore et al. | Low temperature sulfation of tissues and the demonstration of metachromasy | |
| JPS5478076A (en) | Frozen sample observation device of scanning electron microscope and similar unit | |
| Rickard et al. | Occlusions in cassava xylem vessels associated with vascular discoloration | |
| Wardrop | The opening mechanism of follicles of some species of Banksia | |
| Feldman-Muhsam et al. | On the evacuation of sperm from the spermatophore of the tick, Ornithodoros savignyi | |
| Livingston | Morphology of the perivascular regions of the rat neural lobe in relation to hormone release | |
| Stobbart | Ion movements and water transport in the rectum of the locust Schistocerca gregaria | |
| US4997522A (en) | Wet chemical etchant and method for etching high temperature superconductive films | |
| CN86102408A (zh) | 一种铝硅系合金金相分析试样的制备方法 | |
| US4375384A (en) | Method for penetrant inspection employing an etchant penetrant | |
| Sills | A multidisciplinary method for study of lung structure and function | |
| Worthen et al. | Scanning electron microscopy tissue preparation | |
| JPH02209729A (ja) | 半導体装置の製造方法及び異物除去装置 | |
| US4063886A (en) | Mercerizing compositions | |
| CONDON et al. | The effect of chemical fixation and dehydration on the preservation of latex in Calystegia silvatica (Convolvulaceae). Examination of exudate and latex in situ by light and scanning electron microscopy | |
| Avery et al. | Methods for removing uranyl acetate precipitate from ultrathin sections | |
| Abraham et al. | The extravascular channel system in the rostral pituitary of Mugil cephalus (Teleostei) as revealed by use of horseradish peroxidase | |
| Spencer | On the nature of the blocking of the laticiferous system at the leaf-base of Hevea brasiliensis | |
| Nomura | An embedding technique for observation of internal microfossil structure by scanning electron microscopy |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |