CN106645701A - 水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法及应用 - Google Patents

水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析的方法及应用。采用电化学发光免疫分析测定血清甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平，综合分析甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等抗体水平的差异，对甲状腺疾病尤其是自身免疫性甲状腺疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的临床价值。联合检测促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等对自身免疫性甲状腺疾病和非自身免疫性甲状腺疾病诊断和鉴别诊断的敏感性和特异性均高于单项指标的检测。因此，测定血清中甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平有助于自身免疫性甲状腺疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后监测。

Description

水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法及应用
技术领域
本发明涉及自身抗体筛查技术领域，具体为水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法及应用。
背景技术
甲状腺自身抗体包括甲状腺微粒体抗体(TMAb)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)和甲状腺激素抗体(TAb)。其中甲状腺微粒体抗体中有一种叫做甲状腺过氧化物酶抗体(TROAb)，其作用相当重要，是甲状腺的主要破坏性抗体，在自身免疫性甲状腺疾病中水平升高，是对甲状腺细胞主要的破坏性抗体。促甲状腺激素、TROAb、TRAb等抗体在自身免疫性甲状腺疾病诊断过程中的敏感性、特异性、准确性较高，联合检测对自身免疫性甲状腺疾病的诊断价值更大。
近年来随着人们生活水平的提高，饮食结构的改变，精神压力的增加，生活节奏的加快，保健意识的增强以及环境影响甲状腺功能物质的增加，甲状腺疾病的发病率呈上升趋势。窦瑜贵等对成人碘营养及甲状腺功能状态研究证实，随着碘摄入量的增加，TPOAb、TGAb的阳性率呈上升趋势，水源性高碘地区健康体检人群甲状腺自身抗体的阳性率较高，对甲状腺功能正常而自身抗体阳性者进行动态监测、随访或早期干预，有利于甲状腺疾病早期诊断、鉴别诊断及其防治。
发明内容
本发明的目的在于提供水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，包含以下步骤：
A、将吡啶钌标记的X物质对应的抗体、待测血清和生物素化的X物质充分混合，使待测血清和吡啶钌标记的抗体竞争与生物素化的X物质结合；
B、加入链霉亲和素包被的磁性微粒，充分反应后，链霉亲和素包被的磁性微粒与生物素化的抗原-抗体复合物紧密结合；
C、将反应液吸入流动池，通过电磁作用，磁珠微粒吸附于电极表面，加入三羟甲基氨基甲烷，除去未吸附于电极表面的物质；
D、加入一定量的三丙胺溶液，加电压启动ECL反应，使吡啶钌标记复合体化学发光，并通过光电倍增器测定发光强度，发光的强弱程度与待测血清中抗体的含量成反比；
E、绘制或计算发光信号强弱对该抗体量的曲线，从而建立疾病发生前或整个疾病过程中受试者的抗体产生谱，动态监测以建立抗体产生谱；
F、应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，在不同性别、年龄组中甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体的阳性率以及自身抗体在各种甲状腺疾病中的阳性率，采用χ2检验进行组间比较，应用非条件Logi-stic回归，计算甲状腺抗体阳性人群中发生各种甲状腺功能异常的风险。
优选的，所述待测样品为血清。
优选的，所述待测物质为甲状腺自身抗体。
优选的，所述第一抗体为单克隆免疫球蛋白。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：采用电化学发光免疫分析测定血清甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平，对甲状腺疾病的诊断和鉴别诊断具有重要价值，结合分析甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等抗体水平差异，对甲状腺疾病尤其是自身免疫性甲状腺疾病的诊断具有重要价值。联合检测促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等对自身免疫性甲状腺疾病和非自身免疫性甲状腺疾病的敏感性和特异性均高于单项指标的检测。因此，测定血清甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平有助于自身免疫性甲状腺疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后监测。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案：水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，包含以下步骤：
A、将吡啶钌标记的X物质对应的抗体、待测血清(含X物质对应的抗体)和生物素化的X物质充分混合，使待测血清和吡啶钌标记的抗体竞争与生物素化的X物质结合；
B、加入链霉亲和素包被的磁性微粒，充分反应后，链霉亲和素包被的磁性微粒与生物素化的抗原-抗体复合物紧密结合；
C、将反应液吸入流动池，通过电磁作用，磁珠微粒吸附于电极表面，加入三羟甲基氨基甲烷，除去未吸附于电极表面的物质；
D、加入一定量的三丙胺溶液，加电压启动ECL反应，使吡啶钌标记复合体化学发光，并通过光电倍增器测定发光强度，其发光强度的强弱与待测血清中抗体的含量成反比；
E、绘制或计算发光信号强弱对该抗体量的曲线，从而建立疾病发生前或整个疾病过程中受试者的抗体产生谱，动态监测以建立抗体产生谱；
F、应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，在不同性别、年龄组中甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体的阳性率以及自身抗体在各种甲状腺疾病中的阳性率，采用χ2检验进行组间比较，应用非条件Logi-stic回归计算甲状腺抗体阳性人群中发生各种甲状腺功能异常的风险。
本实施例中，待测样品为血清。
本实施例中，待测物质为甲状腺自身抗体。
本实施例中，第一抗体为单克隆免疫球蛋白。
甲状腺疾病主要依据血清TSH、FT3、FT4、TT3、TT4检测结果进行诊断，其诊断标准如下：甲状腺功能亢进(甲亢)：有甲亢的症状或体征，同时FT3＞7.1pmol/l，FT4＞22pmol/L，TSH＜0.27mIU/L者；亚临床甲状腺功能亢进(亚临床甲亢)：无甲亢的症状或体征，同时FT3和FT4正常，TSH＜0.27mIU/L；甲状腺功能减退(甲减)：有甲减的症状或体征，同时FT3＜2.8pmol/L，FT4＜12pmol/L，TSH＞4.2mIU/L者；亚临床甲状腺功能减退(亚临床甲减)：无甲减的症状或体征，TSH＞4.20mIU/L，FT3和FT4正常；TPOAb＞34IU/mL为TPOAb阳性，TGAb＞115IU/mL为TGAb阳性。
分析结果如下：
1、健康体检者不同年份甲状腺自身抗体异常检出率比较
表1结果显示，3218名健康体检者甲状腺自身抗体TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb异常检出率随年份的增加呈明显的增高趋势，2013年与2014和2015年比较差异均有统计学意义(P＜0.001)，但2014和2015年TPOAb+TgAb均阳性的差异无统计学意义(χ2为1.651，P为0.199)。
表1 健康体检者不同年份血清TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb阳性率比较[n(％)]
2、健康体检者不同性别、不同年龄甲状腺自身抗体检出率比较
表2结果显示，调查的3218名健康人群中，甲状腺自身抗体总的阳性检出率为16.19％(521/3218)，TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb的阳性检出率分别为14.57％、12.74％和11.12％。TPOAb的阳性检出率男性显著低于女性(6.92％VS 21.53％，χ2＝137.634，P＜0.001)，均随年龄增加而增高，男性50～59岁年龄组检出率最高(9.49％)，女性≥70岁年龄组达高峰(28.10％)；TGAb的阳性检出率男性显著低于女性(5.68％VS 19.16％，χ2＝131.169，P＜0.001)，)其年龄分布特征与TPOAb相同，男性50～59岁年龄组检出率最高(7.32％)，女性≥70岁年龄组阳性检出率高达19.16％。TPOAb+TgAb均阳性的检出率男性显著低于女性(5.03％VS 16.67％，χ2＝110.002，P＜0.001)，男性50～59岁年龄组检出率最高(5.15％)，女性≥70岁年龄组达高峰(20.26％)。无论男性还是女性，30岁以上各年龄组与30岁以下年龄组TPOAb、TGAb和TPOAb+TgAb阳性检出率均有统计学意义(P＜0.001)。
表2 健康体检者不同性别、不同年龄甲状腺自身抗体阳性检出率[n(％)]的比较
其中：①总人群中，不同性别之间甲状腺自身抗体检出率比较：χ2＝535.427，P＜0.001；②各年龄组男性甲状腺自身抗体检出率比较：χ2＝16.310，P＝0.006；③各年龄组女性甲状腺自身抗体检出率比较：χ2＝78.343，P＜0.001。
3、健康体检者各年龄组不同性别甲状腺自身抗体检出率比较
表3结果显示，各年龄组不同性别之间甲状腺自身抗体阳性检出率均有显著性差异(P值＜0.05～＜0.001)，其中20～29岁年龄组TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb阳性检出率差异的P值分别为0.013、0.003和0.034，其余各年龄组不同性别差异的P值均＜0.001。
表3 健康体检者各年龄组不同性别甲状腺自身抗体检出率[n(％)]比较
4、甲状腺功能异常者甲状腺自身抗体阳性检出率及OR值比较
表4结果显示，各种甲状腺功能异常疾病中TPOAb、TgAb和TPOAb+TgAb阳性检出率的比例不同，阳性检出率和OR由高到低依次为甲减、甲亢、亚临床甲减和亚临床甲亢，甲亢、亚临床甲亢和甲减、亚临床甲减之间均有显著性差异。
表4 各组甲状腺功能异常人群甲状腺自身抗体检出率[n(％)]及OR值比较
由以上表格数据可知，在水源性高碘地区，其甲状腺功能异常患病率较高，尤其亚临床甲状腺疾病的发病率更高。
实施案例：
TPOAb、TgAb阳性的亚临床甲状腺功能减退易演变为甲状腺功能减退。一项随访4～8年的研究结果发现，20％～50％的亚临床甲状腺功能减退患者发展为甲状腺功能减退。65岁以上，尤其是甲状腺自身抗体阳性者，4年内从亚临床甲状腺功能减退转化为甲状腺功能减退的几率高达80％，说明甲状腺自身抗体阳性是导致甲状腺功能异常的危险因素。双抗体阳性在甲状腺功能异常人群中的阳性率低于任何单一抗体的阳性率，但更易导致AITD的发生，说明两种抗体对甲状腺的损伤起协同作用。对甲状腺功能正常而自身抗体阳性者进行随访，1年后甲状腺功能减退和甲状腺功能亢进的发生率分别为5.2％和3.7％，TPOAb阳性者甲状腺功能减退的发生率(5.5％)显著高于TPOAb阴性者(0.5％)。一项20年的随访发现，甲状腺功能正常而自身抗体阳性者，每年以2％～4％的速度发展为甲状腺功能减退。抗体出现的高峰在60～＜70岁，较亚临床甲状腺功能减退发病的高峰早10年，证实自身抗体导致甲状腺的损伤是一个潜在、慢性渐进的过程。
沧州市作为水源性高碘地区，其甲状腺功能异常和自身抗体阳性的检出率较高，尤其亚临床甲状腺功能减退的患病率更高，且与性别和年龄有关。亚临床甲状腺功能减退者通常没有明显的临床表现，很容易被忽视，大多数通过甲状腺功能项目检查后发现。TPOAb和TGAb是诊断AITD的重要指标，AITD易感人群血液内TPOAb首先升高，继而TSH升高，FT4及其他甲状腺激素水平变化出现较晚。因此，将甲状腺功能和自身抗体检测列为健康人群的常规体检项目非常必要，加强对甲状腺疾病的筛查，有利于甲状腺疾病的早期诊断和鉴别诊断，尤其对甲状腺功能正常而自身抗体阳性者进行动态监测和随访，及时调整饮食习惯、生活方式，或进行早期干预治疗，有助于甲状腺疾病的防治。
本发明采用电化学发光免疫分析测定血清甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平用于甲状腺疾病的诊断，结合分析甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等抗体水平差异，对甲状腺疾病尤其是自身免疫性甲状腺疾病具有重要的诊断价值。促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体等联合检测对自身免疫性甲状腺疾病和非自身免疫性甲状腺疾病诊断和鉴别诊断的敏感性和特异性均高于单项指标的检测。因此，测定血清甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体水平有助于自身免疫性甲状腺疾病的诊断、观察疗效和预后监测。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下，对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，其特征在于：包含以下步骤：
A、将吡啶钌标记的X物质对应的抗体、待测血清和生物素化的X物质充分混合，使待测血清和吡啶钌标记的抗体竞争与生物素化的X物质结合；
B、加入链霉亲和素包被的磁性微粒，充分反应后，链霉亲和素包被的磁性微粒与生物素化的抗原-抗体复合物紧密结合；
C、将反应液吸入流动池，通过电磁作用，磁珠微粒吸附于电极表面，加入三羟甲基氨基甲烷，除去未吸附于电极表面的物质；
D、加入一定量的三丙胺溶液，加电压启动ECL反应，使吡啶钌标记复合体化学发光，并通过光电倍增器测定发光强度，发光强度的强弱与待测血清中抗体的含量成反比；
E、绘制或计算发光信号强弱对该抗体量的曲线，从而建立疾病发生前或整个疾病过程中受试者的抗体产生谱，动态监测以建立抗体产生谱；
F、应用SPSS17.0软件进行统计学分析，在不同性别、年龄组中甲状腺过氧化物酶抗体、甲状腺球蛋白抗体的阳性率以及自身抗体在各种甲状腺疾病中的阳性率，采用χ2检验进行组间比较，应用非条件Logi-stic回归，计算甲状腺抗体阳性人群中发生各种甲状腺功能异常的风险。
2.根据权利要求1所述的水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，其特征在于：所述待测样品为血清。
3.根据权利要求1所述的水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，其特征在于：所述待测物质为甲状腺自身抗体。
4.根据权利要求1所述的水源性高碘地区人群甲状腺自身抗体筛查分析方法，其特征在于：所述第一抗体为单克隆免疫球蛋白。
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