CN1063265C - 电泳转移一种大分子核酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及电泳转移一种大分子核酸的方法，其主要是首先制做支持胶，然后将硝基纤维素纸，电泳后切下的含DNA酶解谱带的琼脂条先后垂直贴在一块支持胶的断面上，再用另一块支持胶一将硝基纤维素纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源即可，使用该方法可防止杂质离子进入，同时它还适用于任何一种电极设备，时间短、转移完全，该方法制做简单、使用方便，安全可靠。
Description
本发明涉及采用电泳转移一种大分子核酸的方法
在进行核酸的各种杂交实验前，都要先做核酸的硝基纤维素纸转移，即把经琼脂糖凝胶电泳分离的DNA片段转移到硝基纤维素纸上，然后进行DNA-DNA，DNA-RNA杂交实验，根据国同内外现通常采用核酸转移方法为吸印法，电转移方法，吸印法对于大于15Kb的DNA分子，需要很长的转移时间(至少20小时以上)，而且转移常常不彻底，只是利用了吸水纸对水的吸力，而使DNA分子随水向上移动，由于吸水纸的作用力很有限，转移速度自然缓慢，电转移方法采用不锈钢电极专用设备，在不锈钢板上需人为打眼，其孔径及孔的均匀程度不能保证，很容易引进杂质离子，同时它必须是专用的电极设备。本发明经过大量的试验研究探索，研制出采用电泳转移一种大分子核酸的方法。
本发明的目的在于，研制电泳转移一种大分子核酸的方法，其主要是首先制做支持胶，然后将硝基纤维素纸，电泳后切下的含DNA酶解谱带的琼脂条先后垂直贴在一块支持胶的断面上，再用另一块支持胶将硝基纤维纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源即可，该方法是利用琼脂糖中自身的孔径转移，可防止杂质离子进入，同时它还适用于任何一种水平电泳设备，时间短，转移完全，该方法制做简单，使用方便，安全可靠。
本发明所述的电泳转移一种大分子核酸的方法，首先制做支持胶，然后将硝基纤维素纸、电泳后切下的含DNA酶解谱带的琼脂条先后垂直贴在一块支持胶的断面上，再用另一块支持胶将硝基纤维素纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源，电流50-100MA，电泳1-2小时。支持胶是用电泳缓冲液配制1-2％琼脂糖溶液，倒入玻璃盒内凝固，凝固后除去玻璃盒切成胶条即可。本发明所述的电泳转移方法还可推广用于聚丙烯酰胺凝胶中DNA片段的转移，聚丙烯酰胺凝胶电泳，但聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，一般难于进行通常的转移，而改用电泳转移，则可得到好的结果。
实施例1：
首先制做支持胶，用电泳缓冲液配制定1％琼脂糖溶液，倒入玻璃盒内凝固，凝固后除去玻璃盒内切成胶条即成支持胶，然后将硝基纤维素纸，电泳后切下的含DNA敏解谱带的琼脂条，先后垂直贴在一块支持胶的垂直断面上排尽气泡，再用另一块支持胶将硝基纤维素纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源、电流50MA，电泳1小时即可得到转移完全的硝基纤维素纸条，用于杂交实验。
实施例2：
首先制做支持胶，用电泳缓冲液配制2％琼脂糖溶液，倒入玻璃盒内凝固，凝固后除去玻璃盒切成胶条即成支持胶，然后将硝基纤维素纸、电泳后切下的含DNA酶解谱带的琼脂条，先后垂直贴在一块支持胶的垂直断面上排尽汽泡，再用另一块支持胶将硝基纤维素纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源，电流100MA，电泳2小时，即可得到转移完全的硝基纤维纸条，用于杂交实验。
Claims (2)
1、一种电泳转移一种大分子核酸的方法．其特征在于，首先制做支持胶。然后将硝基纤维素纸、电泳后切下的含DNA酶解谱带的琼脂条先后垂直贴在一块支持胶的断面上，再用另一块支持胶将硝基纤维素纸条和电泳胶条夹紧，给两块支持胶搭上纸桥，接通电源，电流50-100MA，电泳1-2小时。
2、根据权利要求1所述的电泳转移一种大分子核酸的方法，其特征在于支持胶是用电泳缓冲液配制1-2％琼脂糖溶液，倒入玻璃盒内凝固，凝固后除去玻璃盒切成胶条即可。
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| CN1186790A CN1186790A (zh) | 1998-07-08 |
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| CN (1) | CN1063265C (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1981002790A1 (en) * | 1980-03-18 | 1981-10-01 | Ciba Geigy Ag | New solid supports for proteins for analytical purposes |
| DD152423A1 (de) * | 1980-07-02 | 1981-11-25 | Hunger Hans Dieter | Elektrotransfer von nukleinsaeuren oder proteinen aus trenngelen auf aktivierte papiere |
| US4455370A (en) * | 1982-05-17 | 1984-06-19 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Transferring separated components in gel electrophoresis via nylon membrane |
| JPH01277750A (ja) * | 1988-04-30 | 1989-11-08 | Shimadzu Corp | 核酸バンド回収用具及びそれを使った回収方法 |
-
1996
- 1996-12-31 CN CN96118960A patent/CN1063265C/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
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Also Published As
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|---|---|
| CN1186790A (zh) | 1998-07-08 |
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