CN106038398A - 黄柏提取液的制备方法和由其组成的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途 - Google Patents

黄柏提取液的制备方法和由其组成的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种黄柏提取液的制备方法和由其组成的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途；本发明采用水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液，是一步法完成，工艺操作简单，经HPLC检测，黄柏提取液不含有盐酸小蘖碱等有色物质,且不含有机溶剂，无有害物质残留，刺激性小，无色透明，气味淡，符合绿色天然概念；将通过水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液，与马齿苋提取液、天女木兰提取液、烷二醇进行复配的黄柏提取液组合物，无色透明，气味比较淡，通过抑菌圈实验测试和防腐挑战实验测试并证实黄柏提取液组合物的抑菌效果好，将其应用到化妆品、食品、保健品中作为抑菌剂，添加量少，且可以对化妆品、食品、保健品起到抑制细菌、霉菌和酵母菌等真菌的抑菌作用。

Description

黄柏提取液的制备方法和由其组成的黄柏提取液组合物作为 抑菌剂的用途
技术领域
本发明涉及化妆品领域，特别涉及一种黄柏提取液的制备方法和由其组成的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途。
背景技术
随着生活水平提高，越来越多人开始关注化妆品、食品、保健品中防腐剂安全问题，传统的防腐剂多为化学合成的，如苯甲酸钠、福尔马林、尼泊金酯、硝酸盐等，其在化妆品、食品、保健品中存在一些致癌、皮肤刺激等风险。
近年来，随着人们对绿色天然植物来源的青睐，利用植物精华开发功能性护肤品的研究也越来越多。随着传统防腐剂的安全问题被人们所认识，植物性防腐剂备受消费者青睐，由于植物防腐剂随着季节变换，导致品质难以控制，并且植物防腐剂稳定性差，容易变色，导致植物防腐剂在护肤品中的应用少之又少。因此，研究开发一种新型高效安全天然的植物防腐剂，对于化妆品、食品、保健品等领域要重要意义。
黄柏（P . chinense Schneid.）植物来源芸香料科黄蘖属，又称“川黄柏”，被《中国药典》2010版所收载，广泛分布于四川、云南、贵州、湖北、广西、陕西等地。黄柏是我国传统中药，始载于《神农本草》，具有抗菌、抗真菌、抗炎、抗肝炎，抗氧化，抗痛风，降血压、降血糖、抗肿瘤等功效。黄柏药材中的化学成分主要包括生物碱类、黄酮类、内酯类、萜类以及挥发油类。其中，黄柏中小蘖碱、药根碱等生物碱表现的主要药理活性为抗菌抗炎活性。
关于黄柏的提取方法主要有煎煮法、酸水浸渍法、乙醇回流提取法、超声波提取法、超声波-酶法、微波萃取法等等，但是上述方法制备的提取物含有盐酸小蘖碱，提取物都为黄色，并且具有一定气味，大大限制了其在膏霜、乳液、喷雾等化妆品中的应用。
因此开发一种无色透明的黄柏提取液的制备方法，并将其制备得到的黄柏提取液用于制备无色透明，且同样具有抑菌效果的植物防腐剂具有重要意义。此外，到目前为止，关于将黄柏提取液与其它原料复配得到的复合植物防腐剂，使其在抗菌性方面存在协同作用，从而大大提高其抗菌的广谱性及效果的文献未见报道。
发明内容
本发明旨在给出一种黄柏提取液的制备方法，包括如下步骤：取黄柏内皮，在70-90℃下烘干，用粉碎机粉碎至30-50目，按照质量体积料液比1:5-1:10加入蒸馏水，在蒸馏釜中进行蒸馏，出来的水蒸气用冷凝器进行冷凝，收集下层冷凝液，即为黄柏提取液。
其中，所述蒸馏的工艺条件为：蒸汽温度为80℃-100℃，压力为0-0.2MPa ,时间1-3h。
本发明还公开了一种由上述黄柏提取液的制备方法制备得到的黄柏提取液。
本发明还公开了一种包含上述黄柏提取物的黄柏提取液组合物，按重量份计，包括如下组分：
黄柏提取液 10-20份；
马齿苋提取液 30-50 份；
天女木兰提取液 10-20份；
烷二醇 10-20份。
本发明所述的黄柏提取液组合物的制备方法：按照配比将黄柏提取液、马齿苋提取液、天女木兰提取液和烷二醇在常温下混合均匀即得。
其中，所述马齿苋提取液的制备方法，包括如下步骤：取新鲜马齿苋，用打浆机磨成浆液，按照质量体积料液比1:3-1:8加入乙醇，使得乙醇的质量分数为50-80%，提取2h，过滤马齿苋残渣，用活性炭和活性白土进行脱色脱味，得到提取液，即为马齿苋提取液。同时，马齿苋提取液的制备方法也可以参考中国专利CN201610100815.6中公开的马齿苋提取液的制备方法制备得到。马齿苋（Portulaca Oleracea）系马齿苋科一年生草本植物，是我国78种药食同源的植物之一，在我国民间已经有几千年的应用历史。马齿苋富含w-3不饱和脂肪酸，人体所需要的18中氨基酸，多种微量元素、维生素以及多糖和黄酮。马齿苋性味酸寒，归肝大肠经，具有清热解毒、凉血止血之功效。临床用于热毒血痢、湿疹、丹毒、蛇虫咬伤，便血以及预防细菌性痢疾等病症。
其中，所述天女木兰提取液可以参考中国专利CN201610100818.X中公开的天女木兰提取液的制备方法（水蒸气蒸馏、水提法或醇提法）制备得到。天女木兰（Magnoliasiebodii K.Koch）为木兰科木兰属落叶小乔木，为第四纪冰川时幸存的孑遗植物，勘称植物王国中的“准皇后”与“活化石”。天女木兰的材质光滑、细腻、防腐，制作高端器具的上等材料。花、果、叶、根均含有芳香油，可以提取高级香料，同时具有很高的药用价值。天女木兰提取物含有大量的有机酸，经过液质鉴定为：去甲基二氢愈创木酸、扁桃酸、香草酸、糠酸等，具有很强的抑霉菌和细菌能力。
其中，所述烷二醇选自1,2-己二醇、1,2-丙二醇、1,2-丁二醇、1,2-戊二醇中的一种或几种混合，所述烷二醇具有一定的保湿、抑菌效果。它能和黄柏提取液、马齿苋提取液以及天女木兰提取液之间产生协同作用，增加这些提取液的抑菌能力。
本发明还公开了上述黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途。
优选地，本发明所述黄柏提取液组合物作为在化妆品、食品、保健品中的抑菌剂的用途。
其中，所述抑菌剂的抑菌种类为抑制细菌和/或真菌；所述抑制细菌为抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌或铜绿假单胞菌；所述抑制真菌为抑制霉菌或抑制酵母菌。
其中，本发明所述的黄柏提取液组合物的加入量占化妆品总重量的0.3-1.5wt%；优选为0.5-1wt%。
当黄柏提取液组合物的加入量占化妆品总重量超过1.5wt%，会造成生产过高和浪费，同时会产生一些轻微草药气味，另外也会对某些配方体系造成一定的风险，如料体变色或者沉淀，或者引起皮肤刺激性等等。
其中，所述黄柏提取液组合物的加入量占食品总重量的0.5-2wt%；优选为0.8-1.5wt%。
当黄柏提取液组合物的加入量占食品总重量超过2wt%，会造成生产过高和浪费，还可能造成食品中营养成分活性下降，在安全方面也存在一定的风险。
其中，所述黄柏提取液组合物的加入量占保健品总重量的0.3-1.5wt%；优选为0.5-1wt%。
当黄柏提取液组合物的加入量占保健品总重量超过1.5wt%，会造成生产过高和浪费，还可能造成保健中活性成分活性下降，同时在安全方面也存在一定的风险。
本发明意外的发现，将通过水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液，与马齿苋提取液、天女木兰提取液、烷二醇进行复配得到的黄柏提取液组合物作为抑菌剂添加到化妆品、食品、保健品中，黄柏提取液组合物可以显著起到抑制霉菌和酵母菌等真菌的抑菌作用，大大拓宽了黄柏提取液组合物在市场中的应用范围。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1）本发明采用水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液，是一步法完成，工艺操作简单，经过HPLC检测，提取液不含有盐酸小蘖碱等有色物质。
2）本发明采用水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液，制备得到的黄柏提取液不含有机溶剂，无有害物质残留，刺激性小，且所得到的提取液为无色透明，气味淡，符合绿色天然概念。
3）将通过水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液，与马齿苋提取液、天女木兰提取液、烷二醇进行复配得到的黄柏提取液组合物，无色透明，气味比较淡，稳定性好，通过抑菌圈实验测试和防腐挑战实验测试黄柏提取液组合物的抑菌效果，证实黄柏提取液组合物可以显著起到抑制细菌、霉菌和酵母菌等真菌的抑菌作用，大大拓宽了黄柏提取液组合物在市场中的应用范围。
4）将通过水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液，与马齿苋提取液、天女木兰提取液、烷二醇进行复配得到的黄柏提取液组合物应用到化妆品、食品、保健品中作为抑菌剂，添加量少，且可以对化妆品、食品、保健品起到抑制细菌、霉菌和酵母菌等真菌的抑菌作用。
附图说明
图1为本发明所述的黄柏提取物冻干粉的HPLC图谱；
图2为本发明所述的黄柏提取液的HPLC图谱。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。
实施例1：水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液和黄柏提取物冻干粉
取1kg黄柏内皮，在80℃下烘干，用粉碎机粉碎至40目，按照质量体积料液比1:8加入蒸馏水，在蒸馏釜中进行蒸馏2h，出来的水蒸气用冷凝器进行冷凝，收集下层冷凝液650ml，即为本发明所制备的黄柏提取液。同时将蒸馏釜底部黄色提取浓液进行过滤，除掉黄柏滤渣，加入95%乙醇，使得体系中乙醇含量为60%，静置15min，然后利用离心机12000rmp/min，离心5min,取上层清液；然后利用旋转蒸发器进行脱醇、浓缩。将浓缩液放在-80℃冰箱预冷冻，然后在冻干机上进行冻干，制备得到黄柏提取物冻干粉。
检测实施例制备得到的水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液和黄柏提取物冻干粉的盐酸小蘖碱
HPLC检测方法: 按照2010版《中国药典》中测定黄柏中小蘖碱的条件，本实验进行改动：采用RP-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）；流动相为A相：乙腈，B相：0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基苯磺酸钠0.2g），流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：284nm，进样量10μl，检测样品中盐酸小蘖碱含量，检测结果如图1和图2所示：图1显示黄柏提取物冻干粉中检测出有盐酸小蘖碱存在；而图2显示黄柏提取液中未检测出有盐酸小蘖碱存在，这说明由水蒸气蒸馏法制备黄柏提取液，与传统方法得到的黄柏提取物有很大的不同，该水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液中不含有盐酸小蘖碱，并且该水蒸气蒸馏法制备得到的黄柏提取液无色透明，气味淡。
实施例2：黄柏提取液组合物配方及其制备方法：
一种黄柏提取液组合物，按重量份计，包括15份黄柏提取液；50 份马齿苋提取液；15份天女木兰提取液；20份烷二醇。其制备方法为：按照配比将黄柏提取液、马齿苋提取液、天女木兰提取液和烷二醇在常温下混合均匀即得。
黄柏提取液组合物的抑菌效果的测试
1.1抑菌圈实验测试
1.1.1抑菌片的制备
按照要求将实施例2制备得到的黄柏提取液组合物配置成试验所需浓度。取干燥备用的滤纸片，置37℃温箱或室温干燥备用。（溶出性抗抑菌产品，可直接制成直径为8mm，厚度不超过4mm圆片）。
1.1.2 阴性对照样片的制备
取干燥备用的滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水或抑菌剂溶剂20ul，干燥备用。
1.1.3 试验菌的接种
取0.5ml浓度为5×105cfu/ml～5×106cfu/ml试验菌悬液与无菌培养皿，倒入营养琼脂培养基于平板并摇匀；盖好平板，置室温干燥5min。
1.1.4 抑菌剂样片贴放
用无菌镊子取样片贴放于平板表面，立即滴加20ul抑菌剂。每次试验贴放3个染菌平板，其中2个平板每个贴放1片试验样片，另外一个平板贴放1片阴性对照样片，贴放好后，盖好平皿，置37℃培养箱培养16～18h观察结果；用卡尺测量抑菌环的直径（包括贴片）并记录。（测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行；测量其直径应以抑菌环外沿为界）实验结果表1所示：
表1 黄柏提取液组合物的抑菌圈测试结果
结论：对于黄柏提取液组合物作为抑菌剂的抑菌圈测试结果可知，其抑细菌的菌环直径为12mm，与空白对照可知，黄柏提取液组合物具有很强的抑制细菌效果，对霉菌或酵母菌的抑菌环直径为11mm，表明对霉菌或酵母菌具有一定的抑制效果。
防腐挑战实验测试
参照美国药典USP30(51)对实施例2制备得到的黄柏提取液组合物做了一个防腐挑战实验，测试结果如表2所示：
表2 黄柏提取液组合物的防腐挑战测试结果
结论：黄柏提取液组合物经过28天防腐挑战测试结果可知，细菌在7天就已经被完全杀死，霉菌或酵母菌经过21天防腐挑战测试也已经被完全杀死，表明黄柏提取液组合物具有很强的抑细菌和霉菌效果。
应用实施例1：黄柏提取液组合物应用于喷雾剂型化妆品
按以下组分及含量配料并制备喷雾剂型化妆品：
主要组分 配比（%为质量百分数）
A1 水 82.00%~91.00%；
A2 冰川水 1.00%~5.00%；
A3 丁二醇 1.00%~3.00%；
A4 β-葡聚糖 0.05%~0.30%；
A5 香橙果提取物 0.05%~0.30%；
B1 水解植物蛋白 0.001%~0.003%；
B2 卤虫提取物 0.001%~0.003%；
C1甘草酸二钾 0.001%~0.003%；
SP1 黄柏提取液组合物 1%。
对照组（采用与黄柏提取液组合物中对应1% 己二醇溶液作为对照），注：1% 己二醇溶液：将己二醇用水稀释，配成己二醇溶液，其中己二醇含量为20%；
A1 水 82.00%~91.00%；
A2 冰川水 1.00%~5.00%；
A3 丁二醇 1.00%~3.00%；
A4 β-葡聚糖 0.05%~0.30%；
A5 香橙果提取物 0.05%~0.30%；
B1 水解植物蛋白 0.001%~0.003%；
B2 卤虫提取物 0.001%~0.003%；
C1甘草酸二钾 0.001%~0.003%
SP 己二醇溶液 1%；
将上述喷雾剂型化妆品进行28天防腐挑战实验，测试结果如表3所示：
表3 喷雾型化妆品的防腐挑战测试结果
经过28天防腐挑战实验，上述喷雾剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌对数减少值为5.26和4.76，总菌落总数<10 cfu/g，说明黄柏提取液组合物能够有效地抑制喷雾剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌生长。
而对照组已经长出大量细菌和霉菌，同时出现絮状沉淀。表明单纯加对应量的己二醇，不能抑制细菌生长。采用黄柏提取液组合物能够很好抑制细菌，表明己二醇和黄柏提取液组合物之间有一定量的协同增效作用，能够大大提高植物防腐剂的防腐效能。
应用实施例2：黄柏提取液组合物应用于精华乳剂型化妆品
按以下组分及含量配料并制备精华乳剂型化妆品：
主要组分 配比（%为质量百分数）
A1 水 30.00%~35.00%；
A2 冰川水 1.00%~5.00%；
A3 丁二醇 1.00%~3.00%；
A4甘草酸二钾 0.001%~0.003%；
A5 1,3-丙二醇 5.00%~8.00%；
A6 甘油 2.00%~4.00%；
A7月桂酰胺谷氨酰胺 0.40%~0.60%；
B1 聚二甲基硅氧烷 2.00%~4.00%；
B2 鲸蜡醇乙基己酸酯 1.00%~4.00%；
B3 角鲨烷 1.00%~1.50%；
B4 山嵛醇 1.00%~1.50%；
B5 澳洲坚果 1.00%~2.00%；
B6 鲸蜡硬脂醇 2.00%~3.00%；
C1 卡波姆 6.500%~8.500%；
C2蔗糖硬脂酸酯 0.60%~0.80%；
D1 银耳提取物 0.0004%~0.0006%；
D2 β-葡聚糖 20%~25%；
D3菜蓟叶提取物 0.01%~0.03
ST1 白藜芦醇 0.0001%~0.0002%；
SP1 黄柏提取液组合物 1%。
将上述精华乳型化妆品进行28天防腐挑战实验，测试结果如表4所示：
表4 精华型化妆品的防腐挑战测试结果
经过28天防腐挑战实验，上述面霜剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌对数减少值分别为4.64、5.26，总菌落总数<10 cfu/g，说明黄柏提取液组合物能够有效地抑制精化剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌的生长。
应用实施例3：复合防腐应用于面膜液剂型化妆品
按以下组分及含量配料并制备面膜液剂型化妆品：
主要组分 配比（%为质量百分数）
A1 水 79.00%~82.00%；
A2 羟乙基纤维素 0.200%~0.300%；
A3月桂酰胺谷氨酰胺 0.08%~0.12%；
B1卡波姆 6.00%~8.00%；
B2 1,3-丙二醇 4.00%~6.00%；
B3甘油 2.00%~4.00%；
B4 海藻糖 0.01%~0.03%；
C1蔗糖硬脂酸酯 0.50%~1.50%；
C2聚丙烯酸 2.00%~3.00%；
D1欧洲山杨树皮提取物 0.05%~0.15%；
E1茵陈蒿花提取物 0.05%~0.15%；
E2丁香花提取物 0.05%~0.15%；
F1 β-葡聚糖 1.50%~2.50%；
SP1 黄柏提取液组合物 1%。
将上述乳液剂型化妆品进行28天防腐挑战实验，测试结果如表5所示：
表5 面膜液型化妆品的防腐挑战测试结果
经过28天防腐挑战实验，上述面膜液剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌对数减少值分别为4.76、5.26，总菌落总数<10 cfu/g，说明黄柏提取液组合物能够有效地抑制面膜液剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌的生长。
应用实施例4：黄柏提取液组合物应用于面霜剂型化妆品
按以下组分及含量配料并制备面霜剂型化妆品：
主要组分 配比（%为质量百分数）
A1 水 58.00%~62.00%；
A2 羟乙基纤维素 0.400%~0.600%；
A3 氢化卵磷脂 0.100%~0.120%；
A4 甘油 2.00%~4.00%
B1角鲨烷 1.00%~2.00%；
B2 聚二甲基硅氧烷 1.00%~3.00%；
B3维生素E 0.10%~0.20%；
C1 甘油丙烯酸酯 0.40%~0.60%；
C2 β-葡聚糖 9.00%~11.00%；
C3聚甲基丙烯酸甲酯 2.00%~3.00%；
D1黄蘖树皮提取物 0.20%~0.40%；
E1香橙果提取物 0.05%~0.15%；
E2丁香花提取物 0.05%~0.15%；
F1水解蜂王浆 0.05%~0.15%；
SP1 黄柏提取液组合物 1%。
将上述面霜剂型化妆品进行28天防腐挑战实验，测试结果如表6所示：
表6 面霜型化妆品的防腐挑战测试结果
经过28天防腐挑战实验，上述面霜剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌对数减少值分别为4.76、5.26，总菌落总数<10 cfu/g，说明黄柏提取液组合物能够有效地抑制面膜液剂型化妆品里面的霉菌和酵母菌及细菌的生长。

Claims (10)

1.一种黄柏提取液的制备方法,其特征在于, 包括如下步骤：取黄柏内皮，在70-90℃下烘干，用粉碎机粉碎至30-50目，按照质量体积料液比1:5-1:10加入蒸馏水，在蒸馏釜中进行蒸馏，出来的水蒸气用冷凝器进行冷凝，收集下层冷凝液，即为黄柏提取液。
2.根据权利要求1所述的黄柏提取液的制备方法，其特征在于，所述蒸馏的工艺条件为：蒸汽温度为80℃-100℃，压力为0-0.2MPa ,时间1-3h。
3.一种如权利要求1或2所述的黄柏提取液的制备方法制备得到的黄柏提取液。
4.一种包含权利要求3所述的黄柏提取物的黄柏提取液组合物，其特征在于，按重量份计，包括如下组分：
黄柏提取液 10-20份；
马齿苋提取液 30-50 份；
天女木兰提取液 10-20份；
烷二醇 10-20份。
5.如权利要求4所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途。
6.根据权利要求5所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途，其特征在于，所述黄柏提取液组合物作为在化妆品、食品、保健品中的抑菌剂的用途。
7.根据权利要求5所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途，其特征在于，所述抑菌剂的抑菌种类为抑制细菌和/或真菌；所述抑制细菌为抑制金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌或铜绿假单胞菌；所述抑制真菌为抑制霉菌或抑制酵母菌。
8.根据权利要求6所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途，其特征在于，所述黄柏提取液组合物的加入量占化妆品总重量的0.3-1.5wt%；优选为0.5-1wt%。
9.根据权利要求6所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途，其特征在于，所述黄柏提取液组合物的加入量占食品总重量的0.5-2wt%；优选为0.8-1.5wt%。
10.根据权利要求6所述的黄柏提取液组合物作为抑菌剂的用途，其特征在于，所述黄柏提取液组合物的加入量占保健品总重量的0.3-1.5wt%；优选为0.5-1wt%。
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