CN106011125A - 一种过氧化物纳米酶及其制备方法 - Google Patents
一种过氧化物纳米酶及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106011125A CN106011125A CN201610403772.9A CN201610403772A CN106011125A CN 106011125 A CN106011125 A CN 106011125A CN 201610403772 A CN201610403772 A CN 201610403772A CN 106011125 A CN106011125 A CN 106011125A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- nanoenzyme
- pentapeptide
- enzyme
- peroxide
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y111/00—Oxidoreductases acting on a peroxide as acceptor (1.11)
- C12Y111/01—Peroxidases (1.11.1)
- C12Y111/01009—Glutathione peroxidase (1.11.1.9)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
一种过氧化物纳米酶及其制备方法,属于纳米生物技术领域。是以金纳米粒子为载体,利用生物活性五肽(URGDC)进行自组装,五肽分子中巯基与金纳米粒子配位共价偶联,得到具有高GPx活性的过氧化物纳米酶。此方法简便易于操作,并且具有良好的稳定性。生物活性五肽的氨基酸序列为Sec‑Arg‑Gly‑Asp‑Cys(简称URGDC)。其中Sec(U)中含有酶的活性中心;Arg‑Gly‑Asp(RGD)能促进纳米酶与底物的结合,Cys(C)侧链中的巯基可以和金纳米粒子共价连接。金纳米粒子的应用是作为一种载体固定生物活性五肽,促进纳米酶与底物的充分接触,提高谷胱甘肽过氧化物酶的活力。
Description
技术领域
本发明属于纳米生物技术领域,具体涉及纳米技术与人工模拟酶领域的交叉与结合,通过纳米技术模拟谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的性质,制备一种高GPx活性的过氧化物纳米酶。
背景技术
谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)具有独特的氧化还原特性,是生物体内抗氧化酶的重要成员之一。GPx以谷胱甘肽(GSH)为还原剂,分解体内的各类氢过氧化物。它的主要生理机能是保护血红细胞和线粒体不被活性氧损伤,阻止体内脂类过氧化反应发生,在生物体抗氧化方面发挥着极其重要的作用。
GPx能清除体内活性氧,防止脂质过氧化,因而具有治疗由活性氧失衡而引起的各种疾病,如白内障、心脑血管病症、各类炎症、克山病等疾病的潜力,具有十分重要的药用开发前景。由于天然GPx的来源有限、稳定性差等原因,致使它的药用开发过程非常缓慢。因此,对GPx进行人工模拟,开发治疗相关疾病的药物越来越受到关注。Ebselen、环糊精等小分子,以及半合成酶、抗体酶、生物印记酶等大分子模拟物已有研究,用来模拟谷胱甘肽过氧化物酶,对设计和开发新的生物催化活性体系具有十分重要的意义,在医药、酶学方面具有广阔的应用前景。
纳米材料具有特殊的表面、界面效应,并且其尺寸与生物大分子的大小相当。不仅如此,金纳米粒子还表现出良好的提高生物催化过程中电子的反转速度特性,为利用纳米材料在生物催化体系中的应用提供了重要的基础。同时,金纳米粒子所产生的表面等离子体共振信号会随着金纳米粒子之间的距离发生改变而被用于生物传感器件的开发。这些特征,为以金纳米粒子为基础构建纳米酶在生物传感器领域中的应用提供了保障。
分子自组装过程作为一种纳米技术手段是构建纳米酶的一种有效方法,其过程简便、易于操作。
发明内容
本发明所述一种过氧化物纳米酶的构建过程是以金纳米粒子为载体,利用生物活性五肽(URGDC)进行自组装,五肽分子中巯基与金纳米粒子配位共价偶联,得到具有高GPx活性的过氧化物纳米酶。此方法简便易于操作,并且具有良好的稳定性。
具体步骤如下:
(1)利用柠檬酸钠还原四氯金酸得到柠檬酸钠包覆的金纳米粒子溶胶(参考文献J.Phys.Chem.C,2007,111,9172-9176),然后将该金纳米粒子溶液于8000~12000rpm离心20~30min,沉淀再以高纯水溶解并稀释得到金纳米粒子溶液,其最大等离子体共振吸收峰(λmax≈520nm)处的吸光度值在0.8~1.0,制备得到金溶胶储备液,储备液的浓度为1.26~1.57nM。
(2)取1mL步骤(1)制备得到的金溶胶储备液,用10mM磷酸缓冲液PBS调节其pH=8.0~9.0,然后向其中加入6~30μL、10-3M的生物活性五肽URGDC(购买于吉尔生化(上海)有限公司,纯度>98%),摇匀后,4℃静置20~30小时,即得到具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的过氧化物纳米酶。
生物活性五肽的氨基酸序列为Sec-Arg-Gly-Asp-Cys(简称URGDC)。其中Sec(U)中含有酶的活性中心;Arg-Gly-Asp(RGD)能促进纳米酶与底物的结合,Cys(C)侧链中的巯基可以和金纳米粒子共价连接。
金纳米粒子的应用是作为一种载体固定生物活性五肽,促进纳米酶与底物的充分接触,提高谷胱甘肽过氧化物酶的活力。
本发明具有以下特点:
(1)利用生物活性五肽(URGDC)修饰金属纳米材料表面进行新型过氧化物人工模拟酶的研究是本发明的特色之处。生物活性肽本身具有较低的GPx活性,而通过金纳米粒子的固定,纳米酶较生物活性五肽的活力明显提高,说明本发明中构建纳米酶的方法可行。
(2)纳米酶的GPx活性是世界知名的小分子GPx模拟物Ebselen活性的5.1倍。
(3)纳米酶构建过程简便、易于操作。纳米酶具有良好的水溶性,且所制备的纳米酶可以稳定保存。
本发明通过分子自组装等纳米技术手段利用金纳米粒子成功的构建了具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的纳米酶。所构建的纳米酶性质稳定,并且该纳米酶的活性较生物活性五肽的活力显著提高,具有良好的应用前景。
具体实施方式
实施例1:金纳米粒子的合成
利用柠檬酸钠还原四氯金酸得到柠檬酸钠包覆的金纳米粒子(参考文献J.Phys.Chem.C 2007,111,9172-9176)。具体步骤如下,在100mL双口圆底烧瓶(中间的接口用于连接回流冷凝管,侧面的接口用于反应过程中添加试剂)中,加入48.5mL高纯水和1.3mL四氯金酸溶液(0.01M),在磁力搅拌下(转速800rpm)加热至沸腾、回流。通过侧面的接口,迅速加入0.2mL柠檬酸钠溶液(0.2M),继续加热10min,停止加热并持续搅拌至自然冷却,其最大等离子体共振吸收峰在520nm。然后将该金纳米粒子溶液于8,000rpm离心30min,沉淀再以高纯水溶解并稀释至金纳米粒子溶液在520nm处的吸光度值为0.9,制得金纳米粒子储备液,储备液的浓度为1.41nM。
实施例2:纳米酶的制备
取2mL金纳米粒子储备液,加入510μL磷酸缓冲液(10mM,pH 8),摇匀后快速加入40μL URGDC溶液(0.15mM)(购买于吉尔生化(上海)有限公司,纯度>98%),立即摇匀,4℃静置24小时,即得到具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的过氧化物纳米酶,在4℃保存。
实施例3:纳米酶的GPx活性
根据Wilson方法(J.Am.Chem.Soc.1989,111,5936-5939)测量生物活性五肽和纳米酶的GPx活力(反应方程式下式所示),酶活力定义为37℃下,每分钟氧化1μmoL NADPH所需酶的量为一个活力单位(U),酶的比活力定义为1μmoL的酶所具有的酶的活力单位数,表示为U/μmoL。反应在37℃、pH 7.0条件下,测得纳米酶的GPx活力为5.05U/μmoL和生物活性五肽URGDC的GPx活力为0.36U/μmoL。经典商业化模拟物Ebselen的GPx活力为0.99U/μmoL(参考文献Adv.Pharmacol.1997,38,2229-2246)。因此,所制备的纳米酶的活力高于生物活性五肽和Ebselen酶模拟物的酶活力,具有高GPx酶活性。
实施例4:纳米酶的稳定性
纳米酶具有很好的稳定性,该酶在pH 7.0、5mM磷酸缓冲溶液中三个月活力保持90%以上。
Claims (2)
1.一种过氧化物纳米酶的制备方法,其步骤如下:
(1)利用柠檬酸钠还原四氯金酸得到柠檬酸钠包覆的金纳米粒子溶胶,然后将该金纳米粒子溶液于8000~12000rpm离心20~30min,沉淀再以高纯水溶解并稀释得到金纳米粒子溶液,其最大等离子体共振吸收峰λmax≈520nm处的吸光度值在0.8~1.0,制备得到金溶胶储备液,储备液的浓度为1.26~1.57nM;
(2)取1mL步骤(1)制备得到的金溶胶储备液,用10mM磷酸缓冲液PBS调节其pH=8.0~9.0,然后向其中加入6~30μL、10-3M的生物活性五肽URGDC,摇匀后,4℃静置20~30小时,即得到具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的过氧化物纳米酶。
2.一种过氧化物纳米酶,其特征在于:是由权利要求1所述的方法制备得到。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610403772.9A CN106011125B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种过氧化物纳米酶及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610403772.9A CN106011125B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种过氧化物纳米酶及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106011125A true CN106011125A (zh) | 2016-10-12 |
CN106011125B CN106011125B (zh) | 2022-02-15 |
Family
ID=57090033
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610403772.9A Active CN106011125B (zh) | 2016-06-08 | 2016-06-08 | 一种过氧化物纳米酶及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106011125B (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109517524A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-26 | 吉林大学 | 一种古代骨骼资源保护剂 |
CN113522283A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-22 | 吉林大学 | 一种多孔硅负载铜纳米粒子及其制备方法和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102961756A (zh) * | 2012-10-16 | 2013-03-13 | 常州大学 | 一种多肽—纳米金粒子药物载体合成方法 |
CN103014117A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-04-03 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种纳米金-多肽生物探针及制备和应用方法 |
CN103864971A (zh) * | 2013-10-12 | 2014-06-18 | 牡丹江师范学院 | 一种新型核壳结构高聚物刷的合成方法 |
WO2015023715A1 (en) * | 2013-08-14 | 2015-02-19 | The University Of Florida Research Foundation, Inc. | Nanozymes, methods of making nanozymes, and methods of using nanozymes |
-
2016
- 2016-06-08 CN CN201610403772.9A patent/CN106011125B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102961756A (zh) * | 2012-10-16 | 2013-03-13 | 常州大学 | 一种多肽—纳米金粒子药物载体合成方法 |
CN103014117A (zh) * | 2012-12-13 | 2013-04-03 | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 | 一种纳米金-多肽生物探针及制备和应用方法 |
WO2015023715A1 (en) * | 2013-08-14 | 2015-02-19 | The University Of Florida Research Foundation, Inc. | Nanozymes, methods of making nanozymes, and methods of using nanozymes |
CN103864971A (zh) * | 2013-10-12 | 2014-06-18 | 牡丹江师范学院 | 一种新型核壳结构高聚物刷的合成方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
ABRAHAM, S ET AL.: "Synthesis of stable "gold nanoparticle-polymeric micelle" conjugates: A new class of star "molecular chimera" that self-assemble into linear arrays of spherical micelles", 《OURNAL OF POLYMER SCIENCE PART A-POLYMER CHEMISTRY》 * |
BALASUBRAMANIAN, SURESH K ET AL.: "Characterization, purification, and stability of gold nanoparticles", 《BIOMATERIALS》 * |
李娜 等: "纳米贵金属粒子的性质、制备与应用", 《材料导报》 * |
郭轶 等: "肽修饰金纳米粒子用于纳米酶研究", 《第九届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109517524A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-03-26 | 吉林大学 | 一种古代骨骼资源保护剂 |
CN113522283A (zh) * | 2021-07-13 | 2021-10-22 | 吉林大学 | 一种多孔硅负载铜纳米粒子及其制备方法和应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106011125B (zh) | 2022-02-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Lu et al. | Nanomedicines: redefining traditional medicine | |
Lee et al. | Hyaluronic acid-based theranostic nanomedicines for targeted cancer therapy | |
Zhao et al. | Glucose oxidase-based glucose-sensitive drug delivery for diabetes treatment | |
Hu et al. | Micro/nanorobot: A promising targeted drug delivery system | |
Zhang et al. | Application of plant viruses as a biotemplate for nanomaterial fabrication | |
Gisbert-Garzarán et al. | Influence of the surface functionalization on the fate and performance of mesoporous silica nanoparticles | |
Chow et al. | Nanodiamond therapeutic delivery agents mediate enhanced chemoresistant tumor treatment | |
Tarafdar et al. | Nanotechnology: Interdisciplinary science of applications | |
Razzaque et al. | Design and utility of metal/metal oxide nanoparticles mediated by thioether end-functionalized polymeric ligands | |
Jiang et al. | Recent advance in biological responsive nanomaterials for biosensing and molecular imaging application | |
Magro et al. | Nanotechnology-based strategies to develop new anticancer therapies | |
TWI611812B (zh) | 氧化矽型生物分子載體、包含其之醫藥組成物、其製備方法及用途 | |
Hassan et al. | Biophysicochemical perspective of nanoparticle compatibility: a critically ignored parameter in nanomedicine | |
Kalubowilage et al. | Magnetic nanomaterials for magnetically-aided drug delivery and hyperthermia | |
Grimes et al. | Bi-functionalized clay nanotubes for anti-cancer therapy | |
CN106011125A (zh) | 一种过氧化物纳米酶及其制备方法 | |
CN111671901B (zh) | 一种具有靶向识别的核酸适配体修饰二硫化钼纳米片光热剂 | |
Wang et al. | Nano-drug delivery systems based on different targeting mechanisms in the targeted therapy of colorectal cancer | |
CN106821985A (zh) | 一种适配体修饰的携氧载药多功能脂质体复合物 | |
Chinnathambi et al. | Recent development to explore the use of biodegradable periodic mesoporous organosilica (BPMO) nanomaterials for cancer therapy | |
Zhu et al. | In vivo nano-biosensing element of red blood cell-mediated delivery | |
Wang et al. | Thermodynamic implications and time evolution of the interactions of near-infrared PbS quantum dots with human serum albumin | |
Shipunova et al. | Targeting Cancer Cell Tight Junctions Enhances PLGA-Based Photothermal Sensitizers’ Performance In Vitro and In Vivo | |
Li et al. | Chiral effect at nano-bio interface: a model of chiral gold nanoparticle on amylin fibrillation | |
Evangelopoulos et al. | Trends towards biomimicry in theranostics |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |