CN105806977B - 一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，采用顶空固相微萃取技术(headspace solid phase microextraction，HS‑SPEM)提取丹蒌片中的挥发性成分，利用气相色谱质谱技术(GC‑MS)结合保留指数(Kovats retention index,KI)对其主要成分进行分离分析鉴定，具有良好的重现性和可靠性，为丹蒌片药效物质基础的深入研究及质量标准的提高提供了重要的科学依据。

Description

一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法
技术领域
本发明涉及一种药物检测方法，尤其是一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法。
背景技术
丹蒌片是临床治疗冠心病、心绞痛的常用复方制剂，由川芎、丹参、赤芍、泽泻、郁金等10味中药组成，具有宽胸通阳，化痰散结，活血化瘀等功效。丹蒌片主要用于治疗痰瘀互结所致的胸痹心痛，症见胸闷胸痛、憋气、舌质紫暗、苔白腻、冠心病心绞痛见上述证候者。丹蒌片复方制剂众多药味中川芎、郁金等均含有挥发性成分。已有相关文献报道丹蒌片中郁金、川芎、泽泻三味单药的挥发性成分，各单味药中的挥发油成分主要包括酚酸、酮类、萜类和酯类等，对心、脑血管疾病具有一定的预防和治疗作用，但对丹蒌片中的挥发性成分尚未研究报道，因此对丹蒌片中挥发性成分的研究值得重视。
保留指数是被国际公认的气相色谱定性指标的一种参数，可以有效地区分结构上细微差别的同分异构体，将质谱检索和保留指数相结合分析可显著提高鉴定的准确性。有望对丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定提供新的技术思路。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，具体步骤如下：
(1)HS-SPEM法提取挥发油，立即插入气相色谱仪进样口，进样口温度250℃，解吸6min，进样模式为不分流进样；其中，
色谱条件：色谱柱：HP-5MS(60m×320μm×0.25μm)；载气He，流量1ml/min；汽化温度：250℃；接口温度：280℃；色谱柱初始温度60℃、保持1min，以4℃/min升温速率升至150℃、保持5min，以4℃/min升温速率升至240℃、保持3min；溶剂延迟：0min；
质谱条件：电离方式：EI源，能量70eV；离子源温度:230℃；四极杆温度:150℃；质量范围：(35-800)amu；电子倍增器电压:1400V；谱图检索：采用NIST08.L谱库进行检索；
(2)KI值测定：取正构烷烃混合对照品，按上述条件分析，记录各正构烷烃保留时间，程序升温(变温)公式：
IT＝100Z+100[TR(x)-TR(z)]/[TR(z+1)-TR(z)]；
式中：TR(x)，TR(z)，TR(z+1)分别代表组分及碳数为Z，Z+1正构烷的保留时间，且TR(z)<TR(x)<TR(z+1)。
优选的，上述丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，所述步骤(1)中HS-SPEM法提取挥发油的具体方法为：丹蒌片粉碎与饱和氯化钠及水混合搅拌，聚二甲基硅氧烷涂层固相萃取头(PDMS)萃取后取出。
本发明的有益效果是：
上述丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，采用顶空固相微萃取技术(headspace solid phase microextraction，HS-SPEM)提取丹蒌片中的挥发性成分，利用气相色谱质谱技术(GC-MS)结合保留指数(Kovats retention index,KI)对其主要成分进行分离分析鉴定，具有良好的重现性和可靠性，为丹蒌片药效物质基础的深入研究及质量标准的提高提供了重要的科学依据。
附图说明
图1是丹蒌片在GC-MS中的TIC图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
实施例1
1.材料和方法
1.1材料、试剂与仪器
丹蒌片(吉林康乃尔药业有限公司，批号：20140602)；氯化钠(分析纯，)；超纯水；Agilent GC 7890/MS 5975气相色谱-质谱联用仪(美国Agilent科技公司)；色谱数据处理系统(MSD ChemStation E.02.01，美国Agilent科技公司)；NIST08.L谱库；HJ-3磁力搅拌加热器(金坛市医疗仪器厂)；100μm聚二甲基硅氧烷涂层固相萃取头(PDMS,Supelco,Bellefonte,Pa)；HP-5MS毛细管柱。
正构烷烃对照品溶液C8-C20购自美国FLUKA公司。
1.2方法
1.2.1 HS-SPEM法提取挥发油:取5片丹蒌片粉碎，将粉碎过的样品0.6584g、饱和氯化钠3.6g及12mL水放入150mL顶空瓶，加入搅拌子，加盖密封垫(含透明蓝色硅胶/PTFE垫)和铝帽，65℃磁力搅拌，插入100μm聚二甲基硅氧烷涂层固相萃取头(PDMS，Supelco,Bellefonte,Pa)。使萃取头伸出1cm，萃取40min，取出，立即插入气相色谱仪进样口，进样口温度250℃，解吸6min，进样模式为不分流进样。
1.2.2色谱条件：色谱柱：HP-5MS(60m×320μm×0.25μm)；载气He，流量1ml/min；汽化温度：250℃；接口温度：280℃；色谱柱初始温度60℃(保持1min)，以4℃/min升温速率升至150℃(保持5min)，以4℃/min升温速率升至240℃(保持3min)；溶剂延迟：0min。
1.2.3质谱条件：电离方式：EI源，能量70eV；离子源温度:230℃；四极杆温度:150℃；质量范围：(35-800)amu；电子倍增器电压:1400V。谱图检索：采用NIST08.L谱库进行检索。
1.2.4KI值测定：取正构烷烃混合对照品，按1.2.2项下条件分析，记录各正构烷烃保留时间，程序升温(变温)公式：
IT＝100Z+100[TR(x)-TR(z)]/[TR(z+1)-TR(z)]。式中：TR(x)，TR(z)，TR(z+1)分别代表组分及碳数为Z，Z+1正构烷的保留时间。且TR(z)<TR(x)<TR(z+1)。
2.结果
取1.1项下的丹蒌片供试品，按1.2.1项下条件提取供试品中的挥发性成分，按1.2.2项下条件对丹蒌片中的挥发性化学成分进行GC-MS分析(见图1)。
采用峰面积归一化法估算各组分相对含量，对总离子流图中各色谱峰计算其KI值，利用各色谱峰对应的质谱图进行NIST标准谱库检索，选取质谱匹配度高的10个可能物质，并检索其KI*值，以质谱图和KI值匹配度都高的化学结构为最佳鉴定结果(见表1)。
表1丹蒌片中挥发性成分鉴定结果
Nc代表未计算出来。
从丹蒌片挥发油中鉴定出44个化合物，占挥发油总组分的72.46％。其中相对含量1-5％的成分有芳姜黄酮，吉马酮等4个化合物；相对含量高于5％的成分有蒿本内酯，β-榄香烯，(-)桉油烯醇，4-庚基苯酚等6个化合物。挥发性成分中含量最高的化合物通过NIST标准谱库比对的匹配度只有69％，低于一般标准匹配度80％，为了确证该化合物的结构，我们采用NIST匹配与保留指数法相结合方法鉴定该化合物，该化合物的实际保留指数与为反式蒿本内酯理论保留指数比较，标准偏差阈值小于10％，可确定是该化合物为反式蒿本内酯。
反式蒿本内酯是本复方制剂中川芎的主要活性成分之一，不仅可以通过不同的途径保护治疗常见的脑缺血性疾病，而且可以通过改善红细胞聚集状态，使血流流速增加，降低微血管通透性，达到改善微循环的作用。不仅如此，它还可以舒张血管，抑制血管平滑肌细胞增殖。β-榄香烯是丹蒌片复方制剂中郁金的活性组成成分，具有抑制血管生成，抗凝血，溶血栓，改善血液流变学，抗氧化损伤，抗动脉粥样硬化的作用。根据本实验结果可知，丹蒌片复方制剂中的挥发性成分是其发挥抑制心肌缺血、抑制心肌梗塞、抗血栓、降脂等功效的活性成分，本实验结果为后期进一步研究其药效物质基础及质量控制提供了依据。
上述参照具体实施方式对该一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)HS-SPEM法提取挥发油，立即插入气相色谱仪进样口，进样口温度250℃，解吸6min，进样模式为不分流进样；其中，
色谱条件：色谱柱：HP-5MS，60m×320μm×0.25μm；载气He，流量1ml/min；汽化温度：250℃；接口温度：280℃；色谱柱初始温度60℃、保持1min，以4℃/min升温速率升至150℃、保持5min，以4℃/min升温速率升至240℃、保持3min；溶剂延迟：0min；
质谱条件：电离方式：EI源，能量70eV；离子源温度:230℃；四极杆温度:150℃；质量范围：35-800amu；电子倍增器电压:1400V；谱图检索：采用NIST08.L谱库进行检索；
(2)KI值测定：取正构烷烃混合对照品，按上述条件分析，记录各正构烷烃保留时间，程序升温公式：IT＝100Z+100[TR(x)-TR(z)]/[TR(z+1)-TR(z)]；
式中：TR(x)，TR(z)，TR(z+1)分别代表组分及碳数为Z，Z+1正构烷的保留时间，且TR(z)<TR(x)<TR(z+1)。
2.根据权利要求1所述的丹蒌片中的挥发性化学成分的分离鉴定方法，其特征在于：所述步骤(1)中HS-SPEM法提取挥发油的具体方法为：丹蒌片粉碎与饱和氯化钠及水混合搅拌，聚二甲基硅氧烷涂层固相萃取头萃取后取出。
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HS-SPME-GC-MS联用分析瓜蒌子挥发性成分;万丽娟 等;《食品工业》;20151231;第36卷(第2期);全文 *
主产地泽泻药材顶空萃取挥发性成分的GC-MS分析;李兰 等;《西北药学杂》;20091231;第24卷(第2期);全文 *
川芎和当归挥发油成分的比较研究;丁明玉 等;《生命科学仪器》;20051231;第3卷(第3期);第38页 *
川芎提取物中大孔树脂残留物的顶空进样法分析;武亚晓 等;《中国实验方剂学杂志》;20150131;第21卷(第1期);全文 *
气相色谱保留指数定性方法研究进展;赵晨曦 等;《分析化学》;20050531;第33卷(第5期);第715-716页 *

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