CN105779537A - 多棘海盘车酶解多肽及其作为ace抑制剂的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种多棘海盘车酶解多肽，该多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入蛋白酶，所加入蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，在恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽；以及该种多棘海盘车酶解多肽作为ACE抑制剂的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种多棘海盘车酶解多肽，以及该多棘海盘车酶解多肽作为ACE抑制剂的具体应用。
背景技术
多棘海盘车(Asteriasamurensis)，呈五角星状，直径14cm左右，体扁，呈黄色或浅褐色，背面稍隆，口面很平，是我国黄海沿岸一种极为普遍的海星。它属于海洋无脊椎动物，棘皮动物门、海星纲，海盘车科，是已知的一种可以食用的海星。多棘海盘车于我国渤海、黄海海域分布广泛，现今已经从多棘海盘车中提取到很多种甾体皂苷、甾醇、多糖、神经酰胺与脑苷脂等成分。多棘海盘车在中国黄渤海沿海居民中有长期食用的历史，其可食部为生殖腺，成份研究表明其富含维生素、微量元素、脂肪等，且含有丰富的不饱和脂肪酸。可用作高营养、无毒的新型海洋食品原料。
高血压是较为常见的慢性病，也是心脑血管病最主要的影响因素，它能引起心肌梗塞、心力衰竭以及慢性肾脏病等并发症，潜在的危害性大。近年来，随着人们生活水平的提高，高血压的发病率也呈上升趋势，严重威胁着人类健康。血管紧张素转化酶(angiotensinconvertingenzyme，ACE)是一种二肽酶，它在肾素-血管紧张素系统中对哺乳动物的血压调节具有重要作用，它能够将血管紧张素Ⅰ转化为具有强烈收缩血管作用的血管紧张素Ⅱ，还能够催化有促血管舒张作用的缓激肽水解，因此具有ACE抑制活性的物质具有显著地降血压效果。当前人为合成的降压药物（如卡托普利）长期服用往往会产生不同程度的副作用，如心血管疾病、血管性水肿、咳嗽、皮疹等。随着时代进步，人们越来越重视此类药物的安全性。因此，筛选对ACE具有强抑制活性的天然降压活性物质对人类健康具有重要的意义。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种多棘海盘车酶解多肽，以及该种酶解多肽作为ACE抑制剂的应用。
本发明的技术解决方案是：一种多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入蛋白酶，所加入蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，在恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入胃蛋白酶，所加入胃蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=2.0，然后在37℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入木瓜蛋白酶，所加入木瓜蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=6.5，然后在60℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入碱性蛋白酶，所加入碱性蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用氢氧化钠调节pH=12.0，然后在50℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
一种如上所述的多棘海盘车酶解多肽作为ACE抑制剂的应用。
本发明同现有技术相比，具有如下优点：
本发明所公开的多棘海盘车的酶解多肽，经过申请人的试验表明，该多棘海盘车酶解多肽对于血管紧张素转化酶(angiotensinconvertingenzyme，ACE)具有较好的抑制活性功能，该多肽可以作为降血压的药物和保健品的原料，以进行此类药物或保健品的生产。并且该种多棘海盘车酶解多肽获得容易，成本低廉，因此可以说它具备了多种优点，特别适合于在本领域中推广应用，其市场前景十分广阔。
附图说明
图1为本发明实施例的三种酶解多肽的ACE活性抑制率曲线图。
图2为卡托普利ACE活性抑制率曲线。
具体实施方式
下面将结合附图说明本发明的具体实施方式。如图1、图2所示：
一种多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入蛋白酶，所加入蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，在恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
实施例一：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入胃蛋白酶，所加入胃蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=2.0，然后在37℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得胃蛋白酶酶解多肽（PE-P）。
实施例二：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入木瓜蛋白酶，所加入木瓜蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=6.5，然后在60℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得木瓜蛋白酶酶解多肽（PA-P）。
实施例三：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入碱性蛋白酶，所加入碱性蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用氢氧化钠调节pH=12.0，然后在50℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得碱性蛋白酶酶解多肽（AP-P）。
上述三种多棘海盘车酶解多肽作为ACE抑制剂的应用。
对经过上述方法获得的多肽进行ACE抑制活性研究实验，具体步骤如下：
a.高效液相色谱检测条件：流动相：甲醇：水=30：70（含有0.1%TFA和0.05%冰乙酸）；流速：1.0mL/min；检测波长：228nm；柱温：25℃；色谱柱：KromasilC18色谱柱（5um，I.D.4.6mm×250mm）；进样量：20μL。
b.多肽样品抑制ACE活性分析：分别取10μL不同浓度的多肽样品液（由pH8.3的硼酸-硼砂缓冲液，含0.3mol/LNaCl配置）于1.5mL的离心管中，加入30μLACE（60U/mL），37℃下反应5min后，加入50μL马尿酰-组胺酰-亮氨酸（Hip-His-Leu，HHL，7.6mmol/L）溶液，充分混合37℃下反应30min，加入10μL的10%TFA溶液终止反应，测定马尿酸（Hip）的峰面积，平行测定三次计算平均值，通过抑制率公式计算样品抑制ACE活性。
式中：A——不含活性组分样品测定Hip的峰面积
B——含活性组分样品测得Hip的峰面积
c.卡托普利对照品ACE抑制活性分析
配制不同浓度的卡托普利溶液对照品，按照b的实验方法分别测定卡托普利样品的ACE抑制率。
实验结果表明：在本文HPLC条件下，Hip保留时间在9.5分钟左右，HHL在102分钟左右，Hip与HHL之间互不干扰，实验可行。测得Hip浓度在0.2～10mg/mL与峰面积的线性关系关系良好，回归方程为y=11239x-2556.1，R2=0.9991，最低检出限位0.2mg/mL，RSD的值在1.905～6.361%，说明该测定方法精密度良好，可用于对ACE抑制活性检测分析。
分别由胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶水解多棘海盘车所得多肽PE-P、PA-P、AP-P的抑制ACE活性测定结果见图1。
由图1可知，碱性蛋白酶水解多棘海盘车蛋白得到的多肽AP-P的抑制ACE活性显著高于另外两种酶水解所得的多肽。在AP-P的浓度达到10mg/mL时对ACE的抑制率高达95.88%。用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解多棘海盘车得到的多肽PA-P和PE-P的ACE抑制率也很高，在本实验最高浓度（10mg/mL）对ACE的抑制率分别为88.5%、86.1%。PA-P和PE-P在浓度为0.2～2mg/mL时，其浓度与抑制率呈线性关系，当浓度大于2mg/mL后抑制率增长缓慢。PA-P在0~1mg/mL抑制率增长明显，当浓度大于2mg/mL后其对ACE的抑制活性基本达到平衡，抑制率没有显著变化。根据对AP-P、PA-P、PE-P抑制率的分析结果，最终得到AP-P、PA-P、PE-P半抑制浓度IC50分别为：0.3328、0.5526、0.6827mg/mL。
为对比多肽样品对ACE活性抑制的效果，实验分析了目前市面上治疗高血压疗效最好的卡托普利品的ACE活性抑制，如图2所示。在浓度0.2mg/mL浓度时卡托普利对ACE的活性抑制率已经达到99.99%。计算可知卡托普利的半抑制浓度IC50值为0.453μmol/L。
Claims (5)
1.一种多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入蛋白酶，所加入蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，在恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
2.根据权利要求1所述的多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入胃蛋白酶，所加入胃蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=2.0，然后在37℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
3.根据权利要求1所述的多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入木瓜蛋白酶，所加入木瓜蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用浓盐酸调节pH=6.5，然后在60℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
4.根据权利要求1所述的多棘海盘车酶解多肽，其特征在于：所述的多棘海盘车酶解多肽按照以下步骤制备而得：
将整只多棘海盘车放入干燥箱，65℃条件下烘干并粉碎，过20目筛，将多棘海盘车粉末按照固液比为1：20g/ml的比例与蒸馏水混合，并向其中加入碱性蛋白酶，所加入碱性蛋白酶为多棘海盘车质量的5%，搅拌均匀后，用氢氧化钠调节pH=12.0，然后在50℃的条件下于恒温水浴锅内酶解8小时，获得多棘海盘车酶解液，将多棘海盘车酶解液沸水浴10min，冷却后进行离心处理，离心条件：4000r/min，离心15min，然后取上清液，透析，浓缩，冷冻干燥，获得多棘海盘车酶解多肽。
5.一种如权利要求1所述的多棘海盘车酶解多肽作为ACE抑制剂的应用。
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2012135262A (ru) * | 2012-08-15 | 2014-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова Дальневосточного отделения Российской академии наук (ТИБОХ ДВО РАН) | Биологически активные пептиды коллагена морской звезды и способ их получения |
| CN104666225A (zh) * | 2015-03-19 | 2015-06-03 | 山东大学（威海） | 一种海星酶解提取物及其制备方法和应用 |
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| CN104666225A (zh) * | 2015-03-19 | 2015-06-03 | 山东大学（威海） | 一种海星酶解提取物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 耿浩等: "多棘海盘车体壁胶原蛋白肽的制备", 《食品与发酵工业》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114231586A (zh) * | 2022-02-23 | 2022-03-25 | 北京德人健康科技有限公司 | 一种改善微循环的生物活性肽及其制备方法 |
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