CN105675560B - 一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法 - Google Patents

一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法。该方法包括如下步骤：(1)配制浓度为10nM以下的聚合物溶液，将荧光分子探针标记在聚合物分子上；(2)在施加剪切场的同时，激光照射经标记的聚合物溶液，收集分析发射出的荧光信号，即得所述单个聚合物分子的荧光发射光谱信息；所采用的测量系统包括一激发光源单元、一剪切施加与流变测量单元、一光学显微单元和一单分子荧光发射光谱测量单元，其中，剪切施加与流变测量单元底部设置一激发光光学窗口。本发明方法将宏观的剪切施加与流变测量和单分子荧光发射光谱测量相结合，获取剪切场下被测量体系的单分子荧光发射光谱，其探测空间为10‑15L级别，具有单分子级别的灵敏度。

Description

一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法
技术领域
本发明涉及一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法，属于高分子物理基础研究领域。
背景技术
聚合物分子尤其是带电聚合物在其良溶剂中的构象信息一致是学术界关注却很少为人理解的问题，该问题与聚合物链附近的微观环境是密不可分的如抗衡离子分布问题，而测量单分子级别的荧光发射光谱是解决这一难题的有效方法，这将帮助我们更好的理解聚合物溶液宏观性质的微观物理过程，也将帮助我们揭开一些生命过程的微观物理本质。
光谱大体可以分为吸收光谱和发射光谱。红外吸收光谱(IR)和紫外吸收光谱(UV)是最为常见的两种吸收光谱，红外吸收光谱是分子中成键原子振动能级跃迁而产生的吸收光谱，所有有机化合物在红外光谱区内都有吸收，因此，红外光谱广泛的应用于鉴别化合物的特征键及其官能团，能提供大量的关于化合物的结构信息，Ken-ichi Ataka等用表面增强红外吸收光谱研究了水分子在电极表面的再取向信息(Ken-ichi Ataka,TakaoYotsuyanagi,and Masatoshi Osawa.Potential-Dependent Reorientation of WaterMolecules at an Electrode/Electrolyte Interface Studied by Surface-EnhancedInfrared Absorption Spectroscopy，J.Phys.Chem.，1996，100：10664–10672)；紫外光谱由于其极高的灵敏度广泛的应用于微量杂质的检测以及化学结构的分析等，K.KeithInnes.等用紫外吸收光谱研究了乙炔分子的振动和转动信息(K.Keith Innes.Analysisof the Near Ultraviolet Absorption Spectrum of Acetylene，J.Chem.Phys.，1954，22：863–876)。另外，对于荧光光谱最受人们关注的是其发射光谱，是由电子在两能级间不发生自旋反转的辐射跃迁过程中所产生的，广泛的应用于荧光探针、物质的检测、发光器件等，中国科学院化学研究所赵江等用荧光关联光谱研究了聚电解质稀溶液的链周围抗衡离子的分布以及构象变化信息(Shuangjiang Luo,Xiubo Jiang,Lei Zou,Fei Wang,JingfaYang,Yongmingand Jiang Zhao.Resolving the Difference in ElectricPotential within a Charged Macromolecule，Macromolecules,2013，46，3132–3136；FeiWang,Yi Shi,Shuangjiang Luo,Yongming Chen,and Jiang Zhao.ConformationalTransition of Poly(N-isopropylacrylamide)Single Chains in Its CononsolvencyProcess:A Study by Fluorescence Correlation Spectroscopy and ScalingAnalysis，Macromolecules,2012，45：9196–9204)。
然而，紫外吸收光谱以及红外吸收光谱由于浓度的限制，无法从单分子的角度去研究聚合物溶液的微观物理信息，荧光关联光谱纵有单分子的分辨率与灵敏度，但是无法得到光强的分布信息，无法直观的得到链周围微观物理环境的变化。
发明内容
本发明的目的是提供一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法，该方法既可以实施精确的动态剪切，而且具有单分子级别的分辨率和灵敏度。
本发明提供的一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法，包括如下步骤：
(1)配制浓度为10nM以下的聚合物溶液，将荧光分子探针标记在聚合物分子上；
(2)在施加剪切场的同时，激光照射经标记的聚合物溶液，收集发射出的荧光信号，即得单个聚合物分子的荧光发射光谱信息；所采用的测量系统包括：一用于作为激发光照射待测样品的激发光源单元；一用于对待测样品施加机械剪切同时测量其宏观流变学特性的剪切施加与流变测量单元，所述剪切施加与流变测量单元底部设置一激发光光学窗口；以及一光学显微单元，所述光学显微单元用于将所述激发光源单元出射的激发光经所述激发光光学窗口引入到位于剪切场下的待测样品，使得待测样品受激发产生荧光信号，并将产生的荧光信号收集发射到一单分子荧光发射光谱测量单元；所述单分子荧光发射光谱测量单元用于获取荧光信号，得到单个聚合物分子的荧光发射光谱信息(如荧光发射光谱图、聚电解质链周围抗衡离子分布信息等)。
上述的测量方法中，所述测量系统中，所述剪切施加与流变测量单元采用一转矩流变仪，所述转矩流变仪下基板设置所述激发光光学窗口，所述激发光光学窗口具体可为一石英载玻片，其厚度为0.13～0.17mm，从而使光学窗口具有高透过率和短工作距离；在测试过程中将待测的聚合物溶液滴加到该载玻片上测量，具体可滴加0.8～1.2mL(如1mL)，由于聚合物溶液的浓度小于10nM(如5nM)，微小的激发空间内平均存在单个或者少于单个荧光分子，因此可得到单个聚合物分子的荧光发射光谱。
上述的测量方法中，所述测量系统中，所述激发光源单元采用连续激光或飞秒脉冲激光，所述连续激光或飞秒脉冲激光的波长需要与所激发的荧光分子(经标记的聚合物分子)相匹配；所述激发光源单元包括一个以上不同波长的激光器、若干反射镜、若干光阑、第一扩束镜、第二扩束镜，所述第二扩束镜的入射端设置一中性密度滤波片，所述激光器发出的光分别经若干所述反射镜和所述光阑并依次经所述第一扩束镜和第二扩束镜进行两级扩束将激发光束直径扩大以确保其尺寸大于所述光学显微单元的显微镜物镜进光孔，从而获得充分利用物镜的数值孔径而产生最小的激发空间(达10-15L级别)。
上述的测量方法中，所述光学显微单元采用倒置荧光显微镜结构，包括一显微镜物镜、一二向色镜、一发射光高通滤波片、一激发光带通滤波片、一反射镜、一聚焦透镜和一狭缝，所述激发光经所述显微物镜发射到位于所述剪切施加与流变测量单元内部的待测样品，经待测样品激发的荧光经所述显微物镜收集后发射到所述二向色镜，经所述二向色镜出射的荧光信号经所述发射光高通滤波片发射到所述反射镜，经所述反射镜反射的荧光经所述聚焦透镜和狭缝发射到所述单分子荧光发射光谱测量单元；另外，所述激发光源单元的出射端设置所述激发光带通滤波片。
上述的测量方法中，所述测量系统中，所述单分子荧光发射光谱测量单元可以采用光谱分析仪，具体可采用具有单分子分辨率以及灵敏度的荧光光谱仪。
上述的测量方法中，所述测量系统还包括一高精度位移平台，使用时可以将转矩流变仪放置在显微镜物镜的上方，从而实现各个器件的精确联动。
上述的测量方法中，所述荧光分子探针以化学键合的方式标记到所述聚合物分子上，如所述聚合物分子链的末端。
上述测量方法中，所述聚合物可为DNA，具体可为人体单链DNA i-motif片段，序列为5’-CCCTAACCCTAACCCTAACCC-3’。
上述测量方法中，所述荧光分子探针可为荧光染料，具体可为Oregon Green 514，其最大吸收波长为514nm，为pH响应性染料，随着pH的增加其发光能力会增加，结构式如式I所示：
上述的测量方法中，所述方法在所述标记之前还包括在所述DNA分子的5’端修饰的NH2-(CH2)6-步骤，使得荧光分子探针中的琥珀酰亚胺酯键与DNA分子末端修饰的氨基反应从而使荧光分子探针结合在DNA分子上。
上述的测量方法中，所述标记中，所述DNA与所述荧光染料的摩尔比为1：(3～7)，具体可为1：5。
上述的测量方法中，DNA溶液的溶剂可为pH为8.2～8.4的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液，以利于与荧光分子探针的键合。
上述的测量方法中，所述标记在避光的条件下进行，温度可为20～30℃(如25℃)，时间可为8～14h(如12h)。
上述的测量方法中，所述方法在所述标记之后还包括除去聚合物溶液中未标记的荧光分子探针的步骤。
本发明具有如下有益效果：
本发明方法将宏观的剪切施加与流变测量和单分子荧光发射光谱测量相结合，获取剪切场下被测量体系的单分子荧光发射光谱，其探测空间为10-15L级别，具有单分子级别的灵敏度，测量样品的浓度可以达到nM水平，为进一步直观的得到聚合物分子链周围的微观环境信息奠定基础。
附图说明
图1是本发明的测量原理示意图。
图2是本发明开设光学窗口的流变仪下基板结构示意图。
图3是本发明的激发光源单元结构示意图。
图4为采用本发明测量方法得到的不同剪切速率下的聚合物分子的荧光发射光谱图(沿箭头方向剪切速率依次为0s-1、100s-1、500s-1和100s-1)。
图5为Oregon Green 514染料(Free OG514)和标记有Oregon Green 514染料的DNA分子(OG514-i-motif)在不同pH值下的荧光发射光谱图。
图中，各标记如下：
1 激发光源单元、2 剪切施加与流变测量单元、3 光学显微单元、4 单分子荧光成像单元、5 单分子荧光发射光谱测量单元、6 荧光关联光谱测量单元、21 光学窗口、10 激光器、11 反射镜、12 光阑、13 第一扩束镜、14 第二扩束镜、15 中性密度滤波片、31 显微镜物镜、32 二向色镜、33 第一反射镜～第三反射镜、34 发射光高通滤波片、35 针孔、36分束镜、37 狭缝、38 第一聚焦透镜～第四聚焦透镜、39 激发光带通滤波片。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
5’端修饰NH2-(CH2)6-的人体单链DNA i-motif片段，其序列为：5’-CCCTAACCCTAACCCTAACCC-3’(序列1)；Mw＝6200；HPLC纯化；购买于生工生物工程(上海)股份有限公司。
Oregon Green 514染料作为荧光分子探针，购买于Invitrogen,USA；直接使用。
实施例1、获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息
(1)本发明方法采用的获取剪切场下单个分子光谱及成像的测量系统
如图1所示，本发明方法使用的获取剪切场下单个分子光谱及成像测量系统，包括一激发光源单元1、一剪切施加与流变测量单元2、一光学显微单元3、一单分子荧光成像单元4和/或一光谱测量单元，光谱测量单元可以采用一单分子荧光发射光谱测量单元5和/或一荧光关联光谱测量单元6，其中，剪切施加与流变测量单元2底部设置一激发光光学窗口21；
激发光源单元1发出的激光作为激发光照射聚合物溶液，染料分子以化学键合的方式接到聚合物分子链的末端；剪切施加与流变测量单元2用于对待测样品施加机械剪切同时准确测量其宏观流变学特性；光学显微单元3用于将激光光源单元1出射的激发光通过光学窗口21引入到位于剪流场下的聚合物溶液，使得经荧光分子探针标记的聚合物分子(荧光分子)受激发产生荧光信号，并将产生的荧光信号收集分别发射到单分子荧光成像单元4、单分子荧光发射光谱测量单元5和/或荧光关联光谱测量单元6；单分子荧光成像单元4用于对扩散较慢体系(凝胶、高分子固体薄膜等)内的单个荧光分子进行实时荧光成像，获得在扩散较慢的体系中的单分子实空间运动信息，即获取该荧光分子的扩散和取向信息；单分子荧光发射光谱测量单元5用于对聚合物溶液中的单个荧光分子的发射光谱，并对其进行强度分析通过光谱的变化得到染料分子附近的抗衡离子分布的信息；荧光关联光谱测量单元6用于获取荧光信号，通过对其进行关联性分析得关联光谱，并对关联光谱进行关联性拟合得到聚合物分子的扩散以及尺寸信息。
优选地，如图2所示，剪切施加与流变测量单元2可以采用能够实施精确动态剪切的转矩流变仪，转矩流变仪下基板设置有一高透过率且短工作距离的激发光光学窗口21，短工作距离是为了与高数值孔径的显微镜水浸物镜相匹配，其工作距离非常的短，最大0.2mm。
优选地，激发光源单元1可以采用连续激光或飞秒脉冲激光，目的是激发更多种荧光分子，所选择激光器的波长需要与所激发的荧光分子相匹配，本实施例中的激发光源单元1包括三种不同波长的激光器10(以此为例，但是不限于此，可以根据实际使用进行选择)、若干反射镜11、若干光阑12、第一扩束镜13和第二扩束镜14，第二扩束镜14的入射端可以设置一用于调节激发光的功率的衰减片15，三个激光器10的波长分别为1060nm、532nm和473nm，三个激光器10分别依次经若干反射镜11反射或透射以及光阑12并依次经第一扩束镜13和第二扩束镜14进行两级扩束将激发光束直径扩大到2.0cm左右以确保其尺寸大于光学显微单元的显微镜物镜进光孔，从而获得充分利用物镜的数值孔径而产生最小的激发空间。
优选地，如图1所示，光学显微单元3可以采用倒置荧光显微镜，包括一显微镜物镜31、一二向色镜32、第一～第二反射镜33、一发射光高通滤波片34、一针孔35、一分束镜36、一狭缝37和第一～第三聚焦透镜38，激发光经显微物镜31发射到位于剪切施加与流变测量单元3内部的待测样品，经待测样品激发的荧光经显微物镜35收集后发射到二向色镜32，经二向色镜32出射的荧光信号经发射光高通滤波片34发射到第一反射镜33，经第一反射镜33反射的荧光经第一聚焦透镜38和狭缝37发射到单分子荧光发射光谱测量单元5，经第一反射镜33透射的荧光经第二聚焦透镜38发射到第二反射镜33，经第二反射镜33反射的光发送到单分子荧光成像单元4，经第二反射镜33透射的光经针孔35发射到分束镜36，经分束镜36出射的一部分光经第三聚焦透镜38发射到荧光关联光谱测量单元6；另外，激发光源单元1的出射端设置激发光带通滤波片39。
优选地，为了有效消除探测器本身的after-pulsing产生的假信号，本发明还包括第三反射镜33和第四聚焦透镜38，经分束镜36出射的另一部分光经第四反射镜33反射到第四聚焦透镜38，经第四聚焦透镜38出射的光发射第二荧光关联光谱测量单元6。
优选地，单分子荧光成像单元4可以采用EMCCD相机。
优选地，单分子荧光发射光谱测量单元5可以采用光谱分析仪。
优选地，每一荧光关联光谱测量单元6均包括一单光子探测器以和一数据采集卡，单光子探测器将探测接收的荧光信号转换为电信号经数据采集卡发送到一计算机进行关联性分析获得关联函数数据，进而获得待测样品的扩散系数及平均浓度信息。
优选地，该系统还包括一高精度位移平台，使用时可以将转矩流变仪放置在显微镜物镜31的上方，从而实现各个器件的精确联动，高精度位移平台是可以采用现有技术的位移平台，在此不再赘述。
(2)获取剪切场下单个聚合物分子的荧光发射光谱信息
按照如下步骤获取剪切场下单个聚合物分子的荧光发射光谱信息：
1、样品的制备
1)末端修饰DNA溶液的制备
将浓度为215.3nM 5’端修饰NH2-(CH2)6-的人体单链DNA i-motif片段溶解在350μL pH＝8.3的0.1M的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液中制得待标记的单链DNA溶液；
2)标记
将50μL的Oregon Green 514染料(820.56纳摩尔)的DMSO溶液加入步骤1)中配制好的DNA溶液(DNA与染料的摩尔比为1：5)中，均匀混合，室温下(25℃)，避光过夜反应(12h)。
3)将步骤2)得到的染色反应的混合物通过以0.1M的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液为流动相的聚丙烯酰胺凝胶色谱柱(P-6media；Bio-Rad,USA)分离除去大部分自由染料，再通过超滤直至滤出液中未检测到荧光信号，获得样品。
2、测试
操作步骤如下：
1)打开激发光源(473nm连续激光)并将扩束后的激发光束调节准直使之成为平行光束；
2)将转矩流变仪通过高精度位移台移动到显微镜物镜正上方；
3)切换到水浸物镜，并在显微镜物镜上加入40μL超纯水，并向上调节使之达到合适的聚焦位置；
4)加样品(体积1mL)于载玻片正中心；
5)打开转矩流变仪实施动态剪切；
6)调节光谱仪狭缝宽度(10μm)以及增益倍数(100倍)使得探测到的最佳的荧光发射光谱；
7)改变流变仪的剪切速率，得到荧光发射光谱随剪切速率的变化，如图4。
8)固定剪切速率为1001/s，按照上述步骤1)-6)分别测定Oregon Green 514染料(Free OG514)和标记有Oregon Green 514染料的DNA分子(OG514-i-motif)在不同pH值下的荧光发射光谱，由于所用染料为pH响应性染料，光谱强度均随pH值的变化而变化，如图5所示，其中左图为Free OG514的发射光谱，右图为OG514-i-motif的发射光谱，通过两者发射光谱图中峰形的比较，可以看出，由于发射光谱与链周围的氢离子浓度有关，对于该体系链周围的抗衡离子浓度要比本体溶液中高一个数量级左右。

Claims (9)

1.一种获取剪切场下单个聚合物分子荧光发射光谱信息的方法，包括如下步骤：
(1)配制浓度为10nM以下的聚合物溶液，将荧光分子探针标记在聚合物分子上；
(2)在施加剪切场的同时，激光照射经标记的聚合物溶液，收集发射出的荧光信号，即得单个聚合物分子的荧光发射光谱信息；所采用的测量系统包括：
一用于作为激发光照射待测样品的激发光源单元；
一用于对待测样品施加机械剪切同时测量其宏观流变学特性的剪切施加与流变测量单元，所述剪切施加与流变测量单元底部设置一激发光光学窗口；以及
一光学显微单元，所述光学显微单元用于将所述激发光源单元出射的激发光经所述激发光光学窗口引入到位于剪切场下的待测样品，使得待测样品受激发产生荧光信号，并将产生的荧光信号收集发射到一单分子荧光发射光谱测量单元；所述单分子荧光发射光谱测量单元用于获取荧光信号，得到单个聚合物分子的荧光发射光谱信息；
所述测量系统中，所述光学显微单元采用倒置荧光显微镜结构，包括一显微镜物镜、一二向色镜、一反射镜、一发射光高通滤波片、一激发光带通滤波片、一狭缝和一聚焦透镜，所述激发光经所述显微镜物镜发射到位于所述剪切施加与流变测量单元内部的待测样品，经待测样品激发的荧光经所述显微镜物镜收集后发射到所述二向色镜，经所述二向色镜出射的荧光信号经所述滤波片发射到所述反射镜，经所述反射镜反射的荧光经所述聚焦透镜和狭缝发射到所述单分子荧光发射光谱测量单元；另外，所述激发光源单元的出射端设置所述激发光带通滤波片。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述测量系统中，所述剪切施加与流变测量单元采用转矩流变仪，所述转矩流变仪下基板设置所述激发光光学窗口。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述测量系统中，所述激发光源单元采用连续激光或飞秒脉冲激光；所述激发光源单元包括一个以上不同波长的激光器、若干反射镜、若干光阑、第一扩束镜和第二扩束镜，所述第二扩束镜的入射端设置一中性密度滤波片，所述激光器发出的光分别经若干所述反射镜和所述光阑并依次经所述第一扩束镜和第二扩束镜进行两级扩束将激发光束直径扩大以确保其尺寸大于所述光学显微单元的显微镜物镜进光孔。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述聚合物为DNA；所述荧光分子探针为荧光染料。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述聚合物为人体单链DNA i-motif片段，序列为5’-CCCTAACCCTAACCCTAACCC-3’；所述荧光分子探针为Oregon Green 514。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法在所述标记之前还包括在DNA分子的5’端修饰的NH2-(CH2)6-步骤。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述标记中，所述DNA与所述荧光染料的摩尔比为1：(3～7)。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：DNA溶液的溶剂为pH为8.2～8.4的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述标记在避光的条件下进行，温度为20～30℃，时间为8～14h。
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CN106525794B (zh) * 2016-11-08 2018-12-25 中国科学院化学研究所 一种聚电解质附近抗衡离子的吸附脱附速率常数的测定方法
CN108072636A (zh) * 2016-11-14 2018-05-25 中国科学院化学研究所 一种单个环形聚合物分子在固/液界面上扩散信息的测量方法
CN106645070B (zh) * 2017-01-10 2019-04-23 中国科学院化学研究所 基于单分子荧光显微成像获取聚合物形变时的测量系统
CN111337469B (zh) * 2020-04-27 2021-06-08 中国科学院化学研究所 利用荧光宽场成像获取剪切场下微观运动信息的方法
CN115753708B (zh) * 2022-11-08 2024-07-16 中国科学院长春应用化学研究所 基于量子特性荧光光谱学的高分子链动力学多尺度观测仪

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1415963A (zh) * 2001-10-23 2003-05-07 三星电子株式会社 通过测量剪切应力来检测生物分子结合的方法和传感器
CN102183497A (zh) * 2011-02-15 2011-09-14 中国科学院化学研究所 一种聚合物薄膜中单分子链扩散运动轨迹的测定方法
CN104072695A (zh) * 2014-06-25 2014-10-01 中国科学技术大学 内涵体逃逸聚合物超灵敏比例型pH传感器的制备及其应用
CN104758058A (zh) * 2015-03-11 2015-07-08 苏州大学 一种血细胞机械应力形变脉冲激光同步显微成像观测装置

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1415963A (zh) * 2001-10-23 2003-05-07 三星电子株式会社 通过测量剪切应力来检测生物分子结合的方法和传感器
CN102183497A (zh) * 2011-02-15 2011-09-14 中国科学院化学研究所 一种聚合物薄膜中单分子链扩散运动轨迹的测定方法
CN104072695A (zh) * 2014-06-25 2014-10-01 中国科学技术大学 内涵体逃逸聚合物超灵敏比例型pH传感器的制备及其应用
CN104758058A (zh) * 2015-03-11 2015-07-08 苏州大学 一种血细胞机械应力形变脉冲激光同步显微成像观测装置

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