CN105651988A - 一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法 - Google Patents

一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：(1)称取0.3-0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；(2)向离心管中加入3-5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡混均，70-80℃条件下提取15-30min；(3)将离心管离心20min，取上清液；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡，提取15-30min，离心，合并两次上清液；(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管水浴蒸干；(5)加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。本发明的优点是能从企鹅粪便中将类固醇激素提取出来，操作简单准确，检测结果可靠性高。

Description

一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法
技术领域
本发明涉及一种激素提取方法，尤其涉及一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法。
背景技术
企鹅是地球上数一数二可爱的动物，世界上总共18种企鹅，它们全分布在南半球；南极与亚南极地区约有8种，其中在南极大陆海岸繁殖的有2种，其它则在南极大陆海岸与亚南极之间的岛屿。类固醇激素(Steroidhormone)是一类脂溶性激素，它们在结构上都是环戊烷多氢菲衍生物。类固醇激素的分子质量较小，且是脂溶性的，可通过扩散或载体转运进入靶细胞，激素进入细胞后先与胞浆内的受体结合。类固醇激素具有极重要的医药价值；在维持生命、调节性功能，对机体发展、免疫调节、皮肤疾病治疗及生育控制方面有明确的作用。
目前已有的对于企鹅类固醇激素测定的相关研究报道，大部分研究学者都是直接抽取血液或离心出血清，通过ELISA方法进行激素水平的定量检测。但是，由于企鹅血液获取比较困难，因此通过抽取血液测定企鹅激素水平难度系数较大，而且，这种方法操作复杂，抽取血液的过程中需要抓捕动物并刺伤动物，对动物造成的损伤较大，而且抓捕动物会对动物造成应激，因此对激素水平也会存在一定影响，进而也影响了检测结果的可靠性。对于禽类，其排出的类固醇化合物存在于粪便中，且禽类的粪和尿是混在一起的，所以在收集和测量上具有可操作性，因此若能从动物粪便中提取类固醇激素并准确测定则能成功解决现有技术中所存在的上述问题。
发明内容
本发明的目的解决上述技术问题，提供一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其提取过程和测定过程对企鹅无伤害性，可在自然状态下监测企鹅生殖内分泌状态，而且操作简单，检测结果可靠性高。
为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)称取0.3-0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入3-5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下提取15-30min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下提取15-30min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
本发明成功地从企鹅粪便中将类固醇激素提取出来，对企鹅安全无伤害，而且可在自然状态下监测企鹅生殖内分泌状态，操作简单准确，配合ELISA检测方法灵敏度高、特异性好，检测结果可靠性高。
优选地，所述企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)称取0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
进一步地，步骤(1)中，将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便解冻的方法为：将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放1-2小时。
进一步地，步骤(1)中，所述企鹅湿粪的含水量为60-80％。
优选地，步骤(2)的具体步骤为：向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min。
优选地，步骤(3)的具体步骤为：将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；将下层沉淀再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明克服了现有技术中存在的技术问题，无需从企鹅体内抽取血液，降低了操作难度系数，采用本发明的技术方案可有效地从企鹅粪样中提取类固醇激素，而且提取率高，测得非繁殖期睾酮浓度11.9pmol/L，繁殖期睾酮浓度达108.1pmol/L，操作简单，对企鹅安全无伤害，提取过程中不会使企鹅产生应激反应，因此可在自然状态下监测企鹅生殖内分泌状态，采用本发明的提取方法配合ELISA检测方法灵敏度高、特异性好，检测结果可靠性高。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1
一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放2小时，称取0.3g。解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取30min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、80℃条件下提取30min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
实施例2
一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放2小时，称取0.4g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、80℃条件下提取15min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取15min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、80℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
实施例3
一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放1小时，称取0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
实施例4
一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放1小时，称取0.4g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入4mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、75℃条件下提取30min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、75℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
实验结果表明，本发明的技术方案能够从企鹅粪样中提取类固醇激素，测得非繁殖期睾酮浓度11.9pmol/L，繁殖期睾酮浓度达108.1pmol/L，而且提取率高，操作简单，提取过程中对企鹅安全无伤害，也不会使企鹅产生应激反应，因此可在自然状态下监测企鹅生殖内分泌状态，采用本发明的提取方法配合ELISA检测方法灵敏度高、特异性好，检测结果可靠性高。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于包括下列步骤：
(1)称取0.3-0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入3-5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下提取15-30min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下提取15-30min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70-80℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
2.根据权利要求1所述的企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于：所述企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，包括下列步骤：
(1)称取0.5g解冻的企鹅湿粪于15mL离心管中；
(2)向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min；
(3)将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；向下层沉淀中再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液；
(4)将盛装有两次合并的上清液的离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下水浴蒸干；
(5)向步骤(4)的离心管中加入1mL甲醇，振荡溶解回收，置于-20℃待测。
3.根据权利要求1所述的企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便解冻的方法为：将冷冻保藏或超低温保藏的企鹅粪便冰上研磨粉碎，放入冰箱的4℃保温层静置存放1-2小时。
4.根据权利要求1所述的企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于：步骤(1)中，所述企鹅湿粪的含水量为60-80％。
5.根据权利要求1所述的企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于：步骤(2)的具体步骤为：向离心管中加入5mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min使乙醇溶液与企鹅湿粪混合均匀，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的企鹅粪样中类固醇激素的提取方法，其特征在于：步骤(3)的具体步骤为：将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，取上清液于50mL离心管；将下层沉淀再加入3mL质量浓度为80％的乙醇溶液，振荡1min，于室温条件下静置1-2h，然后超声波处理20min，再将离心管置于恒温水浴摇床，在140rpm、70℃条件下提取20min，再将离心管放入离心机中3000rpm/min离心20min，合并两次上清液。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110231208A (zh) * 2019-06-26 2019-09-13 太原动物园 一种华北豹粪便中雌激素的提取方法
CN113045615A (zh) * 2021-03-05 2021-06-29 太原动物园 一种华北豹粪便类固醇激素的提取方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0204583A2 (en) * 1985-06-06 1986-12-10 Larkhall Laboratories plc A method of preparing a food sample for testing for human food sensitivity
CN102156055A (zh) * 2010-02-11 2011-08-17 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种快速的稚幼鱼甾类激素提取方法
CN102607927A (zh) * 2012-03-19 2012-07-25 郑州大学 一种从动物粪便中提取激素的方法
US20150174175A1 (en) * 2011-04-11 2015-06-25 Watanabe Oyster Laboratory Co., Ltd. Method for producing oyster meat essence containing large amount of antioxidants having high antioxidative power and high orac value
CN105158041A (zh) * 2015-09-09 2015-12-16 中国农业大学 一种毛发皮质醇激素提取方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0204583A2 (en) * 1985-06-06 1986-12-10 Larkhall Laboratories plc A method of preparing a food sample for testing for human food sensitivity
CN102156055A (zh) * 2010-02-11 2011-08-17 中国水产科学研究院东海水产研究所 一种快速的稚幼鱼甾类激素提取方法
US20150174175A1 (en) * 2011-04-11 2015-06-25 Watanabe Oyster Laboratory Co., Ltd. Method for producing oyster meat essence containing large amount of antioxidants having high antioxidative power and high orac value
CN102607927A (zh) * 2012-03-19 2012-07-25 郑州大学 一种从动物粪便中提取激素的方法
CN105158041A (zh) * 2015-09-09 2015-12-16 中国农业大学 一种毛发皮质醇激素提取方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CALUM EDWARD NINNES ET AL: "Comparing plasma and faecal measures of steroid hormones in Adelie penguins Pygoscelis adeliae", 《JOURNAL OF COMPARATIVE PHYSLOLOGY B》 *
KATHARINA HIRSCHENHAUSER ET AL: "Seasonal Patterns of Sex Steroids Determined from Feces in Different Social Categories of Greylag Geese (Anser anser)", 《GENERAL AND COMPARTATIVE ENDOCRINOLOGY》 *
刘树强等: "野生动物分辨中激素保存、提取、分析及应用的研究进展", 《中国科技论文在线》 *
王慧平等: "川金丝猴粪尿中类固醇性激素抽提方法比较", 《兽类学报》 *
黄华苑等: "利用非损伤法分析鳄蜥粪便激素水平的变化", 《广西师范大学学报：自然科学版》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110231208A (zh) * 2019-06-26 2019-09-13 太原动物园 一种华北豹粪便中雌激素的提取方法
CN113045615A (zh) * 2021-03-05 2021-06-29 太原动物园 一种华北豹粪便类固醇激素的提取方法

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Mosler et al. The anabolic steroid methandienone targets the hypothalamic–pituitary–testicular axis and myostatin signaling in a rat training model
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Tan et al. Developmental patterns of plasma dehydroepiandrosterone sulfate and testosterone in male pigs
Proietto et al. Pituitary estrogen receptor alpha is involved in luteinizing hormone pulsatility at mid-gestation in the South American plains vizcacha, Lagostomus maximus (Rodentia, Caviomorpha)
Scaramuzzi et al. Oestradiol levels in sheep plasma during the oestrous cycle
Poretti et al. Reproductive performance of male mice after hypothalamic ghrelin administration
Csaba Is there a hormonal regulation of phagocytosis at unicellular and multicellular levels? A critical review
Amaral et al. Endocrine monitoring of the ovarian cycle in captive female Amazonian manatees (Trichechus inunguis)
Mukku et al. Studies on luteolysis: effect of antiserum to luteinizing hormone on sterols and steroid levels in pregnant hamsters
Prado-Oviedo et al. Hyperprolactinemia is not associated with hyperestrogenism in noncycling African elephants (Loxodonta africana)
Hao et al. Non-invasive Fecal steroid measurements for monitoring the reproductive status of a critically endangered Yangtze finless porpoises (Neophocaena asiaeorientalis asiaeorientalis)

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