CN105555326A - 软组织植入物 - Google Patents

Abstract

本文提供软组织植入物、其制造方法、用途和施用。所述软组织植入物可以通过从供体收获细胞或组织且选择性裂解所述细胞或组织以获得胞内内容物来制备。本文还提供用于递送本文描述的软组织植入物的递送设备和包括本文描述的软组织植入物的试剂盒。

Description

软组织植入物

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年7月1日提交且具有标题“软组织植入物(SoftTissueImplant)”的美国临时专利申请序列号61/841,601的权益，所述申请的公开内容以其整体并入本文。

背景

软组织中的变化作为自然老化过程以及创伤性事件诸如外科手术、疾病或其他状况的结果而发生。这些软组织中的变化可以生成不期望的软组织缺损。例如，随着老化发生，脸部的脂肪和其他软组织的损失导致皱纹。此外，炎症和纤维组织形成可以在添加任何类型的植入物之后响应于异物存在而发生。

在此类情况下，软组织植入物对于解决一些软组织变化的有害后果是期望的。目前获得软组织用于软组织植入物的基础的方法依赖于在收获之后从软组织植入物移取几种重要的细胞组分(包括关键蛋白)的方法。因此，需要改进的软组织植入物以及制备软组织植入物的方法。

概述

在一个方面，本文描述的软组织植入物含有脂肪细胞的生物活性的胞内组分和载体基材，其中所述软组织植入物通过以下制备：从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分和将生物活性的胞内组分与载体基材组合。在一些实施方案中，所述生物活性的胞内组分是生长因子。在进一步实施方案中，所述供体是自体供体、同种异体供体、异种供体或同系供体。在额外实施方案中，选择性裂解的步骤包括通过化学破碎或机械破碎裂解脂肪细胞。在一些实施方案中，所述化学破碎涉及将脂肪细胞与溶液接触，其中所述溶液含有酸或碱。在进一步实施方案中，选择性裂解的步骤包括将生物活性的胞内组分与其他脂肪细胞组分选择性分离。在一些实施方案中，所述载体基材是完整的细胞外基质、脱细胞的细胞外基质、细胞外基质组分、水凝胶、聚合物固体、聚合物半固体、碳水化合物、自组装肽、碳纳米管、壳聚糖、藻酸盐、透明质酸、骨粉、软骨粉、蛋白、糖、塑料、金属或其组合。在一个实施方案中，所述浆料中含有生物活性的胞内内容物，其中浆料与载体基材的比率为约1:1(v/v)至约1:100(v/v)。

在另一个方面，该方法涉及从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分和将生物活性的胞内组分与载体基材组合以形成组合的生物活性的胞内组分-载体基材。在一些实施方案中，所述生物活性的胞内组分是生长因子。在进一步实施方案中，所述供体是自体供体、同种异体供体、异种供体或同系供体。在额外实施方案中，选择性裂解的步骤包括通过化学破碎或机械破碎裂解脂肪细胞。在一些实施方案中，所述化学破碎涉及将脂肪细胞与溶液接触，其中所述溶液含有酸或碱。在进一步实施方案中，选择性裂解的步骤包括将生物活性的胞内组分与其他脂肪细胞组分选择性分离。在一些实施方案中，所述载体基材是完整的细胞外基质、脱细胞的细胞外基质、细胞外基质组分、水凝胶、聚合物固体、聚合物半固体、碳水化合物、自组装肽、碳纳米管、壳聚糖、藻酸盐、透明质酸、骨粉、软骨粉、蛋白、糖、塑料、金属或其组合。在一个实施方案中，所述浆料中含有生物活性的胞内内容物，其中浆料与载体基材的比率为约1:1(v/v)至约1:100(v/v)。在其他实施方案中，所述方法还包括将防腐剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂(osmostablizer)、抗炎剂、抗肿瘤剂、生长因子、血管生成化合物、血管形成性化合物、化疗剂、免疫调节剂、化学引诱物或其组合添加至胞内组分、载体基材或组合的生物活性的胞内组分-载体基材。在又进一步实施方案中，所述方法包括将组合的生物活性的胞内组分-载体基材施用于有需要的主体。

在另一个方面，试剂盒含有包括脂肪细胞的生物活性的胞内组分和载体基材的软组织植入物，其中所述软组织植入物通过以下生成：从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分和将生物活性的胞内组分与载体基材组合，以及实体表达媒介中含有的说明书，其中所述说明书提供用于将软组织植入物施用于有需要的主体的指导。在其他实施方案中，所述试剂盒含有具有中空容器和柱塞的递送设备，其中所述柱塞机械地连接至所述中空容器，且其中所述递送设备被配置为在中空容器内含有软组织植入物。

附图简述

当结合附图时，本公开的进一步方面将在阅读下述其各个实施方案的详述之后被容易地理解。

图1是说明用于收获软组织细胞和保留内源性胞内组分的方法的实施方案的流程图。

图2是说明将图1的储存或未储存的浆料并入载体基材的方法的实施方案的流程图。

图3是说明将图1的储存或未储存的浆料并入软组织移植物的方法的实施方案的流程图。

图4显示含有如根据本文描述的方法产生的浆料的递送设备的一个实施方案。

图5显示含有如根据本文描述的方法产生的浆料的递送设备的另一个实施方案。

图6表明与脂肪来源的胞内化合物组合的载体基材(LipoAmp)与对照相比增加的生长因子含量。

图7显示与脂肪来源的胞内化合物组合的载体基材(LipoAmp)与供体匹配的对照植入物相比随着时间的体内植入体积。

图8a和8b显示对照染色(图8a)和苏木精和伊红染色，其表明在含有脂肪来源的胞内化合物的载体基材(LipoAmp)的植入位置的异位脂肪形成。

详述

在更详细描述本公开之前，应当理解，本公开不限于描述的具体实施方案，且因此当然可以变化。也应当理解，本文使用的术语仅出于描述具体实施方案的目的，而不非意欲限制。

当提供数值范围时，应当理解，本发明内涵盖该范围的上限和下限之间的各中间数值(至下限单位的十分之一，除非上下文另外明确指明)和该规定范围中的任何其他规定或中间数值。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围中，且也涵盖于本公开内，服从规定范围内任何被明确排除的限值。当规定范围包括一个或两个限值时，排除那些包括的限值中的任一或两者的范围也包括在本公开中。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。尽管与本文描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以用于本公开的操作或测试中，现在描述优选的方法和材料。

本说明书中引用的所有出版物和专利都通过引用并入本文，如同各单独的出版物或专利被特定且单独地提到通过引用并入，并且通过引用并入本文以公开和描述与引用所述出版物相关的方法和/或材料。任何出版物的引用用于在申请日之前的其公开内容，并且不应解释为承认本发明没有资格凭借在先公开而先于此出版物。进一步，提供的公开日可以与可以需要独立证实的实际公开日不同。

如本领域技术人员在阅读本公开之后将显而易见，本文描述和说明的各单独实施方案具有离散的组分和特征，其可以容易地与任何其他几个实施方案的特征分开或与其组合，而不脱离本公开的范围或精神。任何所述方法可以以所述事件的顺序或以逻辑上可能的任何其他顺序实施。

本公开的实施方案将采用，除非另有说明，在本领域技术内的分子生物学、生理学、现代外科手术技术、微生物学、纳米技术、有机化学、生物化学、植物学等的技术。文献中充分解释此类技术。

定义

在描述公开的主题中，以下术语将根据下文记载的定义使用。

如本文所使用，“约”、“近似”等，当与数字变量结合使用时，通常是指该变量的值，和该变量的实验误差内(例如，平均值的95％置信区间内)或所示值的.+-.10%内(无论哪个更大)的所有值。

如本文所使用，“有效量”是足以实现有益或期望结果的量。有效量可以在一次或多次施用、应用或剂量中施用。

如本文所使用，“治疗性”是指治疗或治愈疾病或病况。

如本文所使用，“预防性”是指在疾病或病况发生之前或在疾病或病况仍处于亚临床阶段的同时阻碍或停止疾病或病况。

如本文所使用，关于分子、化合物或组合物(包括，但不限于，化学化合物、多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗体或其片段)的量使用的“浓缩的”表明样品与其天然存在的对应物的区别在于浓度或每体积的分子数大于其天然存在的对应物的浓度或每体积的分子数。

如本文所使用，“分离的”意指与多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗体或其片段通常天然结合的细胞或其他组分分离。非天然存在的多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗体或其片段不需要“分离”以将其与其天然存在的对应物区分开。

如本文所使用，关于分子、化合物或组合物(包括，但不限于，化学化合物、多核苷酸、肽、多肽、蛋白、抗体或其片段)的量使用的“稀释的”表明样品与其天然存在的对应物的区别在于浓度或每体积的分子数小于其天然存在的对应物的浓度或每体积的分子数。

如本文可互换使用，“主体”、“个体”或“患者”是指脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。哺乳动物包括，但不限于，鼠、猿、人、农场动物、运动动物和宠物。术语“宠物”包括狗、猫、豚鼠、小鼠、大鼠、兔、雪貂等。术语农场动物包括马、绵羊、山羊、鸡、猪、牛、驴、美洲驼、羊驼、火鸡等。

如本文所使用，“生物相容的”或“生物相容性”是指材料被患者使用而不在患者中引发对物质或其衍生物(诸如代谢物)的不利或其他不当的宿主反应(与正常或对照患者中的宿主反应相比)的能力。

如本文所使用，“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”包括后代。还应当理解，由于有意或无意的突变，所有后代可能无法在DNA含量中精确地相同。包括与在初始转化的细胞中筛选具有相同的功能或生物学特性的变体后代。

如本文所使用，“特异性结合”是指在配对种类诸如酶/底物、受体/激动剂、抗体/抗原和凝集素/碳水化合物之间发生的结合，其可以由共价或非共价相互作用或共价和非共价相互作用的组合介导。当两个种类的相互作用产生非共价结合的复合物时，发生的结合通常是静电、氢键键合或亲脂相互作用的结果。因此，在配对种类之间发生“特异性结合”，其中在产生具有抗体/抗原或酶/底物相互作用的特征的结合复合物的两者之间存在相互作用。具体而言，特异性结合的特征在于配对的一个成员结合至结合成员的相应成员所属的化合物家族内的特定种类且不结合至其他种类。因此，例如，抗体优选地结合至蛋白家族内的单一表位且不结合至其他表位。

如本文所使用，“对照”是实验中用于比较目的使用且包括以尽可能降低或区分除了独立变量以外的变量的效果的替代对象或样品。

如本文所使用，“阳性对照”是指被设计以产生期望结果的“对照”，条件是所有试剂都适当地发挥功能且适当地进行实验。

如本文所使用，“阴性对照”是指被设计以不产生效果或结果的“对照”，条件是所有试剂都适当地发挥功能且适当地进行实验。与“阴性对照”可互换使用的其他术语包括“假物(sham)”、“安慰剂”和“模拟物”。

如本文所使用，“培养”是指在其中细胞可以增殖且作为一组细胞避免衰老的条件下维持细胞。“培养”也可以包括其中细胞也或者以其他方式分化的条件。

如本文所使用，“协同效应”、“协同作用”或“协同性”是指两种或更多种分子、化合物、物质、因子或组合物之间产生的大于或不同于它们各自效果的总和的效果。

如本文所使用，“累加效果”是指两种或更多种分子、化合物、物质、因子或组合物之间产生的等于它们各自效果的总和或与其相同的效果。

如本文所使用，“自体的”是指源自作为受体的相同主体。

如本文所使用，“同种异体移植物”是指源自一个物种的一个成员且在相同物种的基因相异成员中移植的移植物。

如本文所使用，“异种移植物”或“异种的”是指源自一个物种的一个成员且在不同物种的成员中移植或使用的物质或移植物。

如本文所使用，“自体移植物”是指源自主体且移植入所述移植物来源的相同主体的移植物。

如本文所使用，“同种异体的”是指涉及、源自或者是遗传上足够不同以便与彼此抗原上相互作用的相同物种的个体。

如本文所使用，“同系的”是指在遗传上足够相似以便免疫相容以允许移植(transplantation)、移植(grafting)或植入的主体或供体。

本文所使用，“植入物”或“移植物”，如本文中可互换使用，是指被插入主体体内的细胞、组织或其他化合物，包括金属和塑料。

如本文所使用，“填料”是指用于填充空腔或凹陷的物质。填料可以填充凹陷，使得其与周围区域持平或填充空腔，使得减小凹陷的深度或空腔的体积，或使得作为凹陷的区域现在相对于该凹陷邻近周围的区域升高。

如本文所使用，“免疫原性的”或“免疫原性”是指物质、化合物、分子等(被称为“抗原”)在主体中引发免疫应答的能力。

如本文所使用，“外源的”是指来自主体或供体(包括它们的细胞和组织)之外的化合物、物质或分子。

如本文所使用，“内源的”是指源自主体或供体(包括它们的细胞或组织)内的化合物、物质或分子。

如本文所使用，“生物活性的”是指与主体中的任何细胞或组织或其他生物途径相互作用或引起对其的作用的材料、化合物或其他分子。

如本文所使用，“生理溶液”是指与组织液、血液或细胞约等渗的溶液。

如本文所使用，“供体”是指细胞或组织来源的主体。

如本文所使用，“浆料”是指来自任何本文描述的方法的所得产物。因此，所述浆料可以呈由本文描述的处理导致的任何形式，包括但不限于，脱水浆料或组织、糊状物、粉末、溶液、凝胶、油灰、微粒等。

如本文所使用，“细胞外基质”是指为细胞提供支持功能的细胞周围的非细胞组分，所述支持功能包括结构、生物化学和生物物理支持，包括但不限于，提供营养物、充当支架用于结构支持和对于细胞过程诸如生长、分化和内环境稳定发送生物线索或对生物线索响应。

如本文所使用，“完整的细胞外基质”是指具有存在的所有组分(蛋白、肽、蛋白聚糖等)的细胞外基质，且可以包括或可以不包括嵌入细胞外基质中的其他细胞。

如本文所使用，“脱细胞的细胞外基质”是指已经处理以去除嵌入细胞外基质内的任何细胞的完整的细胞外基质。

如本文所使用，“细胞外基质组分”是指特定组分。通过非限制性实例的方式，细胞外基质组分可以是与其他细胞外组分分开或分离的特定类的组分(例如蛋白聚糖)或单独组分(例如胶原蛋白I)。可以合成制备这些组分。

如本文所使用，“水凝胶”是指水中分散的亲水聚合物链的网络。“水凝胶”也包括作为胶态凝胶发现的水中分散的亲水聚合物链的网络。

如本文所使用，“自组装肽”是指经历自发组装成有序纳米结构的肽。“自组装肽”包括二肽、乐高肽(legopeptides)、表面活性剂肽、分子油漆或地毯肽(molecularpaintorcarpetpeptides)和环肽。

讨论

尽管软组织植入物和移植物具有许多应用，但用于收获和制备软组织用于植入的目前方法是相对粗糙和苛刻的，重要地，导致关键蛋白和其他分子的损失。在典型同种异体移植物收获和加工过程中，根据标准外科手术程序制备供体且由外科手术人员回收期望的各种组织。通常在进一步处理之前培养回收的组织(其为组织移植物)以测定细菌污染的水平。一些组织可以在培养中维持以保留组织的活力。

如果，培养之后，软组织植入物/移植物对于致命生物体(包括但不限于，梭状芽胞杆菌属种、肠球菌或真菌)是阳性的，则丢弃组织移植物。然而，该培养方法在测定细菌污染中不是完全可靠的。进行对供体的其他测试，诸如针对HIV、乙型肝炎和丙型肝炎以及梅毒的血液测试，以测定收获的同种异体移植物的安全性。甚至这些方法不是完全可靠的。

因此，通常将同种异体移植物进一步灭菌，以便将微生物污染降低至小于约10^-3个微生物。典型的灭菌方法包括，但不限于，洗涤与或不与加压的组合，离心与各种化学品诸如醇和/或洗涤剂的组合，以及组合抗生素与低剂量辐射。尽管这些加工方法降低微生物污染的量，但它们也可以破坏组织移植物，且导致许多胞内蛋白和分子的损失。

一方面，胞内蛋白和分子的去除是良好的，在于其降低同种异体移植物的免疫原性。免疫原性降低，因为在严格的洗涤步骤(其通常包括裂解细胞)期间将免疫原性胞外组分(例如驻留于细胞膜中/上的蛋白、脂蛋白和其他免疫原性分子)洗走。然而，洗涤和裂解也导致细胞的胞内组分(例如，细胞内含有的蛋白、DNA、RNA、肽和其他分子)的损失。这些内源性胞内组分中的一些(诸如生长因子蛋白)的损失，可以不利影响同种异体移植物的性能和其并入周围组织。完整细胞或未脱细胞的组织移植物的同种异体移植是不成功的，这是由于完整细胞和细胞化组织具有免疫原性。这些同种异体移植物很少成功，且通常要求受体采用免疫抑制剂以维持同种异体移植物。

考虑到现有方法用于制备软组织植入物和移植物的这些问题和限制，本公开提供制备软组织植入物的方法，其中去除所述细胞的免疫原性部分，且将胞内组分的至少一部分保留且加工为软组织植入物。本文描述的方法特别适合于处理收获的脂肪组织和细胞，以及体外培养的脂肪组织和细胞。具体地，本文描述的方法允许收集脂肪细胞的内源性胞内组分且将这些组分并入软组织植入物、移植物和填料用于许多重构和外科手术修复技术。

在一个实施方案中，软组织植入物含有脂肪细胞的生物活性的胞内组分和载体基材，其中所述软组织植入物通过以下制备：从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分和将生物活性的胞内组分与载体基材组合。在一些实施方案中，所述软组织植入物可以直接施用于有需要的主体。

在其他实施方案中，所述软组织植入物是应用于第二软组织植入物的第一软组织植入物。第一软组织植入物可以应用于第二软组织植入物，而所述第二软组织植入物在所述第二软组织植入物的受体之外(先体外后体内)。在其他实施方案中，在所述第二软组织植入物已经植入受体(原位)之后，所述第一软组织植入物可以应用于第二软组织植入物。

因此，还提供了通过本文描述的方法产生的软组织植入物、移植物和填料。还提供了用于含有和/或递送通过本文描述的方法产生的软组织植入物、移植物和填料的设备和含有本文描述的软组织植入物、移植物、填料和/或设备的试剂盒。本文描述的方法、软组织植入物、移植物、填料、设备和试剂盒为目前的软组织移植物提供了几个优点，至少在于它们并入内源性胞内组分，同时尽可能降低软组织植入物的免疫原性。

在检查以下附图、详述和实施例之后，本公开的其他组合物、化合物、方法、设备、系统、特征和优点对于本领域普通技术人员将是显而易见或变得显而易见。意欲所有此类额外组合物、化合物、方法、特征和优点包括于本说明书内，且在本公开的范围内。

公开的实施方案的讨论以图1开始，图1是流程图，其说明用于收获软组织细胞、特别是脂肪细胞和收集内源胞内组分中的一种或多种的方法的实施方案。简而言之，该方法涉及从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分和将生物活性的胞内组分与载体基材组合以形成组合的生物活性的胞内组分-载体基材。在一些实施方案中，将组合的生物活性的胞内组分-载体基材施用于有需要的主体。本文描述的方法产生含有脂肪细胞的生物活性的胞内组分的软组织植入物。

该方法在一个实施方案中通过经由合适方法100从来自供体的软组织或从体外细胞或组织培养物收获细胞开始。合适的收获方法通常是本领域已知的，并且包括，但不限于，吸取、刮擦、解剖和本领域已知的其他外科手术技术。在一个实施方案中，以如医师测定的期望形状和量切取组织。决定待切取的组织的形状和量的因素包括供体组织的生理状况和需要的移植物的大小。在一些实施方案中，在环境温度下收获所述组织或细胞。在其他实施方案中，在低于环境温度的温度收获所述组织或细胞。在进一步实施方案中，在低至约-210℃的温度收获所述组织或细胞。

在实施方案中，可以将组织切碎、切割、研磨和/或切成微粒。在这些实施方案的一些中，所述微粒在一个平面中比另一个平面中长约1.5倍。在一些实施方案中，这些微粒的延长形状可以改善植入物并入周围组织，周围组织的重塑，和植入后的组织生长。这可以是由于延长植入物微粒的表面积的增加，其可以促进血管形成。

切割、切碎和研磨可以进一步有助于将组织分离成不同组分，以便进一步使从所述组织分离容易，其允许基于密度分离所述组分。在一些实施方案中，为了获得组织的特定组分(例如，脂肪或胶原蛋白)，将收获的组织切割、切碎、研磨或以其他方式机械地操作，且基于它们的密度分离出所述组分。在一些实施方案中，通过该方法从另一组织(例如肌肉)内获得脂肪组织或细胞。细胞的胞内内容物的概况可以基于其中细胞驻留的环境而变化。因此，在一些实施方案中，脂肪细胞源自组织间(另一组织内或散布于另一组织内)脂肪组织，与间质性脂肪组织（其不散布于另一组织内）相反，以获得最终植入物产物中的特定胞内内容物概况。

软组织包括，不是骨骼的任何组织或器官，包括但不限于脂肪组织、肌肉、软骨、肌腱和韧带。在一个实施方案中，收获的细胞是脂肪细胞。所述软组织在起源上可以是自体、同种异体、异种或同系的。为了尽可能降低免疫原性，使用自体细胞是最有利的。换言之，优选从接受软组织植入物的主体直接或间接(即从含有来自接受植入物的主体的细胞的体外培养物)获得收获的细胞。在一个实施方案中，收获自体脂肪细胞。在其他实施方案中，所述组织或细胞是同种异体的。

如前面提到，在一些实施方案中，使用本领域通常已知的合适的细胞培养方法将收获的软组织的细胞在体外培养一定量时间。普通技术人员将理解，培养条件将根据细胞类型而变化。在一些实施方案中，将来自脂肪组织的细胞在体外培养约1天至约6个月。在一些实施方案中，如前所述收获培养的细胞100。在一个实施方案中，从供体收获脂肪细胞且在体外培养，直至如前所述收获100。

在一些实施方案中，将收获的细胞悬浮于生理溶液中。合适的生理溶液包括，但不限于，盐水(约0.9%w/v)、磷酸盐缓冲盐水、Ringer氏溶液、Tris缓冲盐水和HEPES(2-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸)-缓冲盐水。在一些实施方案中，生理溶液中的收获的细胞的浓度范围为约1X10²个细胞/mL至约1x10¹⁰个细胞/mL。

接下来，在一些实施方案中，将收获的细胞裂解101a以释放内源性胞内组分。细胞裂解之后，生成细胞裂解物，其含有裂解的细胞膜、胞内内容物、生理溶液(如果存在的话)和用于裂解细胞的溶液。胞内组分包括，但不限于，蛋白(包括酶促蛋白和非酶促蛋白)、蛋白复合物、核酸、脂质、脂肪酸、氨基酸、肽、单糖、碳水化合物、矿物质、维生素、离子(例如钾、钠、氯离子、碳酸氢根、镁和钙)、激素和生长因子(其可以是蛋白或其他类型的分子或大分子本身)。胞内组分的实例包括，但不限于aFGF、bFGF、VEGF、TGFB1、ANG、IGF等。裂解可以通过机械、化学和/或生物学方法发生。机械方法包括，但不限于，热解、微流体、超声波、电击、混合、磨碎、珠击(beadbeating)、均质化、弗氏压碎(frenchpress)、冲击、应用过量剪切力、压力或真空力、或其组合。

对于一些实施方案，热解包括冷冻、冻融循环和加热以破坏细胞膜。在其他实施方案中，微流体包括渗透压休克或皱缩。裂解的超声方法包括但不限于，超声处理、声孔处理、声化学、声致发光和声空化。裂解的电休克方法包括但不限于，电穿孔和将细胞暴露于高电压和电流源(amperagesources)。细胞裂解的磨碎或珠击方法涉及将细胞与物体或彼此物理碰撞或研磨，以打破细胞膜。在一些实施方案中，通过经由高rpm的小孔径离心的强力吸移(aggressivepipetting)诱导过量剪切力压力，其导致高重力应用于细胞、湍流或者将真空应用于细胞，使得剪切开细胞膜。

在其他实施方案中，利用化学方法以裂解细胞。在这些实施方案的一些中，细胞在暴露于洗涤剂、溶剂、表面活性剂、溶血或其组合之后裂解。暴露于洗涤剂和/或溶剂也可以破坏细胞膜且去除细胞周围的脂质屏障。进一步，暴露于洗涤剂、表面活性剂和溶血素还可以有助于去除细胞溶液中可以存在的其他碎片。在其他实施方案中，细胞由于通过暴露于酸性(pH小于7)、碱性(pH大于7)或中性溶液(pH等于7)诱导的pH失衡而裂解。在额外实施方案中，将额外离子，诸如钠、钾和钙，添加至生理溶液，以改变溶液的摩尔渗透压浓度，使得其不再是等渗的。实例包括，但不限于，水、triton、过氧化物、抗生素和其他降低生物负荷的溶液。

在进一步实施方案中，使用生物方法或工艺裂解细胞。在一些实施方案中，将细胞与裂解细胞膜的酶(诸如溶菌酶、甘露聚糖酶、蛋白酶、脂质酶(lipidases)、聚糖酶或其组合)接触。在其他实施方案中，利用病毒来裂解细胞膜。

用图1继续，当释放内源性胞内组分时，收集至少一些101b。在一些实施方案中，将基本上所有胞内组分与细胞膜组分分离且收集。在其他实施方案中，收集胞内组分的子集。在这些实施方案中，收集期望的胞内组分，且使用合适的分离技术将其与细胞膜片段的剩余部分和/或其他胞内组分分开。在这些实施方案中，当在裂解过程中获得胞内组分的选择性子集时，步骤101a和101b被统称为选择性裂解。在一些实施方案中，分离的胞内组分用于本文描述的方法的随后步骤中。在其他实施方案中，裂解物中的剩余胞内组分用于本文描述的方法的随后步骤中。在任一情况下，含有期望胞内组分的部分被称为步骤的剩余部分中的内源性胞内组分。

在一些实施方案中，使用层析技术分离期望的胞内组分。合适的层析技术包括但不限于，大小排阻层析、离子交换层析、膨胀床吸附层析、亲和层析(包括但不限于超临界流体层析)、置换层析、气相层析、液相层析、柱层析、平面层析(包括但不限于纸层析、薄层层析)、反相层析、模拟移动床层析、热解气相层析、快速蛋白液相层析、高效液相层析、超高效液相层析、反流层析和手性层析。

在其他实施方案中，使用免疫分离技术分离期望的胞内组分。在这些实施方案中，利用对于特定胞内组分特异性的抗体来结合期望的胞内组分。然后可以使用本领域已知的抗体纯化方法将抗体-胞内组分复合物与裂解物的剩余部分分离。在一些实施方案中，通过使裂解物暴露于免疫球蛋白亲和柱将抗体-胞内组分复合物与裂解物分离。在其他实施方案中，所述抗体是与磁性化合物或离子的复合物。在这些实施方案中，使用磁场将抗体-胞内组分复合物与复合物分离。从裂解物分离之后，可以使用本领域通常已知的技术将抗体与胞内组分分离。

在其他实施方案中，将裂解物溶液暴露于具有带电表面的基材。合适的基材包括，但不限于，离子树脂、陶瓷、矿化组织、脱矿物质组织、软组织、金属、塑料、聚合物及其组合。这些基材的表面可以固有地携带电荷或被配置为使得它们携带电荷。所述基材的表面可以携带正或负电荷。基材的带电表面吸引了裂解物中存在的带相反电荷的胞内组分。

用图1继续，在步骤102中确定是否中和裂解物或分离的胞内组分。在一些实施方案中，在步骤103中中和所述裂解物或胞内组分。在这些实施方案中，将含有分离的期望的胞内组分的裂解物或溶液的pH调节至约6至约8。在一个实施方案中，将含有分离的期望的胞内组分的裂解物或溶液的pH调节至约7。在一个非限制性实例中，HCL或乙酸可以任选地用于使溶液更酸性，或者NaOH或缓冲剂(如PBS)可以中和溶液或使其更碱性。

在一些实施方案中，在步骤103中中和含有分离的期望的胞内组分的裂解物或溶液或在步骤102中确定不中和含有分离的期望的胞内组分的裂解物或溶液之后，在步骤104中确定是否储存内源性胞内组分浆料。在其中储存内源性胞内组分浆料的实施方案中，通过合适的方法储存该浆料用于随后在步骤106中使用。在这些实施方案的一些中，将该浆料脱水(部分或完全)。脱水浆料可以切割成期望的形状和大小。例如，脱水浆料可以是不规则的，或约球形、矩形、三角形或片状。本领域普通技术人员将理解，脱水浆料的期望的形状和大小将取决于多种因素，包括但不限于，植入物用途和植入的位置。在其他实施方案中，将该浆料冻干。在一些实施方案中，将浆料、脱水浆料或冻干浆料置于合适的容器中。在一些实施方案中，该容器是气密性的。在其他实施方案中，该容器可以承受冷冻。

在一些实施方案中，该容器含有关于供体来源、批号、其中含有的胞内组分的信息和/或标识或以其他方式表征内源性胞内组分浆料的其他信息。在进一步实施方案中，将浆料、脱水浆料或冻干浆料储存在约4℃至约-209℃。该浆料可以在使用前储存长达约5年。在一些实施方案中，在储存之前将额外化合物添加至浆料。合适的化合物包括，但不限于，防腐剂、冷冻保护剂、稀释剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、蛋白酶抑制剂或其组合。

在一些实施方案中，在步骤107中确定是否使用储存的浆料。在其中确定使用储存的浆料的一些实施方案中，在图2中的步骤202中使用储存的浆料。在其他实施方案中，在图3的步骤302中使用储存的浆料。

在其中在步骤104中确定不储存浆料的实施方案中，在步骤105中确定是否直接使用含有内源性胞内组分的浆料作为填料用于植入主体中。如果决定直接使用浆料作为填料，则将浆料作为填料植入主体。在一些实施方案中，在用作填料之前将额外组分添加至浆料。合适的化合物包括，但不限于，防腐剂、稀释剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、化疗剂、免疫调节剂(包括免疫抑制剂)、化学引诱物、生长因子、抗凝血剂或其组合。

在一些实施方案中，在已经由医师确定的需要填料的位置将浆料植入主体。除了为植入部位提供体积之外，该填料可以有助于将化合物诸如生长因子和细胞因子招募至植入部位。这有利于现有细胞的生长和发育，且刺激新细胞在植入部位的生长和发育。因此，当该填料被机体吸收时，主体的自身细胞留在原处(inplace)以拉平皮肤中的凹陷。在一个非限制性实例中，皮肤科医生或重构医师确定使用填料以便将物质添加至皮肤中的凹陷(例如皱纹)以拉平皮肤表面且将填料施用于皮肤中的凹陷。

在进一步实施方案中，将填料施用于主体中已经在原处具有组织植入移植物的位置，或者在相同程序过程中添加至组织移植物被植入主体的组织移植物的部位。如前所述，该填料可以有助于将化合物诸如生长因子和细胞因子招募至植入部位。这有利于区域中的现有细胞的生长和发育和植入部位的新细胞的生长和发育。该方法也增强组织移植物整合至周围组织，其改善组织移植物的性能。

在其中确定不使用浆料作为填料的一些实施方案中，可以在图2的步骤205或206中使用浆料。在其他实施方案中，可以在图3的步骤305或306中使用浆料。在一些实施方案中，在步骤205、206、305或306中使用之前，将额外化合物添加至浆料。合适的化合物包括，但不限于，防腐剂、稀释剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、化疗剂、免疫调节剂(包括免疫抑制剂)、化学引诱物或其组合。

在生成浆料过程中，将脂肪细胞的疏水组分与脂肪细胞的亲水组分分离。根据先前描述的步骤，该浆料仅含有亲水组分。然而，在一些实施方案中，例如其中期望增加的润滑性，可以将疏水组分中的一些添加回浆料。

现在注意图2，其为说明将图1的储存或未储存的浆料并入载体基材的方法的一个实施方案的流程图。如先前所讨论，该浆料含有一种或多种胞内组分，其可以增强软组织移植物或植入物的性能。关于图2讨论的实施方案涉及在载体基材中并入胞内组分，然后可以将其施用于有需要的主体。在一些实施方案中，分离载体基材连同浆料。换言之，生成浆料，使得其含有载体基材以及胞内生长因子和其他亲水组分。在其他实施方案中，该浆料不含载体基材。在任一情况下，可以如下所述将载体基材添加至浆料。

在一些实施方案中，该载体基材进一步增强软组织移植物或植入物的性能。例如，该载体基材可以是支架，其提供细胞生长和发育的环境。合适的载体基材包括但不限于，同种异体、自体、同系或异种的完整细胞外基质，脱细胞的胞外基质，或胞外基质组分，诸如水凝胶、合成或天然的聚合物固体和半固体、碳水化合物、自组装肽、碳纳米管、壳聚糖、藻酸盐、透明质酸、骨粉、软骨粉、蛋白、糖、塑料、金属或其组合。在一些实施方案中，该载体基材是生物相容的。在实施方案中，该载体基材通过本领域通常已知的方法制备用于使用200。在一些实施方案中，该载体基材已经准备用于使用，且制备是不必要的。在一些实施方案中，浆料与载体基材的比率范围为约1:1v/v至约10:1v/v。在其他实施方案中，浆料与载体基材的比率范围为约1:1v/v至约1:100v/v。

制备载体基材200之后，确定是否使用储存106(图1)或未储存(新鲜)105的(图1)浆料201。在其中决定使用储存的浆料的实施方案中，制备来自步骤106(图1)的储存的浆料用于在步骤202中使用。在一些实施方案中，储存的浆料的制备包括解冻浆料。在其他实施方案中，储存的浆料的制备包括再水化浆料。如果该浆料在使用前不再水化，则在引入主体的机体之后，当其接触机体内的生物流体时，其变得再水化。在进一步实施方案中，除了将储存的样品从储存中取用以外，制备方法不需要额外制备储存的样品。制备储存的浆料202之后，然后使用合适的方法将制备的浆料与载体基材组合203。

在其中决定不使用储存的浆料的实施方案中，在步骤204中确定是否进一步处理来自步骤105的新鲜浆料(图1)。在其中确定进一步处理来自步骤105(图1)的新鲜浆料的实施方案中，进一步处理该浆料206。该浆料可以通过过滤、浓缩、稀释和/或用额外化合物强化进一步处理，所述额外化合物诸如防腐剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、化疗剂、免疫调节剂(包括免疫抑制剂)、化学引诱物或其组合。

进一步处理206之后，将进一步处理的浆料与制备的载体基材组合207。然后可以将含有浆料的载体基材植入有需要的主体。在一些实施方案中，在已经由医师确定的有需要的位置将含有浆料的载体基材植入主体。除了为植入部位提供体积之外，该含有浆料的载体基材可以有助于将化合物诸如生长因子和细胞因子招募至植入部位。这有利于现有细胞的生长和发育，且刺激新细胞在植入部位的生长和发育。因此，当载体基材和/或浆料被机体吸收时，主体的自身细胞留在原处以拉平皮肤中的凹陷。在一个非限制性实例中，皮肤科医生或重构医师确定使用含有浆料的载体基材以便将物质添加至皮肤中的凹陷(例如皱纹)以拉平皮肤表面且将含有浆料的载体基材施用于皮肤中的凹陷。

在进一步实施方案中，将含有浆料或其组分的载体基材施用于主体中已经在原处具有组织植入物的位置，或者在相同程序过程中添加至组织移植物被植入主体的组织移植物的部位。在其他实施方案中，可以在植入组织移植物之前将含有浆料的载体基材添加至组织移植物。如前所述，含有浆料的载体基材可以有助于将化合物诸如生长因子和细胞因子招募至植入部位。这有利于区域中的现有细胞的生长和发育和植入部位的新细胞的生长和发育。该方法也增强组织移植物整合至周围组织，其改善组织移植物的性能。

在其中确定不进一步处理来自步骤105(图1)的新鲜浆料的实施方案中，如先前所述将新鲜浆料与载体基材组合205。如前关于处理的新鲜浆料所述，可以将组合的载体基材/浆料施用于有需要的主体。

现在转向图3，其显示说明将图1的储存或未储存的浆料并入软组织移植物的方法的实施方案的流程图。如先前所讨论，该浆料含有一种或多种胞内组分，其可以增强软组织移植物的性能。该方法以制备软组织移植物300开始。在一些实施方案中，该软组织移植物从供体收获。该软组织移植物可以是同种异体、自体、同系或异种的。在其他实施方案中，该软组织移植物获得自通过体外或先体外后体内培养开发或维持的软组织移植物。在一些实施方案中，将该软组织移植物清洗、消毒和/或脱细胞。在一些实施方案中，该软组织移植物准备使用，且不需要制备步骤。

制备软组织移植物300之后，确定是否使用储存106(图1)或未储存(新鲜)105(图1)的浆料201。在其中决定使用储存的浆料的实施方案中，制备来自步骤106(图1)的储存的浆料用于在步骤302中使用。在一些实施方案中，储存的浆料的制备包括解冻浆料。在其他实施方案中，储存的浆料的制备包括再水化浆料。如果该浆料在使用前不再水化，则在引入主体的机体之后，当其接触机体内的生物流体时，其变得再水化。在进一步实施方案中，除了将储存的样品从储存中取用以外，制备方法不需要额外制备储存的样品。

制备储存的浆料302之后，使用合适的方法将制备的浆料与软组织移植物组合303。在一些实施方案中，在主体中移植软组织移植物之前，将浆料与软组织移植物组合。在其他实施方案中，在软组织移植物已经位于主体内之后，将浆料与软组织移植物组合。

在其中决定不使用储存的浆料的实施方案中，确定是否进一步处理来自步骤105的新鲜浆料(图1)。在其中确定进一步处理来自步骤105(图1)的新鲜浆料的实施方案中，在步骤306中进一步处理该浆料。该浆料可以通过过滤、浓缩、稀释和/或用额外化合物强化进一步处理，所述额外化合物诸如防腐剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、化疗剂、免疫调节剂(包括免疫抑制剂)、血管生成化合物、血管形成的化学引诱物或其组合。

在步骤306中进一步处理之后，在步骤307中将进一步处理的浆料与制备的软组织移植物组合。在一些实施方案中，在主体中移植软组织移植物之前，将浆料与软组织移植物组合。在其他实施方案中，在软组织移植物已经位于主体内之后，将浆料与软组织移植物组合。

在其中确定不进一步处理来自步骤105(图1)的新鲜浆料的实施方案中，将新鲜浆料与软组织移植物组合305。在一些实施方案中，在主体中移植软组织移植物之前，将浆料与软组织移植物组合。在其他实施方案中，在软组织移植物已经位于主体内之后，将浆料与软组织移植物组合。

理解产生含有胞内组分的浆料、与含有胞内组分的浆料组合的软组织植入物和移植物的方法的实施方案，注意图4，其显示含有浆料或组合浆料和载体基材401的递送设备400的一个实施方案，如根据本文描述的实施方案产生。递送设备400含有尖端402，所述尖端402机械连接至中空容器407。在一些实施方案中，尖端402是锥形的。尖端402的开口可以范围为约7gauge至约34gauge。在一些实施方案中，尖端402的开口是有斜面的。在其他实施方案中，尖端402的开口是齐平的。在一些实施方案中，尖端402被配置为机械地锁定至中空容器407上。

中空容器407被配置为容纳浆料或组合的浆料和载体基材401。在一些实施方案中，中空容器407被配置为容纳约0.1cc至约1000cc的浆料或与载体基材组合的浆料。在一个实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约1cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在另一个实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约5cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在又进一步实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约10cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在又进一步实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约20cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在其他实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约50cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在又其他实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约100cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在进一步实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约500cc的浆料或浆料/载体基材混合物。在其他实施方案中，中空容器407被配置为容纳多达约1000cc的浆料或浆料/载体基材混合物。

在一个实施方案中，中空容器连接至把手403，所述把手403由第一握把406和触发部402构成。可移动柱塞404被机械地连接至把手403和中空容器407。可移动柱塞404延伸通过把手403且进入尖端402对面的中空容器407的末端。可移动柱塞404被配置为将正压或负压应用于中空容器和其中含有的内容物。在中空容器对面的末端，所述可移动柱塞含有第二握把405。

在一些实施方案中，通过将压力应用于第二握把405和朝向把手403推动第二握把405而将正压应用于中空容器。在其他实施方案中，挤压扳机408。配置扳机408，使得当挤压扳机408时其将正压应用于柱塞上。当将压力应用于第二握把405或扳机408且中空容器407内侧的柱塞末端移动更靠近尖端402时，这从设备400排出浆料或组合的浆料和载体基材401。通过在第二握把405上牵拉和将第二握把405牵拉远离把手403而应用负压。这将中空容器407内侧的可移动柱塞404的末端移动更靠近把手403且远离尖端402。负压将内容物牵拉入中空容器407中。在进一步实施方案中，配置递送设备400，使得正或负压由机器生成，而不是人类用户。

图5显示含有如根据本文描述的方法产生的浆料或组合的浆料和载体基材501的递送设备500的另一个实施方案。递送设备500含有尖端503，所述尖端503机械连接至中空容器502。在一些实施方案中，尖端503是锥形的。尖端503的开口可以范围为约7gauge至约34gauge。在一些实施方案中，尖端503的开口是有斜面的。在其他实施方案中，尖端503的开口是齐平的。在一些实施方案中，尖端503被配置为机械地锁定至中空容器503上。例如，机械锁可以是卢尔锁(luerlock)。

中空容器502被配置为容纳浆料或组合的浆料和载体基材501。在一些实施方案中，中空容器502连接至脊部506，所述脊部506形成用于用户手指507的握把，如图5所示。可移动柱塞504被机械地连接至中空容器502。可移动柱塞504延伸通过尖端503对面的中空容器502的一个末端。可移动柱塞504被配置为将正压或负压应用于中空容器502和其中含有的内容物。在中空容器502对面的末端，可移动柱塞504含有拇指托(thumbrest)508。

在一个实施方案中，正压通过对拇指托508的压力应用于中空容器502，因此，将柱塞504进一步压入中空容器502。在一些实施方案中，用户在两个或更多个手指507之间握住设备500。一个手指507，例如拇指，可以置于拇指托508上，而一个或多个其他手指507可以置于脊部506下的中空容器502的任一侧，如图5中所示。通过将拇指507更靠近脊部506下的其他手指507而将正压应用于中空容器502。这压下柱塞504，且在中空容器502上生成正压。可以通过在柱塞504上拉回而应用负压。正压排出中空容器502的内容物501，且负压将内容物引入中空容器502。在一些实施方案中，正压的应用将中空容器502的内容物501排出进入有需要的主体505。在进一步实施方案中，配置递送设备500，使得正或负压由机器生成，而不是人类用户。例如，在一些实施方案中，将递送设备500装载入机器，其含有将正压应用于可移动柱塞504的部分。此类机器的实例是本领域已知的。

本文还提供了含有脂肪细胞的生物活性的胞内组分的软组织植入物。在一些实施方案中，该软组织植入物为浆料。在一个实施方案中，该浆料源自收获自体外培养的脂肪细胞的脂肪细胞或直接收获自组织的脂肪细胞。在其他实施方案中，该浆料源自其他类型的软组织细胞。此类细胞包括，但不限于，肌肉、上皮细胞、肌腱和韧带。浆料中含有的胞内组分包括但不限于蛋白(结构和非结构蛋白两者)、核酸、脂质、碳水化合物和其他分子。在一些实施方案中，该浆料含有富集或浓缩量的这些内源性胞内组分。在一些实施方案中，选择性裂解供体细胞，如先前所述，使得该浆料选择性含有生长因子，特别是血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β1(TGFb1)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)、胰岛素样生长因子(IGF)。

如先前所讨论，可以将根据本文描述的方法制备的有效量的浆料作为填料施用于有需要的主体。在一些实施方案中，将浆料配置为糊状物。在其他实施方案中，有效量的浆状物已经可以含有如前所述的载体基材和/或与如前所述的载体基材组合，且该组合然后可以施用于有需要的主体。在进一步实施方案中，可以在放置软组织移植物(而非已经并入浆料的软组织移植物)之后施用有效量的浆料。在其他实施方案中，可以在植入之前将有效量的浆料直接先体外后体内并入软组织移植物(其不是浆料或浆料/载体基材本身)。有效剂量可以是约1mL至1000ml。

本文描述的浆料(包括含有载体基材的那些)、植入物和移植物以及递送设备可以作为组合试剂盒呈现。如本文中使用，术语“组合试剂盒”或“部件试剂盒(kitofparts)”是指浆料、植入物和移植物以及递送设备和用于包装、出售、销售、递送和/或施用其中含有的元件的组合或单一元件(诸如活性成分)的额外组分。此类额外组分包括但不限于，包装、注射器、泡罩包装(blisterpackages)、瓶子等。在一个实施方案中，所述试剂盒包含含有脂肪细胞的生物活性的胞内组分和载体基材的软组织植入物。在一些实施方案中，试剂盒中含有的软组织植入物通过这样的方法生成，所述方法涉及从供体收获脂肪细胞，选择性裂解脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分，和将生物活性的胞内组分与载体基材组合。

在一些实施方案中，所述组合试剂盒还包括在实体表达媒介上印刷或实体表达媒介以其他方式含有的说明书。说明书可以提供关于其中含有的化合物或药物制剂的内容的信息，关于其中含有的浆料、植入物、移植物和递送设备的内容的安全信息，关于剂量、使用适应症和/或其中含有的浆料、植入物、移植物和递送设备的推荐治疗方案的信息。在一个实施方案中，所述说明书提供了用于将软组织植入物作为填料或作为植入主体的组织移植物的部件施用于有需要的主体的指导。在一些实施方案中，所述说明书提供了用于将浆料、植入物和移植物施用于有需要的主体的指导。使用适应症包括但不限于引入同种异体细胞或其他异物引起的其他软组织植入物(例如软组织(即，乳房)、血管(即，支架)，或关节植入物)之后纤维囊形成的降低，植入物诱导的炎症的降低，改善植入物整合入周围组织，改善皮肤的质量和着色，或皮肤或其他软组织中的凹陷的修复。

实施例

现在已经描述了本公开的实施方案，通常，以下实施例描述本公开的一些额外实施方案。尽管结合以下实施例和相应的文字和附图描述本公开的实施方案，但不意欲将本公开的实施方案限于本说明书。相反，意欲覆盖本公开的实施方案的精神和范围内包括的所有替代方案、修改和等同方案。

实施例1：含有脂肪来源的细胞内化合物的软组织植入物中的增加的生长因子。

介绍

根据本文描述的方法制备的软组织植入物含有胞内组分，包括生长因子诸如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和转化生长因子β1(TGFb1)。为了评价本文描述的软组织植入物的生长因子含量，根据本文描述的方法收获和处理脂肪来源的细胞内内容物，且应用于细胞外基质。该组合物在本实施例中被称为LipoAmp。将LipoAmp与对照软组织植入物的生长因子含量进行比较，所述对照软组织植入物如Brown,等人2011.TissueEng.PartC,17:411-423中所述。

材料和方法

简言之，从主体的真皮层分离皮下脂肪。将收获的皮下脂肪经由混合器研磨以机械破坏细胞结构，以形成亲水和疏水组分的混合物。亲水和疏水组分基于其浮力彼此分离。丢弃尤其含有脂质的疏水部分。将乙酸(高至50%v/v，例如约25%v/v)添加至亲水级分。进行添加直至1MHCl的任选步骤。此处，将0.6NHCl添加至亲水级分。必要时，所得溶液然后在磷酸盐缓冲盐水或NaOH中中和。经由离心去除过量液体。

结果

本实验的结果显示于图6，其表明与脂肪来源的细胞内化合物组合的载体基材(“LipoAmp”)与对照相比增加的生长因子含量。生长因子的浓度(pg/g的植入物)显示于y轴上。生长因子显示于x轴上。如本文描述的软组织植入物组合物具有较大量的VEGF、bFGF和TGFb1。

实施例2：在体内与天然组织相比增加的脂肪来源的软组织植入体积。

介绍

在体内检查根据本文描述的方法制备和施用的软组织植入物(“LipoAmp”)对植入后的植入体积的影响。

材料和方法

如先前实施例1中所述制备LipoAmp。

结果

图7中表明本实验的结果。如图7所表明，尽管Lipoamp植入物和对照在约4周时维持约相同体积，但两种植入物的性能不同。经第5周至第8周，Lipoamp植入物使体积维持在实验开始时存在的体积约8％。相反，对照植入物经第5周至第8周体积稳定减小。

实施例3：含有脂肪来源的细胞内化合物的软组织植入物在体内诱导异位脂肪生成

介绍

在体内检查根据本文描述的方法制备和施用的软组织植入物(“LipoAmp”)对脂肪生成的影响。

材料和方法

为了生成LipoAmp，从主体的真皮层分离皮下脂肪。将收获的皮下脂肪经由混合器研磨以机械破坏细胞结构，以形成亲水和疏水性组分的混合物。亲水和疏水组分基于其浮力彼此分离。丢弃尤其含有脂质的疏水部分。将乙酸(高至50%v/v，例如约25%v/v)添加至亲水级分。进行添加直至1MHCl的任选步骤。此处，将0.6NHCl添加至亲水级分。必要时，所得溶液然后在磷酸盐缓冲盐水或NaOH中中和。经由离心去除过量液体。然后将LipoAmp施用于主体。

结果

本实验的结果显示于图8A和8B。如图8B中表明，从所述植入物诱导脂肪生成。

Claims (20)

1.软组织植入物，其包含：

脂肪细胞的生物活性的胞内组分；和

载体基材，其中所述软组织植入物通过包括以下的方法制备：

从供体收获脂肪细胞；

选择性裂解所述脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分；和

将所述生物活性的胞内组分与载体基材组合。

2.权利要求1的软组织植入物，其中所述生物活性的胞内组分是生长因子。

3.权利要求1的软组织植入物，其中所述供体选自自体供体、同种异体供体、异种供体和同系供体。

4.权利要求1的软组织植入物，其中选择性裂解的步骤进一步包括通过化学破碎或机械破碎选择性裂解所述脂肪细胞。

5.权利要求4的软组织植入物，其中所述化学破碎包括将所述脂肪细胞与溶液接触，所述溶液包含酸或碱。

6.权利要求1的软组织植入物，其中选择性裂解的步骤进一步包括将所述生物活性的胞内组分与其他脂肪细胞组分选择性分离。

7.权利要求1的软组织植入物，其中所述载体基材选自完整的细胞外基质、脱细胞的细胞外基质、细胞外基质组分、水凝胶、聚合物固体、聚合物半固体、碳水化合物、自组装肽、碳纳米管、壳聚糖、藻酸盐、透明质酸、骨粉、软骨粉、蛋白、糖、塑料、金属和其组合。

8.权利要求1的软组织植入物，其中所述生物活性的胞内内容物含于浆料中，且其中浆料与载体基材的比率为约1:1(v/v)至约1:100(v/v)。

9.方法，其包括：

从供体收获脂肪细胞；

选择性裂解所述脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分；和

将所述生物活性的胞内组分与载体基材组合以形成组合的生物活性的胞内组分-载体基材。

10.权利要求9的方法，其中所述生物活性的胞内组分是生长因子。

11.权利要求9的方法，其中所述供体选自自体供体、同种异体供体、异种供体和同系供体。

12.权利要求9的方法，其中选择性裂解的步骤进一步包括通过化学破碎或机械破碎选择性裂解脂肪溶液。

13.权利要求12的方法，其中所述化学破碎包括将所述脂肪细胞与溶液接触，所述溶液包含酸或碱。

14.权利要求9的方法，其中选择性裂解的步骤进一步包括将所述生物活性的胞内组分与其他脂肪细胞组分选择性分离。

15.权利要求9的方法，其中所述载体基材选自完整的细胞外基质、脱细胞的细胞外基质、细胞外基质组分、水凝胶、聚合物固体、聚合物半固体、碳水化合物、自组装肽、碳纳米管、壳聚糖、藻酸盐、骨粉、软骨粉、蛋白、糖、塑料、金属和其组合。

16.权利要求9的方法，其中所述生物活性的胞内内容物含于浆料中，且其中浆料与载体基材的浆料比率为约1:1(v/v)至约1:100(v/v)。

17.权利要求9的方法，其进一步包括将选自以下的化合物添加至所述胞内组分、载体基材或组合的生物活性的胞内组分-载体基材：防腐剂、抗生素、抗病毒剂、抗真菌剂、pH稳定剂、渗透稳定剂、抗炎剂、抗肿瘤剂、生长因子、血管生成化合物、血管形成性化合物、化疗剂、免疫调节剂、化学引诱物和其组合。

18.权利要求9的方法，其进一步包括将所述组合的生物活性的胞内组分-载体基材施用于有需要的主体。

19.试剂盒，其包含：

软组织植入物，其包含：

脂肪细胞的生物活性的胞内组分；和

载体基材，其中所述软组织植入物通过包括以下的方法生成：

从供体收获脂肪细胞；

选择性裂解所述脂肪细胞以获得生物活性的胞内组分；和

将所述生物活性的胞内组分与载体基材组合；和

实体表达媒介中含有的说明书，其中所述说明书提供用于将所述软组织植入物施用于有需要的主体的指导。

20.权利要求19的试剂盒，其进一步包含具有中空容器和柱塞的递送设备，其中所述柱塞机械地连接至所述中空容器，且其中所述递送设备被配置为在所述中空容器内含有软组织植入物。