CN105360117A

CN105360117A - 一种无公害杀蚜虫剂

Info

Publication number: CN105360117A
Application number: CN201510903386.1A
Authority: CN
Inventors: 巨云为; 严晓茹; 刘海燕; 曹霞
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2015-12-09
Filing date: 2015-12-09
Publication date: 2016-03-02

Abstract

本发明公开了一种无公害杀蚜虫剂，由百里酚1-7%、乙醇10-15%、水78-89%组成，各组分的质量分数之和为100%。本发明的无公害杀蚜虫剂，具有无毒、无残留、选择性高、易分解、害虫不易产生抗药性等特点。研究证实用百里酚处理后萝卜蚜体内的SOD活力在6h被显著诱导；处理后12h，POD活力被激活；处理后18h，SOD活力开始被抑制。百里酚对萝卜蚜成虫在24h的致死中浓度为0.07g/L；在48h的致死中浓度为0.04g/L；在72h的致死中浓度为0.02g/L；随着处理时间的延长，致死中浓度越来越低，表明百里酚具有持续毒性。

Description

一种无公害杀蚜虫剂

技术领域

本发明涉及杀虫剂技术领域，具体涉及一种无公害杀蚜虫剂。

背景技术

蚜虫是危害白菜、油菜、萝卜、花椰菜、芥兰等十字花科蔬菜的主要害虫之一。蚜虫在南方地区有的一年可发生数十代，除本身危害蔬菜外，还可传播病毒病，所造成的危害远远大于蚜虫本身的危害。蚜虫的这些寄主植物大多是人直接食用的，在防治这些植物上的蚜虫时不能使用对人有害的高毒农药。目前市场上使用一般的化学药剂防治蔬菜蚜虫易引起农药残留的问题，残留在蔬菜上的农药进入人体后会对人体健康产生不利影响，缺乏无公害杀蚜虫剂。

由于大多合成农药在使用中存在多种问题，植物源农药具有低毒、无残留、选择性高、易分解、害虫不易产生抗药性等特点。因此，植物源杀虫剂已成为国内外研究的重点和热点。百里酚又叫麝香草酚，具有特殊香气和甜的辛香风味。百里酚在唇形科植物百里香草、麝香草等和伞形科植物粗果芹种子中含量较高。百里香酚毒性很低，是我国《食品添加剂使用卫生标准》规定允许使用的食品香料之一，目前仅报道了百里香酚具有杀螨、杀菌等药理活性，尚无百里酚对萝卜蚜的毒力及作用机理方面的研究。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明提出一种无公害杀蚜虫剂，其具有无毒、无残留、选择性高、易分解、可食用、害虫不易产生抗药性等特点。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种无公害杀蚜虫剂：由百里酚1-7％、乙醇10-15％、水78-89％组成，各组分的质量分数之和为100％。

所述的无公害杀蚜虫剂，优选由百里酚3-5％、乙醇11-13％、水80-85％组成，各组分的质量分数之和为100％。

一种制备所述的无公害杀蚜虫剂的方法，先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。

所述的无公害杀蚜虫剂的施用方法：将杀蚜虫剂稀释20-30倍后，每亩使用30-35L进行喷雾，喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。

有益效果：与现有技术相比，本发明所述的无公害杀蚜虫剂，具有无毒、无残留、选择性高、易分解、害虫不易产生抗药性等特点。研究证实用百里酚处理后萝卜蚜体内的SOD活力在6h被显著诱导；处理后12h，POD活力被激活；处理后18h，SOD活力开始被抑制。百里酚对萝卜蚜成虫在24h的致死中浓度为0.07g/L；在48h的致死中浓度为0.04g/L；在72h的致死中浓度为0.02g/L；随着处理时间的延长，致死中浓度越来越低，表明百里酚具有持续毒性。

附图说明

图1是百里酚对谷胱甘肽-S转移酶活力的影响结果图；

图2是百里酚对过氧化物酶活力的影响结果图；

图3是百里酚对超氧化物歧化酶活力的影响结果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

供试虫源：在野外未用药防治过的田里采集萝卜蚜，室内鉴定后，用在室内培养的萝卜苗饲喂萝卜蚜，放在25℃、相对湿度80％的光照培养箱内饲养至第2代后备用。

药液配制：取5g百里酚溶解于无水乙醇，定容至50mL，配制成10％的溶液作为母液冷藏备用。触杀活性测定时分别取5、1、0.2、0.04、0.008mL母液，用蒸馏水定容至100mL，配制成5、1、0.2、0.04、0.008g/L的梯度浓度药液，对照为5％乙醇溶液。

1、触杀作用

触杀测定采用点滴法：先选取虫龄及大小一致的无翅萝卜蚜成虫作为试虫，用微量进样器将0.1μL的不同浓度的药液点滴在虫体的前胸背板上，每种处理3次重复，每重复虫数30头。将处理过的试虫用毛笔接在培养皿(直径9cm，内垫滤纸，加少量水保湿)中的新鲜萝卜叶(大小一致，叶柄用湿棉球包裹)上，每皿接30头虫，用保鲜膜封口，昆虫针扎洞，然后将培养皿放入温度25℃，相对湿度80％，光照12h/12h的光照培养箱中，分别在24h，48h，72h检查死虫数，计算死亡率、校正死亡率、毒力回归方程、致死中浓度(LC₅₀)、LC₅₀值的95％置信限。蚜虫死亡判断以用细毛笔触碰蚜虫腹部，其足和触角等附肢完全不动为死亡标准。

死亡率(％)＝死亡虫数/处理总虫数×100。

校正死亡率(％)＝(处理死亡率－对照死亡率)/(1－对照死亡率)×100。

将药液浓度换算成对数，为x值；根据校正死亡率查几率值表，所得结果为y值，求得毒力回归方程和相关系数，并计算出致死中浓度LC₅₀及其95％置信限。

中毒后的萝卜蚜停止取食，不停地爬动，大约半小时后静止不动，随着中毒时间的延长体色渐渐变暗，最后死亡。百里酚对萝卜蚜的触杀活性结果见表1、2。萝卜蚜各个浓度梯度下所表现出的症状基本一致，症状随着浓度降低而表现缓慢。在处理48h后观察，校正死亡率可高达96.56％。这说明百里酚对萝卜蚜有很好的触杀作用。随着处理时间的延长，萝卜蚜的校正死亡率不断升高；随着质量浓度提高，校正死亡率逐渐提高。在质量浓度为0.008g/L时，校正死亡率只有29.89％，说明此浓度对萝卜蚜的触杀活性微弱。处理24h、48h、72h后的致死中浓度分别为0.07g/L、0.04g/L、0.02g/L。

表1百里酚对萝卜蚜的触杀活性

注：数据为3次重复的平均值±标准差。同列数据后标有相同字母者表示在5％水平上差异不显著(LSD)。

表2百里酚对萝卜蚜的致死中浓度

处理时间	毒力回归方程	R²	LC₅₀(g/L)	95％置信限(g/L)
					24h	y＝0.7873x+5.9118	0.9933	0.07	0.05-0.11
48h	y＝0.8363x+6.1622	0.9968	0.04	0.03-0.07
					72h	y＝0.8250x+6.3429	0.9794	0.02	0.01-0.04

2、GSTs活力

酶活测定方法：

1)样本的制备：用0.02g/L药液点滴处理作为处理组，和1个空白对照组。分别于6h、12h、18h、24h、30h每组各取30头萝卜蚜(3个重复)放于0.5mL的离心管中，置其于-80℃超低温冰箱中冷冻备用。

2)组织匀浆的制备：称取样本虫重量，加0.4mL生理盐水冰浴中研磨制成约10％的组织匀浆，在3500r/min，4℃下离心10min后取其上清液置于冰箱中冷藏待测。在测定POD活力时，将组织匀浆在2500转/分离心10分钟，其他同上。

3)GSTs活力测定：GST具有催化还原谷光甘肽(GSH)与1-氯-2，4-二硝基苯(CDNB底物)结合的能力，在一定反应时间内，其活性高低与反应前后底物浓度的变化呈线性关系。本实施例通过检测GSH浓度的高低来反应GST活力的大小，GSH(底物)浓度降低越多则GST活力越大。测定方法为分光光度法：反应体系为0.066mol/L，pH7.0磷酸缓冲液(含0.002mol/L乙二胺四乙酸)2.5mL，0.05mol/L还原型谷胱甘肽底物液0.3mL，0.03mol/L2,4-二硝基氯苯丙酮底物液0.1mL，1mol/mL酶源0.1mL，总体积3mL。在25℃下用分光光度计测反应5min的340nm处光密度值。

酶的比活力表达为OD值。

计算公式：组织中GST活力(U/mgprot)＝(OD_C－OD_U)/(OD_S－OD_B)×Cs×N/T/(A×Cprot)；式中：OD_C为对照管吸光度；OD_U为测定管吸光度；OD_S为标准管吸光度；OD_B为空白管吸光度；Cs为标准浓度(20μmol/L)；N为反应体系稀释倍数(6)；T为反应时间(10分钟)；A为取样量(0.1mL)；Cprot为待测样本蛋白浓度(mgprot/mL)。

由图1可以看出，6-18h处理组GSTs活力明显低于对照组，用LSD法进行方差分析，差异达到显著(P<0.05)水平，谷胱甘肽-S转移酶被抑制；24h-30h处理组GSTs活力与对照组几乎一致，经过方差分析，差异未达到显著(P<0.05)水平。

3、POD活力

POD活力测定：测定方法为比色法：取光径1cm比色杯3个，向其中之一加入酶液0.8mL，再加入反应混合液2.4mL；向另一个比色杯加入0.8mLTris-HCl缓冲液，再加入反应混合液2.4mL，作为在没有酶液参与反应下的对照；而向最后一个比色杯中加入0.2mol/L的磷酸缓冲液(pH6.0)，作为零对照。立即用分光光度计在470nm波长下测定反应光密度值，记下每一组被测定液体的吸光值。

计算公式：

式中，OD₁为空白对照的光吸收值，OD₂为实验组的吸收值，V₁为反应液的总体积，V₂为样品液的体积，N为稀释倍数，L为比色光径，T为反应温度，V₀为总匀浆蛋白的量(mg/mL)。

由图2可以看出，6h处理组POD活力与对照组基本一样，12h后处理组过氧化物酶活力明显高于对照组，而且POD活力越来越高。其中处理30h时，百里酚对过氧化物酶的激活作用最强，为同期对照组的1.602倍。经过方差分析，6h酶活力数据间的差异不显著；12-30h过氧化物酶活力数据间的差异达到显著(P<0.05)水平。

4、SOD活力

SOD活力的测定采用邻苯三酚自氧化法：①邻苯三酚自养化速率的测定：取PH8.2的Tris-HCl-EDTA缓冲液4.5ml于10ml的比色管中，于25℃恒温10min，再加入25℃恒温的45mmol/L的邻苯三酚溶液10μL，混匀后迅速于1cm石英比色杯中325nm波长下测光密度值，每隔30s测一次光密度值，共测4min，求出邻苯三酚自养化速率(OD₁/min)，同时用10mmol/L的盐酸做空白实验。②取pH8.2的Tris-HCl-EDTA缓冲液4.5mL于10mL的比色管中，于25℃恒温10min，加入已恒温至25℃的样品溶液10mL，迅速混匀，于325nm波长下测定光密度值，每隔30s测一次，共测4min，求出光密度值变化速率OD₂/min。

计算公式：总SOD活力(U/mgprot)＝(OD₁－OD₂)OD₁×100％÷50％×V₁×N÷V₂。式中，V₁为反应液的总体积,mL，V₂为测定样品体积，mL，N为样品稀释液倍数，OD₁为邻苯三酚的自养化速率，OD₂为样品光密度值变化速率。

5、蛋白质含量

蛋白质含量测定方法：取5mL消化好的样品溶液进行凯式定氮蒸馏，后加入一定量的40％氢氧化钠溶液至蒸馏器内的内溶物变成棕色为止，用0.0508mol/L的标准盐酸滴定馏出液，以颜色由蓝色变为紫红色为滴定终点。

计算蛋白质含量：

式中：M为标准盐酸的摩尔浓度，mol/L；V₁为滴定样品中消耗盐酸溶液的体积，mL；V₂为滴定空白消化液时消耗盐酸的体积，mL；W为样品重量，g；14为氮的相对原子量。

数据处理方法：对所有实验数据采用SSPS19.0和EXCEL软件进行统计，所得数据均用平均数±标准误差表示，用Duncan新复极差法比较显著差异(p<0.05)。

由图3可以看出，百里酚对超氧化物歧化酶(SOD)表现为先激活后抑制的作用。处理6-12h，SOD被激活，其中处理6h时，百里酚对SOD的激活作用最强，为同期对照组的1.540倍，差异显著(P<0.05)；处理18h后，该酶活力已被抑制，在30h时百里酚对SOD的抑制作用最强，为同期对照组的0.555倍，差异显著(P<0.05)。

实施例2

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚1％、乙醇10％、蒸馏水89％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释20倍后，每亩使用35L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。用药后，蚜虫被100％消灭，药效维持30天以上。

实施例3

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚4％，乙醇12％，蒸馏水84％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释25倍后，每亩使用30L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。用药后，蚜虫被100％消灭，药效维持40天以上。

实施例4

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚7％，乙醇15％，蒸馏水78％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释30倍后，每亩使用25L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围，用药后。蚜虫被100％消灭，药效维持28天以上。

实施例5

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚3％，乙醇13％，蒸馏水84％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释25倍后，每亩使用35L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。用药后，蚜虫被100％消灭，药效维持33天以上。

实施例6

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚5％，乙醇11％，蒸馏水84％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释28倍后，每亩使用30L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。用药后，蚜虫被100％消灭，药效维持30天以上。

实施例7

无公害杀蚜虫剂，由以下质量分数的原料制成：百里酚3％，乙醇12％，蒸馏水85％。先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。将产品稀释30倍后，每亩使用25L进行喷雾，将其喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。用药后，蚜虫被100％消灭，药效维持33天以上。

实施例8

供试虫源：萝卜蚜为温室内水培萝卜苗上的无翅成蚜。

药液配制：用无水乙醇配置10％百里酚母液冷藏备用。使用时用蒸馏水将10％百里酚母液分别配制成5×10^-3g/l、1×10^-3g/l、5×10^-4g/l、1×10^-4g/l、5×10^-5g/l、1×10^-5g/l的梯度浓度溶液；用清水作空白对照。

胃毒试验：试验在自然光照玻璃温室中进行，选取21株长势均一的萝卜苗，用6个不同浓度的百里酚溶液作为培养液，以清水作对照。选择每株萝卜苗的一片叶，剔除这片叶上的若蚜，只保留大小一致的成蚜。用配置的6个梯度浓度百里酚溶液对应处理，以清水作对照，每处理进行3次重复。先用细密纱网套住试虫所在的萝卜叶，后用手持喷雾器将各个浓度的药液均匀喷在其它萝卜叶及茎上，喷洒时使药液避开试虫。于施药前调查每处理的无翅成蚜基数，于药后24h、48h，分别调查每处理的存活蚜虫数。死亡率以三次重复的平均值计，进而计算校正死亡率。

数据处理方法：死亡率(％)＝(PT₀-PT₁)×100/PT₀，校正死亡率(％)＝(PT-CK)×100/(100-CK)，式中：PT₀-药剂处理区药前虫数；PT₁-药剂处理区药后虫数；PT-药剂处理区虫口减退率；CK-空白对照区虫口减退率。

表3百里酚对萝卜蚜的胃毒试验效果

如表3所示，用5×10^-3g/L的百里酚溶液对萝卜蚜进行胃毒试验时差异显著，24h后差值为39.66％，校正死亡率可达40.72％；48h后差值为51.93％，校正死亡率可达53.60％。用1×10^-3g/L的百里酚溶液对萝卜蚜进行胃毒试验时差异也很明显，效果很好，24h后差值为33.47％，校正死亡率达34.36％；48h后差值为46％，校正死亡率达47.48％。用5×10^-5g/L及1×10^-5g/L百里酚溶液对萝卜蚜进行胃毒试验时差异不显著，效果不理想，24h后差值分别为14.74％和10.4％，校正死亡率不高，分别为15.13％和10.68％；48h后差值分别为24.9％和14.61％，校正死亡率分别为25.70％和15.08％。

经不同浓度的百里酚溶液对萝卜蚜的胃毒试验发现，当百里酚浓度为5×10^-3g/L时，萝卜蚜的死亡率最高，百里酚对萝卜蚜的校正死亡率最高；当百里酚浓度为1×10^-5g/L时，萝卜蚜的死亡率最低，百里酚对萝卜蚜的校正死亡率最低。随着质量浓度的上升，百里酚对萝卜蚜的胃毒活性增强。在胃毒试验中，药后48h的死亡率及校正死亡率均高于药后24h，说明百里酚具有持续毒性。

上述说明并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普通技术人员，在本发明的实质范围内做出的变化、改型、添加或替换，都应属于本发明的保护范围。

Claims

1.一种无公害杀蚜虫剂，其特征在于：由百里酚1-7%、乙醇10-15%、水78-89%组成，各组分的质量分数之和为100%。

2.根据权利要求1所述的无公害杀蚜虫剂，其特征在于：由百里酚3-5%、乙醇11-13%、水80-85%组成，各组分的质量分数之和为100%。

3.一种制备权利要求1或2所述的无公害杀蚜虫剂的方法，其特征在于：先将百里酚溶于乙醇，后加蒸馏水配成溶液，得到产品。

4.权利要求1或2所述的无公害杀蚜虫剂的施用方法，其特征在于：将杀蚜虫剂稀释20-30倍后，每亩使用30-35L进行喷雾，喷洒于蔬菜的茎秆、叶面和根部周围。