CN1053117C - 治疗Kaposi肉瘤所用组合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

公开了用共同人类白细胞干扰素治疗细胞增殖紊乱的一些方法。还色开了共同人类白细胞干扰素的药物组合物。

Description

本发明涉及用共同人类白细胞干扰素治疗细胞增殖紊乱的方法。本发明还涉及共同人类白细胞干扰素的药用组合物，此共同人类白细胞干扰素适于治疗细胞增殖紊乱。

干扰素是细胞活素的一个亚类，此细胞活素呈现抗病毒及抗增殖两种活力。在生物化学及免疫学性质的基础上，将人类干扰素分为三类：干扰素α(白细胞)、干扰素β(纤维细胞)及干扰素γ(免疫)具有不同氨基酸顺序的14种α干扰素(分组为亚类型A到H)已通过将DNA分离和编序来鉴别，该DNA给这些多肽编码。作为潜在的治疗药剂，α干扰素已受到相当注意，这是由于它们的抗病毒及抗肿瘤生长抑制作用。

在美国专利4,503,035中描述了由从全血的血沉棕黄层部分分离的人类白细胞，提纯干扰素。以这种方式制备的人类白细胞干扰素包含一些不同的人类白细胞干扰素氨基酸顺序的一种混合物。被提纯的物质，当在MDBK牛细胞系上测定时，具有从0.9×10⁸至4×10⁸单位/毫克的蛋白质的比活性，当在Ag1732人类细胞系上测定时，具有从2×10⁶至7.6×10⁸单位/毫克的蛋白质比活性。美国专利4,241,174公开了用来确定干扰素抗病毒活力的细胞病效应抑制测定法。所测的干扰素活力对照一用于人类白细胞干扰素的参考标准来校正，此人类白细胞干扰素由国家卫生研究所提供。

美国专利4,530,901公开了重组DNA质粒的构造，该重组DNA质粒包含给至少部分人类白细胞干扰素编码的一些顺序及一种多肽在E.coli中的表达，而所述多钛具有人类白细胞干扰素的免疫及生物活力。

美国专利4,414,150、4,456,748及4,678,751公开了杂种α-干扰素基因的构造，该杂种α-干扰素包含一些不同亚类型顺序的组合(例如，A和D，A和B，及A和F)。

美国专利4,695,623及4,897,471公开了新的、具有一些氨基酸顺序的人类白细胞干扰素多肽，这些氨基酸顺序包括一些普通或主要的氨基酸，这些氨基酸可在自然出现的α干扰素的亚类型的一些多肽中间的每个位置找到，所述那些氨基酸顺序被叫作共同人类白细胞干扰素(IFN-con)。这些所公开的IFN-con氨基酸顺序被命名为IFN-con₁、IFN-con₂及IFN-con₃。所制作的给IFN-con编码的那些基因的制备，以及所述那些基因在E.coli中的表达也被公开了。

Klein等人(J.Chromalog 454，205-215(1988)说明了提纯E.coli中产生的IFN-con₁。据报道，以这种方式提纯的IFN-con₁具有3×10⁹单位/毫克的蛋白质比活性，这是在细胞病效应抑制测定中用T98G人类细胞系测定的(Fish等人，J.Interen Res.9，97-114(1989))。所提纯的IFN-con₁包括三种异构形式(isoform)，这是由等电聚焦确定的，这三种异构形式被鉴定为甲硫氨酰基IFN-con₁、去甲硫氨酰基IFN-con₁及带有用乙酰基封闭它的N-末端的去甲硫氨酰基IFN-con₁(Klein等人，Arch.Biochem.Biophys.276，531-537(1990))。

在美国和其它一些国家，现在已批准将α-干扰素用于治疗毛发细胞白血病、性病疣、Kaposi氏肉瘤(通常折磨患获得性免疫缺乏综合症(AIDS)的一些病人的一种癌)、及慢性非A型非B型肝炎。α干扰素的两个变种在用于治疗方面已得到批准；干扰素α-2a以商业名称ROFERON-A投放市场，而干扰素α-2b以商业名称INTRON-A投放市场。在一单个位置，ROFERON-A及INTRON-A的那些氨基酸顺序不同，但在其它方面与α-干扰素亚类型2(亚类型A)的上述氨基酸顺序等同。

除了被标记的那些指示外，α干扰素正在单独被使用或评价，或者在各种其它细胞增殖紊乱中与  些化学治疗剂一起被使用或评价，这些细胞增殖紊乱包括：慢性骨髓性白血病、多骨髓瘤、表面膀胱癌、皮癌(基细胞癌和恶性黑素瘤)、肾细胞癌、卵巢癌、低度淋巴细胞及皮肤的T细胞淋巴瘤、以及神经胶质瘤。与其它一些化学治疗试剂结合，用于治疗一些产生于肺的硬肿瘤、结肠直肠及乳房癌，α-干扰素可以是有效的(见Rosenberg等人，癌的“生物疗法的原理及应用”：肿瘤学的原理及实践，3rd ed，Devita等人，eds.pp.301-547(1989)，Balmer DICP，Arm Pharmacotner24，761-768(1990))。

人们知道α-干扰素影响各种细胞功能，这些功能包括在正常和反常细胞中DNA复制及RNA和蛋白质合成。这样，干扰素的细胞毒素效应不限于感染肿瘤或病毒的细胞，而且在正常、健康细胞中也同样有所表现。结果，在干扰素治疗期间，特别是当需要大剂量时，产生一些不希望的付作用。干扰素的施药能导致骨髓抑制(myelo-suppression)，这骨髓抑制导致红血细胞、白血细胞及血小板含量的降少。大剂量的干扰素通常产生一些类似流感的症状(例如，发烧、疲乏、头痛及寒战)、胃肠紊乱(例如，厌食、恶心、及腹泻)头晕和咳嗽。减少或消除上述干扰素治疗的那些不希望的付作用而不减少这种治疗的治疗好处将是有用的。

因此，本发明的一个目的是用IFN-con治疗细胞增殖紊乱，例如毛发细胞白血病或Kaposi氏肉瘤，其中，与现在所实行的那些治疗方法相比，那些伴随的、不希望的付作用被减少或完全消除。换句话说，本发明的一个目的是在与现在实行的那些方法比较时，增加用IFN-con治疗细胞增殖紊乱的治疗益处，不会相应增加一些付作用的频率及严重性。

本发明包括治疗细胞增殖紊乱的方法，该治疗涉及给哺乳动物施用有效治疗剂量的共同人类白细胞干扰素(IFN-con)。

已经证明，IFN-con比INTRON-A具有更高的抗增殖活力。因此，用IFN-con治疗细胞增殖紊乱，与其它现在实行的一些干扰素治疗相比，显示了更强的功效及安全性。特别是，IFN-con的一有效治疗剂量的施药，与现在所实行的那些方法相比，导致细胞增殖紊乱的更快、更广泛的治疗，其中，没有出现不希望的那些伴随的副作用的频率或严重性的增加。此外，IFN-con的一有效治疗剂量可少于现在所实行的那些方法中所用的一种干扰素的所述量。结果，减少剂量的IFN-con给出与更高剂量的其它那些干扰素同样的益处，但却减少或消除了一些不希望的付作用，这些付作用是与当前所实行干扰素疗法伴随在一起的。

在治疗与癌常常伴随在一起的细胞增殖紊乱时，IFN-con是有效的。这样一些紊乱包括但并不限于毛发细胞白血病和Kaposi氏肉瘤。可以单独使用IFN-con，或与其它一些用于治疗癌及别的一些增殖紊乱的疗法结合使用IFN-con。在一最佳实施例中，IFN-con与一有效治疗剂量的一种或多种因子一起使用，该因子刺激骨髓瘤细胞增殖或分化，例如粒性白细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒性白细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞间素-1(interleukin-1(IL-1)、白细胞间素-3(IL-3)、白细胞间素-6(IL-6)、红细胞生成素及干细胞因子(SCF)。

IFN-con是一种具有抗增殖活力的、非天然存在的多肽。较好的IFN-con是一种具有IFN-con₁、IFN-con₂或IFN-con₃的氨基酸顺序的多肽。IFN-con最好具有IFN-con₁的氨基酸顺序。

本发明还涉及药物组合物，此组合物包括与合适的稀释剂、辅药、载体、保存剂和/或加溶剂一起的一有效治疗剂量的IFN-con。

图1到图7表明将干扰素分别以0.1、0.5、1、5、10、50及100ngs/ml加入Eskol细胞悬浮液时，IFN-con₁及INTRON(一种比较物质)在Eskol(一种毛发细胞白血病细胞系)上的抗增殖活力。

图8显示了在用INTRON-A、IFN-con₁、或IFN-con₁及r-metGCSF治疗患Kaposi氏肉瘤病人时，所获得的最初及目前中间的MTDs。

这里所采用的共同人类白细胞干扰素(IFN-con)将意味着一种非天然存在的多肽，此多肽主要包含这样一些氨基酸残基(residues)这些氨基酸残基对于所有天然存在的人类白细胞干扰素亚类型顺序是共同的，而且在对所有亚类型没有共同氨基酸的那些位置的一个或多个位置上，所述多肽包括一种主要出现在那个位置上的氨基酸，而且绝不包括任何这样的氨基酸残基，此氨基酸残基在至少一种天然存在的亚类型中的那个位置上现在没有。IFN-con包括但并不限于叫作IFN-con₁、IFN-con₂及IFN-con₃的氨基酸顺序，美国专利4,695,623及4,897,471都公开了IFN-con₁、IFN-con₂及IFN-con₃这里作为参考引用了这两份美国专利所公开的全部内容。一些给IFN-con编码的DNA顺序按上述那些专利中所述的那样被合成。

IFN-con多肽是所产生的DNA顺序的表达的产物，此DNA顺序被转化或被转染进细菌宿主，特别是E.coli。即IFN-con是重组的IFN-con。通过本领域普通技术人员所熟知的那些程序，将E.coli中产生的IFN-con提纯，对于IFN-con₁的情况，Klein等人(supra(1988))作了一般说明。被提纯的IFN-con可包含一些异构形式的一种混合物，例如，被提纯的IFN-con₁包含甲硫氨酰基IFN-con₁、去甲硫氨酰基IFN-con₁及带有一封闭的N-末端的去甲硫氨酰基IFN-con₁的一混合物(Klein等人，supra(1990))换句话说，IFN-con可包含一特异的、分离的异构形式。通过一些技术将IFN-con的一些异构形式彼此分离，例如，通过本领域普通技术人员所熟知的等电聚焦技术。

本发明主要提供了一种治疗细胞增殖紊乱的方法，此法涉及进行IFN-con的一有效治疗剂量的施药。本发明的一个最佳实施例是一种治疗方法，此治疗方法涉及进行一有效治疗剂量的IFN-con₁、IFNcon₂或IFN-con₃的施药。最好进行一有效治疗剂量的IFN-con₁的施药。

对于治疗各种细胞增殖紊乱，特别是各种癌，IFN-con是有益的。这些紊乱包括但不限于毛发细胞白血病、Kaposi氏肉瘤、慢性骨髓性白血病、多骨髓瘤、表面膀胱癌、皮癌(基细胞癌和恶性黑素瘤)、肾细胞癌、卵巢癌、低度淋巴细胞及皮肤的T细胞淋巴瘤、以及神经胶氏瘤。

将IFN-con单独使用或与其它疗法一起使用，用于治疗癌及别的一些增殖紊乱。将IFN-con与一有效治疗剂量的一种或多种化学治疗剂一起施药，例如，与白消安、5-氟尿嘧啶(5-FU)、叠氮胸苷(AZT)、甲酰四氢叶酸、左旋溶肉瘤素、泼尼松、环磷酰胺、氮烯咪胺、顺铂、以及潘生丁一起施药。IFN-con也可以与细胞活素，例如白细胞间素-2(IL-2)一起给药。

一有效治疗剂量的IFN-con可以与一有效治疗剂量的、一个或多个刺激骨髓分化的因子一起施药，以便克服在干扰素治疗期间所观察到的骨髓抑制的一些效应。这样一些药剂，包括但并不限于G-CSF、GM-CSF、IL-1、IL-3、IL-6、红细胞生成素及SCF。干细胞因子(SCF)刺激早期造血祖先细胞的增殖，而且已被美国专利(申请号573,616)说明了，此专利所公开的内容在此作为参考而被引用。

在所给出的一些操作例子中，已经表明，对于抗毛细胞白血病及与艾滋病伴随在一起的Kaposi氏肉瘤，IFN-con₁是一种有效的抗增殖剂。

例1示出了在Eskol细胞(一毛发细胞白血病细胞系)上所测定的IFN-con₁及INTRON-A的抗增殖活力。它表明，在一广泛的浓度范围，IFN-con₁比INTRON-A具有更大的抗增殖活力。将IFN-con₁与ROFERON-A比较时，得到类似的结果。这些结果表明，当与INTRON-A按同样含量施药时，IFN-con₁具有更大的治疗功效。换句话说，要显示等效于INTRON-A的治疗功效，需要较低的IFN-con₁含量。

例2说明了在治疗伴随有艾滋病的Kaposi氏肉瘤时，对IFN-con₁及INTRON-A所作的比较研究。它表明，接受IFN-con₁的病人比接受INTRON-A的病人获得更高的单位剂量。此外，接受IFN-con₁及GCSF的病人比单独接受IFN-con₁的病人获得更高的剂量(见图8)。在这个研究中，所有病人接受了AZT，作为治疗他们的HIV感染的一部分。单独施药AZT对Kaposi氏肉瘤无效。

当进行IFN-con₁施药时，通过3度毒性频率的减少判断出，IFN-con₁比INTRON-A更安全。用IFN-con₁治疗表明，与INTRON-A治疗相比，中性白细胞减少症及肝机能障碍的影响减少，而用IFN-con₁及γ-metGCSF治疗，完全消除了3度毒性(见表2)。

还提供了药物组合物，此药物组合物包含药物可接受的载体、辅药、稀释剂、保存剂和/或加溶剂，和一有效治疗剂量的IFN-con。IFN-con的药物组合物，包括具有一个范围的pH值及离子强度的各种缓冲剂的稀释剂(例如，Tris-HCl、乙酸盐、磷酸盐)、载体(例如，人类血清白蛋白)、加溶剂(例如，吐温、多乙氧基醚)以及保存剂(例如，乙汞硫代水扬酸钠、苯甲醇)。一般说来，药物成分的各组分可从那些与干扰素及其它抗增殖剂共同使用的成份中选取，这些是本领域普通技术人员所熟知的。将IFN-con的药物成分作为一种注射溶液或作为一种冻干粉末来提供，这种冻干粉末在注射前在一相应的稀释剂中再构成。

本领域普通技术人员考虑到这样一些变化时，如IFN-con制剂的半衰期、施药途径及正在被检验的细胞增殖紊乱，就能确定IFN-con的有效治疗剂量。一般说来，对于治疗细胞增殖紊乱，IFN-con的有效剂量是在2×10⁶到60×10⁶单位范围内，对每个病人每星期施药几次。在治疗毛发细胞白血病时，该范围的低剂量部分是有效的，而该范围的高剂量部分适用于治疗Kaposi肉瘤。有效治疗剂量的IFN-con将较理想地导致肿瘤缓解20-80％，这取决于特殊的肿瘤类型，这是对于至少6个月的一段时间。

较好的施药途径将是通过注射进哺乳动物的血液，这里的注射可以是静脉内注射、肌内注射、皮下注射或病灶内(intralesional)注射。对于一给定的施药途径，一给定药物成分的适用性对本领域普通技术人员是显而易见的。

提供下面这些例子以更充分地说明本发明，但并不能被看作是对本发明范围的限制。

例1

IFN-con₁及INTRON-A的抗增殖活力

在Eskol细胞系(印第安那大学医学院的E.Srour博士所分离的毛发细胞白血病细胞系)上检验IFN-con₁及INTRON-A的抗增殖活力。在RPMI介质(Gibco)中孵育3ml Eskol细胞培养物，在37℃时，在含有10％胎牛血清的5％的CO₂中，按1×10⁵细胞/毫升孵育12小时。将IFN-con₁或INTRON-A(干扰素a-2b；Schering公司)加到100μl介质中的0.1到100ngs/ml的最终蛋白质浓缩物中。通过一种Brad-ford蛋白质测定，确定IFN-con₁的蛋白质浓度(Brad-ford，Anal Biochem.72，248-254(1976))，而由比活性(2×⁸国际单位/毫克蛋白质)及由制造商所提供的单位浓度，来计算INTRON-A的浓度。通过台盼兰(trypanblue)(Sigma)的排除，在24小时间隔，确定有活力的细胞数。在24小时间隔，将100μl的IFN-con₁或INTRON-A加到所指出的最终浓缩物中。有活力的细胞计数是四个独立试验的平均值，而每个试验有一些复制样品。在24到48小时中的细胞计数变化范围约为5％，到更长时间点的变化范围约为2％。图1至7所示结果是有活力的细胞计数的比值，这是在由百分比所表达的各种时候对于有或没有干扰素的情况。

通过测量3H-胸(腺嘧啶脱氧核)甘结合进Eskol细胞，来确定有活力细胞计数，此Eskol细胞是在有IFN-con₁或INTRON-A的情况下孵育的。在120小时的孵育时间后，抽出200μl细胞悬浮液并在存在5μCi/ml的3H-胸(腺嘧啶脱氧核)甘(Amersham)的情况下，将此细胞悬浮液在37℃孵育3小时。采用Cambridge细胞采集机(Cambridge技术)收获所述这些细胞，将这些细胞用蒸馏水冲洗七次，并用95％的乙醇冲洗两次，而用液体闪烁计数来确定被结合的3H-胸(腺嘧啶脱氧核)甘的量。所观察到的3H-胸(腺嘧啶脱氧核)甘的被Eskol细胞的吸收(uptake)正比于细胞生存能力计数，这Eskol细胞是在有IFN-con₁或INTRON-A的情况下孵育了120小时。

例2

对具有Kaposi氏肉瘤(KS)的病人进行IFN-con₁施药的安全性、允许剂量及功效。

进行了一随机的，显明标记的研究，此研究为估价IFN-con₁及INTRON-A的安全性及允许剂量，并确定IFN-con₁及INTRON-A的最大允许剂量(MTD)。IFN-con₁及INTRON-A每个都与叠氮胸苷(AZT)一起，对具有伴随有艾滋病的KS的病人施药。此外，当IFN-con₁与AZT及E.coli产生的重组粒性白细胞集落刺激因子一起施药时，确定IFN-con₁的安全性、允许剂量及MID，该E.coli产生的重组粒性白细胞集落刺激因子，在多肽(γ-metGCSF)的氨终端，具有一蛋氨酸残基。在该研究中的三个治疗组是：

1.INTRON-A和AZT

2 IFN-con₁和AZT

3.IFN-con₁、AZT和γ-metGCSF。

每个治疗组中至少包括12个可估价的病人。

A、产品说明

用美国专利4,695,623及4,897,471中所述的方法，在E.coli中产生IFN-con₁。用Klein等人(supra(1988))等人概括说明的步骤来提纯IFN-con₁。对于目前研究中的皮下施药，将IFN-con₁作为磷酸钠缓冲剂中的无菌蛋白质来提供。若需要的话，将稀释剂制成无菌盐水。

由Burroughs-Wellcome公司得到叠氮胸苷(AZT)，并按包装插页上所指示的那样使用此叠氮胸苷。

由Shering公司获得INTRON-A的无菌、冰干配制剂，将此制剂按包装插页上所指示的那样再悬浮在稀释剂中。

用美国专利4,810,643中所概括说明的方法在E.coli中产生γ-metGCSF，这里参考引用了该专利所公开的内容。将γ-metGCSF制备成在10mM乙酸钠、5％的甘露醇及0.004％吐温80中的、pH4.0的、浓度0.3mg/ml的无菌蛋白质溶液。若需要的话，稀释成无菌的5％的葡萄糖水溶液(D₅W)。

B、用量及方案

AZT按一固定剂量每四小时口服100mg，对所有病人施药，而对于全部5个剂量或每日500mg来说，所述病人是醒着的。γ-metGCSF，对于那些被随机地从包括γ-metGCSF的治疗组中选出的病人，γ-met-GCSF的剂量是每天1微克/每公斤体重，作为一单独的大丸剂注射皮下施药。若必需的话，这个用量以1μg/kg/天(不超过6μg/kg/天)的增量增加，或相应地以0.5μg/kg/天(或更少)的减少量减少，以获得5000到15000/mm³的绝对中性白细胞计数(ANC)指标范围。干扰素。病人按一剂量提高方案接受IFN-con₁或INTRON-A。用量根据每一种干扰素的相等单位。然而，因为两种干扰素的比活性不同(对INTRON-A为2×10⁸IU/mg，而对IFN-con₁至少为1×10⁹IU/mg，如美国专利4,695,623中所述的抗病毒细胞病测定所确定的那样)，对任何给定剂量的，按重量(毫克)计的蛋白质的量，对INTRON-A和INF-con₁是不同的。下面表1显示了所用的剂量提高方案。表1对每种干扰素还显示了，对应每个剂量等级(国际单位)，蛋白质的剂量(以毫克为单位)。

                 表1

对于INTRON-A及IFN-con₁的剂量提高方案

剂量剂量×10⁶剂量(以蛋白质毫克数

                 为单位)

等级       IU    INTRON-A   IFN-con₁

1          3     0.015     0.003

2          9     0.045     0.009

3          12    0.060     0.012

4          15    0.075     0.015

5          18    0.090     0.018

6          21    0.105     0.021

7          24    0.120     0.024

8          27    0.135     0.027

9          30    0.150     0.030

上面表明，对三个治疗组中的每一组的病人进行IFN-con₁或INTRON-A的施药，在提高到下个最高剂量等级之前，每天从剂量等级1开始进行一星期。在第8、15、22、29、36、43、50及57天呈现剂量提高。不断进行提高，直到每个病人达到MTD，或直到获得每日最大30×10⁶IUs的干扰素剂量。对一个病人的MTD定义为出现剂量极限毒性的等级以下的剂量等级。采用世界卫生组织建立的、而且为Miller等人(Cancer 47，210-211(1981))所进一步说明的判断标准，将毒性分为0(无毒性)到4(剧毒)这样一个标度等级。剂量极限毒性被定义为3度或4度有害作用，这有害作用被判别为至少可能与干扰素有关。发烧及寒战持续少于24小时，疲劳、头痛、或2度或更少的毒性，并没被用来确定MTD，除非它们被确定为对单个病人是不能忍受的。

在上述提高阶段完成时，继续对病人维持治疗，这治疗包括或每日按病人的MTD剂量治疗、或每日按30×10⁶IUs的最大剂量(如果得到这个剂量的话)治疗。继续进行维持治疗，直到疾病的进展或其它被证明为是正确的判据将该病人从此研究中排除。

在维持治疗期间，允许由于毒性原因而减少两种干扰素剂量。在减少两个剂量后，不允许进一步修改干扰素剂量，而且从该方案中撤出需要进一步减少的病人。这步骤的一个例外是当剂量极限毒性是中性白细胞减少症的情况(ANC≤1000/mm³在约一星期期间中的两天)。在这个例子中，允许保持研究该病人，而无需进一步减少干扰素剂量，但对未接受γ-met-GCSF的那些病人开始γ-metGCSF治疗，以每天每公斤体重1微克的量进行皮下施病。对于已经在γ-metGCSF治疗组中的那些病人，进行施药的γ-met-GCSF的剂量被提高到下一个最高等级(1微克/公斤/天的增加量)。

C、选择病人、全部49个病人已在本研究中登记。在本研究中登记一个单个人只是在满足所有蕴含及排斥判据之后。对于蕴含的显著判据是血清学确证了的HIV感染、病理组织学确定了的Kaposi氏肉瘤(此Ka-posi氏肉瘤具有一(些)适度(measurable)的皮或口的损害)、可接受的免疫功能(如由CD4淋巴细胞含量所测得的)及少于一年的AZT治疗。

由这个研究撤回一个病人的那此原因中有：在上述剂量提高阶段出现第二次3度或更高的毒性、在已确定单个病人的MTD后第三次出现剂量极限毒性以及该病人正在进行维持治疗或KS的发展。D、对于INF-con₁及INTRON-A的MTDs的确定。

采用上述剂量提高方案用于1至9星期的研究，接着进行维持治疗，并当合适的时候减少剂量，确定对所述三个治疗组的INTRON-A及IFN-con₁的最初及现在中间的MTDs，并在图8中示出。每组包括15个病人。组1(INTRON-A及AZT)在剂量提高期间，达到9×10⁶IUs的最初MTD，并达到6×10⁶IUs的现在的MTD；组2(IFN-con₁及AZT)达到15×10⁶IUs的最初及现在的MTDs；组3(IFN-con₁、γ-metGCSF和AZT)分别达到24×10⁶IUs和21×10⁶IUs的最初和现在的MTDs。

E、INTRON-A及IFN-con₁治疗安全性评估。

INTRON-A及IFN-con₁治疗安全性由有害效果的严重程度来确定，这有害效应要求减少干扰素剂量。结果总结在表2中。

              表2

在三个治疗组中毒性引起的剂量减少出现的频率(％)

        INTRIN-A   IFN-con₁ ^*  IFN-con₁和

                            γ-metGCSF^*

2度

不能忍受

(类似流感   20        70           65

的综合症)

3度

中性白细胞

减少症      40        10           0

3度

肝功能试验  30        10           0

*对于IFN-con₁以及IFN-con₁和γ-met-GCSF治疗组的各百分比求和不等于100％，因为这些组中的某些病人达到30×10⁶IU的最大剂量而无有害效果。

自从开始研究以来，还没有病人由于明显产生于INTRON-A或IFN-con₁的施药的毒性而撤回。

F、确定IFN-con₁及INTRON-A治疗的功效

抗肿瘤反应，在治疗四个月后，用艾滋病临床试验团体(ACTG)肿瘤学委员会的标准反应判据(Krown等人，J.Clin Oncol7，1201-1207(1989))估价抗肿瘤反应。

免疫功能。在上述研究期间，每个月获取CD4淋巴细胞计数，共进行6个月，以评价病人对HIV感染的免疫反应。

在所有治疗组中，Kaposi氏肉瘤的一些损害反应和CD4淋巴细胞含量(levels)是等价的。

已根据一些最佳实施例说明了本发明，应这样理解，本领域普通技术人员将作出一些变化和改进。因此，打算使所附的权利要求书覆盖所有这样的变化，这些变化是属于本发明所要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种制备用于治疗Kaposi内瘤同时又减小施用α干扰素时产生的由世界卫生组织确定的3级或4级毒性的组合物的方法，包括

确定共同人类白细胞干扰素的有效治疗剂量为对每个病人从2×10⁶到60×10⁶单位范围；并

将所述剂量与药物可接受的稀释剂、辅药、载体、保存剂和/或加溶剂结合。

2.如权利要求1所述的一种方法，其中将所述组合物单独施药，与一有效治疗剂量的化学治疗剂一起施药，或与一有效治疗剂量的G-CSF、GM-CSF、IL-1、IL-3或SCF一起施药。

3.如权利要求1所述的一种方法，其中通过静脉内、肌内、皮下或病灶内这些途径施用所述组合物。

4.如权利要求1所述的一种，其中所述组合物适于对哺乳动物施药。

5.如权利要求1所述的一种方法，其中所述组合物作为一种注射液或一种被冻干的粉末提供。

6.如权利要求1所述的一种方法，其中所述细胞增殖紊乱是毛发细胞白血病或Kaposi氏肉瘤。

7.如权利要求1所述的一种方法，其中所述共同人类白细胞干扰素选自IFN-con₁、IFN-con₂和IFN-con₃。

8.如权利要求7所述的一种方法，其中所述的共同人类白细胞干扰素是IFN-con₁。

9.如权利要求1所述的一种方法，其中所述共同人类白细胞干扰素是一外源DNA顺序的原核生物表达的产物。

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