CN105264359A - 一种检测从体液样品提取的微小rna的试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
公开了一种用于检测至少一种从体液提取的样品(C)中感兴趣的微小RNA的试剂盒,包括:至少一种装置(2),所述装置(2)包括容纳外壳(2a)和至少一个开口(2c),所述容纳外壳(2a)中至少一个容纳座(2b)用于所述至少一种样品(C),所述容纳座(2b)通过所述至少一个开口(2c)与外界连通;用于所述至少一种样品(C)的至少一个容器元件(3),所述至少一个容器元件(3)可通过所述至少一个开口(2c)插入所述容纳座(2b)/在容纳座(2b)内断开/从容纳座(2b)断开;至少一个光激发组(5),所述至少一个光激发组(5)容纳在所述容纳外壳(2a)内,设计成发射朝向所述至少一个容纳座(2b)的至少一种激发光辐射(λ,λ1);至少一个检测组(6),设计成检测至少一种发射光辐射(λ2),所述发射光辐射(λ2)在使用中由所述至少一种样品(C)产生,所述至少一种样品(C)可以被所述至少一个光激发组(5)发射的所述至少一种激发光辐射(λ,λ1)光激发,所述至少一个检测组(6)设计成提供与所述至少一种样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的至少一种电输出信号(SO信号输出);至少一个处理单元(7),设计成接收和处理所述至少一种电信号(SO)并且输出与所述至少一种样品(C)中感兴趣的微小RNA的量相关联的指数;至少一个容器元件(3),所述容器元件(3)由可透过所述至少一种激发光辐射(λ,λ1)以及所述至少一种发射光辐射(λ2)的材料构成,用于检测所述发射光辐射(λ2)的所述至少一个组(6)包括至少一个硅光电倍增管类型的传感元件(6a)。
Description
本发明涉及用于光学检测从体液提取的样品中感兴趣的微小RNA的试剂盒。
本发明还涉及用于检测这种感兴趣的微小RNA的方法。
众所周知,人们对于通过良好导向、精确、可能的侵入性最小并且便宜的检查的方式对具有可怕预后的病理的早期预测存在越来越高的兴趣。
为了这个目的,认为微小RNA在诊断领域是非常有潜力的分子,即使它们在体液中的浓度较低。这些小的、未整理的RNA分子(大约21-23个核苷酸),介导基因表达的转录后调控,对于人体基因组而言起到总开关的作用。存在许多研究来证明这些分子对于具体参与一些病理(例如癌症、心血管疾病、肝病、神经学疾病等)以及诸如分化、编程的细胞死亡和肿瘤转化等进程中的基因起到关键作用。
因此,很显然采用灵敏且可靠的技术对这些从体液样品提取的分子进行检测是重要的。
大多数检测从诸如血液(血清和/或血浆)、尿液或唾液等体液样品提取的感兴趣的微小RNA的方法是基于杂交原理,其中需要检查的样品C中存在的每个感兴趣的微小RNA分子(术语也称为“靶标”)与各自的具有单链的互补寡核苷酸合成探针(术语也称为“探针”)相互作用(技术术语称为“杂交”)。在杂交过程中,构成寡核苷酸探针的核苷酸碱基的链以特异性方式连接到靶标微小RNA的链中存在的互补的核苷酸序列,从而形成具有双链的分子。杂交事件表明需要检查的样品C中包含的特异性微小RNA的存在。
一旦发生这种杂交,现有技术的检测方法通过以下方式实现了需要检查的样品C中包含的这样杂交的靶标微小RNA的实际定量测量:产生(例如)电化学(通过氧化还原反应)或者由于荧光或生物发光光学获得的可测量的信号的方式,或者自发放射成像的方式,可以通过能够与样品的杂交的微小RNA或者寡核苷酸探针偶联或者作为插入双链的插入试剂或者在任意情况下与两个互补链之间的杂交事件相关的分子标记物(术语称为“标签”、“标记”或者“报告基因”)产生。
已知,可以以固态或者在溶液中进行电化学方法和光学荧光或者生物发光方法,取决于识别互补的微小RNA的特异性寡核苷酸探针束缚在发生杂交的表面(例如,包括微小颗粒或者纳米颗粒或者平面表面)还是在溶液中发现(悬浮在液体中)。为此,多年来开发了各种装置和方法用于测量微小RNA,包括例如微阵列或深度测序,或者其他生物化学方法如Northern印迹、定量逆转录酶-PCR(qRT-PCR)或原位杂交(ISH)。
上文简要描述的这些装置和方法存在一些缺陷。
其中之一是灵敏度差。事实上,由于体液中微小RNA的浓度低,不适用于获得需要检查的样品中存在的感兴趣的微小RNA的可靠的直接定量读取,因而需要通过酶反应(PCR)的方式对需要分析的样品C中的感兴趣的微小RNA进行扩增的步骤。这种预处理步骤不仅费力费钱,而且延长了样品本身的分析时间。对需要分析的样品C中感兴趣的微小RNA进行PCR扩增的平均时间甚至达到2小时。总之,执行这种方法通常需要2小时以上的时间。
因此,本发明的主要目的是提供一种试剂盒,用于非常灵敏地对从体液提取的样品中感兴趣的微小RNA进行光学检测,允许检测极低浓度的微小RNA并且对于需要分析的样品的用量要求最小。
本发明的另一个目的是提供一种能够比常规方法更快地对从体液提取的感兴趣的微小RNA进行光学检测的方法。
本发明的另一个目的是提供一种准确且可靠的对从体液提取的感兴趣的微小RNA进行光学检测的方法。
本发明的目的还在于,提供一种可以实际实现的对从体液提取的感兴趣的微小RNA进行光学检测的方法。
根据本发明的第一方面,提供了一种用于检测至少一种从体液提取的样品中感兴趣的微小RNA的试剂盒,包括:
至少一个装置,该装置包括容纳外壳和至少一个开口,所述容纳外壳中至少一个容纳座用于至少一种样品,所述容纳座通过所述至少一个开口与外界连通;
至少一个用于样品的容器元件,至少一个容器元件通过所述至少一个开口可插入所述容纳座/在容纳座内断开/从容纳座断开;
至少一个光激发组,所述至少一个光激发组容纳在所述容纳外壳内,设计成发射朝向所述至少一个容纳座的激发光辐射;
至少一个检测组,设计成检测至少一种发射光辐射,所述发射光辐射在使用中由所述至少一种样品产生,所述至少一种样品可以被所述至少一个光激发组发射的所述至少一种激发光辐射光激发,所述至少一个检测组设计成提供与所述至少一种样品中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的至少一种电输出信号;
至少一个处理单元,设计成接收和处理所述至少一种电信号并且输出与所述至少一种样品中感兴趣的微小RNA的量相关联的指数;
所述至少一个容器元件由可透过所述至少一种激发光辐射以及所述至少一种发射光辐射的材料构成,
其特征在于,
用于检测所述发射光辐射的所述至少一个检测组包括至少一个硅光电倍增管类型的传感元件。
根据本发明的另一方面,提供了一种用于检测从体液提取的样品中感兴趣的微小RNA的方法,包括以下可操作步骤:
-提供本发明第一方面所述的试剂盒;
-将所述要检查的样品设置在所述至少一个容器元件中;
-在所述至少一个容器元件中设置至少一种寡核苷酸探针,寡核苷酸探针设置成与所述感兴趣的微小RNA的链中存在的各个互补的核苷酸序列建立特异性结合;
-在所述至少一个容器元件中提供与所述样品中所述感兴趣的微小RNA相缔合的至少一种分子标记物;
-将所述至少一个容器元件插入所述装置的所述容纳座中;
-激活所述至少一个光激发组;
-激活所述至少一个检测组;
-通过这样激活的所述至少一个检测组的方式检测来自所述至少一个容器元件的所述发射光辐射,与所述样品中所述感兴趣的微小RNA的量相关联;和
-应用与所述样品中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的至少一种电输出信号。
通过以下目前优选的实施方式的详细描述可以更加明白本发明的其他方面和优点,附图中的这些实施方式仅仅是非限制性的示例,其中:
图1显示了从体液提取的感兴趣的微小RNA的光学检测的试剂盒的稍微从上方观察的透视图。
图2显示了根据本发明的第一个实施方式,图1的试剂盒的主要组件的简图。
图3显示了根据本发明的第二个实施方式的第一变体,图1的试剂盒的主要组件的简图。
图4显示了根据图3所示的本发明的第二个实施方式的试剂盒的第二变体。
在附图中,用相同的附图标记表示相当或类似部件或组件。
现在参考图1-4,观察到根据本发明的第一个实施方式,用于对从体液提取的样品C中的感兴趣的微小RNA进行光学检测的试剂盒,宽泛地用附图标记1表示,包括装置2,装置2由容纳外壳2a形成,由容纳座2b界定,容纳座2b可以通过外壳本身内的开口2c的方式与外界连通。本发明的试剂盒还包括容器元件3,使用时用于包含从体液提取的、含有感兴趣的微小RNA的需要分析的样品C,从而检测感兴趣的微小RNA在样品中的存在。容器元件3由可透过通过各自的光源和通过分子标记物发射的光辐射的材料构成,如下文更好地描述的那样,例如由透明材料构成,可插入容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开。
在本发明试剂盒的装置2的容纳外壳2a中,安装有光激发组5,设计成将激发光辐射λ向容纳座2b传输,因而朝容器元件3传输,所述容器元件3在使用中可插入所述容纳座。
更具体说,光激发组5包括光源5a,例如LED类型的光源,适用于传输激发光辐射λ。这种光辐射λ具有分子标记物的激发范围的波长,可光学激发并且以已知的方式与需要检查的样品C中的感兴趣的微小RNA的分子相缔合。LED光源例如可选择大约470nm的发射峰。
如本发明所述,一种该类型的光源5a相当便宜,允许维持本发明的试剂盒有限的生产成本以及有限的功率消耗。在任何情况下,可使用其他类型的光源5a,例如激光光源或者一种或多种白光光源,例如卤素灯。
本发明试剂盒的光激发组5还包括这种激发光辐射λ的准直元件5b,例如包括会聚的光学透镜设置以校准光辐射λ朝向装置2的外壳2a的容纳座2b。这种准直元件5b例如包括放置在离开LED光源5a等于其自身焦距的距离的焦距等于约10mm的光学透镜。
有益地,本发明的光激发组5还包括位于准直元件5b和容纳座2b之间的光过滤元件5c。光过滤元件5c设置成限制由光源5a激发的、到达容纳座2b的光辐射组件λ的光谱。穿过光过滤元件5c的光辐射λ1的光谱设置为获取使用中与需要检查的样品C相关的标记物的光激发。光过滤元件5c还具有以下功能:将光辐射λ降至最小而不能用于分子标记物的光激发,也不可避免地传播至装置的其他组件,如下文更好地描述的那样。
任选地,本发明的光激发组包括一个或多个用于筛选光源5a发射的光辐射λ,λ1的元件5d。筛选元件5d,技术术语也称为“光栅格”,设置在光过滤元件5c和装置2的容纳座2b之间。它们对于光辐射λ和/或λ1侧向限定发射区域的部分形成物理阻隔,在所述发射区域内辐射λ,λ1能够向容纳座2b自由扩散。因而光辐射λ,λ1在容纳座2b入射,并且使用中入射到容器3上,具有平行光束,振幅或大或小,取决于筛选元件5d限定的发射区域的宽度。
本发明用于光学检测样品C中感兴趣的微小RNA的试剂盒还包括组件6,用于检测使用中与光激发的感兴趣的微小RNA相关的分子标记物产生的发射光辐射λ2。这种检测组件6可容纳在装置2内容纳座2b处。分子标记物产生的发射光辐射λ2由需要检查的样品C响应光源5a激发光辐射λ1而发射。发射光辐射λ2指示感兴趣的微小RNA与各自的寡核苷酸探针杂交。检测组件6设计成检测光辐射λ2,并且提供一种或多种与样品C中感兴趣的微小RNA的量相关联的电输出信号SO(信号输出)。
本发明的试剂盒还包括优选地安装在装置2内的处理单元7,它被设计成以已知的方式处理检测组6提供的电信号SO,然后输出需要检查的样品C中感兴趣的微小RNA的定量指数或测量结果。
有益地,检测组6包括至少一个硅光电倍增管类型的传感元件(或SiPM)6a,如已知的那样,对低强度的信号极端敏感。传感元件SiPM6a适用于检测一旦光学激发后,可缔合样品C的微小RNA的分子标记物发射的光子。输出时,SiPM6a提供电信号SO。可在本发明的试剂盒中使用的典型SiPM传感器的灵敏度峰值在380-480nm之间。
任选地,容器3和传感元件6a之间,本发明的试剂盒的检测组6提供了光过滤元件6b,它被设计成过滤不可避免地到达传感元件6a的光辐射λ1,即使到达的量有限。
例如,光过滤元件6b安装或设置在传感元件6a的表面上。采用这种构造,发射光辐射λ2之后的光程非常有限,因而相对于常规技术而言试剂盒的灵敏度增加。
此外,显然这种辐射λ2的有限光程的构造使得来自周围环境的背景噪音降低,因而以更有效的方式检测发射光辐射λ2。如观察到的那样,采用这种构型,本发明试剂盒的装置2的尺寸也会非常有限,使得该装置易于操作者运输。
本发明的试剂盒还包括适用于给药的任何合适的类型的给样元件(图中未示出),在需要分析的样品C的容器元件3中,可检测到与微小RNA互补的分子标记物以及(如果在液相中存在杂交的话)寡核苷酸探针4。
在感兴趣的微小RNA与寡核苷酸探针4在固相中杂交的具体示例中,探针4已经在容器元件3中,例如以已知的方式结合或束缚到容器3的内表面或者容器3中存在的微小或纳米颗粒的表面上,图中未示出。
在这种情况下,除了样品C的给样元件,本发明的试剂盒还包括设计成插入容器3中的任何合适的类型的给样元件(图中也未示出),与感兴趣的微小RNA的分子互补、并且光激发的至少一个分子标记物和多个寡核苷酸探针4缔合。
根据本发明的第一个实施方式,如图2所示,用于光学检测从体液提取的样品C中的感兴趣的微小RNA的试剂盒沿轴线x-x延伸,穿过装置2的容纳外壳2a的容纳座2b并且穿过安装在内的光激发组5。更具体说,容器元件3有益地由检测组6支撑并且在一次性卡盘8(图1)中与之整合,所述一次性卡盘8可插入容纳外壳2a的容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开。
在第一实施方式中,容器元件3可透过光辐射λ,λ1,λ2,由光过滤元件6b直接支撑。例如,容器3可由石英、COC、PC、PET构成;使用中,从体液提取的需要分析的样品C插入所述容器内,在其中发生与多个寡核苷酸探针4的杂交以及与分子标记物的缔合。在固相杂交的情况下,探针4已经存在于容器3内。在溶液杂交的情况下,通过合适的给样元件以已知的方式加入探针、样品C以及分子标记物。
采用这种构型,发射光辐射λ2的光程降至最小,因而试剂盒的灵敏度增加。在这种情况下,传感元件SiPM6a尺寸降低,例如在1x1mm或2x2mm的数量级上。
作为可选方式,检测组6可以锚定在装置2中,导向容纳座,并且容器元件3可以整合到可插入容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开的一次性卡盘8中。
根据本发明的试剂盒1的第二个实施方式(参见图3和4),检测组6可容纳在装置2中,相对于穿过容纳座2b和光激发组5之间延伸的轴线x-x发生位移。例如,检测组6可以锚定至容纳外壳2a,相对于轴线x-x发生大约90度的角位移。
该构造是有益的,因为其显著降低了光源5a发射的激发光辐射λ导致的背景噪音。如上所述,这种光辐射从未被完全消除,即使通过检测组6的光过滤元件6b进行过滤,并且如果通过传感元件SiPM6a检测(即使最小),实际上代表了需要检查的样品C发射的光辐射λ2的检测下限。
根据本发明第二实施方式的第一变体,容器元件3可以沿轴线x-x容纳在容纳座2b内,在容纳座内侧向接收激发光辐射λ1。
在这种情况下(图3),单一容器元件3由合适的支撑件支撑以形成可插入容纳外壳2a的容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开的一次性卡盘8,而检测组6容纳在外壳内,沿各自的容纳轴线y-y相对于轴线x-x发生大约90度的角位移。
传感元件SiPM6a尺寸有限,例如在1x1mm或2x2mm的数量级上。
根据本发明第二实施方式的第二变体,参见图4,容器3可以相对于轴线x-x角位移地容纳在外壳2a的容纳座内,从而导向光激发组5的光源5a并且导向检测组6的传感元件6a。根据该变体,容器3可整合在可插入容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开的一次性卡盘内。
第二实施方式的第二变体使得光源5a对样品C的光照提高,同时确保光源5a导致的背景噪音的降低。在第二实施方式中,本发明的试剂盒的检测组6包括大尺寸(例如4x4mm)的光传感元件SiPM6a。
根据本发明第二实施方式的其他变体,检测组6包括多个传感元件SiPM6a,如图3和4中虚线所示,设计成检测一旦光激发,与感兴趣的微小RNA缔合的分子标记物发射的发射光辐射λ2。众所周知,这种激发光辐射λ2在所有方向上空间发射,因而可以通过安装在容纳座2b处并且导向该容纳座的多个传感元件6a检测。
有益地,根据本发明其他变体的试剂盒提供了两个传感元件6a,设置在相对于装置的容纳座2b的相对侧。采用这种构型,除了检测组6能够获得发射的双重信号SO(每个传感元件发射一个信号)之外,激发光辐射λ1导致的干扰降低。
本领域技术人员可以容易地理解其他构造的传感元件也是可能的。因此,例如,检测组6也可包括多个传感元件SiPM6a,在与轴线x-x正交的平面上,围绕容纳座2b相互角偏移以形成传感器的环。在这种情况下,传感元件SiPM的尺寸可以具有各种类型,例如从1x1mm到4x4mm,取决于安装在装置中的传感器的数量。
本发明的试剂盒的处理组7包括已知的适用于接收和处理检测组6的传感元件6a发射的信号SO的组件。例如,其可包括信号放大元件,设置用于放大SiPM6a发射的信号SO。这种信号放大元件包括例如低噪音的操作放大器。然后,处理组7包括例如集成元件和模拟-数字转换器,设计成将模拟电流信号SO转换成相应的电压水平,实际上是对应于分析的样品中感兴趣的微小RNA的量的指数。任选地,处理单元7输出的指数可以与需要检查的样品C中感兴趣的微小RNA的浓度相关联。
用于检测从体液提取的样品C中感兴趣的微小RNA的方法在执行中非常实际并且是可靠的。
首先,这种方法提供了用于设置本文所述的试剂盒的方法以及将需要检查的样品C设置在试剂盒的容器3中的方法。
如果需要检查的样品C中感兴趣的微小RNA的杂交在溶液中进行,该方法提供了用于和样品C一起给予的一种或多种与感兴趣的微小RNA互补以形成双链杂交分子的寡核苷酸探针以及可与杂交事件缔合的分子标记物。
如果杂交在固相进行,探针4已经设置在容器3内并且等待某一时间段(几分钟)以使杂交发生;然后,通过上述给样方式,将可光激发的分子标记物加入杂交的样品C中,这种标记物将结合杂交的感兴趣的微小RNA分子。
本发明的检测方法提供了激活光激发组5的步骤,期间样品C光激发,以及检测结合杂交的样品C中微小RNA分子的分子标记物发射的发射光辐射λ2并且与样品中感兴趣的微小RNA的量相关联。
在该检测步骤中,检测组6的传感元件SiPM6a检测发射光辐射λ2并且每个元件响应这种辐射而发射一种或多种电信号SO。
上述方法也包括在给予分子标记物的步骤和激活光激发组5的步骤之间,将容器3手动插入装置2的容纳座2b的步骤,根据情况所述容器可以整合或者未整合到一次性卡盘8中。
根据上述方法的一种变体,给予样品C的步骤可以以自动方式进行。
预先测试显示,使用DestiNAGenomics销售并且国际申请WO2009/037473描述的杂交方法(使用掺入荧光团的PNA寡聚体和核碱基构成的探针),使得本发明的试剂盒的选择性提高,因而在执行本发明的过程中更加精确和可靠。
假定对于需要分析的样品C而言无需预先的扩增步骤,执行该方法的时间有限(用于杂交的几分钟以及用于光激发样品和分析对应的信号SO的几秒钟),以及试剂盒的所有组件的尺寸有限,这些使得在应用中实际且可靠。
上文所述的试剂盒和方法可以进行各种改进和变化,均包括在所附权利要求书限定的保护范围内。
因此,例如,本发明第二实施方式的试剂盒可以包括:容器3、至少一个传感元件SiPM6a以及(如果需要的话)光过滤元件6b,整合在可插入装置2的容纳座2b/在容纳座2b内断开/从容纳座2b断开的一次性卡盘8内。
而且,如果本发明的试剂盒的容器3由各自的检测组6直接支撑或者与其整合,与检测组6接触而没有壁,使得需要分析的体液样品C以及寡核苷酸探针4和分子标记物直接接触传感元件SiPM6a或者(如果有的话)光过滤元件6b。
而且,通过相继控制试剂盒的各种组件的打开/关闭或激活-灭活的方式,上文所述用于检测感兴趣的微小RNA的方法可以更加精确和可靠。
例如,可以激活光激发组5从而诱导各个发射光辐射λ2对需要检查的样品C的发射,以及灭活所述光激发组5,然后激活装置2的检测组。
这样,光激发组5发射的导向容器3的光辐射λ,λ1将接近被完全消除,因而光激发组5发射以及检测组6检测有效检测的光辐射将仅仅包括与感兴趣的微小RNA的量相关联的发射光辐射λ2。
Claims (23)
1.一种用于检测至少一种从体液提取的样品(C)中感兴趣的微小RNA的试剂盒,包括:
-至少一个装置(2),所述装置(2)包括容纳外壳(2a)和至少一个开口(2c),所述容纳外壳(2a)中至少一个容纳座(2b)用于所述至少一种样品(C),所述容纳座(2b)通过所述至少一个开口(2c)与外界连通;
-用于所述至少一种样品(C)的至少一个容器元件(3),所述至少一个容器元件(3)可通过所述至少一个开口(2c)插入所述容纳座(2b)/在容纳座(2b)内断开/从容纳座(2b)断开;
-至少一个光激发组(5),所述至少一个光激发组(5)容纳在所述容纳外壳(2a)内,设计成发射朝向所述至少一个容纳座(2b)的至少一种激发光辐射(λ,λ1);
-至少一个检测组(6),设计成检测至少一种发射光辐射(λ2),所述发射光辐射(λ2)在使用中由所述至少一种样品(C)产生,所述至少一种样品(C)可以被所述至少一个光激发组(5)发射的所述至少一种激发光辐射(λ,λ1)光激发,所述至少一个检测组(6)设计成提供与所述至少一种样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的至少一种电输出信号(SO信号输出);
-至少一个处理单元(7),设计成接收和处理所述至少一种电信号(SO)并且输出与所述至少一种样品(C)中感兴趣的微小RNA的量相关联的指数;
至少一个容器元件(3),所述容器元件(3)由可透过所述至少一种激发光辐射(λ,λ1)以及所述至少一种发射光辐射(λ2)的材料构成,其特征在于,用于检测所述发射光辐射(λ2)的所述至少一个组(6)包括至少一个硅光电倍增管类型的传感元件(6a)。
2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述光激发组(5)包括至少一个LED类型的光源(5a),安装在所述容纳外壳(2a)的所述容纳座(2b)处并且适用于传输与所述感兴趣的微小RNA缔合的至少一个分子标记物的激发波长范围的激发光辐射(λ)。
3.如权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述光激发组(5)包括至少一个准直元件(5b)以及在所述至少一个准直以及(5b)和所述至少一个容纳座(2b)之间的至少一个光过滤元件(5c)。
4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述光激发组(5)包括至少一个用于筛选所述激发光辐射(λ,λ1)的元件(5d),所述至少一个筛选元件被设计成侧向界定发射区域,在该区域内所述激发光辐射(λ,λ1)能够朝所述至少一个容纳座(2b)自由扩散。
5.如权利要求1-4中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述用于检测来自所述至少一种样品(C)的所述至少一种发射光辐射(λ2)的至少一个组(6)包括至少一个光过滤元件(6b),位于所述至少一个容纳座(2b)和所述至少一个硅光电倍增管传感元件(6a)之间。
6.如权利要求1-5中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个检测组(6)在使用中沿着穿过所述装置(2)的所述容纳座(2b)和所述光激发组(5)之间的轴线(x-x)容纳在所述装置(2)内。
7.如权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个容器元件(3)由所述至少一个检测组(6)支撑。
8.如权利要求6或7所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个容器元件(3)和所述至少一个检测组(6)整合在可插入所述容纳座(2b)/在容纳座(2b)内断开/从容纳座(2b)断开的一次性卡盘(8)中。
9.如权利要求1-5中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个检测组(6)沿容纳轴线(y-y)容纳在所述外壳(2a)内,相对于所述装置(2)的所述容纳座(2b)和所述光激发组(5)之间的轴线(x-x),所述轴线(y-y)不是对齐的,而是相对于所述轴线(x-x)呈约90度。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个容器元件(3)沿所述容纳轴线(x-x)容纳在所述外壳(2a)的所述容纳座(2b)内,因而所述激发光辐射(λ1)侧向攻击之。
11.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个容器元件(3)相对于所述容纳轴线(x-x)和所述容纳轴线(y-y)角位移地容纳在所述外壳(2a)的所述容纳座内,因而朝向所述光激发组(5)以及朝向所述至少一个检测组(6)。
12.如权利要求9-11中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个检测组(6)锚定至所述容纳外壳(2a)并且所述至少一个容纳元件(3)可整合在可插入所述容纳座(2b)/在容纳座(2b)内断开/从容纳座(2b)断开的一次性卡盘(8)中。
13.如权利要求9-11中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个检测组(6)锚定至所述容纳外壳(2a)并且所述至少一个容纳元件(3)和至少一个检测组(6)整合在可插入所述容纳座(2b)/在容纳座(2b)内断开/从容纳座(2b)断开的一次性卡盘(8)中。
14.如权利要求1-13中任一项所述的试剂盒,其特征在于,来自所述至少一个处理单元(7)的所述输出指数与所述至少一种样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的浓度相关。
15.如权利要求1-14中任一项所述的试剂盒,其特征在于,包括用于将所述至少一种样品(C)给予所述至少一个容器元件(3)的自动元件。
16.如权利要求1-15中任一项所述的试剂盒,其特征在于,包括用于将至少一种分子标记物给予所述至少一个容器元件(3)的元件,所述至少一种分子标记物可与所述样品(C)中所述感兴趣的微小RNA缔合。
17.如权利要求7,8或13中任一项所述的试剂盒,其特征在于,所述至少一个容器元件(3)与所述至少一个检测组(6)接触而没有壁,因而所述需要分析的体液的所述至少一种样品(C)与所述至少一个传感元件(6a)或者与所述至少一个光过滤元件(6b)直接接触。
18.一种检测从体液提取的样品(C)中感兴趣的微小RNA的方法,包括以下操作步骤:
-提供权利要求1-17中任一项所述的试剂盒;
-将所述需要检查的至少一种样品(C)提供给所述至少一个容器元件(3);
-在所述至少一个容器元件(3)中供应至少一种寡核苷酸探针(4),每种寡核苷酸探针(4)设置成与所述感兴趣的微小RNA的链中存在的各个互补的核苷酸序列建立特异性结合。
-在所述至少一个容器元件(3)中供应与所述样品(C)中所述感兴趣的微小RNA相缔合的至少一种分子标记物;
-将所述至少一个容器(3)插入所述装置(2)的所述容纳座中;
-激活所述至少一个光激发组(5);
-激活所述至少一个检测组(6);
-通过激活的所述至少一个检测组(6)的方式检测来自所述至少一个容器元件(3)的所述发射光辐射(λ2),与所述样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的量相关联;
-应用与所述样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的至少一种电输出信号(SO)。
19.如权利要求18所述的方法,如果引用权利要求15,其特征在于,将所述需要检查的至少一种样品(C)设置在所述至少一个容器元件(3)中的步骤通过所述自动给样元件的方式自动进行。
20.如权利要求18或19所述的方法,其特征在于,将所述至少一种样品(C)设置在所述至少一个容器元件(3)中的步骤,将至少一种寡核苷酸探针(4)供应给所述至少一个容器元件(3)的步骤,以及将可与所述感兴趣的微小RNA缔合的所述至少一种分子标记供应给所述至少一个容器元件(3)的步骤同时进行。
21.如权利要求18或19所述的方法,其特征在于,将至少一种寡核苷酸探针(4)提供给所述至少一个容器元件(3)的步骤在将所述需要检查的至少一种样品(C)供应给所述至少一个容器元件(3)的步骤之前进行,其中,每种寡核苷酸探针(4)设置成与所述感兴趣的微小RNA的链中包含的各个互补的核苷酸序列建立特异性结合。
22.如权利要求18-21中任一项所述的方法,如果引用权利要求8或12或13,其特征在于,将所述容器(3)插入所述装置(2)的所述容纳座的步骤包括将将所述一次性卡盘(8)插入所述容纳外壳(2a)的所述容纳座(2b)中。
23.如权利要求18-22中任一项所述的方法,其特征在于,在激活所述至少一个光激发组(5)的步骤以及检测来自所述至少一个容器元件(3)并且与所述样品(C)中所述感兴趣的微小RNA的量相关联的所述发射光辐射(λ2)的步骤之间,提供用于灭活所述至少一个光激发组(5)的步骤然后再激活所述至少一个检测组(6)。
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