CN105213255A

CN105213255A - 一种复方神秘果叶提取物及其在眼部化妆品中的应用

Info

Publication number: CN105213255A
Application number: CN201510638508.9A
Authority: CN
Inventors: 赵仕芝
Original assignee: Shanghai Shangmei Cosmetics Co Ltd
Current assignee: Shanghai Shangmei Cosmetics Co Ltd
Priority date: 2015-09-29
Filing date: 2015-09-29
Publication date: 2016-01-06

Abstract

本发明公开了一种复方神秘果叶提取物，其以中草药原料制备而成，主料为神秘果叶，辅料为赤芍、白蒺藜、黄芪、丹参、三七中的任意三种的组合。本发明还公开了所述复方神秘果叶提取物的制备方法，包括准备中草药原料、预处理、提取、粗滤、精滤、浓缩、复溶和灭菌。本发明还公开了所述复方神秘果叶提取物在具有红润肌肤、改善黑眼圈功效的眼部化妆品中的应用。本发明所述的复方神秘果叶提取物兼具抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性，同时具有改善皮肤微循环血流量的作用，可作为红润肌肤、改善黑眼圈功效成分应用于眼部化妆品中。

Description

一种复方神秘果叶提取物及其在眼部化妆品中的应用

技术领域

本发明涉及化妆品领域，特别是涉及一种复方神秘果叶提取物及其在眼部化妆品中的应用。

背景技术

天然神秘果叶，属于热带常绿灌木，四季常青，国宝级珍贵植物，禁止出口。原产于西非、加纳、刚果一带，20世纪60年代，周恩来总理到西非访问时，加纳共和国把神秘果作为国礼送给周总理。此后，开始在我国栽培，富含粗纤维，粗蛋白，粗脂肪，VC，多酚，多糖，黄铜类物质，主要应用于食品保健品，虽在化妆品领域中应用未见报道，但是因其多糖、多酚、黄酮类物质含量较高，在化妆品中具有极大的潜在的应用价值。神秘果叶中含有较多营养成分，如：

神秘果叶营养成分及含量表

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种兼具抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性的复方神秘果叶提取物及其在眼部化妆品中的应用，并提供该复方神秘果叶提取物的提取方法。

一种复方神秘果叶提取物，所述复方神秘果叶提取物以中草药原料制备而成，所述中草药原料由主料和辅料构成，所述主料为神秘果叶，重量百分比为30％～50％，所述辅料为赤芍、白蒺藜、黄芪、丹参、三七中的任意三种的组合，重量百分比分别为20％～30％，10％～30％以及10％～20％。

本发明所述的复方神秘果叶提取物，其中，所述复方神秘果叶提取物的制备方法包括如下步骤：

(1)按比例准备所述中草药原料；

(2)预处理：将所述中草药原料中的异物挑出后进行烘干粉碎处理，得中草药原料粉末，将四种中草药粉末混合均匀，制成神秘果叶复配物；

(3)提取：将所述神秘果叶复配物和溶剂按重量比1:27～39进行混合，在60～89℃的温度下提取2.5～3小时，得提取溶液；所述溶剂为纯水、40％～95％的乙醇溶液或40％～95％的丙酮溶液；

(4)粗滤：将所述提取溶液粗滤，得复方神秘果叶提取物粗滤液；

(5)精滤：将所述复方神秘果叶提取物粗滤液精滤，得复方神秘果叶提取物精滤液；

(6)浓缩：将所述复方神秘果叶提取物精滤液，得复方神秘果叶提取物浓缩液；

(7)复溶：将所述复方神秘果叶提取物浓缩液采用1:20的丁二醇水溶液复溶，得复方神秘果叶提取物复溶物；

(8)灭菌，将所述复方神秘果叶提取物复溶物灭菌，得复方神秘果叶提取物。

本发明所述的复方神秘果叶提取物，其中，步骤(3)中所述提取为搅拌回流提取或者超声提取。

本发明所述的复方神秘果叶提取物在具有红润肌肤、改善黑眼圈功效的眼部化妆品中的应用。

本发明所述的应用，其中，在所述眼部化妆品中，所述复方神秘果叶提取物所占的重量百分比为0.2％～8％。

本发明所述的应用，其中，所述眼部化妆品中还包括溶剂、润肤剂、增溶剂、抗氧化剂、pH调节剂、促渗剂、乳化稳定剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、中和剂、螯合剂、表面活性剂、乳化剂、香精、着色剂、防晒剂、皮肤调理剂、活性物以及功效添加剂中的一种或几种。

本发明所述的应用，其中，所述眼部化妆品为眼部化妆水、眼膜、眼部啫喱、眼部乳液、眼部精华液、眼霜。

本发明复方神秘果叶提取物的制备方法与现有技术不同之处在于：

神秘果叶具有良好的抗氧化活性，但没有抑制酪氨酸酶活性的功能，要想发挥它出色的红润肌肤、改善黑眼圈功效，需考虑进行复方提取，以充分发挥神秘果叶抗氧化活性的同时，承载更加优良的护肤功效。

关于复方的选择，按照中医理论“辨证、整体、综合”及君臣组方原则“君、臣、佐、使”，进行复配，其中确定神秘果叶为“君”的主要地位，选择与之性情相配的中草药进行复配组方，以最大化得到黄酮、多酚类物质为判断依据，中间进行提取工艺的优化设计，以期达到红润肌肤、改善黑眼圈功效最好的提取液应用到各类眼部化妆品剂型里。

本发明将神秘果叶及赤芍，白蒺藜，黄芪，丹参，三七等进行复配，兼具抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性，弥补了神秘果叶仅具有较强的抗氧化活性的不足，本发明将神秘果叶复配物通过预处理、搅拌热回流提取、粗滤、精滤、浓缩、复溶、灭菌的处理制成复方神秘果叶提取物，其黄酮含量较高，DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率、能显著提高皮肤微循环血流量，可作为红润肌肤、改善黑眼圈功效成分应用于眼部化妆品中。

具体实施方式

实施例1

将中草药原料进行预处理，制成中草药原料粉末；

将神秘果叶、赤芍、白蒺藜、黄芪分别按照30％、30％、20％、20％的比例制成神秘果叶复配物；

将神秘果叶复配物和纯水按重量比1:27进行混合，制成混合物，将该混合物加热至60℃左右，超声提取2.5小时，制成神秘果叶复配物和提取溶液；

将神秘果叶复配物和提取溶液粗滤，制成复方神秘果叶提取物粗滤液；

将复方神秘果叶提取物粗滤液精滤，制成复方神秘果叶提取物精滤液；

将复方神秘果叶提取物精滤液浓缩，制成复方神秘果叶提取物浓缩液；

将复方神秘果叶提取物浓缩液用1:20的丁二醇水溶液复溶，制成复方神秘果叶提取物复溶物；

将复方神秘果叶提取物复溶物灭菌，制成复方神秘果叶提取物。

实施例2

将神秘果叶、赤芍、丹参、三七分别按36％、28％、18％、18％的比例制成神秘果叶复配物；

将神秘果叶复配物和40％的丙酮溶液按重量比1:39进行混合，制成混合物，将该混合物加热至89℃左右，超声提取3小时，制成神秘果叶复配物和提取溶液；

实施例3

将神秘果叶、丹参、三七、黄芪分别按42％、26％、16％、16％的比例制成神秘果叶复配物；

将神秘果叶复配物和80％的丙酮溶液按重量比1:30进行混合，制成混合物，将该混合物加热至70℃左右，搅拌热回流2.6小时，制成神秘果叶复配物和提取溶液；

实施例4

将神秘果叶、白蒺藜、三七、黄芪分别按45％、25％、15％、15％的比例制成神秘果叶复配物；

将神秘果叶复配物和50％的乙醇溶液按重量比1:35进行混合，制成混合物，将该混合物加热至75℃左右，搅拌热回流超声提取2.7小时，制成神秘果叶复配物和提取溶液；

实施例5

将神秘果叶、赤芍、丹参、黄芪分别按50％、24％、14％、12％的比例制成神秘果叶复配物；

将神秘果叶复配物和90％的乙醇溶液按重量比1:37进行混合，制成混合物，将该混合物加热至85℃左右，搅拌热回流2.8小时，制成神秘果叶复配物和提取溶液；

本发明的配方不局限于实施例1～实施例5，研究发现，采用本发明范围内的其他的组合也具有相似的效果。

实施例6：含有复方神秘果叶提取物的眼部化妆水的制备

上述复方神秘果叶提取物为实施例1～实施例5任一所述的复方神秘果叶提取物。

实施例7：含有复方神秘果叶提取物的眼部精华液的制备

实施例8：含有复方神秘果叶提取物的眼霜的制备

实施例9：含有复方神秘果叶提取物的眼膜的制备

实施例10：含有复方神秘果叶提取物的眼部啫喱的制备

实施例11：含有复方神秘果叶提取物的眼部乳液的制备

对实施例1-实施例5所得5％的复方神秘果叶提取物进行指标测试，检测结果均在以下表格范围内。

检测指标	检测结果
		黄酮含量/mg·mL-1	0.39～0.43
DPPH清除率/％	81～93
		酪氨酸酶抑制率/％	84～93
透明质酸抑制率/％	57～68

采用以上复配及工艺方案的有益效果：本发明将神秘果叶及赤芍，白蒺藜，黄芪，丹参，三七中的任意三种进行复配，兼具抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性，弥补了神秘果叶仅具有较强的抗氧化活性的不足，本发明将神秘果叶复配物通过预处理、搅拌热回流提取、粗滤、精滤、浓缩、复溶、灭菌的处理制成复方神秘果叶提取物，其黄酮含量较高，DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率、能显著提高皮肤微循环血流量，可作为红润肌肤、改善黑眼圈成分应用于化妆品中。

本发明复方神秘果叶提取物产品的活性物黄酮含量检测。

复方神秘果叶提取物生药质量浓度为0.05g/mL，黄酮含量检测结果如表1所示。

表1复方神秘果叶提取物黄酮含量

备注：黄酮含量检测采用NaNO₂-Al(NO₃)₃比色法。

一、本发明复方神秘果叶提取物产品的功效评估

1、DPPH自由基清除率

DPPH是一种稳定的有机自由基，在可见光区最大吸收峰为517nm，在乙醇溶液中，每个DPPH分子在溶液中可生成一个稳定的含氮自由基，具有典型紫色，当它与提供1个电子的自由基清除剂作用时，生成无色产物，使溶液的典型紫色变浅，其褪色程度与配对电子数成化学计量关系。因此，可用分光光度法进行定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的清除自由基的能力。研究表明，DPPH清除率越高，抗氧化活性越强。不同受试浓度下，复方神秘果叶提取物的DPPH清除率实验结果如表2所示。

表2复方神秘果叶提取物DPPH自由基清除实验结果

由表2可知，复方神秘果叶提取物具有良好的DPPH自由基清除效果，受试浓度在2.0％时，DPPH自由基清除率即达到88％左右，表明复方神秘果叶提取物在生化水平具有良好的抗氧化活性，且复方神秘果叶提取物的抗氧化活性优于市售竞品。

3、透明质酸酶抑制率

透明质酸酶抑制率大小在一定程度上反应了样品的抗炎活力，抑制率越高，抗炎活性越强。通过构建体外抑制透明质酸酶实验体系，评估复方神秘果叶提取物对透明质酸酶的抑制率。不同受试浓度下复方神秘果叶提取物抑制透明质酸酶实验结果如表3所示。

表3复方神秘果叶提取物透明质酸酶抑制率实验结果

由表3可知，复方神秘果叶提取物具有一定的透明质酸酶抑制率，表明其具有一定的抗炎活性。且在相同的受试浓度下，复方神秘果叶提取物抑制透明质酸酶活性均优于市售竞品。4、改善皮肤微循环实验

皮肤微循环血流量在医学上有广泛的应用。在一定范围内，皮肤微循环血流量越大表明皮肤细胞具有良好的自我更新及再生能力。将制备好的复方神秘果叶提取物添加进膏霜基质中，添加浓度5％，采用“激光多普勒血流测试仪”分析受试志愿者使用复方神秘果叶提取物的膏霜前后改善皮肤微循环血流量的变化情况。

受试志愿者15人，年龄25-35岁，实验过程中控制相对湿度(30±5％)及温度(25±1℃)。结果显示，复方神秘果叶提取物具有良好的改善皮肤微循环血流量的功效。参与实验15名志愿者中，共有11名受试志愿者的皮肤微循环血流量得到了有效的提高，有效率达到73％。实验中，所有15名受试志愿者皮肤均无不良反应发生。据此，复方神秘果叶提取物可运用于红润肌肤、改善黑眼圈。

5、黑色素细胞试验

探讨复方神秘果叶提取物样品对黑色素细胞的增殖及红润肌肤、改善黑眼圈作用的影响。利用B16黑色素瘤细胞，测定样品对黑色素细胞增殖作用的影响，以及对黑色素细胞合成黑色素的影响。

(1)细胞增殖率的测定(MTT法)

培养小鼠黑色素瘤B16细胞，待细胞生长到对数期，用0.25％胰酶消化，调整细胞浓度为5×10⁴个/mL，接种于96孔板中，每孔100μL。置于培养箱中培养24h后，弃上清液，添加含药培养基，每个样品三个浓度组。每一浓度设3个复孔，对照组不加药物，代之以相应的溶媒。孵育72h后，每孔加入5g/L的MTT溶液20μL，4h后弃上清液，每孔加入细胞裂解液100μL，继续培养过夜，在酶标仪上检测各孔吸光度值，波长为570nm。

细胞增殖抑制率％＝(1-药物组平均吸光值/对照组平均吸光值)×100

(2)黑色素合成抑制率的测定

将B16黑色素细胞以20×10⁴个/mL的密度接种于24板。每孔1mL，孵育24h后，弃上清液，添加待测药物(样品作用终浓度同前述)，药物作用72h后，弃上清液，PBS洗涤，每孔加入含10％DMSO的1mol/LNaOH溶液500μL，震荡5min。测量490nm下各孔吸光值。

黑色素合成抑制率％＝[1-(药物孔490nm吸光度值/药物孔570nm吸光度)/(对照孔490nm吸光度值/对照孔570nm吸光度)]×100

加入不同浓度复方神秘果叶提取物受试物后，样品对黑色素细胞黑色素合成抑制率及细胞增殖抑制率实验结果如表4所示。

表4不同浓度复方神秘果叶提取物样品对B16细胞的增殖抑制作用和黑色素生成作用

结论：加入不同浓度的受试物后，复方神秘果叶提取物样品具有较好的抑制黑色素细胞合成黑色素的作用，在受试浓度范围内(0.5％-2.0％)，黑色素合成抑制率在30％-40％左右，表明复方神秘果叶提取物在细胞水平具有良好的红润肌肤、改善黑眼圈功效，且对细胞增殖的影响低于市售竞品。

二、本发明复方神秘果叶提取物产品的安全性评估

1、红细胞溶血试验

红细胞溶血率在一定程度上可以反应样品的刺激性，溶血率越高，潜在的刺激性越大。复方神秘果叶提取物提取液红细胞溶血率实验结果如下表5所示。

表5复方神秘果叶提取物红细胞溶血率实验结果

由表5可知，复方神秘果叶提取物提取液在10％的浓度范围内具有极低的红细胞溶血率，表明其具有较好的安全性。

2、小鼠多次皮肤刺激试验

通过小鼠多次皮肤刺激试验，确定和评价化复方神秘果叶提取物对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。

方法参照2007版化妆品卫生规范规定的皮肤刺激性/腐蚀性试验方法。将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。

试验结果显示，连续涂抹14天受试样品(分别添加复方神秘果叶提取物提取液5％及10％)，小鼠皮肤均未出现红斑及水肿现象。

结果说明，复方神秘果叶提取物安全性良好，无刺激性。

3、人体封闭式斑贴试验

人体斑贴试验方法参照《妆品卫生规范(2007版)》，制备含1.0％和5.0％的复方神秘果叶提取物提取液的膏霜进行封闭式斑贴，考察样品对人体造成不良反应的可能性。

皮肤不良反应分级如下表6所示。

表6皮肤不良反应分级

根据表6，观察受试者去除斑试器30min、24h及48h时的皮肤反应情况。

试验结果如下表7-表9所示。

表7去除斑试器30min观察结果

表8去除斑试器24h观察结果

表9去除斑试器48h观察结果

根据2007《化妆品卫生规范》的要求，判定样品1、样品2对人体皮肤无不良反应。(其中，样品1为添加1.0％的复方神秘果叶提取物提取液的膏霜，样品2为添加5.0％的复方神秘果叶提取物提取液的膏霜。)

结论：添加1.0％、5.0％两个浓度的复方神秘果叶提取物的膏霜，对人体皮肤无不良反应发生，安全性良好。

4、光毒性试验

采用体外3T3中性红摄取光毒性试验评估复方神秘果叶提取物是否存在潜在的光毒性。

通过计算光刺激因子PIF及平均光效应MPE综合评估样品是否存在光毒性，评判标准如下：当PIF<2.0或MPE<0.1：预期无光毒性；当PIF>2.0且<5.0或MPE>0.1且<0.15：预期可能存在光毒性；当PIF>5.0或MPE>0.15：预期存在光毒性。

试验采用96-孔培养板进行。将生长状态良好的Balb/c3T3细胞接种于96孔细胞培养板(受试品及阳性对照品各2块板)，使每孔的细胞密度约为1.0×10⁴个/孔。培养24小时后，加入含有不同浓度受试品给药制剂和阳性对照盐酸氯嗪(CPZ)的HBSS溶液，同时设置空白对照和赋形剂/溶媒对照，每个处理6个复孔，每种受试品2块板。加湿培养1小时后，分别进行光照和非光照处理，然后换上新鲜的培养液继续培养18-22小时。培养结束前约3小时，加入含中性红无血清的DMEM培养液继续培养。培养结束后，每孔加入中性红洗脱液，置于振荡器快速振荡直至形成均匀的溶液。用分光光度计在540nm下测定各孔的OD值(OD540)。

以Phototox软件计算光刺激因子(PIF)值。试验中，赋形剂或溶剂对照组的OD₅₄₀数值均大于0.4且阳性对照品盐酸氯苯嗪IC₅₀(+UV)在0.1-3.0μg/ml的范围之内，IC₅₀(-UV)在7.0–90.0μg/ml的范围之内，且PIF﹥6，表明试验系统成立。

试验中，加样时及处理结束后，样品各浓度组均未观察到受试品沉淀析出和细胞形态学异常；以Phototox软件计算试验结果，样品的PIF值为*1，即：受试物在达到允许的最高浓度值(1000.0μg/mL)也不表现细胞毒性；因而受试物样品无潜在的光毒性；样品的MPE值也均小于0.1，进一步说明受试物样品预期无光毒性。

表10复方神秘果叶提取物光毒性试验结果

备注：*1：在达到允许的最高浓度值(1000.0μg/mL)也不表现细胞毒性；+：预期存在光毒性；-：预期无光毒性。

因此，在本试验条件下，受试样品的体外3T3中性红摄取光毒性试验为阴性反应，预期无光毒性。

5、皮肤变态反应试验

皮肤变态反应试验参照化妆品卫生规范(2007版)，采用局部封闭涂皮试验(BuehlerTest，BT)方法，确定复方神秘果叶提取物的是否引起皮肤变态反应及程度。变态反应试验皮肤反应评分如表11所示。

表11变态反应试验皮肤反应评分

结果评价：当受试物组动物出现皮肤反应积分≥2时，判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按表12判定受试物的致敏强度。

表12致敏率分类

复方神秘果叶提取物(5％、10％两个浓度下)对豚鼠皮肤变态反应的激发试验结果如表13所示。结果显示，豚鼠皮肤未见变态反应，致敏率为0，动物活动及体重正常。

表13复方神秘果叶提取物对豚鼠皮肤变态反应的激发试验结果

备注：

植物油为阴性对照；

2,4二硝基氯代苯为阳性对照；

样品1为5％复方神秘果叶提取物溶液；

样品2为10％复方神秘果叶提取物溶液。

三、结论

1、功效评估结论

经过系统的功效性评估实验，对复方神秘果叶提取物提取液的功效总结如下：

(1)复方神秘果叶提取物提取液具有良好的抗氧化活性，受试浓度在2.0％时，DPPH清除率即达到88％左右，且神秘果叶的抗氧化活性优于市售竞品。

(2)复方神秘果叶提取物提取液具有一定抗炎活性，受试浓度在5.0％时，透明质酸酶抑制率约为65％，且复方神秘果叶提取物的抗炎活性优于市售竞品。

(3)改善微循环实验结果显示，复方神秘果叶提取物具有良好的改善肌肤微循环血流量的功效。

(4)黑色素细胞试验结果显示，复方神秘果叶提取物在受试浓度0.5％、1％及2％三个受试浓度下具有一定的黑色素合成抑制率，同时可以保证黑色素细胞的相对活率在80％以上。表明，复方神秘果叶提取物在细胞水平具有一定的红润肌肤、改善黑眼圈功效。

2、安全性评估结论

通过红细胞溶血实验、小鼠多次皮肤刺激试验、人体斑贴试验、光毒性试验及皮肤变态反应试验，评估复方神秘果叶提取物提取液的安全性，五个安全性实验结果一致显示，复方神秘果叶提取物提取液安全、无刺激，对人体无不良反应产生。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims

1.一种复方神秘果叶提取物，其特征在于：所述复方神秘果叶提取物以中草药原料制备而成，所述中草药原料由主料和辅料构成，所述主料为神秘果叶，重量百分比为30％～50％，所述辅料为赤芍、白蒺藜、黄芪、丹参、三七中的任意三种的组合，重量百分比分别为20％～30％，10％～30％以及10％～20％。

2.根据权利要求1所述的复方神秘果叶提取物，其特征在于：所述复方神秘果叶提取物的制备方法包括如下步骤：

(1)按比例准备所述中草药原料；

3.根据权利要求2所述的复方神秘果叶提取物，其特征在于：步骤(3)中所述提取为搅拌回流提取或者超声提取。

4.权利要求1～3中任意一项所述的复方神秘果叶提取物在具有红润肌肤、改善黑眼圈功效的眼部化妆品中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：在所述眼部化妆品中，所述复方神秘果叶提取物所占的重量百分比为0.2％～8％。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述眼部化妆品中还包括溶剂、润肤剂、增溶剂、抗氧化剂、pH调节剂、促渗剂、乳化稳定剂、防腐剂、保湿剂、增稠剂、中和剂、螯合剂、表面活性剂、乳化剂、香精、着色剂、防晒剂、皮肤调理剂、活性物以及功效添加剂中的一种或几种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述眼部化妆品为眼部化妆水、眼膜、眼部啫喱、眼部乳液、眼部精华液、眼霜。