具体实施方式
在本公开内容中,应当理解,为了清楚起见在单独实施方案的背景下描述的本发明的某些特征还可以在单个实施方案中组合地提供。相反,为简洁起见在单个实施方案的背景下描述的本发明的多个特征还可以单独地或以任意合适的子组合提供。
本公开内容提供了癌症和肿瘤或增生性疾病的治疗,其包括抑制T-型Ca2+通道。发明人已经确定,抑制T-型Ca2+通道活性,特别是通过当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性,可以阻止肿瘤疾病的进展和治疗癌症。
本发明涉及下述发现:通过抑制在特定膜电位时的应答性来抑制电压门控的T-型Ca2+通道,可用于治疗肿瘤或癌细胞增生。不同于典型的化疗剂,在约-90mV的膜电位选择性地抑制T-型Ca2+通道活性的拮抗剂可以阻止癌细胞的增生,并且对免疫系统功能具有有限的影响或没有影响。因此,这样的拮抗剂的施用在本文中被表示为癌症的治疗。
阻断T型钙通道的化合物可以表现出神经元样活性(其可以用于治疗疼痛、癫痫等)、抗增生性活性(其可以用于治疗癌症等)或偶尔表现出两种活性。存在几种可能性来解释阻断T型钙通道的化合物的行为的差异,诸如神经元和增生细胞中的T-型通道之间的通道(例如,翻译后修饰)的电位差异。其他人已经提示,抗增生化合物在T-型钙通道处的活性是非主要的且与抗增生机制无关;抗增生机制完全是不同的靶标。
发明人已经发现,当将细胞电位保持在-90mV时,有效的抗增生化合物会以小于约10mM的IC50值阻断T-型通道。当电位是-40mV时以高效能阻断穿过T型钙通道的钙输入的化合物在神经元疾病中是有效的。表现出对于抗增生活性的选择性的化合物优选地是,具有<10的在-90mV状态的IC50值相对应在-40mV状态的IC50值的化合物(即,在约-90mV的IC50值是在-40mV的IC50值的10倍或更小)。
米贝拉地尔优先阻断-90mV状态,且是抗增生性的。在本文中将具有不同骨架的其它抗增生化合物TTL-1170和氯哌莫齐(chlopimozide)鉴定为表现出类似的选择性。表现出有效神经元活性且没有抗增生活性的其它化合物(例如,TTA-A2和MK-8998)表现出降低的在-90mV相对于在-40mV的选择性。因此,本公开内容包括鉴定当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物的方法,以及通过使用该实验方案或它的明显外延鉴定出抗增生活性的任何化合物。
“T-型钙通道”或“T-型Ca2+通道”是低电压活化的离子通道,其具有以下物质的类型的Ca2+选择性的α1亚基,或具有与以下物质类似的活性和/或氨基酸序列同一性:由CACNA1G基因编码的Cav3.1,由CACNA1H基因编码的Cav3.2,或由CACNA1I基因编码的Cav3.3。在一个实施方案中,所述T-型Ca2+通道具有由CACNA1H基因编码的α1亚基Cav3.2。
本文中使用的“抑制”表示活性的减小或阻止。
“拮抗剂”或“抑制剂”会抑制活性或功能。例如,化合物可以如下充当拮抗剂或抑制剂:抑制、减小或消除蛋白表达,或阻止蛋白活性,或阻止蛋白与其它蛋白的相互作用,导致蛋白介导的功能或信号传递的抑制。拮抗剂/抑制剂化合物的例子包括抑制T-型Ca2+通道活性的肽、多肽、蛋白、抗体、反义寡核苷酸、RNAi/siRNA、小分子、化学治疗剂、及其片段、衍生物和类似物。在一个实施例中,当细胞膜电位是约-90mV时,所述化合物以小于约10μM的半数最大抑制浓度(IC50)抑制T-型Ca2+通道活性。在另一个实施例中,与当细胞膜电位是约-30至-60mV时化合物抑制T-型Ca2+通道活性的选择性相比,当细胞膜电位是约-90mV时化合物抑制T-型Ca2+通道活性的选择性是1∶10或更小。
当细胞膜电位是约-90mV时,本发明的示例性化合物以小于约10μM的半数最大抑制浓度(IC50)抑制T-型Ca2+通道活性。IC50是化合物的抑制生物活性的有效性的量度。确定化合物的IC50的方法是本领域已知的,且包括功能性拮抗剂测定(例如使用剂量响应曲线)或竞争结合测定(其测量例如化合物的从靶分子置换已知结合配偶体的能力)。
通过本发明可以抑制的T-型Ca2+通道的活性包括、但不限于:细胞的钙摄取;细胞内钙水平的调节和/或介导;细胞内窗电流的调节和/或介导;钙信号传递途径的、钙介导的信号传递和/或调节;实现穿过G1/S转变或限制点的通道;实现细胞周期进展;启动和/或维持细胞生长和增生,特别是过度的或不希望的增生;启动和/或维持瘤形成和/或肿瘤生长;和启动和/或维持血管生成和/或转移。
发明人已经发现,当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性,可以优先抑制不希望的细胞增生,诸如癌细胞增生。
本文中使用的术语“约”和“大约”指示,值包括固有变异(其例如基于用于确定所述值的方法)或天然存在的变异(诸如在单个细胞中发现的静息或膜电位的变异,或在不同细胞之间发现的静息或膜电位的变异)。在一个非限制性的实施方案中,将该术语定义为在10%以内,在5%以内,在1%以内,或在0.5%以内。类似地,“约-90mV”的膜电位可以包括在-80mV至-100mV的测量范围内、或在-85mV至-95mV的范围内、或在-89mV至-91mV的范围内的膜电位。在另一个实施例中,“约-30至-60mV”的膜电位可以包括在-20mV至-70mV的范围内、或在-25mV至-65mV的范围内的膜电位,且也包括膜电位范围诸如约-30mV至-40mV、约-30mV至-50mV、约-30mV至-70mV、约-40mV至-50mV、约-40mV至-60mV、约-40mV至-70mV、约-50mV至-60mV、和约-50至-70mV、以及约-30mV、约-40mV、约-50mV和约-60mV。
术语“选择性”和“特异性”在本文中互换地用于表示对一种状态或状况的抑制优先于另一种状态或状况。选择性或特异性可以是绝对的,指示仅抑制一种状态或状况且不抑制不同的状态或状况。选择性或特异性还可以是相对的,指示对一种状态或状况(即,对于处于一种膜电位的细胞或细胞类型)的某种抑制以及对另一种状态或状况(即,对于处于不同膜电位的相同细胞或细胞类型)的某种抑制。
表现出就抗增生活性而言的选择性的化合物的例子是这样的化合物:其具有10∶1或更小的在-90mV状态的IC50值与在约-40mV状态的IC50值之比,即,化合物在约-90mV的膜电位的IC50值不超过相同化合物在-30mV至-60mV、或在约-40mV的膜电位的IC50值的10倍。例如,用于在-80mV至-90mV的细胞膜电位抑制T-型Ca2+通道活性的化合物(诸如米贝拉地尔)的IC50可以是大约1μM,而用于在细胞膜电位是约-30mV至-60mV时抑制T-型Ca2+通道活性的化合物(诸如米贝拉地尔)的IC50可以是约0.1μM或更大,诸如0.15μM、0.2μM、0.25μM、0.3μM,直到1.0μM或更大。
尽管细胞的膜电位在G1早期是约-30mV,它在G1晚期下降至约-60mV,然后随着细胞退出G1并进入S期而快速地下降至约-90mV1。就是在此时点,T型钙通道打开以允许G1/S转变。因而,当它们处于约-30mV至-60mV时具有抑制通道的高效能的T-型钙通道阻滞剂将对进入S期几乎没有影响。这样的化合物的例子是TTA-A2和MK-8998(参见Kraus等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.335:409-17(2010)和美国专利号7,875,636)。这些化合物具有抑制T-型钙通道的高效能,但是对癌细胞的增生几乎没有影响或根本没有影响。因而,T-型钙通道本身的高效能阻断不会预测在癌症治疗中的临床应用。
使用TTA-A2和MK-8998的情形不同于另一种T型钙通道阻滞剂米贝拉地尔的情形。尽管米贝拉地尔优先阻断约-30mV至-60mV的通道(相对于-90mV),该优先是约10比1[Gomora等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.292:96-103(2000)],对于其它化合物却是约1000比1[Kraus等人,JPharmacol.Exp.Ther.335:409-17(2010)]。该显著差异反映为米贝拉地尔的抑制癌细胞增生的能力,如在图中所示。不同于更有效的阻滞剂MK-8998,米贝拉地尔的该抑制作用给它赋予在癌症中具有临床应用的潜力。
因而,药学试剂的阻断T型通道本身的效能不会赋予在癌症治疗中的临床应用。相反,阻断在约-90mV的T型钙通道的能力是一个关键属性。此外,在约-30mV至-60mV的高效能结合是无关的,且可以促进药学试剂的不希望的作用。
因此,当细胞膜电位是约-90mV时选择性地抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物可以抑制不希望的细胞增生,同时与化合物诸如TTA-A2和MK-8998相比对神经元活性几乎没有影响或根本没有影响。另外,当细胞膜电位是约-90mV时选择性地抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物可以治疗癌细胞增生,同时与其它化疗化合物相比对免疫细胞功能具有极小影响。
T-型Ca2+通道由小膜除极化活化和灭活,并显示缓慢的灭活速率。因而,这些通道在低膜电位可以传输除极化电流并介导细胞“窗”电流,所述“窗”电流在低或静息膜电位发生在活化和稳态灭活之间的电压交叠内(TsienRW,等人.Low-voltage-activatedT-typeCa2+channels,Chester:AdisInternationalLtd,第1-394页,1998;CrunelliV,等人,J.Physiol.562:121-129,2005)。T-型Ca2+通道可以在非受激膜电位或静息膜电位维持窗电流,从而允许通过未灭活的通道的一部分传输持续的向内钙电流(BeanBP,McDonoughSI,Neuron20:825-828,1998)。在非受激或静息细胞条件下,窗电流的介导允许T-型Ca2+通道调节放电细胞如神经元和非兴奋性组织二者中的细胞内钙水平。
象所有电压门控的离子通道一样,T-型Ca2+通道具有3种主要状态,它们是关闭的、打开的和灭活的25。简而言之,电压门控的通道以特定顺序循环:关闭、打开、灭活;关闭、打开、灭活;等。如在电压门控的通道中可能预见到的,这些不同的状态可以被实验造成的膜电位的变化诱发。在这些实验系统中,T-型Ca2+通道主要在癌细胞的静息膜电位(-60mV)被灭活,且主要是关闭的,且在由Ca2+活化的K+通道的活化所造成的超极化电位(约-90mV)可被打开。
已经为非源自骨髓的细胞中的电压门控的T-型Ca2+提供了迄今为止关于实现G1/S转变的通用Ca2+输入途径的最有力证据2,9,10。自从在1992年首次描述癌细胞中的T-型Ca2+通道11,已经固定了T-型Ca2+通道的癌细胞中的物理和功能表达的证据12。但是,关于电压门控的Ca2+通道在不产生动作电位的细胞(诸如癌细胞)中的重要作用的提示,已经受到怀疑。
关于T-型Ca2+通道涉入的证据源自几个系列研究。首先,通过掺入靶向T-型Ca2+通道的干扰RNA来操纵细胞系中的T-型Ca2+通道会通过抑制穿过G1/S边界而阻断或减慢这些细胞的增生13,14。相反,T-型Ca2+通道表达的上调会增加增生速率15。另外,来自不同化学类别的药理学抑制剂会抑制T-型Ca2+通道并通过抑制穿过G1/S边界而协调地阻断癌细胞的增生16。另外,已经在多种癌细胞类型中发现了T-型Ca2+通道同种型Cav3.2(钙通道,电压依赖性的,T-型,α1H亚基)和/或它的δ25剪接变体的mRNA16,17。此外,Cav3.2信息的存在或不存在与药物敏感性具有1∶1一致性17。
T-型Ca2+通道具有“电调节的”或“动作电位调节的”活性,因为该通道打开以接纳钙并响应于膜电位的变化(特别是响应于跨膜动作电位的改变)而关闭。例如,T-型Ca2+通道主要在约-30mV至-60mV的静息膜电位被灭活,但是在约-90mV的超极化电位被钙活化的钙调蛋白(CaM)或被钙调蛋白活化的蛋白(诸如CaMKII)关闭且可用于打开。
T-型Ca2+通道具有“生长因子调节的”活性,因为该通道在生长因子信号传递以后打开以接纳钙。例如,生长因子(例如,但不限于,胰岛素样生长因子、表皮生长因子、神经生长因子、转化生长因子和血小板衍生的生长因子)对生长因子受体的活化会开启信号传递级联,该级联将T-型Ca2+通道从灭活变为关闭且可用于打开。该机制还可以被从细胞内Ca2+贮存库(诸如内质网)释放Ca2+的任何试剂(诸如毒胡萝卜内酯)开启。
因此,T-型Ca2+通道被电调节的机制和生长因子调节的机制调节。例如,生长因子结合会导致膜电位的变化,该变化会使T-型Ca2+通道从灭活变为关闭并可用于打开,如在内质网(ER)中。在生长因子诱导的增生过程中诱发的电压调节精确地描绘了T-型Ca2+通道状态的独特低电压敏感性(显然不同于高电压活化的L、N、P、R和Q型Ca2+通道)。因而,在癌症和干细胞的G1/S转变过程中,静息状态膜电位和生长因子介导的、活化诱导的超极化电位与T-型Ca2+通道的电压依赖性状态精确地对齐。
在WO00/059882中公开了抑制T-型Ca2+通道活性的示例性化合物,其内容特此通过引用整体并入。
在一个特定实施方案中,T-型Ca2+通道活性的抑制剂是TH-1177,其具有如在WO00/59882中公开的通式。
另外的T-型Ca2+通道活性抑制剂的例子包括、但不限于米贝拉地尔(mibefradil)、苄普地尔(bepridil)、克仑硫卓(clentiazem)、地尔硫卓(diltiazem)、芬地林(fendiline)、戈洛帕米(gallopamil)、普尼拉明(prenylamine)、司莫地尔(semotiadil)、特罗地林(terodiline)、维拉帕米(verapamil)、氨氯地平(amlodipine)、阿雷地平(aranidipine)、巴尼地平(barnidipine)、贝尼地平(benidipine)、西尼地平(cilnidipine)、依福地平(efonidipine)、依高地平(elgodipine)、非洛地平(felodipine)、伊拉地平(isradipine)、拉西地平(lacidipine)、乐卡地平(lercanidipine)、马尼地平(manidipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼伐地平(nilvadipine)、尼莫地平(nimodipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、桂利嗪(cinnarizine)、氟桂利嗪(flunarizine)、利多氟嗪(lidoflazine)、洛美利嗪(lomerizine)、苄环烷(bencyclane)、依他苯酮(etafenone)、泛托法隆(fantofarone)和哌克昔林(perhexyline)。在一个优选实施例中,生长因子调节的T-型Ca2+通道活性抑制剂是米贝拉地尔或TH-1177。
当细胞膜电位是约-90mV时,化合物诸如米贝拉地尔或TH-1177会抑制T-型Ca2+通道活性。类似地,当细胞膜电位是约-90mV时,结合被米贝拉地尔或TH-1177占据的位点的试剂可以抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性。
本公开内容进一步提供了鉴定当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物的方法。通过使用标准的电生理学方法(诸如膜片筘)测量细胞中T-型Ca2+通道活性的抑制,或通过测量当细胞被促分裂原(诸如生长因子)刺激时药学试剂的阻断向该细胞(诸如癌细胞)中的钙输入的能力,可以鉴定这样的化合物。这样的方法公开在,例如,Densmore,等人,FEBSLett.312:161-164(1992);Haverstick,等人,Mol.Biol.Cell4:173-184(1993);和Gomora等人,J.Pharmacol.Exp.Ther.292:96-103(2000),它们的内容通过引用并入。通过方法诸如Ca2+敏感的荧光染料的细胞内捕集,可以确定钙输入。
因此,本公开内容包括,通过确定化合物在细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的能力来鉴定具有抗增生活性和/或治疗癌症的能力的化合物的方法。本公开内容进一步包括通过本文中公开的方法鉴定的化合物。
本文中使用的“肿瘤”细胞或“癌”细胞是指表现出失控增生和侵入周围组织的潜力的异常细胞。
本文中使用的术语“癌干细胞”表示这样的细胞:其可以是高增生性的癌细胞的祖先,或产生高增生性的癌细胞的祖先。癌干细胞具有重新生长成肿瘤的能力,如它的以下能力所证实的:在免疫受损的哺乳动物(诸如小鼠)中形成肿瘤,和在免疫受损的哺乳动物(诸如小鼠)中随后系列移植后形成肿瘤。
本文中公开的化合物可以抑制肿瘤或癌细胞的增生、分化或发展。通过给有此需要的受试者施用治疗有效量的本文中公开的T-型Ca2+通道活性的抑制剂,可以预防、治疗和/或控制癌症或肿瘤疾病,包括、但不限于赘生物、肿瘤、转移灶、白血病或以失控的细胞生长为特征的任何病症或疾病。
根据本发明可以预防、治疗和/或控制任何类型的癌症。根据本发明可以预防、治疗和/或控制的癌症的非限制性例子包括上皮起源的癌症,诸如乳腺癌、基底细胞癌、腺癌、胃肠癌、唇癌、口腔癌、食管癌、小肠癌和胃癌、结肠癌、肝癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、乳腺癌和皮肤癌(诸如鳞状细胞癌和基底细胞癌)、前列腺癌、肾细胞癌和影响遍布于身体的上皮细胞的其它已知癌症。
本文提供的治疗方法和组合物进一步可用于抑制干细胞(诸如癌干细胞)的增生。
T-型Ca2+通道在G1/S转变中的重要作用不限于癌细胞增生。胚胎干细胞也含有在G1/S转变处增加的Cav3.2信息,Cav3.2的药理学抑制剂会阻断它们的增生,并且针对Cav3.2的干扰RNA会降低表征早期干细胞的碱性磷酸酶和Oct3/4表达18。从表面上看,这些数据表明Cav3.2的表达对于干细胞中的细胞周期进展而言是关键性的。关于胚胎干细胞的数据另外提示,T-型Ca2+通道水平涉入维持它们的未分化状态17。但是,还已经证实,纯合的Cav3.2敲除的小鼠正常发育,仅表现出异常的冠状动脉功能和显著降低的出生重量18。
总之,显而易见,Cav3.2的功能(通常是细胞周期进展和胚胎细胞自我更新所必需的)在它缺失时可以被另一个Ca2+流入机制替代。鉴于三种T-型Ca2+同种型(Cav3.1、3.2和3.3)之间的调节相似性和生物物理学相似性,合理地推测,Cav3.2的正常功能可以受益于两种其它同种型之一。已知的药理学T-型Ca2+拮抗剂不会在三种同种型之间显著地差别化19,并且这可以解释在T-型Ca2+阻滞剂(在它的IC30)的连续存在下生长长达数年的癌细胞不能发展成对相同药物的抗性(D.M.Haverstick,UniversityofVirginia,未公开的观察结果)。
本文中使用的术语”受试者”和“患者”互换使用,并且表示动物,优选哺乳动物诸如非灵长类动物(例如,牛、猪、马、猫、狗、大鼠等)和灵长类动物(例如,猴和人),最优选人。
本文中使用的“治疗”表示尝试改变待治疗的个体或细胞的病程的临床干预,并且可以为了预防或在临床病理期间进行。治疗的疗效包括、但不限于,预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少任何直接或间接的疾病病理后果、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、以及缓解或改善预后。例如,癌症患者的治疗可以是减小肿瘤大小、消除或减少肿瘤或恶性细胞、预防转移、或预防其肿瘤已经消退的患者中的复发。
本文中使用的术语“治疗有效量”和“有效量”互换地用于表示这样的本发明的组合物的量:其足以导致癌干细胞或癌症及其一种或多种症状的发展、复发或发作的预防,增强或改善另一种治疗的预防效果,降低癌症的严重程度和持续时间,改善癌症的一种或多种症状,预防癌症的进展,造成癌症的消退,和/或增强或改善其它抗癌治疗的治疗效果。
可以在足以实现以下目的的一个或多个剂量中给患者施用治疗有效量:减轻、缓和、稳定、逆转或减缓疾病的进展,或在其它方面减轻疾病的病理结果、或减轻疾病的症状。改善或减轻不必是永久的,但是可以持续至少1小时、至少1天或至少1周或更多的时间段。所述有效量通常由医师基于个例确定,并且是在本领域技术人员的技术范围内。当确定实现有效量的适当剂量时,通常考虑多种因素。这些因素包括患者的年龄、性别和重量,要治疗的病症,病症的严重程度,以及施用途径,剂型和方案和所期望的结果。
例如,T-型Ca2+通道活性的抑制剂的有效量可以是在每天0.0001-10mg/kg体重之间。剂量范围通常是约0.5mg至1.0g/患者/天,其可以以单次或多次剂量施用。在一个实施方案中,所述剂量范围是约0.5mg至200mg/患者/天;在另一个实施方案中,是约1mg至100mg/患者/天;且在另一个实施方案中,是约1mg至50mg/患者/天;在另一个实施方案中,是约10mg至20mg/患者/天。本发明的药物组合物可以以固体剂量制剂形式提供,所述制剂诸如包含约0.5mg至500mg活性成分,或包含约1mg至250mg活性成分。所述药物组合物可以以固体剂量制剂形式提供,所述制剂包含约1mg、2mg、3mg、4mg、10mg、100mg、200mg或250mg活性成分。可以以每天1-4次(诸如每天1次或2次)的方案施用化合物。
在本发明的某些实施方案中,治疗有效量是在施用后可有效地实现下述结果中的一个、两个或三个或更多的量:(1)赘生性细胞群体的减少或消除;(2)癌细胞群体的减少或消除;(3)肿瘤或赘生物的生长或增生的减少;(4)肿瘤形成的损伤;(5)原发性、局部性和/或转移性癌的根除、除去或控制;(6)死亡率的降低;(7)无病、无复发、无进展和/或总存活率、持续时间或比例的增加;(8)应答率、应答持久性或者应答或处于缓解期的患者数的增加;(9)肿瘤大小得到维持且不增加或增加小于10%、或小于5%、或小于4%、或小于2%,(10)处于缓解期的患者数增加,(11)缓解期的长度或持续时间增加,(12)癌症的复发率降低,(13)达到癌症复发的时间延长,(14)癌症相关症状和/或生活质量的改善,和(15)癌细胞的抗药性下降。
在某些实施方案中,电调节的T-型Ca2+通道活性的抑制剂的量或方案导致肿瘤块大小减小,以及癌干细胞群的减小。在某些实施方案中,定期监测肿瘤块大小的减小;肿瘤块大小的减小和癌干细胞群(包括抗药性癌干细胞)的减小;或者肿瘤块大小的减小、癌干细胞群的减小和癌症细胞群的减小。因此,在一个实施例中,本发明提供了预防、治疗和/或控制受试者的癌症的方法,所述方法包括:(a)给有此需要的受试者施用一个或多个剂量的有效量的电调节的T-型Ca2+通道活性的抑制剂。在特定实例中,所述抑制剂抑制CACNA1H。
在本文中关于细胞互换使用的术语“增生”和“生长”表示,通过细胞分裂、快速的和重复的细胞再生、细胞循环和细胞生长,特别是失控的细胞生长,相同类型的细胞的数目的增加。“发展”表示从较小的、不太复杂性的、或良性的形式向较大的、更复杂的或赘生物的形式的进展。例如,肿瘤可以从小块发展成较大块。癌干细胞发展可以表示从非癌细胞状态至癌细胞状态的进展,或从非赘生物组织形成至赘生物或肿瘤形成的进展。
“细胞增生性疾病”是指其中身体以非典型地加速的速率产生细胞的疾病。细胞增生性疾病可以包括癌症。癌症的非限制性例子包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、宫颈癌、胃肠癌、泌尿生殖器癌、头颈癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、皮肤癌和睾丸癌。
更具体地,用本文描述的化合物、组合物和方法可以治疗的癌症包括、但不限于以下的:(1)乳腺癌,包括,例如,ER+乳腺癌、ER-乳腺癌、HER2-乳腺癌、HER2+乳腺癌,间质瘤诸如纤维腺瘤、叶状瘤和肉瘤,以及上皮肿瘤诸如大导管乳头状瘤;乳腺癌,包括原位(非侵袭性的)癌,其包括原位导管癌(包括佩吉特病)和原位小叶癌,和侵袭性的(浸润性的)癌,包括、但不限于,浸润性导管癌、浸润性小叶癌、髓样癌、胶体(粘蛋白的)癌、小管癌和侵袭性的乳头状癌;和混杂的恶性肿瘤。乳腺癌的其它例子可以包括luminalA、luminalB、基底A、基底B和三重阴性的乳腺癌,其为雌激素受体阴性的(ER-)、黄体酮受体阴性的和HER2阴性的(HER2-)。在某些实施方案中,所述乳腺癌可以具有高危Oncotype评分;(2)心脏癌症,包括,例如,肉瘤,例如,血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和脂肪肉瘤;粘液瘤;横纹肌肉瘤;纤维瘤;脂肪瘤和畸胎瘤;(3)肺癌,包括,例如,支气管原癌,例如,鳞状细胞、未分化的小细胞、未分化的大细胞和腺癌;肺泡和细支气管癌;支气管腺瘤;肉瘤;淋巴瘤;软骨错构瘤(chondromatoushamartoma);和间皮瘤;(4)胃肠癌,包括,例如,食管的癌症,例如,鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤和淋巴瘤;胃的癌症,例如,癌、淋巴瘤和平滑肌肉瘤;胰腺的癌症,例如,导管腺癌、胰岛素瘤、胰高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤(carcinoidtumors)和血管活性肠肽瘤(vipoma);小肠的癌症,例如,腺癌、淋巴瘤、类癌瘤(carcinoidtumors)、卡波西肉瘤(Kaposi′ssarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤和纤维瘤;大肠的癌症,例如,腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤(hamartoma)和平滑肌瘤;(5)泌尿生殖道癌症,包括,例如,肾癌,例如,腺癌、胚性癌肉瘤(Wilm′stumor)(肾母细胞瘤)、淋巴瘤和白血病;膀胱和尿道的癌症,例如,鳞状细胞癌、移行细胞癌和腺癌;前列腺的癌症,例如,腺癌和肉瘤;睾丸的癌症,例如,精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤(adenomatoidtumors)和脂肪瘤;(6)肝癌,包括,例如,肝细胞瘤,例如,肝细胞癌;胆管上皮癌;肝胚细胞瘤;血管肉瘤;肝细胞的腺瘤;和血管瘤;(7)骨癌,包括,例如,成骨性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性的纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤(Ewing′ssarcoma)、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性的巨细胞瘤脊索瘤、骨軟骨瘤(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液纤维瘤(chondromyxofibroma)、骨样骨瘤和巨细胞瘤;(8)神经系统癌症,包括,例如,头盖骨的癌症,例如,骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤和变形性骨炎;脑膜的癌症,例如,脑膜瘤、脑膜肉瘤和神经胶质瘤病;脑的癌症,例如,星形细胞瘤、髓母细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤(松果体瘤)、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质瘤、许旺细胞瘤、视网膜母细胞瘤和先天性肿瘤;和脊髓的癌症,例如,神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤和肉瘤;(9)妇科癌症,包括,例如,子宫的癌症,例如,子宫内膜癌;子宫颈的癌症,例如,宫颈癌,和肿瘤前宫颈发育不良;卵巢的癌症,例如,卵巢癌,包括浆液囊腺癌、粘液囊腺癌、未分类的癌、粒膜鞘细胞肿瘤、塞托利莱迪希细胞肿瘤(SertoliLeydigcelltumors)、无性细胞瘤和恶性畸胎瘤;外阴的癌症,例如,鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤和黑素瘤;阴道的癌症,例如,透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤和胚胎型横纹肌肉瘤;和输卵管的癌症,例如,癌;(10)血液学癌症,包括,例如,血液的癌症,例如,急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(恶性淋巴瘤)和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(macroglobulinemia);(11)皮肤癌,包括,例如,恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良痣(molesdysplasticnevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕疙瘩和银屑病;(12)肾上腺癌,包括,例如,神经母细胞瘤;(13)胰腺癌,包括,例如,外分泌胰腺癌诸如腺癌(M8140/3)、腺鳞状癌、印戒细胞癌、肝样癌、胶体癌、未分化的癌和具有破骨细胞样巨细胞的未分化的癌;和外分泌胰腺肿瘤。
癌症可以是实体瘤,所述实体瘤可以是或不是转移性的。癌症也可以作为弥散性组织发生,如在白血病中。因而,本文中提供的术语“肿瘤细胞”包括罹患以上鉴定的疾病中的任一种的细胞。
细胞增生性疾病还可以包括非癌性的增生性疾病,包括、但不限于,新生儿中的血管瘤病、继发性进行性多发性硬化、慢性进行性骨髓退行性疾病、神经纤维瘤病、神经节瘤病、瘢痕疙瘩形成、骨的佩吉特病(Paget′sdisease)、乳房的纤维囊性疾病、子宫肌瘤、佩罗尼病(Peyronie′sdisease)、迪皮特朗病(Dupuytren′sdisease)、再狭窄和肝硬化。
本文中使用的术语“化学治疗剂”表示在细胞增生性疾病的治疗中可以用于杀死或抑制细胞的生长或增生的试剂。合适的化学治疗剂的例子包括以下的任一种:阿巴瑞克(abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑珠单抗(alemtuzumab)、阿利维A酸(alitretinoin)、别嘌醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、阿那曲唑(anastrozole)、三氧化二砷(arsenictrioxide)、天门冬酰胺酶(asparaginase)、阿扎胞苷(azacitidine)、贝伐珠单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、博来霉素(bleomycin)、bortezombi、硼替佐米(bortezomib)、静脉内的白消安(busulfanintravenous)、口服的白消安(busulfanoral)、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西妥昔单抗(cetuximab)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素(dactinomycin)、达肝素钠(dalteparinsodium)、达沙替尼(dasatinib)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地尼白介素(denileukin)、地尼白介素2(denileukindiftitox)、右丙亚胺(dexrazoxane)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、依库珠单抗(eculizumab)、表柔比星(epirubicin)、厄洛替尼(erlotinib)、雌莫司汀(estramustine)、磷酸依托泊苷(etoposidephosphate)、依托泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥珠单抗奥加米星(gemtuzumabozogamicin)、乙酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、乙酸组氨瑞林(histrelinacetate)、替伊莫单抗(ibritumomabtiuxetan)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)、干扰素α2a(interferonalfa2a)、伊立替康(irinotecan)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinibditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、亚叶酸(leucovorin)、醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氮芥(meclorethamine)、乙酸甲地孕酮(megestrolacetate)、美法仑(melphalan)、巯嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、丝裂霉素C(mitomycinC)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、苯丙酸诺龙(nandrolonephenpropionate)、奈拉滨(nelarabine)、若莫单抗(nofetumomab)、奥沙利铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕木单抗(panitumumab)、培门冬酶(pegaspargase)、培非司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexeddisodium)、喷司他丁(pentostatin)、哌泊溴烷(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、米帕林(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、利妥昔单抗(rituximab)、鲁索替尼(ruxolitinib)、索拉非尼(sorafenib)、链佐星(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、马来酸舒尼替尼(sunitinibmaleate)、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾内酪(testolactone)、沙利度胺(thalidomide)、硫鸟嘌呤(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维A酸(tretinoin)、尿嘧啶氮芥(uracilmustard)、戊柔比星(valrubicin)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏林司他(vorinostat)和唑来膦酸盐(zoledronate)。
驱动G1/S转变的T-型Ca2+通道的生化活化.本公开内容提出了以下从最初生长因子活化至G1/S限制的释放的步骤顺序,如在图1中所示。生长因子受体(GFR)活化会通过磷脂酶C的活化而增加细胞溶质三磷酸肌醇(IP3)浓度。IP3然后通过与内质网上的IP3受体相互作用从内部贮存库释放Ca2+。得到的细胞溶质Ca2+浓度的小增加会触发穿过T-型Ca2+通道的Ca2+流入引起的大得多的增加,如在图1中所示。该途径中的一个必要事件涉及结合S100的Ca2+,所述S100又结合和灭活p53,从而释放p21的活化。因为活化的p21会灭活CDK2,p21活性的下降允许CDK2驱动G1/S转变。
导致电不可兴奋细胞的细胞分裂的事件.已经提出了在生长因子受体活化以后导致细胞分裂的事件的模型。在该模型中,从它的内部储库释放的Ca2+会通过明显依赖于Ca2+的过程活化Ca2+输入,而不是在其次通过内部储库的”放空”来触发Ca2+输入17。简而言之,从贮存库释放的Ca2+活化钙调蛋白,这又会活化Ca2+流入从而导致细胞分裂。
已经报道癌细胞的膜电位是在-30mV至-60mV之间。但是,当将膜电位测量为人乳腺癌系中的细胞周期的位置的函数时,证实它在G1早期是约-30mV,下降至G1晚期和S期的约-60mV(Ouadid-Ahidouch等人,Am.J.Physiol.Cell.Physiol.,287:C125-34(2004)),这可以解释在文献中报道的测量的癌细胞的膜电位的变异性。生长因子活化会产生三磷酸肌醇,这会从内部贮存库释放Ca2+20。细胞内Ca2+的这种增加的首要作用之一可以是Ca2+活化的K+通道的活化和打开21。得到K+的外流天然地导致膜电位从G1晚期约-60mV的值瞬时下降至约-90mV的超极化值(即钾的平衡电位)。
令人感兴趣的是,已经证实K+通道阻滞剂会抑制生长因子刺激的细胞溶质Ca2+的增加,并通过抑制穿过癌细胞系和间质干细胞中的G1/S边界而阻断细胞增生22-24,该作用在功能上等同于T-型Ca2+通道抑制剂。尽管在这样的研究中使用的K+通道阻滞剂是混乱的,意外的是,K+通道或与K+通道活性有关的超极化将对Ca2+通道功能具有影响或可能增加细胞溶质的Ca2+,从而导致细胞分裂。一个被广泛引用的信念是,由K+通道功能介导的超极化起增加Ca2+输入的电化学驱动力的作用。在它的表面上,这是明显真实的。但是,在0的膜电位存在Ca2+输入的10,000倍浓度梯度,且它难以将超极化质膜电位所需的代谢负担和获得严密控制的Ca2+输入的需要与超极化在增加Ca2+输入的驱动力中的一般假定作用调和。因此,K+通道的活化和伴随的膜电位向钾平衡电位的下降在本文中被公开为起增加Ca2+的驱动力的作用。
根据一个有争议的、但是却普及的假设,恶性肿瘤包含可变比例的所谓的癌干细胞(LathiaJD等,人,StemCellRev.7:227-37(2011))。这些细胞据报道相对耐受辐射和化学疗法,且是癌症复发的原因。癌干细胞被认为类似于胚胎干细胞,并且两类干细胞的生物学知识可能揭示新颖的治疗策略。令人感兴趣的是,Cav3.2(UnigeneclusterHs.459642)和2型小电导钙活化的钾通道(UnigeneClusterHs.98280)具有惊人地类似的早期妊娠共表达谱(如国家生物技术信息中心所确定的),胚状体的最高表达落在其后。该早期妊娠表达谱没有用Cav3.1或Cav3.3看到,也没有用其它钙活化的钾通道看到。该共表达谱与胚胎干细胞中的Cav3.2的功能性表达18以及下述的模型相一致,且可能帮助揭示通向癌症治疗的新医学途径。
实现增生的生长因子调节的Ca2+流入的模型。可以将这些观察结果总结在相关的且简单的模型中(图2):
1.在静息膜电位,T-型通道被灭活且不能被打开。
2.生长因子受体被活化。
3.这造成三磷酸肌醇的产生。
4.三磷酸肌醇从内部贮存库释放Ca2+。
5.该释放的Ca2+经由组成性地结合的钙调蛋白打开Ca2+活化的K+通道。
6.得到的超极化会减轻T-型通道的灭活。
7.T-型通道现在被关闭,且因而可用于打开。
8.Ca2+活化的钙调蛋白扩散并打开T-型通道,可能是经由钙调蛋白激酶的T-型通道磷酸化。
9.Ca2+活化的S100同种型会灭活p53,从而除去p21的活化,这会释放CDK2以推进进展至S期。
如下进一步描述这些步骤。在所述途径的第一个分支中,CaM与Ca2+活化的K+通道的构成关联5,25允许响应于细胞溶质Ca2+的增加而快速打开。Ca2+/CaM复合物的扩散的需要和对CaMKII的参与可能需求将减慢所述途径的第二分支,可能提供超极化的短暂测序,继之以经由T-型Ca2+通道的依赖于CaM的Ca2+输入活化。
在可以为了治疗增益而攻击的该途径的不同点中,脆弱的靶标是T-型Ca2+通道本身。该脆弱性的一个原因是有限数目的T-型Ca2+通道同种型。生长因子例如由大数目的相关蛋白组成,所述蛋白可以被募集以绕过已经被阻断的蛋白。仅存在3种T-型Ca2+通道蛋白,并且都对可利用的药理学抑制剂大约同样敏感19,使得替代成员的募集将是无益的。
脆弱性的另一个点源自该蛋白的有限分布,其通常在胚胎干细胞中表达,且不在没有于成年人中正常分裂的细胞中表达,但是其响应于损伤或致癌刺激而再表达。该重新出现的增生可以源自响应于伤口愈合而分裂的成纤维细胞中象重新表达一样相对简单的对象26,其是对病理学刺激的标准应答,或象在实体癌症中一样复杂,这可能刚好是对正常刺激的病理学应答。另外,骨髓衍生的细胞似乎利用不同的Ca2+输入途径,因为T-型通道拮抗剂对这些细胞的增生或分化没有影响,并且在从骨髓衍生出的细胞系中没有观察到Cav3.2的表达。其分子基础没有得到理解,却是活跃研究的来源。这些属性使得T-型Ca2+通道的抑制剂成为新的和独特的种类的癌症化学治疗剂的非常有吸引力的候选物,所述癌症化学治疗剂抑制癌细胞的增生,同时对免疫细胞增生具有减少的影响或没有影响。
作为单一疗法,T-型钙通道阻滞剂会减慢癌细胞增生和减少体内肿瘤生长,如在人疾病的许多动物模型中观察到的27,28。米贝拉地尔是由Roche销售的用于治疗高血压和心绞痛的T-型Ca2+通道阻滞剂(Clozel等人,Cardiovasc.DrugRev.9:4-17(1991))。在被几乎100万患者使用以后,当发现它具有由米贝拉地尔对CYP4503A4的抑制造成的不希望的药物-药物相互作用时,它从市场上撤回(Po和Zhang,Lancet.351:1829-30(1998))。除此以外,米贝拉地尔被非常好地耐受且不具有副作用,即使对于它的治疗类别的成员而言(Kobrin等人,Am.J.Cardiol.80:40C-46C(1997))。这提示,T-型Ca2+通道阻滞剂的副作用至多是不大的,并显著优于由许多癌症化疗药物通常造成的那些副作用。部分地归因于此,正在活跃地研究T-型Ca2+通道阻滞剂作为靶向细胞周期和癌干细胞的细胞抑制剂的应用。
但是,这样的试剂的电位临床应用存在另一种可能性。大多数常规细胞毒性剂作用于细胞周期的特定阶段,经常是在DNA合成过程中。如果癌细胞可以在G1/S限制点处“排队”并然后释放进S期中,可能使常规细胞毒素更有效地杀死癌细胞。在人成胶质细胞瘤的鼠模型中,这似乎属实(Keir等人,J.Neurooncol.111(2):97-102(2013))。在该模型中,用米贝拉地尔治疗小鼠历时7天以阻断Ca2+流入和停止在G1/S限制点处穿过细胞周期的进展,然后在米贝拉地尔的最后一剂以后30分钟,开始替莫唑胺的5天疗程。该方案显著地增加替莫唑胺的细胞毒性作用,并恢复抗药的癌细胞系对替莫唑胺的敏感性。在2012年早期开启的在多形性成胶质细胞瘤中使用该策略的IND(在正常健康志愿者中的递增剂量的米贝拉地尔的1期研究)正在进行中,国立癌症研究所(NCI)的成年人脑肿瘤协会(NationalCancerInstitute(NCI)′sAdultBrainTumorConsortium)在2012年春天开始了在患者中的试验。该方法的其它细节提供在WO2010/141842中,其通过引用并入本文。
在某些实施方案中,本公开内容提供了用于鉴定化合物的方法,所述化合物用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点,抑制细胞增生性疾病中的细胞增生,和/或增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力。所述方法包括确定,当将细胞的第一细胞膜电位保持在约-70mV至约-110mV范围内的电位时,所述化合物抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性;和,基于所述确定,鉴定应用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点、在细胞增生性疾病中抑制细胞增生、和/或增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力的化合物。在某些实施方案中,所述膜电位可以包括在约-80mV至约-100mV的测量范围内、或在约85mV至约-95mV的范围内、或在约-89mV至约-91mV的范围内的膜电位。在某些实施方案中,所述膜电位是约90mV。在某些实施方案中,所述细胞可以表达本文描述的一种或多种T-型钙通道亚型。在某些实施方案中,所述细胞可以经过工程改造以重组地表达本文描述的一类或多类钙通道亚型。
在某些实施方案中,所述方法可以包括确定第一IC50,其为当将细胞保持在第一细胞膜电位时抑制T-型钙通道活性的化合物的IC50。基于确定第一IC50是约10000μM或更小、约1000μM或更小、约1000μM或更小、约100μM或更小、约10μM或更小、约1μM或更小、或约100nM或更小,可以将化合物鉴定为对于应用而言是有用的。
在某些实施方案中,所述方法可以包括确定化合物的第二IC50,其中所述第二IC50是当将细胞保持在约-30mV至约-60mV范围内的第二细胞膜电位时抑制T-型钙通道活性的化合物的IC50。所述第二膜电位大于(即,负电性低于)第一膜电位。在不同的实施方案中,所述第二膜电位可以是在约-20mV至约-70mV、约-25mV至约-65mV、约-30mV至约-40mV、约-30mV至约-50mV、约-30mV至约-70mV、约-40mV至约-50mV、约-40mV至约-60mV、约-40mV至约-70mV、约-50mV至约-60mV、约-50至约-70mV的范围内,以及约-30mV、约-40mV、约-50mV、或约-60mV。
在某些实施方案中,使用相同的细胞或细胞集合进行在不同膜电位的测量。在某些实施方案中,使用不同的细胞或细胞集合进行在不同膜电位的测量。使用的细胞优选地属于相同细胞类型。例如,所述细胞可以是克隆、得自相同细胞系的细胞、或得自需要治疗细胞增生性疾病的单个受试者的增生细胞。
在某些实施方案中,所述方法可以包括,基于确定第一IC50与第二IC50的比率是约20∶1或更小、约10∶1或更小、约5∶1或更小、约2∶1或更小、约1∶1或更小、约1∶2或更小、约1∶5或更小、约1∶10或更小、或约1∶100或更小,将化合物鉴定为对于应用而言是有用的。所述方法还可以包括基于确定第一IC50与第二IC50的比率是约20∶1或更小、约10∶1或更小、约5∶1或更小、约2∶1或更小、约1∶1或更小、约1∶2或更小、约1∶5或更小、约1∶10或更小、或约1∶100或更小,将化合物鉴定为具有降低的或低神经元介导的副作用易感性。基于神经元的副作用的例子可以包括焦虑、注意缺陷、认知缺陷、意识错乱、惊厥、抑郁、头晕、幻觉、精神病、镇静、刺激等。
在某些实施方案中,使用膜片筘技术可以控制细胞膜电位。在某些实施方案中,使用本文描述的或本领域已知的任意其它技术,可以控制细胞膜电位。
在某些实施方案中,通过确定化合物的抑制生长因子刺激的向细胞中的钙输入的能力,确定化合物的抑制T-型Ca2+通道活性的能力。在某些实施方案中,使用本文描述的或本领域已知的任意其它技术,确定化合物的抑制T-型Ca2+通道活性的能力。
在某些实施方案中,通过使用钙敏感的标记(诸如钙敏感的荧光染料)测量细胞内钙水平的增加,确定向细胞中的钙输入。在某些实施方案中,使用本文描述的或本领域已知的任意其它技术,确定向细胞中的钙输入。
在某些实施方案中,所述方法包括鉴定应用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点的化合物。
在某些实施方案中,所述方法包括鉴定应用于抑制细胞增生性疾病中的细胞增生的化合物。所述细胞增生性疾病可以是癌性的或非癌性的增生性疾病,包括在本文中鉴定的癌性的或非癌性的增生性疾病中的任意一种或多种。所述细胞增生性疾病可以是这样的疾病:其增生细胞表达T-型钙通道。所述细胞增生性疾病可以是这样的疾病:其增生细胞表达如本文中所述的T-型钙通道的任何同种型。
在某些实施方案中,所述方法包括,鉴定当在施用辐射和/或化学治疗剂之前施用化合物时用于增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力的化合物。所述细胞增生性疾病可以是癌性的或非癌性的增生性疾病,包括本文鉴定的癌性的或非癌性的增生性疾病中的任意一种或多种。所述细胞增生性疾病可以是这样的疾病:其增生细胞表达T-型钙通道。所述化学治疗剂可以是本文鉴定的任何化学治疗剂或它们的任意组合。
在某些实施方案中,可以执行所述方法,其中使用的细胞包含需要治疗增生性疾病的受试者的一个或多个增生细胞,且可以将化合物鉴定为可用于治疗细胞增生性疾病和/或用于增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力。在某些实施方案中,在施用辐射和/或化学治疗剂之前施用所述化合物。可以使用所述方法将化合物鉴定为可用于治疗受试者。所述细胞增生性疾病可以是癌性的或非癌性的增生性疾病,包括本文鉴定的癌性的或非癌性的增生性疾病中的任意一种或多种。所述细胞增生性疾病可以是这样的疾病:其增生细胞表达T-型钙通道。所述化学治疗剂可以是本文鉴定的任何化学治疗剂或它们的任意组合。
在某些实施方案中,所述方法包括给所述受试者施用有效量的化合物以治疗细胞增生性疾病。在某些实施方案中,所述方法包括给所述受试者施用与有效量的辐射和/或化学治疗剂组合的有效量的化合物以治疗细胞增生性疾病。在某些实施方案中,在施用辐射和/或化学治疗剂之前将所述化合物施用给受试者。所述细胞增生性疾病可以是癌性的或非癌性的增生性疾病,包括本文鉴定的癌性的或非癌性的增生性疾病中的任意一种或多种。所述细胞增生性疾病可以是这样的疾病:其增生细胞表达T-型钙通道.所述化学治疗剂可以是本文鉴定的任何化学治疗剂或它们的任意组合。
在某些实施方案中,所述化学治疗剂选自由以下组成的组:替莫唑胺、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、博来霉素、卡铂、顺铂、达卡巴嗪、多柔比星、表柔比星、依托泊苷、吉西他滨、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、托泊替康、甲氨蝶呤、米托蒽醌、奥沙利铂、紫杉醇、多西他赛、长春碱、长春新碱、长春瑞滨;长春地辛和丝裂霉素C。在某些实施方案中,所述化学治疗剂是替莫唑胺。在某些实施方案中,所述化学治疗剂是卡铂。在某些实施方案中,所述化学治疗剂是吉西他滨。
在某些实施方案中,所述癌症选自由以下组成的组:脑癌、乳腺癌、结肠癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、黑素瘤、卵巢癌和胰腺癌。在某些实施方案中,所述癌症是脑癌。在某些实施方案中,所述癌症是神经胶质瘤。在某些实施方案中,所述癌症是卵巢癌。在某些实施方案中,所述癌症是胰腺癌。
已经参考多个实施方案和技术描述了本发明。但是,应当理解,可以在本发明的精神和范围内做出多种变化和改变。本领域普通技术人员显而易见,除了本文明确地描述的那些以外的组合物、方法、装置、装置元件、材料、规程和技术可以如本文广泛地公开的那样用于实践本发明,不需要求助于不必要的实验。本发明意图包括本文描述的组合物、方法、装置、装置元件、材料、规程和技术的所有本领域已知的功能等同物。无论范围是否公开,所有子范围和各个值都被包括在内。本发明不受限于所公开的实施方案,包括作为示例或例证给出且非限制性的、在本说明书中列举的任意实施方案。本发明的范围应当仅由权利要求书限定。
在本文中引用的所有参考文献特此通过引用整体并入。
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