CN105132478A - 一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 - Google Patents
一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105132478A CN105132478A CN201510561190.9A CN201510561190A CN105132478A CN 105132478 A CN105132478 A CN 105132478A CN 201510561190 A CN201510561190 A CN 201510561190A CN 105132478 A CN105132478 A CN 105132478A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- reaction
- penicillium
- phenyl
- cell
- sulfate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- RPUSRLKKXPQSGP-UHFFFAOYSA-N methyl 3-phenylpropanoate Chemical compound COC(=O)CCC1=CC=CC=C1 RPUSRLKKXPQSGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 title 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 40
- RJUFJBKOKNCXHH-UHFFFAOYSA-N Methyl propionate Chemical compound CCC(=O)OC RJUFJBKOKNCXHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229940017219 methyl propionate Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 22
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 19
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 19
- 230000002210 biocatalytic effect Effects 0.000 claims description 18
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 17
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 17
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 17
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 16
- 241000228150 Penicillium chrysogenum Species 0.000 claims description 15
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 12
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 12
- 241000790917 Dioxys <bee> Species 0.000 claims description 11
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 11
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 11
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 7
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims description 7
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 7
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 6
- 208000012839 conversion disease Diseases 0.000 claims description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 6
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 claims description 6
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 abstract description 9
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 2
- 101710157860 Oxydoreductase Proteins 0.000 description 2
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 241000024287 Areas Species 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000011914 asymmetric synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000005389 magnetism Effects 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种青霉菌细胞生物催化制备(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，用青霉菌细胞进行生物催化反应，产品收率高，对映体过量率高，解决了现有方法生产的困难。
Description
技术领域
本发明属于制药工程技术领域，特别涉及到青霉菌细胞生物催化制备手性医药中间体(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯的技术。
背景技术
手性(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯是合成手性药物、精细化学品、农药品和其他特殊材料的重要中间体。生物催化不对称反应具有环境友好、条件温和、选择性高等优点,作为绿色高效制备手性化合物的优先途径,被越来越多地应用于生产一些高附加值的手性化合物。生物催化制备手性(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯具有很好的应用前景。
生物催化具有催化效率高、选择性强、条件温和、环境友好等突出优点,是可持续发展过程中替代和拓展传统有机化学合成的重要方法。其中手性拆分和不对称合成是生物催化最具吸引力的应用领域。在作为生物催化剂的六大类酶中,水解酶能够催化动力学拆分外消旋体得到手性产品,在工业生物催化中一直扮演着重要角色。近几年来,氧化还原酶在工业上的应用得到了迅速增长。目前,采用水解酶动力学拆分法、生物还原法和生物氧化法工业制备光学活性手性化合物的比例为4:2:1。
生物还原法相对于动力学拆分法而言,最大的优势在于理论收率可达100%,原子经济性好。然而生物还原反应需要辅酶或辅因子的参与,一定程度上限制了其应用。由于辅酶依赖性的缘故,生物还原反应中多釆用整细胞作为催化剂,实现体内辅酶循环再生的同时免去了酶的分离纯化步骤。
(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯是合成手性药物、精细化学品、农药品的重要手性砌块，。现有的方法普遍存在转化率低、反应时间长、需要添加昂贵辅酶、成本高等严重缺陷，难于进行工业化生产。本发明将采用生物细胞催化制备(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯。
发明内容
本发明采用青霉菌细胞催化制备(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应式如下：
3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯（1）经青霉菌催化反应，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯（2）。有多种微生物可以催化此反应，经过大量实验筛选，最终确定采用青霉菌作为催化剂，因为其催化反应的效果最好，反应收率、对映体过量率（ee%）均很高。
许多青霉菌都可以进行生物催化此反应，然而，其效果不同，相差很大，经实验，本发明选用青霉菌菌株为ATCC204027，其催化反应效果最佳。
由于绝大多数氧化还原酶是辅酶NAD(P)H依赖型,而细胞本身所含有的辅酶量可能较少,因此,进行氧化还原反应时,为促进辅酶再生，提高反应效率，在反应体系中还添加辅助底物构成转化体系。常用的辅助底物种类较多，不同细胞所需的辅助底物不同，效果差别很大，采用几种辅助底物组合，可以取得较好效果，需进行大量实验才能确定最佳的辅助底物。本发明经过大量实验确定的辅助底物为：葡萄糖20-23g/L、麦芽糖32-35g/L、异丙醇8-10%V/V(体积浓度)。
由于底物溶解度较低，所以，加入表面活性剂以增加底物的溶解度。
培养介质：
1、 种子培养基成份为:酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L;配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
2、培养液成份：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
2、固体培养基成份：在液体培养基中加入2%的琼脂粉。
青霉菌细胞制备。青霉菌经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至23-24℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），23-24℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
生物催化转化。底部通气搅拌反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使底物浓度为80-90g/L。其他成份：玉米浆(以干物质计)含量为12-15g/L，山梨坦单月桂酸酯19-20g/L，葡萄糖20-23g/L、麦芽糖32-35g/L、异丙醇8-10%V/V(体积浓度)，121℃高压灭菌30分钟；冷却至32-33℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71-74g/L，通气比为0.12-0.13V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为62-65小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率98-99％，产品收率96-97％，对映体过量率98.5-99％。
本发明所开展工作包括菌株选择、催化反应条件优化（反应温度、通气量、pH）、反应介质选择和浓度优化，包括底物浓度、辅助底物组合、表面活性剂种类及浓度等。
实施例1
种子培养基成份为:玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L;配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
培养液成份为：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子液。1L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至23℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），23℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
生物催化转化：0.5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使其浓度为80g/L，玉米浆(以干物质计)含量为12g/L，山梨坦单月桂酸酯19g/L，葡萄糖23g/L、麦芽糖32g/L、异丙醇8%V/V(体积浓度)，121℃高压灭菌30分钟；冷却至33℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71g/L，通气比为0.13V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为62小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率99％，产品收率97％，对映体过量率98.5％。
实施例2
种子培养基成份为:玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L;配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
培养液成份为：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子液。5L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至24℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），24℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
生物催化转化：5L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使其浓度为90g/L，玉米浆(以干物质计)含量为15g/L，山梨坦单月桂酸酯20g/L，葡萄糖20g/L、麦芽糖35g/L、异丙醇8%V/V(体积浓度)，121℃高压灭菌30分钟；冷却至32℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71g/L，通气比为0.12V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为62小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率98％，产品收率96％，对映体过量率99％。
实施例3
种子培养基成份为:玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L;配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
培养液成份为：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至23℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），23℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
生物催化转化：10L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使其浓度为84g/L，玉米浆(以干物质计)含量为13g/L，山梨坦单月桂酸酯20g/L，葡萄糖21g/L、麦芽糖33g/L、异丙醇9%V/V(体积浓度)，121℃高压灭菌30分钟；冷却至32℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为72g/L，通气比为0.12V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为63小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率98.5％，产品收率96.5％，对映体过量率99％。
实施例4
种子培养基成份为:玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母提取物10g/L，葡萄糖20g/L，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L;配制固体培养基时添加15g/L的琼脂粉。
培养液成份为：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027经斜面、摇瓶培养，得到种子液。10L发酵罐加入培养液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至24℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），24℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂。
生物催化转化：20L底部通气搅拌反应器中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使其浓度为86g/L，玉米浆(以干物质计)含量为14g/L，山梨坦单月桂酸酯19g/L，葡萄糖22g/L、麦芽糖34g/L、异丙醇9%V/V(体积浓度)，121℃高压灭菌30分钟；冷却至32-33℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71-74g/L，通气比为0.13V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为64小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率99％，产品收率96.5％，对映体过量率99％。
Claims (2)
1.一种青霉菌细胞生物催化制备(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯的方法，其特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，pH为6.1，加入底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯，使底物3-（4-甲氧基-苯基）-3-氧代丙酸甲酯添加量为80-90g/L，玉米浆含量为12-15g/L，山梨坦单月桂酸酯19-20g/L，葡萄糖20-23g/L、麦芽糖32-35g/L、异丙醇8-10%V/V
，121℃高压灭菌30分钟；冷却至32-33℃时，加入湿青霉菌细胞使其浓度为71-74g/L，通气比为0.12-0.13V/（V分钟），进行生物催化反应，反应时间为62-65小时；反应结束后，滤出细胞，用乙酸乙酯萃取反应液，蒸出乙酸乙酯，得到产物(S)-3-羟基-3-（4-甲氧基苯基）丙酸甲酯，反应转化率98-99％，产品收率96-97％，对映体过量率98.5-99％。
2.权利要求1所述的方法，其特征在于湿青霉菌细胞制备过程如下：青霉菌ATCC204027，经斜面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，121℃高压灭菌30分钟，冷却至23-24℃，将青霉菌种子液接种至发酵罐，接种比例为10-11％，通气比为0.9-1V/（V分钟），23-24℃培养35-40小时，用过滤式离心机离心得到湿青霉菌细胞，用作生物催化反应催化剂；发酵罐中培养液成份为：玉米浆(以干物质计)含量为35-45g/L，酵母浸膏8-10g/L，葡萄糖18-22g/L，麦芽浸膏25-30g，硫酸铵0.5-0.7g/L，硫酸镁0.3-0.4g/L，磷酸二氧钾1.8-2.3g/L，碳酸钙0.7g/L,硫酸亚铁0.18g/L,硫酸锰0.025g/L;pH5.0。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510561190.9A CN105132478A (zh) | 2015-09-07 | 2015-09-07 | 一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510561190.9A CN105132478A (zh) | 2015-09-07 | 2015-09-07 | 一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105132478A true CN105132478A (zh) | 2015-12-09 |
Family
ID=54718046
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510561190.9A Withdrawn CN105132478A (zh) | 2015-09-07 | 2015-09-07 | 一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105132478A (zh) |
-
2015
- 2015-09-07 CN CN201510561190.9A patent/CN105132478A/zh not_active Withdrawn
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105132478A (zh) | 一种青霉生产(s)-羟甲氧苯丙酸甲酯的方法 | |
| CN105087671A (zh) | 一种青霉菌生产(s)-氟苯基乙醇的方法 | |
| CN105039432A (zh) | 一种青霉菌生产(s)-氯苯二氯乙醇的方法 | |
| CN105087668A (zh) | 一种青霉菌生产(s)-氟苯乙醇的方法 | |
| CN105039449A (zh) | 一种青霉菌生产(s)-呋喃乙醇的方法 | |
| CN105039428A (zh) | 一种黑霉菌生产(s)-溴苯乙醇的方法 | |
| CN105132471A (zh) | 一种微生物生产光活性氯苯氯乙醇的方法 | |
| CN105177060A (zh) | 一种细胞生产(s)-四氢萘酚的方法 | |
| CN105087683A (zh) | 一种细胞生产(s)-3-甲氧丙酸甲酯的方法 | |
| CN105063103A (zh) | 一种霉菌生产手性苯基二氯乙醇的方法 | |
| CN105087682A (zh) | 一种生物生产(s)-羟溴苯丙酸甲酯的方法 | |
| CN105039448A (zh) | 一种黑霉菌生产(s)-乙酰基噻吩的方法 | |
| CN105087698A (zh) | 一种微生物生产(s)-硝基苯乙醇的方法 | |
| CN105063102A (zh) | 一种黑霉菌生产(s)-联苯乙醇的方法 | |
| CN105039446A (zh) | 一种细胞生产(s)-氰基苯乙醇的方法 | |
| CN105087667A (zh) | 一种黄蓝状菌生产(r)-苯基茚醇的方法 | |
| CN105087669A (zh) | 一种黑霉菌生产(s)-溴苯基乙醇的方法 | |
| CN104342464A (zh) | 一种黄蓝状菌催化生产手性苯基甲醇方法 | |
| CN104263776A (zh) | 一种生物催化生产手性吡啶乙醇的方法 | |
| CN105087697A (zh) | 一种细胞生产(s)-羟乙基苯甲磺酸酯的方法 | |
| CN105177069A (zh) | 一种细胞生产(s)-羟乙苯丙酸甲酯的方法 | |
| CN105039433A (zh) | 一种酵母生产(s)-羟乙基苯乙醇的方法 | |
| CN105063112A (zh) | 一种酵母生产(s)-氟苯羟丙酸甲酯的方法 | |
| CN105177070A (zh) | 一种酵母生产(s)-氨基苯基乙醇的方法 | |
| CN105087662A (zh) | 一种酵母生产手性氯苯基氯乙醇的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20151209 |
|
| WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |