CN104938524A - 一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，用鲜叶水提液或干叶水提液处理12h，对福寿螺的LC50分别为5.31g/L和3.19g/L；用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，其中2g/L的红花酢浆草干叶水提液浸渍10日龄和30日龄螺4d的死亡率均为100％；浸渍50日龄5d时，2g/L浓度处理死亡率达到96.65％；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种杀死成年福寿螺的方法，尤其是一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法。
背景技术
福寿螺，又名大瓶螺、苹果螺，两栖淡水贝类软体生物，分类上属软体动物门、腹足纲、中腹足目、瓶螺科、瓶螺属，属于热带和亚热带种；原产于南美洲亚马逊河流域，在20世纪80年代后福寿螺作为一种食物被逐渐引入到日本、菲律宾、越南、泰国等国家；1981年，福寿螺也同样被作为一种食物首先引入我国广东，1984年后，在广东广为养殖，并迅速扩散到广西、福建、海南、浙江、上海、江苏等地，后因福寿螺食味不佳，而被弃之于田野；由于盲目引进和管理不善，目前福寿螺已在我国南方许多省份爆发成灾，并成为我国及其它亚洲国家危害水稻以及其他水生植物的恶性水生动物，被誉为“水稻杀手”；福寿螺适生性强，喜欢在水质清新，食料充足的淡水中生活，多群集栖息于浅水区，或吸附在水生植物茎叶上；适宜在水温为25～32℃的条件下生长，水温超过35℃生长明显下降，生存最高临界水温为45℃，最低临界水温为5℃；福寿螺是以植物性饵料为主的杂食性螺类，食性广，主食水稻、茭白、浮萍等水生作物，偏好带甜味的食物；虽然它是水生物种，但能短暂离开水体生活，可以在湿润的泥土中存活6～8个月，一旦田间恢复水层，又能活动取食为害；福寿螺1年繁殖2～3代，并有明显的世代重叠现象，以幼螺或成螺在水生作物基部或水田土表下2～3cm深处或在田边、沟边等处越冬；卵块常产在离水面10～15cm以上植条或干燥物体的表面，如水稻、茭白、石砌沟壁、田埂、杂草等；1只雌螺1年共能生产孵化出幼螺32.5万余只，繁殖力极强福寿螺的食性很杂，几乎取食环境中的任何生物，有时也攻击其它螺类与螺卵，但其主要食物还是高等植物以及一些旱地蔬菜等。
随着福寿螺在我国入侵时间的增加，加上全球气候的变暖，福寿螺生态适应性的不断增强以及人工的引入，其危害地区将会逐渐向我国北方地区迁移和扩展；福寿螺适宜在我国广大地区生栖危害，危害区面积占60％左右，对我国的水稻生产和生态安全构成严重威胁；同时，近年来，由于农业种植结构的变化，福寿螺危害农作物的种类也在增加，除危害水稻外，福寿螺也侵害处于阴湿生境的茨实、菱角、甘薯、慈姑、紫云英和水生蔬菜，近年来，福寿螺更是普遍危害，引起了广泛的关注。
目前，福寿螺防治有多种方式，如：冬季稻田修整、科学管水、人工摘除卵块、放鸭食螺等，但因受效果的稳定性、实施时机的选择和材料的获取以及成本等因素制约，大都不宜大范围使用。药物防制是福寿螺防治的措施之一，所使用的药剂基本上是化学药剂，除了对环境造成一定程度的污染外，还存在价格较高等问题；喷洒在蔬菜表面的化学药物会因影响食用者的健康，其残留物容易危害生态环境，而且一些地区的福寿螺对化学农药产生了抗性，使防治难度和成本加大。
植物来源的天然药物，特别是采用在当地具有丰富资源的植物或农产品加工废弃物作为天然药物，具有化学药物无法比拟的优势：来源丰富、成本低廉、在自然环境中易降解、对环境的污染小。杀螺植物资源的开发与利用是生物杀螺工作中的重要内容；迄今为止，大约有1500种植物被用于杀螺活性试验，并已发现有不少植物具有杀螺活性；但这只是地球上存在的众多植物种类的一小部分，植物源杀螺剂的研究空间还有很大.
发明内容
本发明的目的是提供一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法。
这种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法：
用鲜叶水提液或干叶水提液处理12h，对福寿螺的LC50分别为5.31g/L和3.19g/L；用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；用干叶水提液浸渍10日龄、30日龄和50日龄螺2d，LC50值分别为0.70g/L、2.15g/L和4.20g/L，其中2g/L的红花酢浆草干叶水提液浸渍10日龄和30日龄螺4d的死亡率均为100％；浸渍50日龄5d时，2g/L浓度处理死亡率达到96.65％；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
这种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，由以下步骤组成：
1.1材料包括：
1.1.1供试植物：
红花酢浆草，全株，采自路旁，用清水洗净后，置烘箱中60℃烘干72h，粉碎后得红花酢浆草原粉，待用；同时采集红花酢浆草新鲜叶片进行试验；
1.1.2福寿螺：
在水稻田中采集螺卵，待其孵化后，置于26℃恒温光照培养箱中，以青饲料饲养待用；使用时分别选取个体大小一致的10日、30日和50日龄福寿螺供试；
1.1.3仪器设备包括：
500mL的烧杯，500mL的加盖一次性塑料碗，小玻璃漏斗，滤纸，量筒，电子分析天平，冰箱，恒温光照培养箱，粉碎机，剪刀，标签；
1.2实验方法：
1.2.1植物样品的提取：
红花酢浆草鲜叶水提液、干叶水提液的制备：将红花酢浆草鲜叶剪成1-2cm碎片，用100g鲜叶和1900mL无氯清水配成50g鲜叶/L红花酢浆草鲜叶水提液，浸泡3d后，用纱布过滤，滤液作为母液备用；红花酢浆草干叶水提液母液的配制方法和浓度与鲜叶水提液相同；
1.2.2采卵与孵化：
采卵时间不宜过早，过早卵块太软，不易整体剥离，也不宜过迟，过迟卵块已完全干涸，剥离时易弄破卵粒；一般产卵后10-20小时，卵块未完全变硬时采集较理想；将采集的卵块放在网片或竹筛上，加盖一层纱布.置于室内水盆上方孵化，并注意遮阳避雨；室温28-30℃下进行孵化，随后红色的卵粒开始变淡最后呈现出白色，10-14天后幼螺便破壳而出，落入水中，2天后，幼螺螺顶由红色变为黑色时便开始摄食；培育期间确保水质清新和环境安静；为保持水质清新，应每天更换一次水，每天早晚投喂足量的青饲料；
1.2.3提取物室内杀螺试验：
试验采用浸杀法；参考张楚霜和Vasconcellos的试验方法；
红花酢浆草水提液稀释成2g/L，1g/L和500mg/L；以无氯清水作空白对照；每处理重复3次；在盛有200mL药液的500mL一次性塑料碗中各放入同龄螺20只和少量浮萍食料，10日、30日和50日龄，每只平均体重分别为0.02g、0.10g和0.67g，烧杯用纱布封口以防止其逃逸；分别在处理后6h，12h，1～7d检查各杯内福寿螺的死亡数，计算死亡率；
1.2.4福寿螺死活鉴定标准：
参考Santos方法判断福寿螺的死亡与否：药后6h，12h，1～7d，取出各处理中的怀疑死螺，分别放养在去氯水中观察，开厣爬行者为活螺，余下敲碎螺壳并用解剖针刺其软体，无反应者为死螺；试验期间室内温度为28±2℃；
1.2.5数据分析方法：
试验数据用Excel，DPS数据处理软件进行统计分析；
2、结果分析：
2.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性
由图1-A和图1-B得出，红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的毒杀作用；
如图1-A所示，红花酢浆草干叶水提液处理2d后，500mg/L，1g/L，2g/L浓度下的福寿螺死亡率分别为41.65％，68.35％，90％；处理3d后1g/L浓度下的福寿螺死亡率在80％以上，而2g/L浓度处理的福寿螺死亡率接近100％；处理4d后，2g/L浓度下的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也达到85％，6d后1g/L处理的福寿螺全部死亡，500mg/L浓度处理的福寿螺死亡率也达到78.35％；说明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用；
如图1-B所示，红花酢浆草鲜叶水提液在2g/L浓度下处理2d后，福寿螺死亡率在60％以上.但以500mg/L浓度处理，福寿螺的死亡率在30％以下；处理3d后各浓度下的福寿螺死亡率明显增加，1g/L处理的死亡率为53.35％，2g/L浓度处理的死亡率接近100％，处理5d后，2g/L处理的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也有78.35％；7d后，1g/L处理的死亡率接近100％，说明，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；
由表1得出，红花酢浆草鲜叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为5.31g/L，2.16g/L，1.12g/L；红花酢浆草干叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为3.19g/L，1.58g/L，0.70g/L；分别相当于红花醋浆草鲜叶水提液的14.49g/L，5.89g/L，3.05g/L，计算依据为：100g红花酢浆草鲜叶经60℃烘干72h，得红花酢浆草干叶36165g，故干叶：鲜叶比为1∶2.73；说明处理12h后红花酢浆草干叶原粉水提液的毒杀效果明显优于鲜叶水提液，而处理2d后红花酢浆草鲜叶及干叶水提液对福寿螺毒杀效果差异不大；因此，试验进一步用红花酢浆草干叶原粉为材料，评价其水提液对不同日龄福寿螺的毒杀活性；
2.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：
图2-a、图2-b、图2-c显示，用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；表2是将图2的结果按LC50值进行统计分析的结果；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高；
3.1结论：
3.1.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性：
以红花酢浆草鲜叶和干叶为原料，对不同日龄福寿螺进行室内浸杀实验，结果表明红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的杀螺活性；红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；
3.1.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：
以红花酢浆草干叶水提液对10日龄，30日龄，50日龄福寿螺进一步的浸杀实验，结果表明用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；将实验数据按LC50值进行统计分析，结果表明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高；
所述的表1：
表1 红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性测定
所述的表2：
表2 红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的LC50值
发明的有益效果：
采用材料为植物来源的天然药物，具有化学药物无法比拟的优势：来源丰富、成本低廉、在自然环境中易降解、对环境的污染小。
本发明进行了植物源杀螺药物的筛选试验，得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。为进一步利用丰富的植物资源用于福寿螺防治研究提供基础资料，同时也为仿生药物合成提供材料。
应用植物中的有效成份进行消灭害螺的研究，不仅利用了我国杀螺植物资源的优势，而且有效地减轻了化学杀螺药物对环境的污染，有着广阔的应用前景；红花酢浆草为多年生草本植物，生活力强，耐寒性强，可适应各种土壤，可作为城市绿化建植草坪的优良植物；有关红花酢浆草成分的杀螺机理尚不清楚，但红花酢浆草原材料简便易得，具有研发新杀螺剂的潜力。
(1)植物材料红花酢浆草为华南地区的常见植物，获取容易。
(2)处理方法操作简便，无需复杂的程序，便于在田间操作，节约成本，降低污染。
(3)有利于控制入侵动物福寿螺，并且为植物的资源化利用开辟了新的途径，对于入侵生态学及生物入侵控制技术的研究都有极大的参考价值。
(4)具有环境污染效应相对较小等特点；劳动强度低，应用范围广泛，工作效率高。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明。
图1-A是本发明的红花酢浆草干叶水提液对福寿螺毒杀作用示意图。
图1-B是本发明的红花酢浆草鲜叶水提液对福寿螺毒杀作用示意图。
图2-a是本发明的红花酢浆草水提液对10日龄福寿螺的毒杀活性示意图。
图2-b是本发明的红花酢浆草水提液对30日龄福寿螺的毒杀活性示意图。
图2-c是本发明的红花酢浆草水提液对50日龄福寿螺的毒杀活性示意图。
具体实施方式
实施例：
红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法：用鲜叶水提液或干叶水提液处理12h，对福寿螺的LC50分别为5.31g/L和3.19g/L；用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；用干叶水提液浸渍10日龄、30日龄和50日龄螺2d，LC50值分别为0.70g/L、2.15g/L和4.20g/L，其中2g/L的红花酢浆草干叶水提液浸渍10日龄和30日龄螺4d的死亡率均为100％；浸渍50日龄5d时，2g/L浓度处理死亡率达到96.65％；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
这种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，具体由以下步骤组成：
1.1材料
1.1.1供试植物
红花酢浆草(Oxalis corymbosa DC)，全株，采自福建省漳州师范学院院内路旁，用清水洗净后置烘箱中60℃烘干72h，粉碎后得红花酢浆草原粉，待用。同时采集红花酢浆草新鲜叶片进行试验。
1.1.2福寿螺
于2010年9月在福建省漳州市天宝地区水稻田中采集螺卵，待其孵化后置于26℃恒温光照培养箱中以青饲料饲养待用。使用时分别选取个体大小一致的10日、30日和50日龄福寿螺供试。
1.1.3主要仪器设备
烧杯(500mL)，一次性塑料碗(500mL，加盖)，小玻璃漏斗，滤纸，量筒，电子分析天平，冰箱，恒温光照培养箱，粉碎机，剪刀，标签。
1.2实验方法
1.2.1植物样品的提取
红花酢浆草鲜叶水提液、干叶水提液的制备：将红花酢浆草鲜叶剪成1-2cm碎片，用100g鲜叶和1900mL无氯清水配成50g(鲜叶)/L红花酢浆草鲜叶水提液，浸泡3d后，用纱布过滤，滤液作为母液备用。红花酢浆草干叶水提液母液的配制方法和浓度与鲜叶水提液相同。
1.2.2采卵与孵化
采卵时间不宜过早，过早卵块太软，不易整体剥离，也不宜过迟，过迟卵块已完全干涸，剥离时易弄破卵粒。一般产卵后10-20小时，卵块未完全变硬时采集较理想。将采集的卵块放在网片或竹筛上，加盖一层纱布，置于室内水盆上方孵化，并注意遮阳避雨。室温28-30℃下进行孵化，随后红色的卵粒开始变淡最后呈现出白色，10-14天后幼螺便破壳而出，落入水中，2天后，幼螺螺顶由红色变为黑色时便开始摄食。培育期间确保水质清新和环境安静。为保持水质清新，应每天更换一次水，每天早晚投喂足量的青饲料。
1.2.3提取物室内杀螺试验
试验采用浸杀法。参考张楚霜等和Vasconcellos等的试验方法。红花酢浆草水提液稀释成2g/L，1g/L和500mg/L。以无氯清水作空白对照。每处理重复3次。在盛有200mL药液的500mL一次性塑料碗中各放入同龄螺(10日、30日和50日龄，每只平均体重分别为0.02g、0.10g和0.67g)20只和少量浮萍食料，烧杯用纱布封口以防止其逃逸。分别在处理后6h，12h，1～7d检查各杯内福寿螺的死亡数，计算死亡率。
1.2.4福寿螺死活鉴定标准
参考Santos等方法[16]判断福寿螺的死亡与否：药后6h，12h，1～7d，取出各处理中的怀疑死螺，分别放养在去氯水中观察，开厣爬行者为活螺，余下敲碎螺壳并用解剖针刺其软体，无反应者为死螺。试验期间室内温度为(28±2)℃。
1.2.5数据分析方法
试验数据用Excel，DPS数据处理软件进行统计分析。
2、结果分析：
2.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性
由图1-A和图1-B得出，红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的毒杀作用。如图1-A所示，红花酢浆草干叶水提液处理2d后，500mg/L，1g/L，2g/L浓度下的福寿螺死亡率分别为41.65％，68.35％，90％。处理3d后1g/L浓度下的福寿螺死亡率在80％以上，而2g/L浓度处理的福寿螺死亡率接近100％。处理4d后，2g/L浓度下的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也达到85％，6d后1g/L处理的福寿螺全部死亡，500mg/L浓度处理的福寿螺死亡率也达到78.35％。说明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用。如图1-B所示，红花酢浆草鲜叶水提液在2g/L浓度下处理2d后，福寿螺死亡率在60％以上，但以500mg/L浓度处理，福寿螺的死亡率在30％以下。处理3d后各浓度下的福寿螺死亡率明显增加，1g/L处理的死亡率为53.35％，2g/L浓度处理的死亡率接近100％，处理5d后，2g/L处理的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也有78.35％。7d后，1g/L处理的死亡率接近100％，说明，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱。
由表1得出，红花酢浆草鲜叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为5.31g/L，2.16g/L，1.12g/L。红花酢浆草干叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为3.19g/L，1.58g/L，0.70g/L。分别相当于红花醋浆草鲜叶水提液的14.49g/L，5.89g/L，3.05g/L(计算依据为：100g红花酢浆草鲜叶经60℃烘干72h，得红花酢浆草干叶36165g，故干叶：鲜叶比为1∶2.73)。说明处理12h后红花酢浆草干叶原粉水提液的毒杀效果明显优于鲜叶水提液，而处理2d后红花酢浆草鲜叶及干叶水提液对福寿螺毒杀效果差异不大。因此，试验进一步用红花酢浆草干叶原粉为材料，评价其水提液对不同日龄福寿螺的毒杀活性。
2.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性
图2-a、图2-b、图2-c显示，用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关。用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％。表2是将图2的结果按LC50值进行统计分析的结果。得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
3.1结论
3.1.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性
本研究以红花酢浆草鲜叶和干叶为原料，对不同日龄福寿螺进行室内浸杀实验，结果表明红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的杀螺活性。红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱。
3.1.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性
以红花酢浆草干叶水提液对10日龄，30日龄，50日龄福寿螺进一步的浸杀实验，结果表明用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关。将实验数据按LC50值进行统计分析，结果表明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
所述的表1：
表1 红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性测定
所述的表2：
表2 红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的LC50值
Claims (4)
1.一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征是：用鲜叶水提液或干叶水提液处理12h，对福寿螺的LC50分别为5.31g/L和3.19g/L；用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；用干叶水提液浸渍10日龄、30日龄和50日龄螺2d，LC50值分别为0.70g/L、2.15g/L和4.20g/L，其中2g/L的红花酢浆草干叶水提液浸渍10日龄和30日龄螺4d的死亡率均为100％；浸渍50日龄5d时，2g/L浓度处理死亡率达到96.65％；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
2.根据权利要求1所述的一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征在于：由以下步骤组成：
1.1材料包括：
1.1.1供试植物：
红花酢浆草，全株，采自路旁，用清水洗净后，置烘箱中60℃烘干72h，粉碎后得红花酢浆草原粉，待用；同时采集红花酢浆草新鲜叶片进行试验；
1.1.2福寿螺：
在水稻田中采集螺卵，待其孵化后，置于26℃恒温光照培养箱中，以青饲料饲养待用；使用时分别选取个体大小一致的10日、30日和50日龄福寿螺供试；
1.1.3仪器设备包括：
500mL的烧杯，500mL的加盖一次性塑料碗，小玻璃漏斗，滤纸，量筒，电子分析天平，冰箱，恒温光照培养箱，粉碎机，剪刀，标签；
1.2实验方法
1.2.1植物样品的提取：
红花酢浆草鲜叶水提液、干叶水提液的制备：将红花酢浆草鲜叶剪成1-2cm碎片，用100g鲜叶和1900mL无氯清水配成50g鲜叶/L红花酢浆草鲜叶水提液，浸泡3d后，用纱布过滤，滤液作为母液备用；红花酢浆草干叶水提液母液的配制方法和浓度与鲜叶水提液相同；
1.2.2采卵与孵化：
采卵时间不宜过早，过早卵块太软，不易整体剥离，也不宜过迟，过迟卵块已完全干涸，剥离时易弄破卵粒；一般产卵后10-20小时，卵块未完全变硬时采集较理想；将采集的卵块放在网片或竹筛上，加盖一层纱布，置于室内水盆上方孵化，并注意遮阳避雨；室温28-30℃下进行孵化，随后红色的卵粒开始变淡最后呈现出白色，10-14天后幼螺便破壳而出，落入水中.2天后，幼螺螺顶由红色变为黑色时便开始摄食；培育期间确保水质清新和环境安静；为保持水质清新，应每天更换一次水，每天早晚投喂足量的青饲料；
1.2.3提取物室内杀螺试验：
试验采用浸杀法；参考张楚霜和Vasconcellos的试验方法；
红花酢浆草水提液稀释成2g/L，1g/L和500mg/L；以无氯清水作空白对照；每处理重复3次；在盛有200mL药液的500mL一次性塑料碗中各放入同龄螺20只和少量浮萍食料，10日、30日和50日龄，每只平均体重分别为0.02g、0.10g和0.67g，烧杯用纱布封口以防止其逃逸；分别在处理后6h，12h，1～7d检查各杯内福寿螺的死亡数，计算死亡率；
1.2.4福寿螺死活鉴定标准：
参考Santos方法判断福寿螺的死亡与否：药后6h，12h，1～7d，取出各处理中的怀疑死螺，分别放养在去氯水中观察，开厣爬行者为活螺，余下敲碎螺壳并用解剖针刺其软体，无反应者为死螺；试验期间室内温度为28±2℃；
1.2.5数据分析方法：
试验数据用Excel，DPS数据处理软件进行统计分析；
2、结果分析：
2.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性
由图1-A和图1-B得出，红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的毒杀作用；
如图1-A所示，红花酢浆草于叶水提液处理2d后，500mg/L，1g/L，2g/L浓度下的福寿螺死亡率分别为41.65％，68.35％，90％；处理3d后1g/L浓度下的福寿螺死亡率在80％以上，而2g/L浓度处理的福寿螺死亡率接近100％；处理4d后，2g/L浓度下的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也达到85％，6d后1g/L处理的福寿螺全部死亡，500mg/L浓度处理的福寿螺死亡率也达到78.35％；说明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用；
如图1-B所示，红花酢浆草鲜叶水提液在2g/L浓度下处理2d后，福寿螺死亡率在60％以上，但以500mg/L浓度处理，福寿螺的死亡率在30％以下；处理3d后各浓度下的福寿螺死亡率明显增加，1g/L处理的死亡率为53.35％，2g/L浓度处理的死亡率接近100％，处理5d后，2g/L处理的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也有78.35％；7d后，1g/L处理的死亡率接近100％，说明，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；
由表1得出，红花酢浆草鲜叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为5.31g/L，2.16g/L，1.12g/L；红花酢浆草干叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC50分别为3.19g/L，1.58g/L，0.70g/L；分别相当于红花醋浆草鲜叶水提液的14.49g/L，5.89g/L，3.05g/L，计算依据为：100g红花酢浆草鲜叶经60℃烘干72h，得红花酢浆草干叶36165g，故干叶∶鲜叶比为1∶2.73；说明处理12h后红花酢浆草干叶原粉水提液的 毒杀效果明显优于鲜叶水提液，而处理2d后红花酢浆草鲜叶及干叶水提液对福寿螺毒杀效果差异不大；因此，试验进一步用红花酢浆草干叶原粉为材料，评价其水提液对不同日龄福寿螺的毒杀活性；
2.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：
图2-a、图2-b、图2-c显示，用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；表2是将图2的结果按LC50值进行统计分析的结果；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高；
3.1结论：
3.1.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性：
以红花酢浆草鲜叶和干叶为原料，对不同日龄福寿螺进行室内浸杀实验，结果表明红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10曰龄福寿螺幼螺均有较强的杀螺活性；红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；
3.1.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：
以红花酢浆草干叶水提液对10日龄，30日龄，50日龄福寿螺进一步的浸杀实验，结果表明用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50曰龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；将实验数据按LC50值进行统计分析，结果表明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。
3.根据权利要求2所述一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征是：所述的表1：
表1 红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性测定
4.根据权利要求2所述一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征是：所述的表2：
表2 红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的LC50值
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN110892896A (zh) * | 2019-11-26 | 2020-03-20 | 江苏师范大学 | 一种低毒复配农药杀螺剂的配方 |
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| JP2006036745A (ja) * | 2004-07-26 | 2006-02-09 | Yoshihiko Kamimura | 田螺駆除剤 |
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