CN104877981A - 一种酸性蛋白酶培养基 - Google Patents
一种酸性蛋白酶培养基 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104877981A CN104877981A CN201510361888.6A CN201510361888A CN104877981A CN 104877981 A CN104877981 A CN 104877981A CN 201510361888 A CN201510361888 A CN 201510361888A CN 104877981 A CN104877981 A CN 104877981A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- substratum
- aspartic protease
- adopt
- ammonium chloride
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/58—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi
- C12N9/62—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from fungi from Aspergillus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种酸性蛋白酶培养基，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：7份～12份，鱼粉：11份～14份，豆饼粉：25份～35份，磷酸氢二钾：2份～7份，氯化钙：4份～6份，氯化铵：15份～30份，氯化钠：1份～4份，氧化钙：20份～50份，组合酶：10份～30份，培养基水解液：5份～15份，碳源补充剂：6份～14份，氮源补充剂：4份～6份，能量补充剂：3份～15份，表面活性剂：5份～15份，氧载体：5份～10份，本发明具有高产量,高酶活，提高发酵水平、增加酶活、高效合成蛋白酶等优点。
Description
【技术领域】
本发明涉及酸性蛋白酶培养基的技术领域。
【背景技术】
酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。酸性蛋白酶是一类断裂肽链的水解酶,其PH在2到4左右，主要来源于动物的器脏，研究比较彻底的是胃蛋白酶，但是通过改善培养基的配方，提高菌株的产酶量是研究尚未报道的。
【发明内容】
本发明的目的就是解决现有技术中的问题，提出一种酸性蛋白酶培养基，具有高产量,高酶活，提高发酵水平、增加酶活、高效合成蛋白酶等优点。
为实现上述目的，本发明提出了一种酸性蛋白酶培养基，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：7份～12份，鱼粉：11份～14份，豆饼粉：25份～35份，磷酸氢二钾：2份～7份，氯化钙：4份～6份，氯化铵：15份～30份，氯化钠：1份～4份，氧化钙：20份～50份，组合酶：10份～30份，培养基水解液：5份～15份，碳源补充剂：6份～14份，氮源补充剂：4份～6份，能量补充剂：3份～15份，表面活性剂：5份～15份，氧载体：5份～10份。
作为优选，所述组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的比例为6.5:2.4:1.3。
作为优选，所述碳源补充剂采用糊精、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、小麦粉、麸皮中的任意一种。
作为优选，所述氮源补充剂采用蛋白胨、酵母膏、玉米浆、黄豆粉、豆饼水解液中的任意一种。
作为优选，所述能量补充剂采用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、中的任意一种。
作为优选，所述表面活性剂采用苄苯氧基氯化铵、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一种。
作为优选，所述氧载体采用正十二烷、全氟化碳、液态烷烃中任意一种，液态烷烃为12—16碳直链烷烃中任意一种。
作为优选，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：8份，鱼粉：12份，豆饼粉：30份，磷酸氢二钾：3份，氯化钙：4份，氯化铵：4份，氯化钠：2份，氧化钙：5份，组合酶：10份，培养基水解液：6份，碳源补充剂：8份，氮源补充剂：4份，能量补充剂：4份，表面活性剂：5份，氧载体：5份。
作为优选，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：12份，鱼粉：14份，豆饼粉：35份，磷酸氢二钾：7份，氯化钙：6份，氯化铵：30份，氯化钠：4份，氧化钙：7份，组合酶：30份，培养基水解液：15份，碳源补充剂：14份，氮源补充剂：6份，能量补充剂：15份，表面活性剂：15份，氧载体：10份。
本发明的有益效果：本发明采用碳源补充剂来避免单一碳源引起的酸性蛋白酶分解代谢阻遏使产酶量降低，在黑曲霉生产酸性蛋白酶时，需要较高浓度的氮源浓度，所以有机氮源补充剂存在时，NH4+或NO3-对黑曲霉生产酸性蛋白酶有显著促进作用，采取高浓度的有机氮并辅与无机氮源，可以加速水解，能量补充剂主要是磷酸盐，在磷酸氢二钾消耗时辅助提供ATP的组成成分，加速微生物生长代谢，向培养基中添加适量表面活性剂，特别是非离子表面活性剂如：苄苯氧基氯化铵、壬基酚聚氧乙烯醚，可以改善细胞膜的通透性并且诱导酸性蛋白酶的生成，在一定条件下可显著促进酸性蛋白酶的生产，氧载体采用正十二烷、全氟化碳，液态烷烃(为12—16碳直链烷烃混合物)中任意一种，使培养基中氧传递速度加快，产生气泡少，剪切力小，能明显提高菌株产酸性蛋白酶的量。
【具体实施方式】
本发明一种酸性蛋白酶培养基，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：7份～12份，鱼粉：11份～14份，豆饼粉：25份～35份，磷酸氢二钾：2份～7份，氯化钙：4份～6份，氯化铵：15份～30份，氯化钠：1份～4份，氧化钙：20份～50份，组合酶：10份～30份，培养基水解液：5份～15份，碳源补充剂：6份～14份，氮源补充剂：4份～6份，能量补充剂：3份～15份，表面活性剂：5份～15份，氧载体：5份～10份。
所述组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次为6.5:2.4:1.3，所述碳源补充剂采用糊精、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、小麦粉、麸皮中的任意一种，所述氮源补充剂采用蛋白胨、酵母膏、玉米浆、黄豆粉、豆饼水解液中的任意一种，所述能量补充剂采用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、中的任意一种，所述表面活性剂采用苄苯氧基氯化铵、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一种，氧载体采用正十二烷、全氟化碳，液态烷烃(为12—16碳直链烷烃混合物)中任意一种。
培养基的起始pH对酸性蛋白酶产量有较大的影响，改变氯化铵的浓度可以有效的调节PH为4.5～5.5左右，组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次为6.5:2.4:1.3，于室温下处理2h，紫外诱变处理50s，得到的菌株比原始菌株酶活提高30％，添加5份～15份的表面活性剂，特别是非离子表面活性剂如：苄苯氧基氯化铵、壬基酚聚氧乙烯醚,可以改善细胞膜的通透性并且诱导酸性蛋白酶的生成，发酵开始后，向培养基中加入5份～10份的正十二烷、全氟化碳，液态烷烃(为12—16碳直链烷烃混合物)等氧载体，使培养基中氧传递速度加快，产生气泡少，剪切力小，能明显提高菌株产酸性蛋白酶的量。
实施例一：
一种酸性蛋白酶培养基，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：8份，鱼粉：12份，豆饼粉：30份，磷酸氢二钾：3份，氯化钙：4份，氯化铵：4份，氯化钠：2份，氧化钙：5份，组合酶：10份，培养基水解液：6份，碳源补充剂：8份，氮源补充剂：4份，能量补充剂：4份，表面活性剂：5份，氧载体：5份，所述组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次为6.5:2.4:1.3，所述碳源补充剂采用糊精所述氮源补充剂采用蛋白胨，所述能量补充剂采用磷酸二氢钠，所述表面活性剂采用苄苯氧基氯化铵，所述氧载体采用正十二烷。
实施例二：
一种酸性蛋白酶培养基，包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：12份，鱼粉：14份，豆饼粉：35份，磷酸氢二钾：7份，氯化钙：6份，氯化铵：30份，氯化钠：4份，氧化钙：7份，组合酶：30份，培养基水解液：15份，碳源补充剂：14份，氮源补充剂：6份，能量补充剂：15份，表面活性剂：15份，氧载体：10份，所述组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，比例依次为6.5:2.4:1.3，所述碳源补充剂采用马铃薯淀粉，所述氮源补充剂采用豆饼水解液，所述能量补充剂采用磷酸二氢钾，所述表面活性剂采用壬基酚聚氧乙烯醚，所述氧载体采用全氟化碳。
上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：7份～12份，鱼粉：11份～14份，豆饼粉：25份～35份，磷酸氢二钾：2份～7份，氯化钙：4份～6份，氯化铵：15份～30份，氯化钠：1份～4份，氧化钙：20份～50份，组合酶：10份～30份，培养基水解液：5份～15份，碳源补充剂：6份～14份，氮源补充剂：4份～6份，能量补充剂：3份～15份，表面活性剂：5份～15份，氧载体：5份～10份。
2.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述组合酶是纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的混合液，纤维素酶、蜗牛酶、溶菌酶的比例为6.5:2.4:1.3。
3.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述碳源补充剂采用糊精、马铃薯淀粉、可溶性淀粉、小麦粉、麸皮中的任意一种。
4.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述氮源补充剂采用蛋白胨、酵母膏、玉米浆、黄豆粉、豆饼水解液中的任意一种。
5.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述能量补充剂采用磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾中的任意一种。
6.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述表面活性剂采用苄苯氧基氯化铵、壬基酚聚氧乙烯醚中任意一种。
7.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：所述氧载体采用正十二烷、全氟化碳、液态烷烃中任意一种，所述液态烷烃为12～16碳直链烷烃中任意一种。
8.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：包括以下组分且各组分的比例为：玉米粉：8份，鱼粉：12份，豆饼粉：30份，磷酸氢二钾：3份，氯化钙：4份，氯化铵：4份，氯化钠：2份，氧化钙：5份，组合酶：10份，培养基水解液：6份，碳源补充剂：8份，氮源补充剂：4份，能量补充剂：4份，表面活性剂：5份，氧载体：5份。
9.如权利要求1所述的一种酸性蛋白酶培养基，其特征在于：玉米粉：12份，鱼粉：14份，豆饼粉：35份，磷酸氢二钾：7份，氯化钙：6份，氯化铵：30份，氯化钠：4份，氧化钙：7份，组合酶：30份，培养基水解液：15份，碳源补充剂：14份，氮源补充剂：6份，能量补充剂：15份，表面活性剂：15份，氧载体：10份。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510361888.6A CN104877981A (zh) | 2015-06-24 | 2015-06-24 | 一种酸性蛋白酶培养基 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510361888.6A CN104877981A (zh) | 2015-06-24 | 2015-06-24 | 一种酸性蛋白酶培养基 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104877981A true CN104877981A (zh) | 2015-09-02 |
Family
ID=53945660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510361888.6A Pending CN104877981A (zh) | 2015-06-24 | 2015-06-24 | 一种酸性蛋白酶培养基 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104877981A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108456708A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-08-28 | 齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司 | 一种发酵制备苏氨酸的培养基 |
-
2015
- 2015-06-24 CN CN201510361888.6A patent/CN104877981A/zh active Pending
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 方春玉等: "泸型大曲黑曲霉产酸性蛋白酶条件的优化及其酶学性质的研究", 《食品与发酵科技》 * |
| 沈玉洁等: "高产酸性蛋白酶菌株的筛选及发酵条件研究", 《食品与发酵科技》 * |
| 袁康培等: "黑曲霉HU53菌株产酸性蛋白酶的条件和酶学性质", 《食品科学》 * |
| 郭艳梅等: "黑曲霉作为细胞工厂：知识准备与技术基础", 《生物工程学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108456708A (zh) * | 2018-06-20 | 2018-08-28 | 齐齐哈尔龙江阜丰生物科技有限公司 | 一种发酵制备苏氨酸的培养基 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Chi et al. | Optimization of medium and cultivation conditions for alkaline protease production by the marine yeast Aureobasidium pullulans | |
| Battan et al. | High-level xylanase production by alkaliphilic Bacillus pumilus ASH under solid-state fermentation | |
| Vohra et al. | A cost‐effective cane molasses medium for enhanced cell‐bound phytase production by Pichia anomala | |
| JP5412272B2 (ja) | エタノール製造のための同時糖化‐発酵培養基用の栄養剤 | |
| CN101979627A (zh) | 利用谷氨酸发酵废菌体制备谷氨酸发酵有机氮添加物的方法 | |
| Lemos et al. | Xylanase production by Aspergillus awamori in solid-state fermentation and influence of different nitrogen sources | |
| Das et al. | Study on regulation of growth and biosynthesis of cellulolytic enzymes from newly isolated Aspergillus fumigatus ABK9 | |
| CN102318737A (zh) | 一种无毒棉粕动物饲料的制备方法 | |
| York et al. | Ethanol production by recombinant Escherichia coli KO11 using crude yeast autolysate as a nutrient supplement | |
| CN103504123A (zh) | 一种具复合酶功能的发酵豆粕及其制备方法 | |
| CN103013960A (zh) | 一种碱性蛋白酶及其重组表达工程菌 | |
| CN104560505B (zh) | 一种流加淀粉葡萄糖液酿造黄酒工艺 | |
| CN104877981A (zh) | 一种酸性蛋白酶培养基 | |
| CN108949864A (zh) | 谷氨酸发酵用糖的制备方法和应用 | |
| CN101139570A (zh) | 一种hpv l1蛋白原核表达的高密度发酵方法 | |
| Cai et al. | Salt-tolerant mechanism of marine Aspergillus niger cellulase cocktail and improvement of its activity | |
| Morita et al. | Effect of organic nitrogen sources on raw starch‐digesting glucoamylase production of Rhizopus sp. MKU 40 | |
| CN111454817A (zh) | 一种利用酒糟生产发酵饲料原料的方法和装置 | |
| El-Refai et al. | Some physiological parameters for ethanol production from beet molasses by Saccharomyces cerevisiae Y-7 | |
| Lee et al. | Production and characterization of keratinase from Paracoccus sp. WJ-98 | |
| Zurbriggen et al. | Pilot scale production of a Trichoderma reesei endo-β-glucanase by brewer's yeast | |
| CN107299121A (zh) | 利用玉米浆水解液代替工业磷酸盐的氨基酸发酵方法 | |
| Mohan et al. | Application of Plackett–Burman design for screening the media components for tannase production from redgram husk using submerged fermentation | |
| Yu et al. | Amylolytic enzyme production by Rhizopus oryzae grown on agricultural commodities | |
| CN101139553A (zh) | 味精废液生产营养酵母粉的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20150902 |