CN104877946B - 粪便乳杆菌fzb1及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种粪便乳杆菌，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)。本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)属于乳杆菌，具有益生特性，同时其具有耐酸耐胆盐性能，可以作为益生菌使用，应用前景良好。

Description

粪便乳杆菌FZB1及其应用
技术领域
本发明涉及一种粪便乳杆菌及其应用，属于微生物技术领域。
背景技术
乳杆菌属(Lactobacillus)是生活在碳源丰富环境的乳酸菌(Lactic acidbacteria)的主要代表，被视为安全无害的微生物。乳杆菌广泛分布于植物体表、传统发酵食品、乳制品、人和动物肠道中，对动物和人类都有益生作用。乳杆菌在宿主肠道中能产生乳酸等代谢产物，拮抗病原菌的生长繁殖、、改善肠道菌群失调、降低血清胆固醇、促进肠道消化系统健康、治疗腹泻、增强免疫力、帮助吸收营养成分，是重要的胃肠道益生菌(Probiotics)。已经证实乳杆菌对过敏、消化道疾病、呼吸道疾病和阴道炎症等都有良好的疗效，对繁殖和早期免疫有促进作用。乳杆菌杆菌都具有益生的功能，但是其是否可以作为益生菌，在肠道中定植存活，取决于其是否耐酸耐胆盐。
粪便乳杆菌(Lactobacillus faecis)是在2013年命名的乳杆菌新种，分离自南非开普敦动物园中的豺和浣熊的粪便，模式种为AFL13-2T(＝JCM 17300T＝DSM23956T)，目前粪便乳杆菌仅有此一例报道，其耐酸和耐胆盐的性能未知。
发明内容
本发明提供了一种新的粪便乳杆菌菌株及其应用。
本发明提供了一种粪便乳杆菌，它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)。
本发明的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)，于2015年2月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，其地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，其保藏号为：CGMCC No.10515。
本发明还提供了保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillusfaecis FZB1)在制备益生菌中的用途。
本发明提供了保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillusfaecis FZB1)在制备抑菌、改善肠道菌群失调、降低血清胆固醇、促进肠道消化系统健康、治疗腹泻、增强免疫力、帮助吸收营养成分的药品、保健品、食品或者饲料添加剂中的应用。
本发明还提供了一种药品，它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上药学上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
本发明还提供了一种食品，它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上食品上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
本发明还提供了一种保健品，它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上保健品上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
本发明还提供了一种饲料添加剂，它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上饲料上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)属于乳杆菌，具有益生特性，同时其具有耐酸耐胆盐性能，可以作为益生菌使用，应用前景良好。
本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)，是一种分离的全新的菌株，本发明是粪便乳杆菌物种的第二次发现并分离鉴定。该菌株的分离鉴定丰富了可利用微生物资源库，为以后更好地利用乳杆菌做出了一定的贡献。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1粪便乳杆菌FZB1菌株的16S rDNA序列系统进化树图。构建方法为邻接法，自举检验值设为1000，Lactobacillus kimchiensis L133T设置为外群，标尺为1％的序列差异。
图2粪便乳杆菌FZB1菌株的RpoA氨基酸残基序列系统进化树图。构建方法为邻接法，自举检验值设为1000，短乳杆菌(Lactobacillus brevis)设置为外群，标尺为2％的序列差异。
具体实施方式
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照试剂盒说明书选择。
实验材料：从四川省富顺县张坝村采集白鹭粪便样品5份。乳杆菌菌株培养方法为用MRS培养基在37℃静置培养18-48h。质粒提取试剂盒与胶回收试剂盒购自Omega公司(Bio-Tek USA)，革兰阳性菌基因组提取试剂盒、PCR(Ex Taq)和T载体试剂盒购自大连宝生物公司(TaKaRa)。细菌微量生化管购自杭州滨和微生物试剂有限公司。
实施例1本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)的分离鉴定
1、分离方法
2010年6月，从四川省富顺县张坝村采集白鹭粪便样品5份，将白鹭粪便样品在MRS培养基上划线培养，然后挑取生长的单菌落进行革兰染色观察。挑取微量革兰阳性杆菌菌株的菌体，作为PCR扩增的模板。然后根据乳杆菌PCR快速检出技术所描述的方法进行PCR，快速筛出乳杆菌菌株。
筛选所用培养基：MRS培养基。
培养方法：37℃静置培养18-48h。
通过在MRS培养基上的划线分离和革兰染色鉴定，从5份白鹭粪便样品得到4株革兰阳性杆菌。使用乳杆菌PCR快速检出技术，从4株革兰阳性杆菌中筛出1株乳杆菌，命名为FZB1菌株。
2、鉴定方法
(1)形态学特征
从固体培养基上挑取单个菌落，进行革兰染色，然后在显微镜下放大2000倍观察菌体形态。
(2)生理生化特征
过氧化氢酶试验、明胶液化试验、硫化氢产生试验和吲哚产生试验采用传统方法进行。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-阿拉伯糖、D-半乳糖和D-甘露醇的发酵产酸试验使用细菌微量生化管进行，培养方式为37℃静置培养。
乳杆菌属的生理生化特征为不产生过氧化氢酶，不液化明胶，不产生硫化氢和吲哚，代谢葡萄糖产酸。不同乳杆菌菌种代谢不同种类的单糖。
(3)分子生物学特征
测序：细菌有些基因高度保守，例如16S rDNA基因；有的基因在同一菌属内有较高的保守性，例如依赖于DNA的RNA聚合酶α亚基基因(rpoA)和重组酶A基因(recA)。利用这些保守基因序列，可以鉴定细菌的种属。
培养筛出的乳杆菌菌株，得到菌液，用革兰阳性菌基因组提取试剂盒提取基因组。利用细菌16S rDNA通用引物对(正义：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'；反义：
5'-AAGGAGGTGATCCAG CCGCA-3')，扩增乳杆菌菌株的16S rDNA基因。根据Endo等人设计的方法，PCR扩增乳杆菌菌株recA基因的保守序列，引物为：正义：
5'-GCCCTAAAAAARATYGAAAAGAAHTTYGGTAAAGG-3；反义：
5'-AATGGTGGCGCYACYTTGTTTTTHACAACTTT-3'。使用Sabri M.Naser等人设计的方法扩增乳杆菌菌株的rpoA基因保守序列，引物为：正义：
5'-ATGATYGARTTTGAAAAACC-3'；反义：5'-ACHGTRTTRATDCCDGCRCG-3'。所有PCR扩增片段均通过胶回收纯化，然后进行A-T克隆，最后送到成都擎科梓熙生物技术有限公司测序。
序列比对与系统进化树构建：利用NCBI网站上的序列比对工具BLAST，在Genbank等数据库中比对乳杆菌菌株16S rDNA、recA和rpoA基因的扩增片段的测序结果。系统进化树构建使用软件MEGA 6.06进行，构建方法为邻接法，自举检验值设为1000。
3、鉴定结果
(1)形态学特征
革兰染色阳性，菌体呈杆状，符合乳杆菌属的特征。
在MRS固体培养基上菌落呈乳白色，表面光滑；革兰氏染色证明分离的菌株为单一的革兰氏阳性菌，菌体呈紫红色杆状，两个或多个排列。
(2)生理生化特征
粪便乳杆菌FZB1的生化试验结果(表1)符合乳杆菌属的特征，不产生过氧化氢酶、硫化氢和吲哚，不液化明胶。比较粪便乳杆菌模式种AFL13-2T(＝JCM 17300T＝DSM23956T)的生化特征，仅发酵D-半乳糖产酸的实验结果不同，但同于粪便乳杆菌AFL18-5和AFL19-3菌株。生化试验结果符合分子鉴定的结论。
表1粪便乳杆菌FZB1生化特性鉴定表
注：生化鉴定实验以嗜酸乳杆菌ATCC 4356菌株为对照。1：粪便乳杆菌FZB1；2：嗜酸乳杆菌ATCC4356；+：为阳性反应；-：为阴性反应；D：为3日后出现反应。
(3)分子生物学特征
a、16S rDNA基因测序鉴定结果
FZB1菌株的16S rDNA基因扩增片段长1557bp，核苷酸序列如下：
AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGATGAACCCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAAACTCCTTTATCACCGAGTGCTTGCATTCACCGATAAAGAGTTGAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAACCTGCCCGAAAGAGGGGGATAACACTTGGAAACAGGTGCTAATACCGCATAACCATGAACACCGCATGGTGTTTATGTGAAAGGTGGTTTCGGCTACCGCTTTCGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCTTACCAAGGCAATGATGCGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGGGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAACCCTGTTGTCAGAGAAGAAAGTGCATGAGAGTAACTGTTCATGTTTCGACGGTATCTGACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGTGCGTAAAGGGAACGCACGCGGGCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCTTCGGCTTAACCGGAGTAGTGCATTGCAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTACCGGTGAAATGCGTATATATATGGAAGAGCACCAGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGTTCGAAAGCGTGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGTTAACACAATAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTCTGACAATCCTAGAGATAGGACTTTTTCTTCGGAAACAGAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTTGTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGCAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAACGAGTCGCAAGACCGCGAGGTTTAGCAAATCTCTTAAAGCCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGCCGGTGGGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGTCTAAGGTGGGACAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCTGCGGCTGGATCACCTCCTT。
序列比对结果表明：粪便乳杆菌(L.faecis AFL13-2)的16S rDNA序列(NR_114391)是与扩增片段最相似的序列，相似性为99.2％，1545bp中有13个碱基不同；接下来的相似性为97.4％、97.4％、97.3％和93.8％，分别是动物乳杆菌(L.animalis KCTC3501)、鼠乳杆菌(L.murinus NBRC 14221)、姬鼠乳杆菌(L.apodemi ASB1)和瘤胃乳杆菌(L.ruminis ATCC 27782)的16S rDNA序列(NR_041610、NR_112689、NR_042367和NR_102839)。FZB1菌株的16S rDNA基因与粪便乳杆菌的16S rDNA基因的差异为0.8％，不到1％，可认FZB1菌株为粪便乳杆菌。从邻接法构建的系统进化树来看，粪便乳杆菌FZB1属于唾液乳杆菌(L.salivarius)系统进化群，和粪便乳杆菌AFL13-2构成小亚群。该小亚群和动物乳杆菌、鼠乳杆菌和姬鼠乳杆菌的亲缘关系最近(图1)。
b、rpoA基因测序鉴定结果
粪便乳杆菌FZB1菌株的rpoA基因扩增片段长821bp，编码273个氨基酸残基，核苷酸序列是：
ACAGTGTTAATGCCGGCACGCTTCAAGCAGTTATATGAACGAACAGAAAGATCAAGTTCTTCGATCGTCATTTCTAACATTTTTTCTTTATGTGTTTCTTCTTTTTCGACCATGATCTCAGCATTCTTAGCTTCATCAGTCAAATCAACAAATAAAGTCAAATGTTCTGTTAGGATCTTCGCAGACAAGCTGATCGCTTCACTTGGTGTGATCGAACCGTTTGTCCACACGTCTAACGTTAATTTATCATAATCATTTTTTTGACCAACACGTGTTTTTTCTACTTGGTAGTTGACACGTTCGATCGGGGTATAAATTGAGTCGATTGGTAAAACGCCAATAGGCATATCTTCAGCCTTAGCTTTATGTTCCGCAGCGGAAACATAGCCTCGACCCTTGTCAGCAGTCATACGTGCGTGGAAAACAGCTCCATCTGCGACCGTACAGATATATTGATCTGGGTTTAAGACCTCAACATCACTGCTACCTTGAATGTCACCGGCTGTAACTTCTTTTGGACCAACAACATCAAATTCTAAAGTTTGAGGATCTTCAGAATCAAGCTTTAGGGTAACTTTCTTTAAGTTCAAAATGATCGCTGTCACGTCTTCTAATACACCTTTGACAGTGGAGAATTCGTGTAACACACCATCGATCTGAACATCTGTGATAGCTGCACCTGGTAAAGAAGAAAGCGAGATCCGACGTAAGGAGTTACCTAAAGTTGTCCCATAGCCACGTTCGAGTGGTTCGACAACAAACTTACCGTAATCTTCGCCTTCTTCAATTTTATGAATTTTTGGTTTTTCAAACTCGATCAT。
核酸序列比对结果表明：相似性最高的前三位分别是92.6％、91.7％和81.9％，分别是以下三个菌株的rpoA基因序列：动物乳杆菌LMG 17195(AM284305)、鼠乳杆菌LMG14189T(AM087801)和瘤胃乳杆菌ATCC 27782(CP003032)。需要说明的是Genbank数据库中没有粪便乳杆菌和姬鼠乳杆菌的rpoA基因序列。粪便乳杆菌FZB1的rpoA基因序列和动物乳杆菌及鼠乳杆菌有90％以上的相似性，这个结果和16S rDNA序列比对结果吻合。
我们发现，在蛋白质数据库中，虽然还是没有粪便乳杆菌的RpoA蛋白质的氨基酸残基序列，却有姬鼠乳杆菌的RpoA蛋白质的氨基酸残基序列。氨基酸残基序列比对结果表明：相似性最高的前三位分别是97.1％，97.1％，96.7％，分别是姬鼠乳杆菌(WP_025086724)、动物乳杆菌(WP_010688171)和鼠乳杆菌(WP_004050263)的RpoA蛋白质的氨基酸残基序列。根据RpoA氨基酸残基序列构建的系统进化树来看，FZB1还是属于唾液乳杆菌系统进化群，仍然和姬鼠乳杆菌、动物乳杆菌和鼠乳杆菌的亲缘关系最近(图2)。
c、recA基因测序鉴定结果
FZB1的recA基因扩增片段长670bp，编码223个氨基酸残基，核苷酸序列如下：
CTGATCCATCTTTGATCTGTTCGGCCCGACGCACATCTAAACGGATCGTTGAATAGAATTTAAGTGCACGTCCACCAGGTGTCGTTTCTGGATTTCCAAACATCACACCGACTTTCTCACGGATCTGGTTGATAAAGATCGCGATCGTCTTTGTCTTATTGATGGTCCCTGAAAGCTTACGTAAAGCTTGGGACATCAAACGTGCTTGCAGACCAACGTGCGAATCGCCCATATCACCATCGATCTCAGCCTTAGGTACAAGGGCCGCAACTGAGTCAACGACGACAATATCGATCGCTCCAGATGAAACCAAAGCATCAGCGATCTGAAGCCCTTGTTCCCCTGTATCTGGTTGTGACAAGAGCAACGCATCGATGTCGACTCCTAAAGCGGTTGCGTATGCAGGATCTAGAGCATTTTCAGCGTCGATATAAGCTGCGATCCCACCATTTTTTTGGACTTCAGCAACAGCGTGCAATGCAACCGTTGTCTTACCTGAACTTTCAGGTCCATAGATCTCAACGATCCGGCCCCGCGGATAGCCTCCCACTCCAAGGGCATAGTCTAATGCTAATGAGCCACTTGGCACAGTAGAGATCTGCGTATCGACCTTTTGCCCCATTCGCATGATCGCACCTTTACCGAAATTCTTTTCAATCTTTTTTAGGGC。
recA基因序列和粪便乳杆菌菌株的相似性最高，分别达到：97.1％、96.1％和96.1％，粪便乳杆菌菌株分别是：AFL19-3(AB812755)、18-5(AB812754)和13-2(AB812753)。接下来相似性剧降为76.8％，是耐久肠球菌(Enterococcus durans LMG 10746T)的recA基因序列(AJ621706)。粪便乳杆菌FZB1的RecA氨基酸残基序列和粪便乳杆菌AFL19-3，18-5，13-2完全相同，相似性为100％。姬鼠乳杆菌(WP_025086660)、动物乳杆菌(WP_010689242)和鼠乳杆菌(WP_004048185的RecA氨基酸残基序列仍然和粪便乳杆菌FZB1菌株保持较高的相似性，分别为91.9％、91.5％和91.5％。recA基因和氨基酸残基序列比对结果说明：FZB1菌株应属于粪便乳杆菌。
结合菌体特征、生理生化特征以及分子生物学鉴定结果，将本发明分离菌株FZB1鉴定为粪便乳杆菌Lactobacillus faecis，命名为粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillusfaecis FZB1)，并于2015年2月2日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.10515。
实施例2本发明粪便乳杆菌益生的应用
1材料与方法
1.1对照菌株魏斯氏菌HHO53(革兰氏阳性菌)、大肠杆菌BL21(革兰氏阴性菌)两株菌均是人和动物肠道中的正常菌群
1.2实验菌株本发明粪便乳杆菌FZB1，保藏号为CGMCC No.10515。
1.3主要试剂和培养基MRS液体和固体培养基，牛胆盐试剂
2.耐酸实验
2.1实验方法
使用前将甘油保护剂中保存的菌株在MRS液体培养基中连续活化2次。
将活化后的菌株按4.0％接种量分别接种于PH＝2.0，PH＝3.0的培养基中，混匀后静置于37.0℃厌氧培养箱中培养，分别于接种后0h,1h,2h,3h取样，作10倍浓度进行梯度稀释，实验组浓度稀释至10-3,对照组稀释至10-5，倾倒3组平行平板进行活菌计数。经过37.0℃培养48h后，统计cfu数量，与放置0h的菌液作对照，计算菌株存活率。
根据公式：存活率(％)＝“1h”或“2h”或“3h”活菌数目/“0h”活菌数目×100％
3.耐胆盐实验
3.1实验方法
使用前将甘油保护剂中保存的菌株在MRS液体培养基中连续活化2次。
①将活化后的菌株大肠杆菌BL21按4.0％接种量分别接种于牛胆盐浓度为0.3％,0.5％，1.0％的培养基中，混匀后静置于37.0℃厌氧培养箱中培养，分别于接种后0h,1h,2h,3h取样，10倍浓度进行梯度稀释，实验组对照组均浓度稀释至10-4,倾倒3组平行平板进行活菌计数。经过37.0℃培养48h后，统计cfu数量，与放置0h的菌液作对照，计算菌株存活率。
②将活化后的菌株魏斯氏菌HH053按4.0％接种量分别接种于牛胆盐浓度为0.03％，0.04％，0.06％,0.08％的培养基中，混匀后静置于37.0℃厌氧培养箱中培养，分别于接种后0h,1h,2h,3h取样，10倍浓度进行梯度稀释，实验组对照组均浓度稀释至10-4,倾倒3组平行平板进行活菌计数。经过37.0℃培养48h后，统计cfu数量，与放置0h的菌液作对照，计算菌株存活率。
③将活化后的实验菌株粪便乳杆菌按4.0％接种量分别接种于牛胆盐浓度为0.03％，0.04％，0.06％,的培养基中，混匀后静置于37.0℃厌氧培养箱中培养，分别于接种后0h,1h,2h,3h取样，10倍浓度进行梯度稀释，实验组对照组均浓度稀释至10-4,倾倒3组平行平板进行活菌计数。经过37.0℃培养48h后，统计cfu数量，与放置0h的菌液作对照，计算菌株存活率。
根据公式：存活率(％)＝“1h”或“2h”或“3h”活菌数目/“0h”活菌数目×100％
4.结果与分析
4.1耐酸实验本实验考查3h内菌株在不同PH条件下菌株的存活率(％).结果见表2,实验发现，对照菌株大肠杆菌BL21、魏斯氏菌HHO53在PH＝2.0,PH＝3.0条件处理后于t＝1h，t＝2h,t＝3h存活率均为0，证明大肠杆菌BL21,魏斯氏菌HHO53不具备耐酸能力；而本发明粪便乳杆菌在PH＝2.0条件处理后仅在t＝1有存活率，在其他时间段存活率均为0，而在PH＝3.0条件处理后，t＝3h时存活率仍为44.5％，表现了较好的存活趋势，进一步表明适宜的pH环境对菌株的生长有着重要的意义，可证明粪便乳杆菌具备耐酸的能力。
表2不同时间不同PH菌株存活率
4.2耐胆盐实验本实验主要模拟了人体小肠中的胆汁浓度和成分，研究实验菌株对模拟人体胆盐的耐受能力。人体正常胆盐浓度大约为0.03％-0.3％，为了筛选具有高耐胆盐的菌株，本实验采用了0.03％，0.04％，0.06％,0.08％，0.3％、0.5％、1.0％七个牛胆盐浓度作为浓度梯度进行筛选。结果见表3,实验发现，对照菌株大肠杆菌BL21在牛胆盐浓度为0.3％,0.5％，1.0％的培养基中3h内均生长且存活率在13.3％以上,魏斯氏菌HHO53在牛胆盐浓度0.03％，0.04％，0.06％,0.08％的培养基中3h生长且存活率在5.8％以上，但两菌株存活率会随着牛胆盐浓度的升高以及培养时间延长呈现下降趋势；实验菌株粪便乳杆菌在牛胆盐浓度0.03％，0.04％，0.06％的培养基中3h内生长，但随着牛胆盐浓度的升高以及培养时间的延长，粪便乳杆菌存活率亦呈现下降趋势。总体而言，实验菌株粪便乳杆菌对牛胆盐具有良好的耐受能力，可以初步认为粪便乳杆菌能够在人体肠道中抵御小肠的高胆盐环境，可在肠道中存活。
表3不同时间不同牛胆盐浓度菌株存活率
5.结论
乳杆菌都具有益生的功能，但是其是否可以作为益生菌，在肠道中定植存活，取决于其是否耐酸耐胆盐。
本发明粪便乳杆菌FZB1在PH＝2.0～3.0，牛胆盐浓度为0.03％～0.06％均能存活，具有耐酸耐胆盐能力，可以作为益生菌使用，拮抗病原菌的生长繁殖、改善肠道菌群失调、降低血清胆固醇、促进肠道消化系统健康、治疗腹泻、增强免疫力、帮助吸收营养成分。
综上，本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)属于乳杆菌，有益生特性，能拮抗病原菌的生长繁殖、改善肠道菌群失调、降低血清胆固醇、促进肠道消化系统健康、治疗腹泻、增强免疫力、帮助吸收营养成分，同时具有耐酸耐胆盐性能，可以作为益生菌使用，应用前景良好。并且，本发明粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)，是一种分离的全新的菌株，本发明是粪便乳杆菌物种的第二次发现并分离鉴定。该菌株的分离鉴定丰富了可利用微生物资源库，为以后更好地利用乳杆菌做出了一定的贡献。

Claims (7)

1.一种粪便乳杆菌，其特征在于：它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)。
2.保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)在制备益生菌中的用途。
3.保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)在制备抑菌、改善肠道菌群失调、降低血清胆固醇、促进肠道消化系统健康、治疗腹泻、增强免疫力、帮助吸收营养成分的药品、保健品、食品或者饲料添加剂中的应用。
4.一种药品，其特征在于：它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上药学上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
5.一种食品，其特征在于：它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上食品上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
6.一种保健品，其特征在于：它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上保健品上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
7.一种饲料添加剂，其特征在于：它是以保藏号：CGMCC No.10515的粪便乳杆菌FZB1(Lactobacillus faecis FZB1)为活性成分，加上饲料上可接受的辅助性成分制备而成的制剂。
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