CN104784296A - 一种抗皮肤过敏组合物及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抗皮肤过敏组合物，它是以如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：马齿苋30～45份、白花蛇舌草15～30份、苦参7～15份、薄荷20～35份、地榆10～18份、大黄8～15份。本发明还提供了该组合物的用途。本发明组合物，将各中药材合理配伍，发挥了协同增效作用，对透明质酸酶的抑制活性更为良好，具有显著的抗过敏、抗炎、止痒等功效，提供了一种具有抗过敏功效的新护肤品或药品。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗皮肤过敏组合物及其用途。
背景技术
近年来，随着饮食结构的变化、大气污染、生活和工作压力的增大，过敏患者急剧增加。尤其是在日本、美国等发达国家，皮肤敏感已经成为了影响人类健康的社会问题。据不完全统计，全球自我感觉敏感性肌肤的人群越来越多，其中男性占38%，女性占61%。因此具有抗敏抗刺激功效的化妆品日益受到人们的重视，具有抗敏抗刺激活性的物质，尤其是植物源物质受到学者和市场的青睐。运用现代实验手段研究传统中草药，将有助于发掘高效、低毒、低副作用的抗过敏产品。
常见的皮肤过敏反应在医学称作超敏反应，又称变态反应，是指机体受到某些抗原刺激时，出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常的特异性免疫应答。其发生取决于两个因素：抗原的刺激和机体的反应性。过敏体质（irritable the physique）一般是将容易发生过敏反应和过敏性疾病而又找不到发病原因的人，称之为“过敏体质”。诱发过敏反应的抗原称为过敏原。引起过敏反应的抗原物质有几百种，它们通过吸入、食入、注射或接触等方式使机体致敏。
按照中西医和生物学对皮肤过敏的相关解释，参照中医“综合防治”的原则，化妆品防治皮肤敏感与刺激的常见途径为：①远离过敏原，降低致敏原自身刺激性；②抑制组胺等炎症介质释放；③增强机体屏障功能；以上防治途径，任何一条的阻断都会取得一定的防治效果，但要达到良好的抗敏效果，应该借鉴并应用中医的“整体防治”观念，全面并形成网络状的防治，才能达到优异的抗敏效果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗过敏作用的组合物。本发明还提供了该组合物的用途。
本发明提供了一种抗皮肤过敏组合物，它是以如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：
马齿苋30～45份、白花蛇舌草15～30份、苦参7～15份、薄荷20～35份、地榆10～18份、大黄8～15份。
进一步地，它是以如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：
马齿苋40～45份、白花蛇舌草15～19份、苦参7～15份、薄荷23～28份、地榆10～11份、大黄8～10份。
其中，所述组合物是以各原料药的水或/和乙醇提取物为活性成分，加上药学或化妆品常用的辅料或辅助性成分制备而成的皮肤外用制剂。
进一步地，所述乙醇浓度为60～80%v/v；优选为60～70%v/v。
更进一步地，所述活性成分的制备方法如下：取各原料药，分别加水提取后，水提物上非极性或中极性大孔吸附树脂柱，水洗除杂后，再以70～80%v/v乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇后，干燥，即得活性成分。
鉴于乙醇洗脱液配置过程中、乙醇原料质量差异、乙醇的挥发损失等情况，均可能导致的乙醇浓度的偏差，本发明中洗脱用乙醇的浓度可以接受一定的误差范围，例如使用65～85%v/v乙醇进行洗脱。
本发明中使用的非极性或中极性大孔吸附树脂柱可以选择市售常用的型号，例如非极性大孔吸附树脂有HPD-100,HPD-300,D-101,X-5或H103等，中极性大孔吸附树脂有AB-8，DA-201,HPD-400或DM301等。上述型号仅是对可使用的大孔树脂类型的举例说明，具体使用时可以不限于上述型号。出于对材料使用频率和成本等综合考虑，本发明具体实施方式中使用的非极性大孔吸附树脂为D101，中极性大孔吸附树脂为DM301。
其中，所述辅助性成分为胶原蛋白、维生素、辅酵素Q10或/和尿囊素。
其中，所述外用制剂为护肤霜、乳液、凝胶、化妆水或面膜。
本发明还提供了上述组合物在制备透明质酸酶抑制剂中的用途。
本发明还提供了上述组合物在制备抗过敏、止痒或/和抗炎的外用护肤品或药品中的用途。
本发明组合物，将各中药材合理配伍，发挥了协同增效作用，对透明质酸酶的抑制活性更为良好，具有显著的抗过敏、抗炎、止痒等功效，提供了一种具有抗过敏功效的新护肤品或药品。
具体实施方式
实施例1本发明抗皮肤过敏组合物的制备
取马齿苋45g、白花蛇舌草19g、苦参7g、薄荷23g、地榆11g、大黄8g粉碎，混合后，加水煎煮3次，每次1.5h，合并滤液，浓缩，干燥后所得浸膏，再加入适量水和外用制剂中常用的油相辅料，制备成护肤品。
实施例2本发明组合物的制备
取马齿苋35g、白花蛇舌草25g、苦参10g、薄荷35g、地榆15g、大黄4g粉碎，混合后，加水煎煮3次，每次1.5h，合并滤液，浓缩，干燥后所得浸膏，再加入适量水和外用制剂中常用的油相辅料，制备成护肤品。
实施例3 本发明组合物的制备
取马齿苋40g、白花蛇舌草15g、苦参15g、薄荷28g、地榆10g、大黄10g，粉碎，混合后，加入70%v/v乙醇回流提取2次，每次1h，合并提取液，回收乙醇后，干燥所得浸膏，再加入适量水和外用制剂中常用的油相辅料，制备成护肤品。
实施例4 本发明组合物的制备
取马齿苋30g、白花蛇舌草30g、苦参8g、薄荷20g、地榆18g、大黄15g，粉碎，混合后，加入60%v/v乙醇超声提取3次，每次15～20min，合并提取液，回收乙醇后，干燥所得浸膏，再加入适量水和外用制剂中常用的油相辅料，制备成护肤品。
实施例5 各药材提取物的制备方法
提取物的制备方法如下：称取马齿苋、白花蛇舌草、苦参、薄荷、地榆、大黄各原料药，粉碎为粗粉，分别加水煎煮三次，每次1.5小时；将各原料药的水煎液，分别过D101大孔树脂吸附，用水洗脱至水洗液无色，用70%v/v乙醇洗脱至无色，收集70%乙醇洗脱液滤液，滤液减压回收乙醇，浓缩洗脱液，浓缩液喷雾干燥，即得。
用高效液相色谱法测定各提取物：马齿苋提取物中，含总黄酮重量百分含量为24.80%；白花蛇舌草提取物中，含总黄酮重量百分含量为6.25%；苦参提取物中，含参碱和氧化苦参碱的重量百分含量为3.7%；薄荷提取物中，总黄酮含量为3.2%；地榆提取物中，没食子酸重量百分含量为5.5%；大黄提取物中，含大黄素和大黄酚的总量为10.06%。
实施例6 各药材提取物的制备方法
提取物的制备方法如下：称取马齿苋、白花蛇舌草、苦参、薄荷、地榆、大黄各原料药，粉碎为粗粉，分别加水煎煮三次，每次1.5小时；将各原料药的水煎液，分别过DM301大孔树脂吸附，用水洗脱至水洗液无色，用80%v/v乙醇洗脱至无色，收集80%乙醇洗脱液滤液，滤液减压回收乙醇，浓缩洗脱液，浓缩液喷雾干燥，即得。
用高效液相色谱法测定各提取物：马齿苋提取物中，含总黄酮重量百分含量为18.56%；白花蛇舌草提取物中，含总黄酮重量百分含量为3.85%；苦参提取物中，含参碱和氧化苦参碱的重量百分含量为2.4%；薄荷提取物中，总黄酮含量为4.8%；地榆提取物中，没食子酸重量百分含量为4.1%；大黄提取物中，含大黄素和大黄酚的总量11.36%。
实施例7本发明护肤霜的制备
A油相（重量百分比）
蜂蜡3.5%，硬脂酸3.2%，单硬脂酸甘油酯1%，十六醇3.0%，白油0.5%，二甲硅油0.5%、维生素D0.6%、维生素E0.8%；
B水相（重量百分比）
马齿苋提取物5%、白花蛇舌草提取物4%、苦参提取物2%、薄荷提取物2%、地榆提取物2%、大黄提取物1%、聚乙二醇4006.5%、羧乙基纤维素0.31%、尿囊素0.5%、维生素C0.5%、去离子水补足至100%；
制备方法：将水相和油相分别加热熔化后，在水相搅拌的同时，慢慢加入油相并搅拌，继续搅1h，停止搅拌，静置、冷却至室温，即得抗过敏护肤霜。本实施例中各提取物来自实施例5。
实施例8本发明乳液的制备
A油相（重量百分比）
泊洛沙姆3%、span601.5%、吐温602%、二甲硅油18%、西黄耆胶0.5%、硬脂酸甘油酯5%、骨胶原蛋白1%、维生素E0.8%；
B水相（重量百分比）
马齿苋提取物4%、白花蛇舌草提取物3%、苦参提取物3%、薄荷提取物2%、地榆提取物2%、大黄提取物1%、甘油提取物7%、卡波姆3.5%、羟苯乙酯2%、聚丙二醇0.5%、维生素B0.5%，维生素C0.5%、去离子水补足至100%；
制备方法：将油相和水相分别熔化后搅拌混合均匀，在油相搅拌的同时，慢慢将混合后的水相加入乳化罐中搅拌，连续搅拌20min，停止搅拌，静置冷却室温，即得抗过敏乳液。
实施例9本发明凝胶的制备
按如下重量百分比称取原料：马齿苋提取物4%、白花蛇舌草提取物4%、苦参提取物2%、薄荷提取物2%、地榆提取物2%、大黄提取物0.5%、卡波姆9401.5%、甘油5.5%、三乙醇胺0.1%、羟苯乙酯0.1%、聚山梨酯800.2%、蒸馏水补足至100%；
制备方法：将卡波姆与聚山梨酯溶解于30ml蒸馏水中，加入三乙醇胺溶液，搅匀后加入马齿苋提取物、白花蛇舌草提取物、苦参提取物、薄荷提取物、地榆提取物、大黄提取物，再将羟苯乙酯逐渐加入搅匀，即得抗过敏凝胶。本实施例中各提取物来自实施例5。
实施例10本发明化妆水的制备
按如下重量百分比称取原料：马齿苋提取物3%、白花蛇舌草提取物5%、苦参提取物3%、薄荷提取物3%、地榆提取物1%、大黄提取物1%、甘油10%、丁二醇1.5%、吐温603%、果酸1%、柠檬酸1%、透明质酸2%、羧乙基纤维素2.5%，维生素E1%、去离子水补足至100%；
制备方法：马齿苋提取物、白花蛇舌草提取物、苦参提取物、薄荷提取物、地榆提取物、大黄提取物混合后，加入甘油、丙二醇、吐温、果酸、骨胶原蛋白、辅酵素Q10、聚乙二醇400，维生素E、去离子水补足至100ml混合均匀即得抗过敏化妆水。本实施例中各提取物来自实施例5。
实施例11本发明面膜的制备
按如下重量百分比称取原料：马齿苋提取物5%、白花蛇舌草提取物2%、苦参提取物1%、薄荷提取物2%、地榆提取物3%、大黄提取物0.5%、甘油15%、聚乙二醇80016%、海藻糖1%、尿囊素0.1%、EDTA二钠0.1%、辅酵素Q101%、维生素E1%、去离子水补足至100%；
制备方法：取少量去离子水，加入聚乙二醇800、甘油、海藻糖加热搅拌，待冷却至室温，加入尿囊素、EDTA二钠、透明质酸、维生素E，再加入马齿苋提取物、白花蛇舌草提取物、苦参提取物、薄荷提取物、地榆提取物、大黄提取物，充分搅拌，使固体物质在胶体中分散均匀，即得抗过敏面膜。本实施例中各提取物来自实施例5。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1本发明组合物抗过敏实验
（一）透明质酸酶体外抑制试验
透明质酸酶(HAase)是透明质酸(HA)的特异性裂解酶，HA在人体发育和调控过程中如细胞粘附、器官形成、创伤愈合、肿瘤发生和血管形成起主要的抑制作用，抑制HAase的活性可使HA不被分解，维持正常的生理功能。透明质酸酶是体外模型实验。Kakegawa等报道各种影响肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶的活性，透明质酸酶活性抑制和肥大细胞释放组胺抑制活性之间有好的相关性(Kakegawa H,Inhibitory effects of some naturalproduct on the activation of hyaluridse and their antiallergic actions[J].HenPharm Bull,1991,40(6):1439～1422)。Yoo等报道了透明质酸酶参与组织发炎过程，是I型过敏反应的参与者，在过敏反应的第三阶段参与反应导致肥大细胞脱颗粒（Yoo,Effects of allergy-related drugs on hyaluridase action andhistamine by rat peritoneal mast cell[J].Tachan Sacngri Hakboechi.1988,22:59～72）。因此透明质酸酶体外抑制试验可以做为简单的生化方法来评价样品的抗过敏性能。由于透明质酸酶体外模型简单易行，所以这种生物实验法作为研究抗过敏作用的一个指标被广泛地采用。
抗过敏活性检测:Elson-Morgan改良法：
透明质酸酶是I型过敏反应的参与者，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，Kakegawa曾经报道了各种肥大细胞释放组胺的药物能调节透明质酸酶的活性。
试剂配制
(l)透明质酸酶：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度500u/mL透明质酸酶，要现配现用，不能过夜。
(2)透明质酸钾：用醋酸缓冲溶液做溶剂配制浓度0.5mg/mL透明质酸钾
(3)Buffer:溶液A(0.2mol/L.醋酸，即11.55mL冰醋酸溶1000mL蒸馏水中)4.8mL，溶液B(0.2mol/L的醋酸钠，即16.4克CH3COONa或者27.2克CH3COONa.3H2O溶于1000ml蒸馏水中)45.2mL，混合，稀释成100mL，配成pH=5.6的醋酸缓冲液。
(4)乙酸丙酮溶液：50mL1.0mol/L碳酸钠溶液和3.5mL乙酰丙酮溶液混合均匀。(临用现配)
(5)P-DAB显色剂的配制：0.8g对二甲氨基苯甲醛和15mLHCl以及无水乙醇混合均匀使用。
(6)CaC12溶液：2.5moL/L。
(7)NaOH溶液：5moL/L。
（8）将各待测物配制成1.2mg/ml浓度的溶液备用，分组如下：实施例1提取方法制备的浸膏，标识为试验1组；实施例3提取方法制备的浸膏，标识为试验2组；实施例5制备的各味中药提取物，按照实施例7的中药提取物比例配比混合，标识为试验3组；实施例6制备的各味中药提取物，按照实施例7的中药提取物比例配比混合，标识为试验4组；实施例5制备的各味中药提取物，分别按实施例8-11中各中药提取物比例配比混合，分别标识为试验5-8组；各单味中药提取物组的浸膏制备方法与实施例5相同。
实验步骤：
将样品0.5ml（A、B管），蒸馏水0.5ml（C、D管）中加入0.5ml透明质酸酶（500U/ml）（A、C管）和0.5ml醋酸缓冲液pH=5.6（B、D管）于37℃保温20min；加入CaCl2溶液0.1ml（A、B、C、D管）于37℃保温20min；分别加入0.5ml透明质酸钾液（A、C管）、0.5ml醋酸缓冲液pH=5.6（B、D管）于37℃保温40min后室温放置10min；分别加入0.5ml蒸馏水（A、B、C、D管），0.1ml5mol/L NaOH溶液（A、B、C、D管）和0.5ml乙酰丙酮溶液（A、B、C、D管）沸水浴15min后冰水浴10min，放置室温10min，加入1ml P-DAB显色剂（A、B、C、D管）各管充分震荡后加无水乙醇至8ml，放置室温30min，在530nm处测吸光度值。
抗过敏活性的计算
透明质酸酶抑制率（%）=[（C-D）-(A-B)]/(C-D)×100%
式中:A—（透明质酸酶+样品+透明质酸酶钾)试样溶液的OD值
B—(醋酸缓冲液+样品+醋酸缓冲液)试样空白的OD值
C—(透明质酸酶+去离子水+透明质酸酶钾)对照溶液的OD值
D—(醋酸缓冲液+去离子水+醋酸缓冲液)对照空白溶液的OD值
结果参见表1：
表1对透明质酸酶的影响
透明质酸酶是I型过敏反应的参与者，研究表明透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性。由实验结果可知，本发明组合物的抑制率高于单个组方成分的抑制率，表明本发明将各味药材复方使用后，发挥了协同增效作用。由此可见，本发明组合物对透明质酸酶有明显的抑制作用，可以通过对透明质酸酶的抑制达到抑制过敏反应的作用。
（二）对豚鼠局部皮肤瘙痒的影响
豚鼠40只,雌雄各半,体重160～190g,随机分四组。1组为空白对照组；2组为阳性对照组用洁尔阴；3组为试验组3（实施例7护肤霜）；4组为试验组4（实施例8乳液组）。实验前3日,给各组豚鼠右后足背剃毛,分别给予蒸馏水、洁尔阴、实施例7护肤霜和实施例8乳液各0.5ml/只。实验当日,用粗砂纸擦伤右后足背剃毛处,面积1平方厘米，局部再涂1次，末次涂药后10min,开始在创面滴0.01%磷酸组胺液0.05ml/只,此后每隔3min依0.02%、0.03%、0.04%依次递增浓度,每次均为0.05ml/只，直至出现豚鼠回头舔右后足,以最后出现豚鼠回头舔右后足时所给予的磷酸组胺总量为致痒阈,记录并比较各组的致痒域。结果见表2。
表2对磷酸组胺致痒域反应的影响
| 组别 | n | 痒域值（μg） |
| 空白对照组 | 10 | 63.13±28.14 |
| 洁尔阴组 | 10 | 185.60±64.02** |
| 试验组3 | 10 | 178.07±84.20** |
| 试验组4 | 10 | 165.38±53.56** |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
过敏反应的一般表现为皮肤瘙痒，由实验结果可知，本发明组合物具有显著的止痒效果，对过敏反应导致的瘙痒具有抑制作用。
（三）对小鼠二甲苯所致耳廓肿胀的影响
取健康雄性小鼠40只,体重20～22g，随机分为四组,每组10只。空白对照组用蒸镏水0.5ml/只,1天涂1次。阳性对照组涂醋酸氟氢松软膏1天涂1次,以上各组每次涂0.5g/只；试验组3为实施例7护肤霜组涂护肤霜1天1次，0.5g/只；试验组4为实施例8乳液组涂乳液组1天1次，0.5g/只。用药方法:将受试物或蒸镏水涂在小鼠右耳廓,连涂3天。末次涂药后1小时,由小鼠尾静脉注射0.5%伊文思兰生理盐水0.1ml/10g，然后向右耳廓滴二甲苯0.03ml使之没及耳廓内外。40min后将小鼠脱颈椎处死。剪下左、右耳廓用直径8mm的打孔器分别在两耳同部位打下圆耳片。用天平称重,左右耳片重量之差为肿胀度，求肿胀抑制率。然后将耳片剪碎，放入7：3丙酮生理盐水中浸泡48小时，以300rpm离心15min，取上清液于600nm波长比色。记录光密度值，结果见表3。
表3对小鼠二甲苯所致耳廓肿胀的影响
| 组别 | n | 肿胀抑制率 | 光密度值 |
| 空白对照组 | 10 | -- | 0.068±0.021 |
| 阳性对照组 | 10 | 60.4 | 0.023±0.013** |
| 试验组3 | 10 | 49.6 | 0.031±0.015* |
| 试验组4 | 10 | 56.3 | 0.032±0.015* |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
实验结果表明:阳性组、试验组与空白对照组比较有显著性差异,说明受试物有抑制二甲苯所致耳廓肿胀的作用，表明本发明组合物具有抗炎作用，通过对炎症的抑制作用达到抗过敏的效果。
（四）对大鼠皮内注射磷酸组织胺所致毛细血管通透性的影响
大鼠40只，体重180～220g，雌雄各半,随机分四组。用电推剪去掉腹部毛,面积为4×5cm,去毛处为涂受试物区。空白对照组用蒸镏水0.5ml/只,1天涂1次。阳性对照组涂醋酸氟氢松软膏1天涂1次,以上各组每次涂0.5g/只;实施例7护肤霜组涂护肤霜1天1次，0.5g/只（试验组3）；实施例8乳液组涂乳液组1天1次，0.5g/只（试验组4）。连续涂7天，末次涂药后30分钟,将0.1%伊文思兰生理盐水0.5ml/100g静注,30min后处死动物,放血,剥开皮肤用尺子测量染色面积,然后剪碎放入7：3丙酮生理盐水浸泡48小时,以300rpm离心15min，取上清液于600nm波长比色。记录光密度值。结果见表4。
表4对大鼠皮内注射组织胺所致毛细血管通透性的影响
| 组别 | n | 染色面积 | 光密度值 |
| 空白对照组 | 10 | 68.13±12.37 | 0.239±0.074 |
| 阳性组 | 10 | 30.13±9.58** | 0.113±0.052** |
| 试验组3 | 10 | 36.76±11.84* | 0.130±0.039* |
| 试验组4 | 10 | 38.59±10.16* | 0.124±0.046* |
注：与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
由试验结果可以看出，组合物对大鼠皮内注射磷酸组胺所致的毛细血管通透性增加有抑制作用，说明本发明组合物具有抗炎作用，通过对炎症的抑制作用达到抗过敏的效果。
Claims (10)
1.一种抗皮肤过敏组合物，其特征在于：它是以如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：
马齿苋30～45份、白花蛇舌草15～30份、苦参7～15份、薄荷20～35份、地榆10～18份、大黄8～15份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：它是以如下重量配比的原料药制备而成的外用制剂：
马齿苋40～45份、白花蛇舌草15～19份、苦参7～15份、薄荷23～28份、地榆10～11份、大黄8～10份。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：所述组合物是以各原料药的水或/和乙醇提取物为活性成分，加上药学或化妆品常用的辅料或辅助性成分制备而成的皮肤外用制剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述乙醇浓度为60～80%v/v；优选为60～70%v/v。
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述活性成分的制备方法如下：取各原料药，分别加水提取后，水提物上非极性或中极性大孔吸附树脂柱，水洗除杂后，再以65～85%v/v乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收乙醇后，干燥，即得活性成分；洗脱用乙醇浓度优选为70～80%v/v。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于：所述非极性大孔吸附树脂为D101；所述中极性大孔吸附树脂为DM301。
7.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述辅助性成分为胶原蛋白、维生素、辅酵素Q10或/和尿囊素。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的组合物，其特征在于：所述外用制剂为护肤霜、乳液、凝胶、化妆水或面膜。
9.权利要求1-8任意一项所述组合物在制备透明质酸酶抑制剂中的用途。
10.权利要求1-8任意一项所述组合物在制备抗过敏、止痒或/和抗炎的外用护肤品或药品中的用途。
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