CN104758082A - 一种猕猴采精方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猕猴采精方法,属于生物技术领域。所述的猕猴采精方法,具体操作步骤如下:1.猴椅保定猕猴;2.用温生理盐水擦洗阴茎龟头部;3.用灭菌擦拭物擦拭龟头和阴茎根部;4.使用振动采精仪进行刺激;5.收集精液。本发明的猕猴采精方法可以用于猕猴人工授精,精子冷冻保存,转基因和基因敲除猕猴的创制,生殖毒理学和生殖生物学研究,充分发挥优良雄性猕猴的繁殖效率,也有利于保存优良猕猴的遗传基因;采集的精液的量更多,质量更好;避免了麻醉对猕猴伤害和采精过程的影响;此采精方法操作简单、快速,对猕猴温和无创伤,更符合动物福利保护的要求。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,特别涉及一种猕猴采精方法。
背景技术
电刺激采精法是目前国内外应用最广泛的猕猴精液采集方法,分为阴茎电刺激法和直肠探子法两种。传统电刺激采精法需要麻醉,会对采精造成一定的影响且造成相当的安全风险。另外在电刺激采精的过程中容易对动物的身体造成伤害和痛苦,因而不完全符合动物福利的要求。当前振动法采精技术已经在人类和狨猴上取得了成功,此技术具有非麻醉、操作简便、采精效率高以及无创伤、无痛苦等优点,被认为是一种良好的采精方法。但由于猕猴属动物性格敏感,在非麻醉状态下警觉性强且具有较强的攻击性,因此之前一直没有猕猴成功使用非麻醉的采精技术采集精液的报道。
发明内容
本发明的目的为消除电刺激采精技术对猕猴造成的伤害和不良影响,提供一种猕猴采精方法。所述的采精方法适用于食蟹猴、恒河猴等猕猴属非人灵长类动物的精液采集。所述的采精技术操作时不需要对猕猴进行麻醉,避免了由麻醉引起的安全风险和对采精的不良影响。通过训练使猕猴在非麻醉的保定过程中处于温顺的低应激状态。非电脉冲刺激,在采精过程中基本无创伤,也不会对动物造成明显的痛苦。同时通过本技术采集的精液的品质比传统方法所采集的精液好。
本发明的目的通过下述技术方案实现:一种猕猴采精方法,该方法采用振动采精仪一台,振动接触棒,消毒过的离心管,移液器,镊子一把,恒温水浴锅一个,猴颈圈一个,猴椅一台,采精方法运用非麻醉保定方法振动刺激采精,具体操作步骤如下:
1)将经过适应训练的佩戴了猴颈圈的猕猴置于猴椅上,把猴颈圈固定于相应的卡槽中,猕猴面向前方,暴露生殖器部位,实现猕猴的保定;
2)猕猴保定好后,用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部,防止精液被污染;
3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物,在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭1~2min;
4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激,采精仪的振动幅度始终设置为3mm,先以频率90Hz,用振动接触棒以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾,刺激时间为5min;然后以频率100Hz,以阴茎为中心,以打圈的形式刺激周围的部位,刺激时间为3min;最后以频率110~120Hz,集中刺激阴茎体部和包皮结合处,刺激时间为2min;整个刺激过程中,采精仪都不接触龟头;
5)猕猴射精后,将胶块部分转移到离心管中,液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中,获得猕猴精液;然后置于37℃的恒温水浴锅中备用,猕猴采精频率每周最多2次,注意适当补充营养。
步骤1)中所述的适应训练为:实验前1~2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈;佩戴猴颈圈后,每天把猕猴安置到猴椅上进行保定,保定时间从5min开始,并不断延长至30min,保定结束后把猕猴放回笼子里;保定的操作每天重复3~4次,保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励,使猕猴消除对保定的恐惧和反抗;使猕猴都能在低应激状态下接受猴椅保定,且不会有明显的反抗和攻击行为。
所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物,优选为食蟹猴或恒河猴。
步骤1)过程中猕猴若出现排尿,立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。
步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。
步骤3)中的擦拭过程中若猕猴有射精即可停止,收集精液。
步骤4)中若猕猴没有射精,则略作休息后,重复步骤4)一次,累计刺激时间不超过20min;若累计刺激时间超过20min没有射精,可以认为这一次采精失败,休息一天再重复刺激。
步骤4)所述的振动接触棒由0.5ml或1.5ml的EP(eppendorf)管加工而成,具体为:把EP管的管盖去除,并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑,EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。
通过训练使猕猴能在低应激水平下接受非麻醉保定;所用的猴椅和猴颈圈可以根据猕猴体重选择成不同型号;采精仪振动探头为改装的,可以根据需求不同做成适合需要的长度;采精的过程中猕猴的表现很安静舒适,不需要麻醉。
通过适应训练降低猕猴的应激水平,用猴椅和猴颈圈代替麻醉保定,由麻醉引起的安全风险和对采精的不良影响。使用振动刺激代替电脉冲刺激,因而在采精过程中不会造成创伤和疼痛。使采精过程,猕猴处于近似自然交配的状态,因此所采集的精液的品质也与自然射精无异,可以用于猕猴人工授精,精子冷冻保存,转基因和基因敲除猕猴的创制,生殖毒理学和生殖生物学研究,充分发挥优良雄性猕猴的繁殖效率,也有利于保存优良猕猴的遗传物质。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
本发明的猕猴采精方法可以用于猕猴人工授精,精子冷冻保存,转基因和基因敲除猕猴的创制,生殖毒理学和生殖生物学研究,充分发挥优良雄性猕猴的繁殖效率,也有利于保存优良猕猴的遗传基因;采集的精液的量更多,质量更好;避免了麻醉对猕猴伤害和采精过程的影响;此采精方法操作简单、快速,对猕猴温和无创伤,更符合动物福利保护的要求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
选取10只成年的健康雄性猕猴,提前1周佩戴猴颈圈进行适应训练。
实验所用的振动采精仪为:a battery-operated FertiCare personal vibrator(Multicept,Rungsted,Denmark)。
本发明提供了一种猕猴采精方法,该方法采用振动采精仪一台,振动接触棒,消毒过的离心管,移液器,镊子一把,恒温水浴锅一个,猴颈圈10个,猴椅一台,采精方法运用非麻醉保定方法振动刺激采精,具体操作步骤如下:
1)将经过适应训练的佩戴了猴颈圈的猕猴置于猴椅上,把猴颈圈固定于相应的卡槽中,猕猴面向前方,暴露生殖器部位,实现猕猴的保定;
2)猕猴保定好后,用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部,防止精液被污染;
3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物,在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭1~2min;
4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激,采精仪的振动幅度始终设置为3mm,先以频率90Hz,以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾,刺激时间为5min;然后以频率100Hz,以阴茎为中心,以打圈的形式刺激周围的部位,刺激时间为3mins;最后以频率110~120Hz,集中刺激阴茎体部和包皮结合处,刺激时间为2min;整个刺激过程中,采精仪都不接触龟头;
5)猕猴射精后,将胶块部分转移到离心管中,液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中,获得猕猴精液;然后置于37℃的恒温水浴锅中备用,猕猴采精频率每周最多2次,注意适当补充营养。
步骤1)中所述的适应训练为:实验前1~2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈;佩戴猴颈圈后,每天把猕猴安置到猴椅上进行保定,保定时间从5min开始,并不断延长至30min,保定结束后把猕猴放回笼子里;保定的操作每天重复3~4次,保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励,使猕猴消除对保定的恐惧和反抗;猕猴都能在低应激状态下接受猴椅保定,且不会有明显的反抗和攻击行为。
所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物,为猕猴、食蟹猴或恒河猴。
步骤1)过程中猕猴若出现排尿,立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。
步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。
步骤3)中的擦拭过程中若猕猴有射精即可停止,收集精液。
步骤4)中若猕猴没有射精,则略作休息后,重复步骤4)一次,累计刺激时间不超过20min;若累计刺激时间超过20min没有射精,可以认为这一次采精失败,休息一天再重复刺激。
步骤4)所述的振动接触棒由0.5ml或1.5ml的EP(eppendorf)管加工而成,具体为:把EP管的管盖去除,并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑,EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。
通过训练使猕猴能在低应激水平下接受非麻醉保定;所用的猴椅和猴颈圈可以根据猕猴体重选择成不同型号;采精仪振动探头为改装的,可以根据需求不同做成适合需要的长度;采精的过程中猕猴的表现很安静舒适,不需要麻醉。
实施例1提供的猕猴采精方法获得的猕猴精子可以用于猕猴人工授精,精子冷冻保存,转基因和基因敲除猕猴的创制,生殖毒理学和生殖生物学研究。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种猕猴采精方法,其特征在于:具体操作步骤如下:
1)将经过适应训练的佩戴了猴颈圈的猕猴置于猴椅上,把猴颈圈固定于相应的卡槽中,猕猴面向前方,暴露生殖器部位,实现猕猴的保定;
2)猕猴保定好后,用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部,防止精液被污染;
3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物,在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭1~2min;
4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激,采精仪的振动幅度始终设置为3mm,先以频率90Hz,以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾,刺激时间为5min;然后以频率100Hz,以阴茎为中心,以打圈的形式刺激周围的部位,刺激时间为3min;最后以频率110~120Hz,集中刺激阴茎体部和包皮结合处,刺激时间为2min;整个刺激过程中,采精仪都不接触龟头;
5)猕猴射精后,将胶块部分转移到离心管中,液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中,获得猕猴精液。
2.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:步骤1)中所述的适应训练为:实验前1~2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈;佩戴猴颈圈后,每天把猕猴安置到猴椅上进行保定,保定时间从5min开始,并不断延长至30min,保定结束后把猕猴放回笼子里;保定的操作每天重复3~4次,保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励,使猕猴消除对保定的恐惧和反抗。
3.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物。
4.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:步骤1)过程中猕猴若出现排尿,立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。
5.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。
6.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:步骤4)中若猕猴没有射精,则略作休息后,重复步骤4)一次,累计刺激时间不超过20min。
7.根据权利要求1所述的猕猴采精方法,其特征在于:步骤4)所述的振动接触棒由0.5ml或1.5ml的EP管加工而成,具体为:把EP管的管盖去除,并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑,EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。
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