CN104730069A - 一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法。将考马斯亮蓝法应用到纤维中蛋白质的定性检测中，利用蛋白质与考马斯亮蓝G-250间的快速显色反应及蛋白质-色素结合物在595nm具有最大吸收波长的特点，对纤维进行是否含有蛋白质进行定性鉴别。检测步骤包括制备考马斯亮蓝溶液，制备纤维样品溶液，样品中蛋白质的定性鉴别。检测过程简单快速，2min即可产生显色反应，继而进行分光光度测试，30min完成测试。

Description

一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法

技术领域

本发明涉及一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，属于纺织材料检验技术领域。

背景技术

目前纤维定性使用的国内标准很多，标准FZ/T01057.1-2007规定纺织纤维鉴别试验方法的一些共同性的技术要求，给出了纤维鉴别试验的一般性程序。FZ/T01057.2-2007是根据纤维燃烧时的气味、残留物的状态来分辩的。FZ/T01057.3-2007根据纤维的外观形态包括纵向和横向形态来分辩的。FZ/T01057.4-2007根据纤维在不同溶液中的溶解性来分辩的。FZ/T01057.5-2007根据纤维的染色性来分辩的。FZ/T01057.6-2007根据不同的纤维其熔点不同来分辩的。FZ/T01057.7-2007根据不同的纤维的密度不同来分辩的。GB/T16988-1997标准给出了各种毛纤维的纵向形态，通过在显微镜下观察其鳞片的大小、厚度、密度、条干均匀度等加以区分。此外，还有SN/T相关标准中对新型纤维的定性检测方法。除了以上的标准方法外，还有一种非常规的纤维定性方法，就是手感目测法。然而随着纺织面料的纤维组分越来越多，由原来的单、双组分向多组分发展、由交织向混纺发展。鉴别纤维成分的难度相应提高。因此，需要增加新的纤维鉴别手段、加强纤维检验技术领域中新的检测方案的制定方能跟上纺织品发展的趋势。

采用生物化学与分子生物学中最新发展起来的一种测定蛋白质的方法——考马斯亮蓝法对蛋白质纤维中的蛋白质进行定性检测，考马斯亮蓝法是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。考马斯亮蓝G-250是一种有机染料，在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中与蛋白质的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合后变成蓝色，其最大吸收波长从465nm变成595nm，蛋白质在1～1000μg范围内，蛋白质-色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定性与定量测定。该方法具有灵敏度高、测定快速、简便，干扰物质少等突出优点，是鉴别纤维中是否含蛋白质或蛋白质纤维方法的新突破。

发明内容

本发明旨在提供一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法。

本发明所采用的定性检测技术方案为：

步骤1：考马斯亮蓝G-250溶液的制备。

精密称取考马斯亮蓝G-250100.00mg，加入95％乙醇50mL，再加入100mL 85％(W/V)磷酸，用蒸馏水稀释定容至1000mL。

步骤2：纤维样品溶液的制备。

①精密称取待测纤维样品x g于试管中，于20℃时用1.0mol/L次氯酸钠y mL将样品溶解。

②将溶解样品包含未溶解纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为10min。待离心完毕后，用移液器移取z mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀。

③从容量瓶中分别取出1.0mL的样品于另外4个试管中，分别加入5.0mL考马斯亮蓝溶液，混匀。

步骤3：样品中蛋白质的定性鉴别。

①任取其中2个试管于2～30min内观察溶液颜色变化，如果考马斯亮蓝溶液由红色转变为蓝色，说明纤维中可能含有蛋白质，如果颜色转化不明显，也不能说明纤维中不含蛋白质，均需进行进一步分光光度测试。

②将剩余2个试管中的溶液以空白试剂为参照，分别测定其最大吸收波长λmax。如果最大吸收波长是595nm或在其附近，那么结合考马斯亮蓝溶液由红色转变为蓝色的显色现象，在排除干扰物的前提下说明该纤维中含有蛋白质。还可以根据最大吸收波长下的吸光度值以及待测溶液的稀释倍数推断蛋白质含量的高低。

测试完毕，对结果进行记录、分析。

发明中分光光度测试所用的比色皿应该是塑料或玻璃的，用前应保证清洗干净，禁止使用石英比色皿。

发明中考马斯亮蓝法鉴别纤维中是否含有蛋白质，比其他方法灵敏度高，抗干扰小，但检测仍有一些物质干扰此法的测定、如Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等，因此，被测纤维样品应先充分皂洗、水洗后再进行溶解测试。

发明中利用蛋白质与考马斯亮蓝G-250间的快速显色反应及蛋白质-色素结合物在595nm具有最大吸收波长的特点，建立了蛋白质的光学分析技术，对纤维进行是否含有蛋白质的定性鉴别。测定过程简单快速，2min即可产生显色反应，30min完成测试。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进一步描述，这些实施例只为清楚公开本发明，但本发明的保护范围并不仅限于此。

实施例1：对已知蛋白质纤维——羊毛进行测试。

按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品0.1g于试管中，于20℃时用1.0mol/L次氯酸钠10mL将样品溶解；将溶解样品包含未溶解纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为10min，待离心完毕后，用移液器移取1.0mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀；从容量瓶中分别取出1mL的样品于另外4个试管中，分别加入5mL考马斯亮蓝溶液，混匀；其中2个试管，2min后颜色发生显著变化，由红色转变为蓝色；另外2个试管中的溶液经分光光度仪测试，最大吸收波长都是595nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量高，这与羊毛纤维含有蛋白质的性质相吻合。

实施例2：对已知蛋白质纤维——蚕丝进行测试。

采用实施例1中的测试过程，对蚕丝进行测试。2min后显色反应非常明显，最大吸收波长都是594nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量高，这与蚕丝纤维含有蛋白质的性质相吻合。

实施例3：对已知再生蛋白质纤维——牛奶蛋白纤维进行测试。

按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品0.2g于试管中，于20℃时用1.0mol/L次氯酸钠10mL将样品溶解；将溶解样品包含未溶解纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为10min，待离心完毕后，用移液器移取2.0mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀；从容量瓶中分别取出1mL的样品于另外4个试管中，分别加入5mL考马斯亮蓝溶液，混匀；其中2个试管，2min后颜色发生显著变化，由红色转变为蓝色；另外2个试管中的溶液经分光光度仪进行测试，最大吸收波长都是594nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量较高，这与牛奶蛋白纤维含有蛋白质的性质相吻合。

实施例4：对已知再生蛋白质纤维——大豆蛋白纤维进行测试。

采用实施例3中的测试过程，对大豆蛋白纤维进行测试。2min后显色反应非常明显，最大吸收波长都是593nm。结合显色反应与分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，通过最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数说明该纤维中的蛋白质含量较高，这与大豆蛋白纤维含有蛋白质的性质相吻合。

实施例5：对已知纤维素纤维——棉进行测试。

按照技术方案中步骤1制备好考马斯亮蓝G-250溶液；精密称取待测纤维样品0.6g于试管中，于20℃时用1.0mol/L次氯酸钠10mL将样品溶解；将溶解样品包含未溶解纤维一同置于离心机中进行离心，速度设定为4000r/min，时间为10min，待离心完毕后，用移液器移取5mL上清液于50mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，混合均匀；从容量瓶中分别取出1mL的样品于另外4个试管中，分别加入5mL考马斯亮蓝溶液，混匀；其中2个试管，观察颜色变化，红色变淡，蓝色不是非常明显；另外2个试管中的溶液经分光光度仪进行测试，最大吸收波长都是595nm。通过分光光度测试结果说明该纤维中含有蛋白质，但是显色不明显，结合最大吸收波长下的吸光度值和待测液稀释倍数分析说明该纤维中的蛋白质含量很低，这与棉纤维所含蛋白质非常少的性质相吻合。

实施例6：对已知纤维素纤维——麻进行测试。

采用实施例5中的测试过程，对麻纤维进行测试。2～30min内显色不明显，测试两个试样最大吸收波长都是595nm，但吸光度值很低，峰很平缓。说明该纤维中蛋白质含量很低，这与麻纤维所含蛋白质非常少的性质相吻合。

实施例7-10：对已知合成纤维进行测试。

采用实施例5中的测试过程对几种典型合成纤维进行测试，测试现象与结果列于表1中。

表1  几种合成纤维的测试情况

实施例11-15：对已知混纺/交织纤维进行测试。

混纺/交织纤维中蛋白质的测试可依次参照实施例1、实施例3、实施例5的测试过程测试。几种代表性混纺/交织纤维中的蛋白质测试现象与结果列于表2中。

表2  几种混纺纤维或面料的测试情况

实施例16-18：对未知纤维进行测试。

未知纤维中蛋白质的测试可依次参照实施例1、实施例3、实施例5的测试过程测试，测试现象与结果列于表3中。

表3  几种未知纤维的测试情况

本发明所述的实施例1～18仅仅是对本发明的优选实施方式进行的描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前提下，本领域中工程技术对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，其特征在于将考马斯亮蓝法应用到纤维中蛋白质的定性检测中，检测过程包括：

步骤1：考马斯亮蓝G-250溶液的制备；

步骤2：纤维样品溶液的制备；

步骤3：样品中蛋白质的定性鉴别。

2.根据权利要求1所述一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，其特征在于所述考马斯亮蓝定性检测法不仅适用于检测参丝、羊毛、再生蛋白质纤维等蛋白质纤维，所有纤维均可作为检测对象。

3.根据权利要求1所述一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，其特征在于所述制备纤维样品溶液所用的溶剂为1.0mol/L次氯酸钠。

4.根据权利要求1所述一种纤维中蛋白质的快速鉴别方法，其特征在于所述样品中蛋白质的定性鉴别是通过显色反应现象与分光光度测试结果进行分析鉴别。

5.根据权利要求4所述样品中蛋白质的定性鉴别，其特征在于所述显色反应现象是观察待测溶液颜色在2～30min内是否发生由红至蓝的变化。

6.根据权利要求4所述样品中蛋白质的定性鉴别，其特征在于所述分光光度测试是测试待测溶液的最大吸收波长λmax是否为595nm或接近595nm。