CN104388527A - 无乳链球菌选择性显色培养基及其检测试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种无乳链球菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：心-脑提取物5-20g、琼脂2-6g、蛋白胨2-5g、特异性酶显色底物0.1-1g、二甲基甲酰胺0.05-20g、氨曲南0.01-0.08g、酵母粉1-5g、葡萄糖1-8g、丙酮酸钠3-5g、氯化钠5-10g、月桂基硫酸钠0.1-0.3g，余量为水。本发明还提供了一种含有所述无乳链球菌选择性显色培养基的检测试纸。本发明采用两种特异性酶显色底物进行复配使用，其对于无乳链球菌的特异性和敏感度较单独使用任何一种显色底物显著增强，使用方便，特异性高，有利于提高检查速度和阳性率。
Description
技术领域
本发明涉及一种适用于无乳链球菌的选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基的检测试纸。
背景技术
无乳链球菌又称B群链球菌(Group B Streptococcus,GBS)，属β溶血性链球菌；其毒力与型特异的荚膜多糖抗原、脂磷壁酸、神经氨酸酶等有关，主要通过抗吞噬作用,或增强细菌对组织细胞的粘附发挥其侵袭力。无乳链球菌是造成孕妇产褥期脓毒血症和新生儿脑膜炎的一个重要原因。它寄生在产妇生殖道，可致婴儿感染的发生。也可引起产后感染、菌血症、心内膜炎、皮肤和软组织感染及骨髓炎。
新生儿GBS感染主要是由母亲的垂直感染而来，据报道产房阴道带菌率相当高，相关报道在4.6-35％之间不等，GBS不仅带菌率高，而且感染后具有发病率和病死率高的特点。早产儿感染GBS的病死率高达20％以上。另一方面，感染GBS的存活婴儿也多有严重的后遗症，如智力发育迟缓，视力或听力受损等，脑膜炎存活儿中15-30％有神经系统后遗症。据流行病学调查统计显示，GBS感染率呈上升趋势，排除随着培养技术水平的提高，GBS检出率可能上升的因素外，这种趋势可能与人们的生活方式的改变及其他一些尚未明了的因素亦有一定的关系。
抗生素预防，即在分娩过程中给予青霉素或氨苄青霉素静脉滴注可以降低新生儿感染的发病率和死亡率，目前认为可以暂时清除阴道菌落，减少新生儿出生时感染的风险，并且抗生素可以通过胎盘，可以对先前的感染进行治疗。在美国，由于抗生素预防的广泛开展，孕妇GBS感染率下降达21％，新生儿早期GBS感染的发生率已由1.7‰降至0.6‰，但是对于不携带GBS的孕妇不宜使用抗生素预防，所以及时而准确的发现孕产妇是否携带GBS是降低GBS感染和致病的关键。
目前，在对孕产妇是否携带GBS进行筛查的时候主要有两种方法，第一种是使用检测试剂盒进行快速诊断。但是通过检测试剂盒进行快速诊断对操作的要求和成本均比较高，限制了检测试剂盒的推广应用。第二种，也就是目前最常见的方法，是利用培养基对取得的样品进行培养，然后通过直接观察法、革兰氏染色法、触酶试验、协同溶血(CAMP)试验等判断是否感染GBS。但是孕妇生殖道和直肠有多种细菌存在，而目前的培养基不能有效抑制GBS以外的其他菌的生长，这些细菌生长速度快，常使GBS菌生长受到抑制，造成GBS菌漏检。
发明内容
本发明提供一种无乳链球菌选择性显色培养基，以及采用该选择性显色培养基制作的检测试纸，以克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明首先涉及一种无乳链球菌选择性显色培养基，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：
所述特异性酶显色底物是3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物和3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物的混合物，两者的重量比优选为1：0.5-1.5，最好是1：0.7-1.0；
所述3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物优选6-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷，特别优选5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
所述3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物，优选5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷。
本发明培养基的制备方法如下：
1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；
2)将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、氨曲南、酵母粉、葡萄糖、丙酮酸钠、氯化钠、月桂基硫酸钠按比例混合；
3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；
4)120℃灭菌15min后冷却备用。
本发明还涉及一种采用该选择性显色培养基制作的检测试纸，其至少含有一吸附有上述无乳链球菌选择性显色培养基的吸水滤纸。
本发明采用两种特异性酶显色底物进行复配使用，出乎意料的其对于无乳链球菌的特异性和敏感度较单独使用任何一种显色底物显著增强，且检出率高、检出时间短。本发明无乳链球菌选择性显色培养基使用方便，特异性高，有利于提高检查速度和阳性率。
具体实施方式
下面给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。
实施例1
一种无乳链球菌显色培养基，每1000mL培养基含有：心-脑提取物5g、琼脂2g、蛋白胨2g、6-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷0.065g、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷0.035g、二甲基甲酰胺0.05g、氨曲南0.01g、酵母粉1g、葡萄糖1g、丙酮酸钠3g、氯化钠5g、月桂基硫酸钠0.1g，余量为水。具体制备方法如下：
1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；
2)将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、氨曲南、酵母粉、葡萄糖、丙酮酸钠、氯化钠、月桂基硫酸钠按比例混合；
3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；
4)120℃灭菌15min后冷却备用。
实施例2
一种无乳链球菌显色培养基，每1000mL培养基含有：心-脑提取物20g、琼脂6g、蛋白胨5g、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷0.4g、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷0.6g、二甲基甲酰胺20g、氨曲南0.08g、酵母粉5g、葡萄糖8g、丙酮酸钠5g、氯化钠10g、月桂基硫酸钠0.3g，余量为水。具体制备方法如下：
1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；
2)将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、氨曲南、酵母粉、葡萄糖、丙酮酸钠、氯化钠、月桂基硫酸钠按比例混合；
3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；
4)120℃灭菌15min后冷却备用。
实施例3
一种无乳链球菌显色培养基，每1000mL培养基含有：心-脑提取物8g、琼脂5g、蛋白胨4g、5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷0.28g、5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷0.22g、二甲基甲酰胺0.09g、氨曲南0.04g、酵母粉3g、葡萄糖3g、丙酮酸钠4g、氯化钠7g、月桂基硫酸钠0.2g，余量为水。具体制备方法如下：
1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；
2)将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、氨曲南、酵母粉、葡萄糖、丙酮酸钠、氯化钠、月桂基硫酸钠按比例混合；
3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；
4)120℃灭菌15min后冷却备用。
对比例
一种无乳链球菌显色培养基，每1000mL培养基含有：心-脑提取物8g、琼脂5g、蛋白胨4g、5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷0.5g、二甲基甲酰胺0.09g、氨曲南0.04g、酵母粉3g、葡萄糖3g、丙酮酸钠4g、氯化钠7g、月桂基硫酸钠0.2g，余量为水。具体制备方法如下：
1)将特异性酶显色底物溶于二甲基甲酰胺中配成混合液；
2)将心-脑提取物、琼脂、蛋白胨、氨曲南、酵母粉、葡萄糖、丙酮酸钠、氯化钠、月桂基硫酸钠按比例混合；
3)将步骤1)的混合液加入步骤2)混合液中，加水配成一定浓度溶液；
4)120℃灭菌15min后冷却备用。
实施例4
无乳链球菌选择性显色培养基试纸的制备：将选定的吸水滤纸浸入无乳链球菌显色培养基中浸渍10-15分钟后取出烘干，冷却至室温后裁成一定规格试纸备用。
实施例5
在实施例4得到的试纸上下两面分别盖覆一层聚丙烯保护膜。
实施例6
将标准菌株分别制成100cfu/mL的标准菌悬液，吸取1mL菌液进行检测，37℃培养18小时。结果如表1，“+”表示阳性结果，“一”表示阴性结果。
表1显色培养基特异性检验结果
由上表可以看出，除无乳链球菌以外的致病菌在培养基上培养18h时进行观察，并没有菌落出现。可见本发明培养基对无乳链球菌初筛检测具有较好的选择性及特异性。
实施例6
分别测试实施例1-3和对比例18h、24h、和48h的检测敏感度，。
表2显色培养基检测敏感度
| 样品 | 18h敏感度(％) | 24h敏感度(％) | 48h敏感度(％) |
| 实施例1 | 93 | 95 | 98 |
| 实施例2 | 95 | 97 | 98 |
| 实施例3 | 98 | 98 | 98 |
| 对比例1 | 76 | 92 | 98 |
由表2可以看出，从18h到48h，本发明显色培养基检测敏感度没有太大的变化，而且在18h时，检测样品的敏感度就可以达到93-98％，和对比样，即单独使用3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物类显色底物的敏感度相比，尤其是18小时敏感度有了显著提高。本发明显色培养基大大缩短检测时间、降低检测成本。
Claims (8)
1.一种无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，其中每1000mL培养基含有如下重量的组分：
2.如权利要求1所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述特异性酶显色底物是3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物和3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物的混合物。
3.如权利要求2所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述特异性酶显色底物中3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物和3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物的重量配比为1：0.5-1.5。
4.如权利要求2所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述特异性酶显色底物中3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物和3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物的重量配比为1：0.7-1.0。
5.如权利要求2所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物选自6-溴-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-6-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷、5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
6.如权利要求5所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述3-吲哚基-β-D-吡喃葡萄糖苷衍生物为5-溴-3-氯-3-吲哚基-N-甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
7.如权利要求2所述的无乳链球菌选择性显色培养基，其特征在于，所述3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷衍生物为5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-纤维二糖糖苷。
8.一种无乳链球菌选择性显色培养基检测试纸，其特征在于，其中至少含有一吸附有权利要求1-7任一项所述无乳链球菌选择性显色培养基的吸水滤纸。
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