CN104353059A - Activin A在制备治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了ActivinA在制备治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物中的应用，通过研究焦虑行为的旷场实验和高架十字迷宫实验，以及研究抑郁行为的悬尾实验和强迫游泳实验，发现ActivinA对神经退行性疾病具有治疗作用，可有效改善可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为，并且ActivinA对细胞基本无毒副作用，具有很好的开发前景，有望被开发为新型的用于治疗神经退行性疾病的新药物，尤其是用于治疗可卡因成瘾后戒断症状的新药物。

Description

Activin A在制备治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物中的应用

技术领域

本发明涉及Activin A在制备治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物中的应用。

背景技术

毒品成瘾是一种长期持续的脑疾病, 即使经过长时间的戒断还是高度容易复发。主要表现为患者在生理和心理上对药物产生依赖，这种依赖感会促使患者不择手段、不计后果地强制获取、使用毒品。长期吸食毒品会引起机体的功能失调和组织病理变化，从而产生精神障碍性疾病如焦虑和抑郁等。 

大量的数据显示毒品的重复暴露能够导致大脑发生稳定的改变，并参与神经回路发生长期持续的变化过程，产生持久的神经改变，包括细胞内信号通路的改变、树突形态结构的改变和行为学可塑性的变化。

毒品成瘾是一种复杂的脑病，目前，还没有药物能够有效的治疗可卡因成瘾及戒断所引起的精神性改变。因此，寻找能够有效抑制成瘾相关症状的药物是目前最紧要的目标。

发明内容

本发明的目的在于提供Activin A在制备治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明通过研究焦虑行为的旷场实验和高架十字迷宫实验，以及研究抑郁行为的悬尾实验和强迫游泳实验，发现Activin A对神经退行性疾病具有治疗作用，可有效改善可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为，并且Activin A对细胞基本无毒副作用，具有很好的开发前景，有望被开发为新型的用于治疗神经退行性疾病的新药物。

本发明的有益效果是：

本发明将Activin A用于治疗可卡因戒断后出现的焦虑和抑郁等神经退行性疾病中，证明了Activin A可有效改善可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为，且基本无毒副作用，是一种有开发前景的治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的药物，尤其是治疗可卡因成瘾后戒断疾病症状的药物。

附图说明

图1是旷场实验检测Activin A对可卡因戒断诱导的焦虑行为的影响；a为小鼠在中央区活动的时间，b为小鼠进入中央区次数，c 为中央区路程；Sal+PBS为第①Saline+PBS组，Coc+PBS为第③Cocaine+PBS组，Sal+Act为第② Saline+Activin A组，Coc +Act为第④Cocaine+Activin A组；

图2是高架十字迷宫检测Activin A对可卡因戒断诱导的焦虑行为的影响；a为小鼠的开臂滞留时间百分比，b为小鼠进入开放臂次数百分比；

图3是悬尾实验检测Activin A对可卡因戒断诱导的抑郁行为的影响；

图4是强迫游泳实验检测Activin A对可卡因戒断诱导的抑郁行为的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

活化素A(Activin A)是转化生长因子β超家族（TGFβsuperfamily）中重要的成员之一，具有许多重要的作用。活化素A主要促进卵泡刺激素（FSH）的生物合成和分泌，同时还参与细胞增殖、分化、代谢、免疫反应、组织修复内分泌功能等。

实施例1

1.实验动物

7-10周龄SPF级雄性昆明小鼠（体重20-25g），所有小鼠自由饮水饮食，并维持在12h：12h光：暗的恒温环境中。

2.实验分组和药物处理

将小鼠随机分为四组，每组15只：①Saline+PBS组；② Saline+Activin A组 ；③Cocaine+PBS组；④Cocaine+Activin A组。③④组连续注射可卡因（Cocaine）20mg/kg.d, ①②组连续注射等量的生理盐水（Saline），四组连续注射14天。其中在注射可卡因第8天时在双侧小鼠大脑双侧海马区安放留置导管，坐标点是前囱后2.0mm，左右径±1.5mm，硬膜下1.8mm。注射14天，戒断48小时后分别给①③组昆明小鼠大脑双侧海马区立体定位注射1μL PBS，给②④组昆明小鼠大脑双侧海马区立体定位注射50μg/ml的Activin A 1μL。然后分别进行以下的实验。

3.旷场实验（OFT）

旷场实验（Open Field Test，OFT）是检测小鼠焦虑行为学指标。上述4组小鼠给予PBS或Activin A后放入行为学实验室适应环境2 h左右。用75%的酒精擦拭实验装置，确认旷场实验装置是干净、无味道，这样排除前面小鼠的气味和味道对实验结果的干扰。实验人员在操作软件中记录小鼠的编号、日期、状态，做好实验动物的排序，实验过程中保持安静，防止噪音干扰。等酒精挥发后，将小鼠从笼内取出(背向实验者)，将小鼠放置在旷场中心区域实验者迅速安静离开；打开旷场实验视频分析系统，录像记录小鼠在旷场内的活动，记录总时间是5min，检测的指标主要为：中央区活动时间（Center time）、进入中央次区数(Center-entreise)、中央区路程（center-distance）等。

实验结果如图1所示，从图1b和图1c中可以看出各组小鼠进入中央次区数和中央区路程的结果没有明显的差异，可卡因和ActivinA对小鼠进入中央区次数（图1b）和中央区路程（图1c）没有影响；从图1a中可以看出，可卡因戒断后，小鼠在中央区活动的时间明显减少，而给予ActivinA进行预处理的第④（Cocaine+Activin A）组的小鼠在中央区活动的时间明显延长，为33.4±2.44s，明显高于第③组（Cocaine+PBS）的活动时间22.4±1.83s（P<0.05），故旷场实验结果显示Activin A治疗组（第④组）比未治疗的可卡因组（第③组）在中央区域停留时间显著增加（P<0.05），提示Activin A对可卡因戒断诱导的小鼠焦虑行为有治疗作用

4.高架十字迷宫（EPM）

高架十字迷宫是检测小鼠焦虑行为学指标。各组小鼠经旷场实验之后，进行高架十字迷宫实验。用75%的酒精擦拭实验装置，将小鼠从笼内取出(背向实验者)，将小鼠放置在开臂与闭臂接合处,面朝开臂，实验者迅速安静离开EPM；录像记录小鼠在EPM内的活动，总时间5 min，然后以75%酒精擦拭EPM实验装置，待酒精干燥后将下一只放入实验装置进行实验。实验结束后，用75%的酒精擦拭实验装置，打扫干净，之后关闭高架十字迷宫视频分析系统。检测的指标主要为开臂滞留时间百分比(% Open arm-time)和进入开放臂次数百分比(% Open arm-enteries)。 

检测结果如图2所示，从中可以看出，可卡因戒断后，小鼠的开臂滞留时间百分比（图2a）和进入开放臂次数百分比（图2b）明显减少，第④组（Cocaine+Activin A）小鼠开臂滞留时间百分比为27.6±1.87、进入开放臂次数百分比为38.4±2.10，分别明显高于第③组（Cocaine+PBS）的开臂滞留时间百分比15.7±1.50和进入开放臂次数百分比为28.6±2.08（P<0.05）。

高架十字迷宫实验结果显示Activin A治疗组比未治疗的可卡因组开臂进入次数和滞留时间显著增加（p<0.05），说明ActivinA对可卡因戒断诱导的小鼠焦虑行为有治疗作用。

5.悬尾实验(TST)

悬尾实验（Tail Suspension Test，TST）是检测小鼠抑郁行为学指标。高架十字迷宫（EPM）之后，进行悬尾实验。实验过程中保持安静，防止噪音干扰。将小鼠从笼内取出，用医用胶布将其尾巴粘在一个钩子下方的白线上，注意操作轻柔，然后将钩子连小鼠一起钩在悬尾的实验装置上，使小鼠呈倒挂状态，开启悬尾实验录像系统，记录小鼠的活动状态，总计6min；实验结束后将小鼠放回笼内，然后以75%酒精擦拭TST实验装置及小鼠下方地板，并打扫小鼠下方地板的粪便, 待酒精干燥后将下一只放入实验装置进行实验。检测指标为悬尾滞留时间百分比(% immobility time of TST)。

检测结果如图3所示，从中可以看出，在第④组（Cocaine+Activin A）小鼠悬尾不动时间百分比为53.3±4.17，显著少于第③组（Cocaine+PBS）的71.6±4.92（P<0.05）。说明Activin A可以减缓可卡因戒断后出现的抑郁状态。

6.强迫游泳（FST）

强迫游泳是检测小鼠抑郁行为学指标。上述4组小鼠在给予PBS或Activin A之前1小时进行15min的FST预适应。24小时之后准备正式实验。圆柱中水深12cm，水温保持在25摄氏度。将小鼠轻轻的从面壁放入水中。开启强迫游泳录像系统，记录小鼠的活动状态，总计6min。每次测量一只换一次水，以免前面强迫游泳小鼠的气味对后面小鼠强迫游泳行为指标有干扰。检测指标为强迫游泳不动时间百分比（% immobility time of FST）。

检测结果如图4所示，从中可以看出第④组（Cocaine+Activin A）小鼠强迫游泳不动时间百分比为31.7±2.31，显著少于第③组（Cocaine+PBS）的42.6±2.80（P<0.05）。说明Activin A可以减缓可卡因戒断后出现的抑郁状态。

上述结果说明，悬强迫游泳实验结果显示Activin A治疗组比未治疗的可卡因组不动时间显著减少（p<0.05）。可见，Activin A有抑制可卡因戒断后抑郁行为的趋势。

7. Activin A治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状可能的作用机制

本发明通过BrdU标记的免疫组化检测和BrdU/Dcx双标免疫荧光检测发现Activin A能够促进可卡因成瘾后戒断的小鼠海马DG区的神经再生。说明活化素A具有阻断可卡因戒断对小鼠海马齿状回神经再生的抑制作用，还能够促进海马齿状回神经再生，从而降低可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁水平。说明Activin A治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的机制可能与促进海马DG区神经再生的作用有关。

本发明还通过Western-blotting检测发现Activin A可诱导ERK的磷酸化，在给予ERK抑制剂SL327后，ActivinA对可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为无改善，并且ActivinA对DG区海马神经再生的影响也受到了抑制，提示，活化素A治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断症状的机制可能通过ERK磷酸化调控DG区海马神经再生的途径有关，从而对可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为起到治疗作用。

综上所述，Activin A可以用于治疗神经退行性疾病，尤其是治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断的疾病症状，Activin A可有效改善可卡因戒断诱导的焦虑和抑郁行为，且基本无毒副作用，是一种有开发前景的治疗精神兴奋类药物成瘾后戒断的药物，尤其是治疗可卡因成瘾后戒断行为的药物。

Claims (7)

1.Activin A在制备治疗神经退行性疾病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的神经退行性疾病为精神兴奋类药物成瘾后戒断症状。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的神经退行性疾病为可卡因戒断后诱导的焦虑和抑郁症状。

4.一种制备治疗神经退行性疾病的药剂，其特征在于：其活性成分为Activin A。

5.根据权利要求4所述一种制备治疗神经退行性疾病的药剂，其特征在于：含有活性成分Activin A和药物上可接受的载体和/或稀释剂。

6.根据权利要求4～5任一所述一种制备治疗神经退行性疾病的药剂，其特征在于：所述神经退行性疾病为精神兴奋类药物成瘾后戒断症状。

7.根据权利要求6所述一种制备治疗神经退行性疾病的药剂，其特征在于：所述的神经退行性疾病为可卡因戒断后诱导的焦虑和抑郁症状。