CN104262462B - 葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用 - Google Patents

Abstract

葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用，本发明涉及药物领域，具体涉及多肽化合物，能治疗糖尿病。所述的多肽序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽的制备方法，采用Fmoc保护的固相合成技术制备，可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。多肽可通过多种给药方式治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。本发明中的葡萄糖转运体蛋白抑制多肽，可以靶向抑制葡萄糖转运体蛋白，达到预防或治疗糖尿病的效果。

Description

葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用

技术领域：

本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽化合物。

背景技术

糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病总人数的85-90％，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。

目前，大多数患者通过口服降糖药物来帮助控制体内血糖，或调节胰岛素分泌等，很多患者最终仍然要使用胰岛素治疗。

葡萄糖的代谢取决于细胞对葡萄糖的摄取，然而，葡萄糖无法自由通过细胞膜脂质双层结构进入细胞，细胞对葡萄糖的摄入需要借助细胞膜上的葡萄糖转运蛋白(glucosetransporters)简称葡萄糖转运体(GLUT)转运功能才能得以实现。

抑制葡萄糖转运体转运功能就可以抑制体内葡萄糖的摄入，缓解体内高血糖的症状，因此，葡萄糖转运体转运抑制认为是治疗糖尿病的靶点。尽管如此，并没有成熟开发的葡萄糖转运体转运抑制剂问世，用于治疗糖尿病。

发明内容：

本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种多肽2化合物，能有效治疗糖尿病。

技术方案

一种葡萄糖转运蛋白抑制多肽2，其序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。所述多肽2的制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技术制备，可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。所述多肽2在治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。多肽2可通过多种给药方式治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。

有益结果：

本发明中的葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2，可以靶向抑制葡萄糖转运体蛋白，达到预防或治疗糖尿病的效果。更优选是治疗糖尿病和/或糖尿病并发症药物中的用途。所述的糖尿病包括I型糖尿病和II型糖尿病；所述的糖尿病并发症包括但不限于：糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变等。

具体实施方式

实施例1

多肽的化学合成方法

多肽2用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照多肽序列从C端向N端进行，Rink介质(可在Advanced ChemTech公司购得)上有自由氨基。每一步连接过程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于介质上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的连接反应之后，都用一个吡啶/醋酸/N-甲基咪唑(4:1:0.5)的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。每次氨基酸的连接反应之后，下一个氨基酸连接之前，都要把介质上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20％哌啶的二甲基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，多肽2用98％三氟乙酸从介质上切割下来，切割在室温下进行2小时。

应用上述化学条件可合成并获得多肽2，序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA，该序列为全新序列。也可以委托上海生工合成。

实施例2

葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2的体外细胞活性测定

采用MTT比色法。将对数生长的胰岛瘤细胞(INS-1细胞)，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔分别加入不同浓度的实验药物葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2作为实验组；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪570nm处测定吸光度A值，按公式细胞生长增殖率＝(实验组吸光值/对照组吸光值-1)×100％。计算出实验药物的EC50为5.45nmol/L。

实施例3

葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2的体内降糖实验

昆明小鼠，高脂高糖喂养至体重18～22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水24h，腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)50mg/kg(1％的柠檬酸盐缓冲液溶解配制)。1周后小鼠尾静脉采血测血糖(BS)，BS高于16mmol/L为造模成功。造模后将小鼠分为3组，每组10只，糖尿病模型组(DM组)：给予等量的PBS缓冲液皮下注射；对照组(拜糖平)：20μg/kg皮下注射给药(溶于0.1mol/L PBS缓冲液)，一天两次，连续15d；样品组(葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2)：同对照组；另取10只正常小鼠做为空白组。用药后第3d、9d、15d于尾静脉取血快速测量血糖。15d之后，在停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。用25％葡萄糖溶液(2g/kg)灌胃，灌胃后0、30、60、120分钟尾静脉取血检测血糖。

结果：葡萄糖转运体蛋白多肽2具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用(P<0.05，表1)；同时，可以缓解糖尿病模型小鼠的糖耐量(表2)。其多肽2的作用与对照组拜糖平作用相当。

表1葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2对小鼠降血糖作用

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

表2葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2对小鼠糖耐量实验结果

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

结论：葡萄糖转运体蛋白抑制多肽2对糖尿病小鼠具有治疗作用。

SEQUENCE LISTING

<110> 苏州普罗达生物科技有限公司

<120> 葡萄糖转运蛋白抑制多肽及其制备方法、应用

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Met Val Thr Arg Cys Asn Asn Val Gly Arg Tyr Arg Val Arg Ile Tyr

1 5 10 15

Val Asp Ala

Claims (3)

1.一种葡萄糖转运蛋白抑制多肽，其特征在于：其氨基酸序列为MVTRCNNVGRYRVRIYVDA。

2.权利要求1所述的多肽在制备治疗糖尿病及糖尿病并发症药物中的应用。

3.根据权利要求2的应用，其特征在于所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。