CN104257673A

CN104257673A - 红景天苷的用途

Info

Publication number: CN104257673A
Application number: CN201410514978.XA
Authority: CN
Inventors: 孙涛; 杨诚; 周红刚
Original assignee: Tianli (tianjin) Technology Co Ltd
Current assignee: Sun Tao; Yang Cheng; Zhou Honggang
Priority date: 2014-09-29
Filing date: 2014-09-29
Publication date: 2015-01-07

Abstract

本发明提供了红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途。体外细胞实验及动物实验结果表明：红景天苷可以改善肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌细胞微环境的乏氧状态，改善放/化疗时因这些肿瘤乏氧的微环境导致的放化疗的耐受性，增强肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌细胞对放、化疗的敏感性，降低放/化疗的毒副作用并且提高放/化疗的治疗效果。

Description

红景天苷的用途

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体而言，涉及红景天苷的用途。

背景技术

恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病之一。近年来，随着抗癌新药的不断涌现，联合放、化疗方案的合理应用，化学药物的疗效有了较大的提高，但这些药物基本都有细胞毒性，在杀伤肿瘤细胞的同时对正常组织器官有损害或毒性作用，从而降低机体免疫功能，出现骨髓抑制等一系列毒副反应，影响放、化疗的疗效，甚至迫使放、化疗终止。同时，由于肿瘤细胞的原发性和获得性耐药等因素也导致化学治疗的疗效仍难以让人满意。

在肿瘤的治疗过程中，肿瘤的复发和转移也是临床上亟待解决的问题。复发和转移的一个重要原因是由于肿瘤微环境乏氧。临床上有许多证据表明肿瘤微环境乏氧可以使肿瘤自身更具侵袭性，容易发生远处转移，而且能使肿瘤对放、化疗的抗拒性增加，从而降低其治疗疗效。已有研究表明乏氧是通过低氧诱导因子-1(HIF-1)为中介的p53依赖途径起作用的。HIF-1是由HIF-1α和HIF-1β两个亚基组成，其中HIF-1β在任何状态下都表达，HIF-1α在低氧浓度下才表达。肿瘤微环境乏氧时，HIF-1的表达增加，进而引起野生型p53(wp53)的表达升高，使该类肿瘤细胞凋亡增加，而HIF-1则对突变型p53(mtp53)无作用，从而使mtp53成为肿瘤细胞的主要表型。这种选择的结果导致肿瘤细胞凋亡潜能下降，进而引起肿瘤细胞对放、化疗的抗拒性。因此，在肿瘤的治疗过程中，通过寻找有效的药物改善肿瘤微环境的乏氧状态，将可以显著增强放、化疗疗效，并能有效地防止肿瘤的复发和转移。目前肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂是研究的热点。

红景天苷是药用植物红景天的主要成分，目前的研究证明红景天苷具有抗衰老、抗辐射、抗氧化、增强注意力、缓解疲劳、提高免疫力和适应原样双向调节等药理作用。关于红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途。在本发明中提供了一种红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途，其中，所述红景天苷的分子结构式为：

在上述用途中，所述肿瘤包括：肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌或它们的组合。

在上述用途中，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂包含红景天苷，红景天苷在药学上可接受的盐、酯，水合物或它们的组合以及辅料。

在上述用途中，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

在上述用途中，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的给药方式包括：口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。

本发明通过体外乏氧细胞模型及动物实验证明，红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂可以改善肿瘤细胞微环境的乏氧状态，增强肿瘤细胞对放、化疗的敏感性，提高放、化疗的治疗效果，防止肿瘤的转移和复发。

一方面，本发明提供了已知化合物红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途，为红景天苷的应用开拓了新的领域。

另一方面，本发明为肿瘤的治疗提供了一种新的放/化疗乏氧细胞增敏剂，其通过改善肿瘤细胞微环境的乏氧状态，提高放/化疗的疗效，防止肿瘤的转移和复发，具有明显的社会效益。

附图说明

图1示出了Western Blot检测红景天苷处理各乏氧细胞株后HIF-1α表达量的变化；

图2示出了各实验组小鼠的肿瘤照片；

图3示出了各实验组小鼠肝脏HE染色切片；

图4示出了各实验组小鼠肝脏HE染色切片；

图5示出了各实验组小鼠体重随观察天数的变化曲线；

图6示出了各组小鼠的生存期随观察天数的变化曲线；

图7示出了各组小鼠的存活率随观察天数的变化曲线；

图8示出了各组小鼠的V_t/V_o比值随时间变化曲线；以及

图9示出了各组小鼠的肿瘤抑制率随时间变化曲线。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1乏氧细胞模型的建立及红景天苷对细胞乏氧状态的影响

1.实验材料和来源包括：

(1)细胞系

SMMC-7721(人肝癌细胞系)，MCF-7(人乳腺癌细胞系)，Mum-2C(人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系)，HL60(人早幼粒白血病细胞系)，A549(人肺腺癌细胞系)，PC-3(胰腺癌细胞系)，Hela(人宫颈癌细胞系)，LOVO(人结肠癌细胞系)，SGC-7901(人胃癌细胞系)，以上细胞系均购自南京凯基生物科技发展有限公司。

(2)供试品

红景天苷：为浅棕色或棕色粉末，购于西安开来生物工程有限公司，批号：K140121，纯度98％。

(3)HIF-1α抗体与质粒

HIF-1α抗体购于艾菲生物技术有限公司；

HIF-1α(P564G)-pcDNA3.0：购自广州复能基因有限公司，对564蛋白位点进行定点突变，第564位脯氨酸(Pro)密码子CCC突变为甘氨酸(Gly)密码子GGC。

2.实验方法：

2.1细胞乏氧模型的建立：建立稳定表达HIF-1α(P564G)的细胞株

实验原理：HIF-1是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子，具有α和β两个亚基，它的生理作用主要通过α亚基调节的。局部组织缺氧即可诱导HIF-1表达，其表达量与缺氧呈时间依赖性。大量的研究表明，在常氧环境下表达外源性HIF-1α的质粒可以达到与低氧诱导相似的生理效果。HIF-1α(P564G)-pcDNA3.0，已对其564蛋白位点进行定点突变，第564位脯氨酸(Pro)突变为甘氨酸(Gly)，这使其在常氧下的细胞内仍能表达且不被降解，所以可模拟细胞内缺氧的生理效果。

用去内毒素大提试剂盒提取HIF-1α(P564G)-pcDNA3.0重组质粒。使用Lip2000转染试剂将质粒转入SMMC-7721、MCF-7、Mum-2C、HL60、A549、PC-3、Hela、LOVO、SGC-7901细胞中。转染步骤参考转染试剂说明书。转染后的细胞置37℃、5％CO₂恒温恒湿培养箱中培养；4-6h后给细胞换液，更换为完全培养基，继续培养12h。转染12h后开始用G418筛选稳定表达HIF-1α(P564G)的细胞株。

2.2 Western Blot(免疫印迹实验)法检测红景天苷处理乏氧细胞株后HIF-1α表达量的变化

①细胞培养与处理筛选得到的稳定细胞株经稳定传代分别置于2个直径为100mm的培养皿中，长至70％左右时，其中一皿作为对照不做任何处理。另一皿加入含红景天苷(浓度为0.005mg/mL)的完全培养基，继续培养24h。

②24h后，将培养皿置于冰上，弃培养液，用磷酸缓冲液清洗2次，加裂解液裂解后，用细胞刮刮下细胞裂解液，移入1.5mL离心管中，100℃金属浴加热10min，11000rpm离心2min。

③取少量上清进行定量，将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合后加入蛋白上样缓冲液加热制备成蛋白样品。将蛋白样品进行SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶)电泳。

④将蛋白样品采用western-blot方法进行检测，分析红景天苷处理乏氧细胞株后HIF-1α表达量的变化。

3.实验结果：

参考图1，图1示出了Western Blot检测红景天苷处理各乏氧细胞株后HIF-1α表达量的变化。实验结果如图1所示(其中，甘油醛-3磷酸脱氢酶为内参)：红景天苷处理过的稳定表达HIF-1α(P564G)的SMMC-7721、MCF-7、Mum-2C、PC-3、Hela、HL60、A549、LOVO、SGC-7901细胞株的HIF-1α表达量均较对照组明显减少。HIF-1α是乏氧细胞的标志，HIF-1α表达的降低表明细胞乏氧程度的降低。由此可见，红景天苷可明显改善SMMC-7721、MCF-7、Mum-2C、PC-3、Hela、HL60、A549、LOVO、SGC-7901细胞株的乏氧状态。

实施例2 MTT法测定药物对乏氧细胞生长的抑制作用

1.实验材料及来源：

(1)各种细胞系

PLC-PRF-5(人肝癌细胞系)，MCF-7(人乳腺癌细胞系)，Mum-2C(人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞系)，HL60(人早幼粒白血病细胞系)，A549(人肺腺癌细胞系)，PC-3(胰腺癌细胞系)，Hela(人宫颈癌细胞系)，LOVO(人结肠癌细胞系)，SGC-7901(人胃癌细胞系)，以上细胞系均购自南京凯基生物科技发展有限公司。

(2)供试品

奥沙利铂：为白色或类白色冻干疏松块状物或粉末，购于大连美仑生物技术有限公司，批号：MB1174，纯度98％+。

(3)其他试剂

四甲基偶氮唑盐(MTT)：上海生工生物工程有限公司，货号：TB0799-1g，批号：XP1008B3012J，级别：分析纯，规格1g。

二甲基亚砜(DMSO)细胞培养级：购自北京索莱宝科技有限公司，货号：A3672,0250，批号：2P005970，级别：细胞培养级，规格500mL，用于细胞冻存，及药物配制。

二甲基亚砜(DMSO)：购自上海生工生物工程有限公司，货号：DN3039A，批号：SJ0731S4013J，级别：分析纯，规格500mL，用于MTT法溶解紫色结晶。

RPMI 1640培养基：购自赛默飞世尔科技有限公司，Hyclone品牌，货号：SH30809.01B，批号：NYG0920，规格：500mL。

DMEM高糖培养基：购自赛默飞世尔科技有限公司，Hyclone品牌，货号：SH30022.01B，批号：规格：500mL。

胰蛋白酶：购自上海生工生物工程有限公司，货号：T0458-10，批号：0301C314，级别：USP，规格：10g。

无内毒素质粒大量提取试剂盒：购自天根生化科技有限公司G418：购自上海生工生物工程有限公司。

HIF-1α(P564G)-pcDNA3.0：购自广州复能基因有限公司，对564蛋白位点进行定点突变，第564位脯氨酸(Pro密码子CCC)突变为甘氨酸(Gly密码子GGC)。

(4)仪器耗材

生物安全柜：西班牙泰事达(Telstar)，型号：Bio II A。

CO2培养箱：施都凯仪器设备(上海)有限公司，型号：STIK IL-161HI。

全自动酶联免疫检测仪：赛默飞世尔科技有限公司，型号Multiscan FC。

96孔板：购自赛默飞世尔科技有限公司，Thermo Nunc品牌，货号167008。

(5)所用药物及试剂的配制方法

a)奥沙利铂溶液的配置：取0.002g溶于0.5mL的DMSO中，配制成10mmol/L溶液，每次使用时现用现配。使用时用细胞培养基稀释至所需浓度。溶液的配制及使用均在无菌生物安全柜中操作。

b)红景天苷溶液的配置：取0.1g溶于1mL的DMSO中，配制成0.1g/mL溶液，每次使用时现用现配。使用时用细胞培养基稀释至所需浓度。溶液的配制及使用均在无菌生物安全柜中操作。

c)MTT储液的配制：将1g MTT溶于200mL PBS溶液中(浓度：5mg/mL)，将MTT完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤除菌后，分装，避光保存于-20℃冰箱中。溶液的配制及使用均在无菌生物安全柜中操作。

d)称取胰蛋白酶0.25g，EDTA 0.02g，加入100mL PBS中4℃冰浴，低速搅拌，调PH至7.4。0.22μm滤膜过滤，分装，保存于-20℃，4℃短期内用完。

e)PBS缓冲液(磷酸缓冲液):称取NaCl 8g、KCl 0.2g、Na₂HPO₄1.54g、KH₂PO₄0.2g溶于ddH₂0中，调PH至7.4，定容至1L。需121℃高温灭菌后使用。

f)G418的配制：300mg G418加入3mL PBS溶液，浓度为100mg/mL，完全溶解后，0.22μm滤膜过滤，-20℃保存。

2.实验方法：

采用的红景天苷的浓度为0.05mg/mL，奥沙利铂的浓度为25μmol/L，对照组不加奥沙利铂。

将处于对数生长期的贴壁稳定表达HIF-1α(P564G)的肿瘤细胞(实验方法参考实施例1的细胞乏氧模型的建立)经胰蛋白酶消化后，分散成单个细胞，并使其悬浮在相应细胞培养基中。将细胞接种于两个96孔培养板上，每孔100μL细胞悬液，3000-4000个细胞/孔。将上述96孔培养板置于37℃，二氧化碳(5％)培养箱中过夜培养24小时，使细胞贴壁。

待24小时细胞完全贴壁后，弃去培养液，板一中每孔加入浓度为25μmol/L奥沙利铂的细胞培养液100μL，板二中每孔加入浓度为25μmol/L奥沙利铂、浓度为0.05mg/mL红景天苷的细胞培养液100μL，并设置不加药物只加相应药物溶剂的对照孔(奥沙利铂、红景天苷溶剂为DMSO)，同时设置只加培养基不含细胞的调零孔。将板子置于37℃，二氧化碳(5％)培养箱中培养48小时。

48小时后，每孔加入20μL MTT(浓度为5mg/mL)，继续孵育4h。然后将培养液轻轻吸出，每孔加入150μL DMSO作溶剂溶解，溶解后用酶标仪测定570nm处的吸光度(实验方法参考：魏伟，吴希美等，《药理实验方法学》，第四版，北京：人民卫生出版社，2010：1568-1569)。

计算细胞的存活率和抑制率，存活率％＝(实验组OD值-调零孔OD值)/(阴性对照组OD值-调零孔OD值)×100％；抑制率％＝(1-存活率)×100％。

实验结果

实验结果如表1所示。

表1 单用奥沙利铂(25μmol/L)组以及红景天苷(0.05mg/mL)和奥沙利铂(25μmol/L)共同使用组对各肿瘤细胞的抑制作用

由表1可知：与奥沙利铂组相比，奥沙利铂、红景天苷组的抑制率(％)大大提高，由此可知，红景天苷可以显著提高肿瘤细胞对药物的敏感性，进而提高奥沙利铂对各种肿瘤细胞的抑制作用。可见，红景天苷可以显著增强化疗药物奥沙利铂的药效。

实施例3：红景天苷联合奥沙利铂对BALB/C裸小鼠人肝癌原位移植瘤的抑制作用

1.实验材料及来源

1.1实验动物

购买4周-8周龄的雌性BALB/CA裸小鼠70只，动物引进严格按照《试验动物引进标准操作规程》(SOPA-001-V00)并记录在《试验动物引进记录表》(BG-015-V00)上，由中国人民解放军军事医学科学院试验动物中心提供，合格证号：0000804。

动物到达后，由专人接收动物于双走廊屏障环境小鼠饲养室2内，填写《试验动物接收记录表》(BG-017-V00)，接收时对动物大体情况进行观察，并随机抽取动物进行称重，确保试验动物与引进标准基本吻合。实验动物使用许可证号：SYXK(津)2012-0003。

1.2实验药物及试剂

1.3实验药物配制

红景天苷：取5.76g红景天苷粉末溶于60mL 0.9％生理盐水中，配制成红景天苷的浓度为0.096g/mL的溶液。

奥沙利铂：取18mg奥沙利铂粉末溶于120mL 5％葡萄糖溶液中。配制成奥沙利铂的浓度为0.15mg/mL的溶液。

2.实验方法

裸小鼠饲养环境为无特定病原体级(specefic pathogen free，SPF)，无菌标准饲料及饮水，环境温度25℃-27℃，相对湿度为45％-50％，12h光暗周期。接种前小鼠在动物房培养观察1周以保证接种前生长状况正常。定期给小鼠添加饲料、灭菌水及更换垫料，每两天对小鼠进行体重称量，观察其生长及精神状况。

人肝癌细胞株PLC-PRF-5，在本实验室常规传代培养。PLC-PRF-5细胞培养于含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中，于37℃、含5％CO₂的培养箱内培养。在满足动物接种所需细胞量的同时，控制传代次数，以保证细胞活力。取对数生长期的各组细胞，用胰酶消化后，制成PBS悬液1×10⁷个/mL。

原位种植瘤动物模型的建立：用浸满乙醚的棉球捂住裸鼠的鼻腔，小鼠经兴奋烦躁期后进入麻醉状态，仰卧固定，前胸壁酒精消毒，在胸膈下约0.5cm处作一约1cm的小切口，分离皮肤及皮下组织暴露肝脏，取PLC-PRF-5细胞悬液以微量注射针注入小鼠肝脏，进针深度约2mm，注射完后停针5s，拔针后用缝合针缝合切口，再次酒精消毒切口。术后，在其饮用水中加入抗生素减少其感染。术后定期观察裸鼠的精神、饮食、排便、体重和活动等情况，手术成功率为90％。

动物分组及给药方法：裸鼠原位肝癌细胞种植10天后，根据精神、饮食、排便、体重和活动等情况进行分组。平均将小鼠分为A、B组，每组各30只。A组用于检测各实验组连续给药14天处死后肝脏的表观以及固定各组肝组织进行石蜡切片、HE染色后行光镜下病理组织学检查。B组用于记录连续给药14天期间各组小鼠的体重变化、全部给药期间各组生存期、计算全部给药期间各组的存活率。

A、B均平均分为三组：对照组，奥沙利铂组，红景天苷、奥沙利铂组。

各组按照下述给药方法给药：对照组，腹腔注射给予0.2mL 5％葡萄糖+0.2mL 0.9％生理盐水/只/天；奥沙利铂组，腹腔注射给予0.2mL奥沙利铂+0.2mL 5％葡萄糖/只/天；奥沙利铂、红景天苷组，腹腔注射给予0.2mL奥沙利铂+0.2mL红景天苷/只/天。

检测指标及方法：A组(连续给药14天)每日观察小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食、粪便性状及对外界刺激的反应。各实验组小鼠于第14天给药24h后，脱颈椎处死小鼠。用镊子镊住小鼠腹部，手术剪剪开皮肤，暴露肝脏。分离整个肝脏，对各组肝脏拍照。然后将肝脏用10％甲醛固定，进行石蜡切片、HE染色后行光镜下病理组织学检查。

B组每日观察小鼠的自主活动、精神状态、毛发、呼吸、饮食、粪便性状及对外界刺激的反应，称量连续给药14天期间各组小鼠体重，绘制连续给药14天期间小鼠体重随观察天数的变化曲线，记录全部给药期间各组小鼠的生存期，计算全部给药期间各组小鼠的存活率：存活率＝(各组剩余动物数量/各组动物总数)×100％。

3.实验结果

3.1红景天苷联合奥沙利铂用药对裸鼠的影响

A实验组连续给药数天后裸鼠的生存状况：红景天苷、奥沙利铂组裸鼠肤色粉红、精神状态良好。奥沙利铂组裸鼠肤色发白、精神萎靡。由此可知：红景天苷联合奥沙利铂用药能显著改善原位肿瘤细胞种植裸鼠的生存质量。

参考图2至图4，其中，图2示出了各实验组小鼠的肿瘤照片；图3示出了各实验组小鼠肝脏HE染色切片；图4示出了各实验组小鼠肝脏HE染色切片。A实验组连续给药14天后各组小鼠肝脏的表观状态如图2所示：奥沙利铂组肝脏表面肿瘤结节较多，且肝脏颜色暗红，而红景天苷联合奥沙利铂用药组肝脏颜色鲜艳、表面光滑，肿瘤结节较少，由此可知红景天苷能显著改善肝脏供血，改善肝脏的状态。A实验组HE染色后各组肝组织切片如图3、4所示：对照组癌细胞较多，细胞坏死，肝脏组织淤血，炎症细胞浸润。奥沙利铂组组织坏死较多，部分细胞癌变，且伴有炎性细胞浸润。奥沙利铂、红景天苷组大部分肝细胞排列规则、正常，只有少部分细胞坏死。由此可以看出红景天苷能显著提高奥沙利铂的化疗疗效。

参考图5至图7，其中，图5示出了各实验组小鼠体重随观察天数的变化曲线；图6示出了各组小鼠的生存期随观察天数的变化曲线；图7示出了各组小鼠的存活率随观察天数的变化曲线。B实验组各组小鼠连续给药14天期间体重变化如图5所示：红景天苷能降低裸鼠体重下降的速度，改善裸鼠的体重。全部给药期间各组小鼠的生存期如图6所示：红景天苷能明显延长原位种植肿瘤裸鼠的生存期。各组小鼠的存活率如图7所示：红景天苷能显著降低因化疗药物毒性过大所致的小鼠的死亡率。

综上所述，红景天苷作为肿瘤化疗乏氧细胞增敏剂，能显著改善裸鼠原位种植肿瘤微环境的乏氧状态，提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，从而增强化疗药物的药效。

实施例4：红景天苷联合放疗疗法对BALB/C裸小鼠MCF-7乳腺癌模型的抑制作用

1.实验材料及来源

1.1实验动物购买4周-8周龄的雌性BALB/CA裸小鼠20只，动物引进严格按照《试验动物引进标准操作规程》(SOPA-001-V00)并记录在《试验动物引进记录表》(BG-015-V00)上，由中国人民解放军军事医学科学院试验动物中心提供。

1.2实验药物及试剂

甘氨双唑钠：购于天津市肿瘤医院药房。

1.3主要仪器

放疗设备：天津市肿瘤医院肿瘤放疗科医柯达直线加速器。

2实验方法

2.1动物模型的建立

取生长良好的MCF-7乳腺癌细胞株，用PBS悬成浓度为1x10⁷/mL悬液，每只小鼠右腋部皮下接种0.2mL，接种时保证每只小鼠接种部位以及接种肿瘤细胞数量一致，共接种20只。

接种后第10天，小鼠接种肿瘤生长良好，用游标卡尺测量小鼠右腋部皮下肿瘤最大直径约7-9mm时，进行随机分组，每组5只，共四组，具体分组如下：空白对照组、单纯放射治疗组、甘氨双唑钠与放疗联合治疗组、红景天苷与放疗联合治疗组。

2.2放疗方法、剂量以及用药剂量

放疗方法：放疗前根据称重，给予10％水合氯醛腹腔注射麻醉，用药剂量为：0.3mL/100g。待小鼠麻醉后将其固定，尽量暴露肿瘤部位。放疗时大机头旋转10℃，将准直器开至最小，同时采用直径10mm限光筒来对准肿瘤部位，屏蔽其他部位。后期小鼠肿瘤增大最大直径超过10mm后依次更换为直径为12.5mm、15mm、17.5mm限光筒。经模拟机下观察采用此放疗方法，小鼠头部、肺部等重要器官均在照射野外，肿瘤部位全部包含在照射野内。

放疗剂量：放射治疗采用直线加速器6MV-X线照射，每次照射剂量为500cGy，剂量率为2.43Gy/min，隔天照射，共照射4次，总照射剂量为20Gy。

用药剂量：甘氨双唑钠用药剂量：甘氨双唑钠与放疗联合治疗组每只小鼠按3.2mmol/kg剂量给予；红景天苷用药剂量：红景天苷与放疗联合治疗组每只小鼠按2.2mmol/kg剂量给予。

2.3治疗方案

空白对照组：在其他组小鼠麻醉时给予相应单位剂量的10％水合氯醛腹腔注射麻醉。

单纯放射治疗组：根据上述放疗方法与剂量进行麻醉、放射治疗。

甘氨双唑钠与放疗联合治疗组：用电子天平将小鼠称重，将甘氨双唑钠用生理盐水稀释混匀后根据小鼠重量以及上述甘氨双唑钠用药剂量，腹腔注射甘氨双唑钠；注射60分钟后将小鼠麻醉、放疗，放疗方法与剂量同单纯放射治疗组。

红景天苷与放疗联合治疗组：用电子天平将小鼠称重，将红景天苷用生理盐水充分溶解混匀后根据小鼠重量以及上述红景天苷用药剂量，腹腔注射红景天苷；注射60分钟后将小鼠麻醉、放疗，放疗方法与剂量同单纯放射治疗组。

2.4观察指标

从开始治疗后隔天(自照后第2天至第14天)用游标卡尺检测各组小鼠肿瘤的长和宽，计算小鼠肿瘤体积，计算肿瘤体积抑制率。并在实验过程中注意观察小鼠皮毛色泽，有无脱毛，食欲及活动变化，以及其他放疗毒副反应。

肿瘤体积按照Steel经验公式：肿瘤体积V(mm³)＝宽度²×长度×0.5计算。V_t/V_o值：计算不同测量时间的肿瘤体积(Vt)与原初体积(V₀)的比值。

3实验结果

3.1V_t/V₀比值：计算不同测量时间不同组别小鼠平均肿瘤体积(V_t)与原初平均肿瘤体积(V₀)的比值，如图8所示，图8示出了各组小鼠的V_t/V_o比值随时间变化曲线，由图8可知：在不同测量时间，空白对照组V_t/V₀比值均最大。红景天苷与放疗联合治疗组V_t/V₀比值均最小。

3.2肿瘤体积抑制率：在开始进行治疗后，计算空白对照组小鼠与各实验组小鼠平均肿瘤体积的差值；与空白对照组小鼠平均肿瘤体积的比值，即肿瘤体积抑制率，如图9所示，图9示出了各组小鼠的肿瘤抑制率随时间变化曲线，由图9可知：在不同测量时间，单纯放疗组肿瘤体积抑制率均最小。红景天苷与放疗联合治疗组肿瘤体积抑制率均最大，最高可达80％以上。

3.3红景天苷与放疗联合治疗组小鼠的生存质量和甘氨双唑钠与放疗联合治疗组相似(表现为食欲较好、对外刺激较灵敏、活动敏捷、精神状态好)，高于空白对照组和单纯治疗组(表现为食欲较差、对外刺激迟钝、活动迟缓，精神状态差)。到本实验结束时，没有小鼠因为放疗不当(照射到脑等重要器官)或者由于红景天苷或甘氨双唑钠的药物毒性等原因发生死亡。因此红景天苷能改善小鼠放疗期间的生存质量。

综上所述：红景天苷作为肿瘤放疗乏氧细胞增敏剂，能显著改善肿瘤微环境的乏氧状态，降低肿瘤细胞对放疗的耐受性，提高放疗疗效。

通过上述实施例得知：红景天苷能显著改善放/化疗时因肿瘤乏氧的微环境导致的放化疗的耐受性，降低放/化疗的毒副作用，显著提高放/化疗的疗效。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.红景天苷作为肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的用途，其中，所述红景天苷的分子结构式为：

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤包括：肝癌、乳腺癌、黑色素瘤、白血病、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、结肠癌、胃癌或它们的组合。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂包含红景天苷，红景天苷在药学上可接受的盐、酯，水合物或它们的组合以及辅料。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的剂型选自片剂、胶囊剂、丸剂、栓剂、气雾剂、口服液体制剂、颗粒剂、散剂、注射剂、糖浆剂、酒剂、酊剂、露剂、膜剂或它们的组合。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肿瘤放/化疗乏氧细胞增敏剂的给药方式包括：口服、注射、植入、外用、喷雾、吸入或它们的组合。