CN104146735A - 一种西花蓟马成虫的解剖方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种西花蓟马成虫的解剖方法，所述的方法包括以下步骤：步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于解剖境下解剖；步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；步骤d，左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉开，这样，整个生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。采用本解剖方法，可以比较完整的得到西花蓟马成虫的内部结构，便于了解锉吸式口器昆虫内部器官的生理结构；对不同时期卵巢结构的观察，便于了解卵巢的发育进程，为西花蓟马的预测预报提供了理论基础。

Description

一种西花蓟马成虫的解剖方法

技术领域

本发明涉及昆虫解剖领域，尤其涉及一种西花蓟马成虫的解剖方法。

背景技术

西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)属于缨翅目，蓟马科，花蓟马属。西花蓟马的寄主范围较广，目前已知的有60个科的500多种植物，包括重要豆科、十字花科、葫芦科等蔬菜和菊科、凤仙花科、蔷薇科等花卉，随着西花蓟马的扩散蔓延，其寄主种类将会不断增加。

西花蓟马首次记载于1895年，源自美国和加拿大西部洛基山脉，20世纪80年代后，随着国际贸易迅速发展，西花蓟马随着花卉、苗木、蔬菜等的调运，迅速向外扩散，成为一种世界性的农业害虫。已广泛分布于美国、加拿大、夏威夷、澳大利亚、哥伦比亚、英国、匈牙利、波兰、斯洛伐克、日本、瑞典、中国等69个国家。2003年6月，西花蓟马在北京市海淀区大棚辣椒上暴发，随后该虫在我国各地陆续有报道，目前已成为我国露地和温室蔬菜生产的重要害虫，且危害逐年加重。

西花蓟马以锉吸式口器刺吸寄主植物的叶、芽、花和果实，尤其喜欢取食寄主植物的幼嫩部位。被取食叶片初呈白色斑点，正面似斑点病害，背面则有黑色虫粪，严重为害时，叶片变小、嫩叶皱缩卷曲，甚至黄化、干枯甚至凋萎。西花蓟马还能传播多种病毒病，其中危害性较大的是番茄斑点萎蔫病毒和凤仙坏死斑点病毒，这两种病毒能感染多种重要的农作物，造成重大的经济损失。

西花蓟马有很强的环境适应性，而且繁殖力也很强。近年来，随着全球气温变暖，再加上农药的滥用，导致抗高温、抗药种群的泛滥，西花蓟马的泛滥带来农业灾害，需对其进行研究，目前尚未存在有效的西花蓟马解剖方法。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种西花蓟马成虫的解剖方法，用以克服上述技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种西花蓟马成虫的解剖方法，所述的方法包括以下步骤：

步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；

步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于解剖境下解剖；

步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；

步骤d，左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉开，这样，整个生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。

进一步地，所述PBS缓冲液为无菌缓冲液，其配方的各化合物的浓度为：

NaH₂PO₄  0.2mol/L

Na₂HPO₄  0.2mol/L

PH为7.4。

进一步地，在上述步骤a中，虫体在PBS缓冲液中浸泡时间为4～5min。

进一步地，上述步骤d中，应保证凹槽处有薄薄的缓冲液，这样就能借助渗透压和表面张力将内部器官拉出。

进一步地，解剖过程涉及的试剂和器材经高压灭菌，即于122℃，0.4MPa的压力下，灭菌1小时。

进一步地，收集卵巢，加入液氮后研磨，按照常规方法可以抽提出DNA或RNA，用于分子生物学分析。

与现有技术相比较本发明的有益效果在于：本发明的优点为：在PBS缓冲缓冲溶液浸泡下，可使得虫体变得软化，很容易用解剖针挑破节间膜，且不会破坏内部结构；用镊子夹往腹部末端轻轻向后拉时能保证结构的完整程度。进而更全面深入的了解虫体内部器官的构造和卵巢的发育进程。

采用本解剖方法，可以比较完整的得到西花蓟马成虫的内部结构，便于了解锉吸式口器昆虫内部器官的生理结构；对不同时期卵巢结构的观察，便于了解卵巢的发育进程，为西花蓟马的预测预报提供了理论基础。

具体实施方式

以下，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明西花蓟马成虫的解剖方法，可以适用于不同发育历期的虫态，操作方便；而且利用该方法得到的生殖系统的结构完整，没有损伤。

其具体过程为：

步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；

步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于Leica KL2000 LED解剖境下解剖；

步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；

步骤d，左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉开，这样，整个生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。

上述技术方案中，所述PBS缓冲液(磷酸缓冲液)的配方的各化合物的浓度为：

NaH₂PO₄  0.2mol/L

Na₂HPO₄  0.2mol/L

溶液的PH值为7.4。

上述技术方案中涉及的解剖器材包括：医用镊子、解剖针、培养皿、凹玻片、细针管。

上述方案中，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜时，注意用力不要过大，否则会伤到内部器官；用镊子夹往腹部末端轻轻向后拉时，保证凹玻片凹槽处有薄薄的缓冲液，这样内部结构就能在渗透压的作用下往外渗出，如果向后拉时没有什么变化，应用镊子轻轻的从腹部顶端向末端赶，然后再往外拉，这样就能保证结构的完整程度。

本发明所得的内部结构可以应用于生殖系统的构造和卵巢发育分级的初步观察。将解剖出来的卵巢在800倍Leica显微镜下进行观察，根据卵巢管特征，可确定卵巢的发育进程。

本方案所得的卵巢还可以应用于分子生物学分析领域，具体包括以下步骤：收集卵巢，加入液氮后研磨，按照常规方法可以抽提出DNA或RNA，用于分子生物学分析。

下面通过实施例对本发明的上述方案进行说明：

其中涉及的解剖器材包括：

医用镊子(11cm，尖度0.1*0.01)、解剖针、培养皿(9cm)、PBS缓冲液(NaH₂PO₄0.2mol/L，Na₂HPO₄0.2mol/L)、细针管(5mL)、凹玻片；

实施案例一：一种西花蓟马成虫的解剖方法，用于消化系统分析。

将西花蓟马成虫放入盛有PBS缓冲液培养皿中浸泡4～5分钟；用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上；用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉，用细针管吸取缓冲液冲洗拉出的器官，然后用解剖针分离出消化道，在800倍Leica显微镜下观察结构。

实施案例二：一种西花蓟马成虫的解剖方法，用于生殖系统分析。

将西花蓟马成虫放入盛有PBS缓冲液培养皿中浸泡4～5分钟；用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上；用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉，用细针管吸取缓冲液冲洗拉出的器官，然后用解剖针分离出卵巢，在800倍Leica显微镜下观察卵巢结构。

实施案例三：一种西花蓟马成虫的解剖方法，用于卵巢发育进程分析。

将西花蓟马不同发育时期的成虫放入盛有PBS缓冲液培养皿中浸泡4～5分钟；用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上；用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉，用细针管吸取缓冲液冲洗拉出的器官，然后用解剖针分离出卵巢，在800倍Leica显微镜下观察不同发育时间的卵巢结构，确定发育进程。

实施案例四：一种西花蓟马成虫的解剖方法，用于高温处理虫体卵巢发育分析。

将高温热激的西花蓟马不同发育时期的成虫放入盛有PBS缓冲液培养皿中浸泡4～5分钟；用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上；用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉，用细针管吸取缓冲液冲洗拉出的器官，然后用解剖针分离出卵巢，在800倍Leica显微镜下观察高温处理的不同发育时间的卵巢结构。

采用本解剖方法，可以比较完整的得到西花蓟马成虫的内部结构，便于了解锉吸式口器昆虫内部器官的生理结构；对不同时期卵巢结构的观察，便于了解卵巢的发育进程，为西花蓟马的预测预报提供了理论基础。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，对发明而言仅仅是说明性的，而非限制性的。本专业技术人员理解，在发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效，但都将落入本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种西花蓟马成虫的解剖方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：

步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；

步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于解剖境下解剖；

步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；

步骤d，左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉开，

这样，整个生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。

2.根据权利要求1所述的西花蓟马成虫解剖方法，其特征在于，所述PBS

缓冲

液为无菌缓冲液，其配方的各化合物的浓度为：

NaH₂PO₄  0.2mol/L

Na₂HPO₄  0.2mol/L

PH为7.4。

3.根据权利要求2所述的西花蓟马成虫解剖方法，其特征在于，在上述步骤a中，虫体在PBS缓冲液中浸泡时间为4～5min。

4.根据权利要求1所述的西花蓟马成虫解剖方法，其特征在于，上述步骤d中，应保证凹槽处有薄薄的缓冲液，这样就能借助渗透压和表面张力将内部器官拉出。

5.根据权利要求1所述的西花蓟马成虫解剖方法，其特征在于，解剖过程涉及

的试剂和器材经高压灭菌，即于122℃，0.4MPa的压力下，灭菌1小时。

6.根据权利要求1所述的西花蓟马成虫解剖方法，其特征在于，收集卵巢，加入液氮后研磨，按照常规方法可以抽提出DNA或RNA，用于分子生物学分析。