CN104094762A - 一种滇重楼种苗快速培育方法 - Google Patents
一种滇重楼种苗快速培育方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104094762A CN104094762A CN201410342960.6A CN201410342960A CN104094762A CN 104094762 A CN104094762 A CN 104094762A CN 201410342960 A CN201410342960 A CN 201410342960A CN 104094762 A CN104094762 A CN 104094762A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seedling
- seed
- paris polyphylla
- yunnan
- rudiment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明涉及农林育苗技术领域,尤其是一种滇重楼种苗快速培育方法,通过选种、种皮软化、常温萌芽和种苗培养步骤,在种皮软化和常温萌芽之间还具有低温催苗步骤;在种皮软化和低温催苗步骤间还具有超声波处理步骤等工艺步骤的结合,使得重楼育苗周期得到较大的缩短,使得从传统的育苗方法需要600多天缩短至了100-120天;重楼育苗成本从0.8元/株降低至了0.3元/株,进而降低了重楼种苗的培育成本。
Description
技术领域
本发明涉及农林育苗技术领域,尤其是一种滇重楼种苗快速培育方法。
背景技术
重楼为百合科植物,属多年生草本植物。我国主要分布在云南、广西、贵州、四川等省(区)。具有清热解毒、散淤消肿、祛痰平喘功能。主治肺痨久咳、肺炎、喉炎;外用治跌打、虫蛇咬伤、淋巴结核、疮毒肿。是云南白药、抗病毒冲剂、季德胜蛇药片的主要原料,近年研究表明还具有排毒养颜养生、独特抗病毒功效。仅国内几家大型中成药年用量已愈2000吨,医院和中药店配方用量约1200吨,全国野生资源已不足1000吨。随着近几年对野生重楼资源掠夺式滥采,重楼资源已严重不足。而传统的人工繁殖成本投入较大,加之重楼生产环境存在选择性强(仅适于云南、四川、广西、贵州等地生长),成功种植并不多见。
目前关于重楼的种植,国内主要为种子萌发与根茎切段种植,其种植方法如下:
种子繁殖:10至11月滇重楼种子成熟后,采用沙藏催芽进行种子处理,然后条播或散播于做好的苗床上,苗床宽120cm,高20cm,上面覆盖1:1的腐殖土和草木灰,浇透水,保持湿润,第三年4月份收苗。
带顶芽切块繁殖:冬季在滇重楼倒苗后,取滇重楼根茎,按垂直于根茎主轴方向,以带顶芽部分节长3~4cm处切割(其余部分可作为商品重楼出售),伤口蘸草木灰或生石灰,随后按大田种植株行距15cm×15cm栽培,第2年春季便可出苗。
种子萌发与根茎切段种植,重楼种子有胚后熟的生理特性,在自然条件下需要经过两个冬季的时间才能萌发,出苗率只有10%左右,出苗时间长,出苗率低;根茎切段种植,会占用大量的生产原材料,导致栽培用种与医药用原料的矛盾加剧,此外切段后的根茎,由于大田水分和温度难以控制,容易感染霉烂,种质材料损失率高达50%以上,繁殖率低,出苗不整齐,不便管理,种植成本也高,不利于重楼种植的大面积推广。
为此,我们急需要对重楼的快速栽培育苗技术提供一种新思路。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述技术问题,本发明提供一种滇重楼种苗快速培育方法,其具有育苗周期短、萌芽率高、成本低,苗成活率高等特征。
具体是通过以下技术方案得以实现的:
一种滇重楼种苗快速培育方法,包括选种、种皮软化、常温萌芽和种苗培养步骤,在种皮软化和常温萌芽之间还具有低温催苗步骤;在种皮软化和低温催苗步骤间还具有超声波处理步骤;其中所述的选种是将滇重楼鲜种进行筛选出籽料饱满、外表光亮、无病虫害的种子;所述的种皮软化是将筛选出来的种子放入不锈钢容器中,并加入种子5倍量浓度为1%的苏打水,并置入恒湿箱中,设定温度40℃,恒温浸泡72小时;所述的常温萌芽是将经过低温催苗处理后的种子用聚乙烯塑料盘分装成2~3cm厚,再置于恒温箱中,喷洒30-40%的去离子水,设定温度为25~30℃,暗光培养;所述的种苗培养是将常温萌芽时,暗光培养至种苗芽长至3-5mm时,将萌芽种苗移植到腐质无菌培养基上,转入种苗圃,每隔4-7天浇水施肥一次,培养30~40天后,将长至≥5cm的种苗,经浓度为75%的乙醇浸泡处理2h后,即可出苗。
所述的常温萌芽是将经过低温催苗处理后的种子用聚乙烯塑料盘分装成2.5cm厚,再置于恒温箱中,喷洒35%的去离子水,设定温度为28℃,暗光培养;
所述的种苗培养是将常温萌芽时,暗光培养至种苗芽长至4mm时,将萌芽种苗移植到腐质无菌培养基上,转入种苗圃,每隔6天浇水施肥一次,培养35天后,将长至≥5cm的种苗,经浓度为75%的乙醇浸泡处理2-3min后,即可出苗。
所述的超声波处理是将种皮软化处理后的种子与苏打水一起倒入超声波清洗机中,选取功率200~300W,超声处理40~60min。
所述的超声波处理是将种皮软化处理后的种子与苏打水一起倒入超声波清洗机中,选取功率250W,超声处理50min。
所述的超声波处理与种皮软化步骤之间要进行三次循环操作,待三次循环操作结束后,即可进入低温催苗步骤。
所述的低温催苗步骤是将超声波处理结束后的种子用去离子水反复冲洗3-4次后,再加入等种子重量的混合液,并置于冰箱内,设定温度为0~4℃,保持15~20天后,即可进入常温萌芽步骤。
所述的低温催苗步骤是将超声波处理结束后的种子用去离子水反复冲洗3次后,再加入等种子重量的混合液,并置于冰箱内,设定温度为2℃,保持18天后,即可进入常温萌芽步骤。
所述的腐质无菌培养基以黑土与有机肥按照4:1的配比配制而成的。
所述的混合液是由GA3、乙烯、激动素组成。
所述的GA3、乙烯、激动素的配比为(0.95-1.05):(0.95-1.05):(0.45-0.55)。
所述的GA3、乙烯、激动素的配比为1:1:0.5。
与现有技术相比,本发明的技术效果体现在:
①通过1%苏打水将种皮软化,超声波处理加速萌发抑制物质的溶出,提高了种子的萌芽率,使得传统的育苗方法中萌芽率的50%被提高至了95%。
②通过GA3、乙烯、激动素混合液浸泡的低温催苗技术,促进种子萌芽,进一步的确保了种子的萌芽率,降低了生产成本。
③通过选种、种皮软化、常温萌芽和种苗培养步骤,在种皮软化和常温萌芽之间还具有低温催苗步骤;在种皮软化和低温催苗步骤间还具有超声波处理步骤等工艺步骤的结合,使得重楼育苗周期得到较大的缩短,使得从传统的育苗方法需要600多天缩短至了100-120天;重楼育苗成本从0.8元/株降低至了0.3元/株,进而降低了重楼种苗的培育成本。
具体实施方式
下面结合具体的实施方式来对本发明的技术方案做进一步的限定,但要求保护的范围不仅局限于所作的描述。
实施例1
一种滇重楼种苗快速培育方法,
采用的仪器有:KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),SPX-250B-D型振荡培养箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂),DHP-9032型恒温箱(上海精密仪器仪表有限公司),海尔BC-829HN829升单温冷柜卧式双门冰柜。
采用种子来源:滇重楼鲜种子于2012年10月20日购买于马龙县红驰实业有限公司,经贵阳中医学院药学教研室鉴定为百合科植物滇重楼的成熟鲜种子,试验于2012年11月至2013年8月在贵阳中医学院生药学实验室进行。
采用育苗方法概要:筛选出籽料饱满、外表光亮、无病虫害的重楼种子;放入不锈钢容器中,加入种子5倍量浓度为1%的苏打水,置入恒湿箱,设定温度40℃,浸泡72小时,将种子连同苏打水一起倒进超声波清洗机中,选取功率300W,设定时间50分钟,反复三次进行处理后;再用去离子水反复冲洗3次,再加入等量由GA3、乙烯、激动素组成的混合液,其中GA3:乙烯:激动素=1:1:0.5,再放置于冰箱内,设定温度0~4℃,保持20天,然后用三个聚乙烯塑料盘分别准确计数100粒分装,标号A、B、C,置于恒温箱中,喷洒30-40%的去离子水,保持湿润,暗光培养,设定温度25℃,分别记录培养20天、30天、40天后,种苗萌芽情况;
其结果如下表所示:
培养20天萌芽率(%) | 培养30天萌芽率(%) | 培养40天萌芽率(%) | |
A | 80 | 95 | 98 |
B | 75 | 96 | 96 |
C | 82 | 95 | 97 |
由表中数据显示可以得出,本发明的重楼育苗技术在30天时,基本已经全部萌芽,可见萌芽率较高,萌芽速度较快,进而缩短了重楼苗的育苗周期,降低了重楼育苗成本。
实施例2
一种滇重楼种苗快速培育方法,选取购买于马龙县红驰实业有限公司,进行如下步骤进行培养操作:选种、种皮软化、常温萌芽和种苗培养步骤,在种皮软化和常温萌芽之间还具有低温催苗步骤;在种皮软化和低温催苗步骤间还具有超声波处理步骤;
其中所述的选种是将滇重楼鲜种进行筛选出籽料饱满、外表光亮、无病虫害的种子;
所述的种皮软化是将筛选出来的种子放入不锈钢容器中,并加入种子5倍量浓度为1%的苏打水,并置入恒湿箱中,设定温度40℃,恒温浸泡72小时;
所述的常温萌芽是将经过低温催苗处理后的种子用聚乙烯塑料盘分装成2cm厚,再置于恒温箱中,喷洒30%的去离子水,设定温度为25℃,暗光培养;
所述的种苗培养是将常温萌芽时,暗光培养至种苗芽长至3mm时,将萌芽种苗移植到腐质无菌培养基上,转入种苗圃,每隔4天浇水施肥一次,培养30天后,将长至≥5cm的种苗,经浓度为75%的乙醇浸泡处理2-3min后,即可出苗。
所述的超声波处理是将种皮软化处理后的种子与苏打水一起倒入超声波清洗机中,选取功率300W,超声处理40min。
所述的超声波处理与种皮软化步骤之间要进行三次循环操作,待三次循环操作结束后,即可进入低温催苗步骤。
所述的低温催苗步骤是将超声波处理结束后的种子用去离子水反复冲洗4次后,再加入等种子重量的混合液,并置于冰箱内,设定温度为4℃,保持20天后,即可进入常温萌芽步骤。
所述的腐质无菌培养基以黑土与有机肥按照4:1的配比配制而成的。
所述的混合液是由GA3、乙烯、激动素组成。
所述的GA3、乙烯、激动素的配比为1:1:0.5。
所述的混合液中各原料成分的配方还可以如下表所示:
GA3 | 乙烯 | 激动素 |
0.95 | 1.05 | 0.55 |
1.05 | 0.95 | 0.45 |
0.98 | 1.03 | 0.53 |
1.03 | 0.98 | 0.48 |
所述的常温萌芽、种苗培养、超声波处理、低温催苗等步骤中,各技术参数的变化如下表所示:
在此有必要指出的是,以上实施例和实验仅限于对本发明的技术方案所能达到的技术效果做进一步的阐述,不能理解为对本发明的技术方案做进一步的限定,本领域技术人员在此基础上做出的非突出的实质性特征和非显著进步的改进,仍然属于本发明的保护范畴。
Claims (8)
1.一种滇重楼种苗快速培育方法,包括选种、种皮软化、常温萌芽和种苗培养步骤,其特征在于,在种皮软化和常温萌芽之间还具有低温催苗步骤;在种皮软化和低温催苗步骤间还具有超声波处理步骤;其中所述的选种是将滇重楼鲜种进行筛选出籽料饱满、外表光亮、无病虫害的种子;所述的种皮软化是将筛选出来的种子放入不锈钢容器中,并加入种子5倍量浓度为1%的苏打水,并置入恒湿箱中,设定温度40℃,恒温浸泡72小时;所述的常温萌芽是将经过低温催苗处理后的种子用聚乙烯塑料盘分装成2~3cm厚,再置于恒温箱中,喷洒30-40%的去离子水,设定温度为25~30℃,暗光培养;所述的种苗培养是将常温萌芽时,暗光培养至种苗芽长至3-5mm时,将萌芽种苗移植到腐质无菌培养基上,转入种苗圃,每隔4-7天浇水施肥一次,培养30~40天后,将长至≥5cm的种苗,经浓度为75%的乙醇浸泡处理2~3min后,即可出苗。
2.如权利要求1所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的超声波处理是将种皮软化处理后的种子与苏打水一起倒入超声波清洗机中,选取功率200~300W,超声处理40~60min。
3.如权利要求1所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的超声波处理与种皮软化步骤之间要进行三次循环操作,待三次循环操作结束后,即可进入低温催苗步骤。
4.如权利要求1所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的低温催苗步骤是将超声波处理结束后的种子用去离子水反复冲洗3-4次后,再加入等种子重量的混合液,并置于冰箱内,设定温度为0~4℃,保持15~20天后,即可进入常温萌芽步骤。
5.如权利要求1所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的腐质无菌培养基以黑土与有机肥按照4:1的配比配制而成的。
6.如权利要求4所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的混合液是由GA3、乙烯、激动素组成。
7.如权利要求6所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的GA3、乙烯、激动素的配比为(0.95-1.05):(0.95-1.05):(0.45-0.55)。
8.如权利要求6所述的滇重楼种苗快速培育方法,其特征在于,所述的GA3、乙烯、激动素的配比为1:1:0.5。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410342960.6A CN104094762B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 一种滇重楼种苗快速培育方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410342960.6A CN104094762B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 一种滇重楼种苗快速培育方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104094762A true CN104094762A (zh) | 2014-10-15 |
CN104094762B CN104094762B (zh) | 2016-01-06 |
Family
ID=51663600
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410342960.6A Expired - Fee Related CN104094762B (zh) | 2014-07-18 | 2014-07-18 | 一种滇重楼种苗快速培育方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104094762B (zh) |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104472064A (zh) * | 2014-11-17 | 2015-04-01 | 柳州市天姿园艺有限公司 | 一种巴西樱桃种子播种前的催芽处理方法 |
CN104488400A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-04-08 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种促进玉郎伞种子萌发的方法 |
CN104663193A (zh) * | 2015-01-04 | 2015-06-03 | 中国医学科学院药用植物研究所云南分所 | 一种快速实现滇重楼种子一次出苗的育苗方法 |
CN104686133A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-06-10 | 云南农业大学 | 一种滇重楼快速育苗方法 |
CN105103709A (zh) * | 2015-09-06 | 2015-12-02 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种促进土茯苓种子萌发的方法 |
CN105248278A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-20 | 金寨县绿野中药材专业合作社 | 一种七叶一枝花种子育苗方法 |
CN105359896A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-03-02 | 李中校 | 一种重楼栽培有效防治病虫害的方法 |
CN106508349A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-03-22 | 兴义市庆庆种植有限责任公司 | 一种重楼种苗的快速培育方法 |
CN107155553A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-09-15 | 安徽省霍山县农伯乐开发有限公司 | 一种当归的高效益种植技术 |
CN109220057A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-01-18 | 天全县营生食用菌种植农民专业合作社 | 一种重楼的育苗方法 |
CN109392356A (zh) * | 2018-12-17 | 2019-03-01 | 靖西市秀美边城农业科技有限公司 | 一种促进重楼种子提早萌发的方法 |
CN109526652A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-29 | 天全县远航农业有限公司 | 一种基于低温处理和酶处理的新型重楼高效育苗方法 |
CN116235762A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-06-09 | 江西农业大学 | 一种多花黄精种子快速育苗的方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111328660A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-06-26 | 石教锁 | 一种重楼的种植方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101822157A (zh) * | 2010-04-21 | 2010-09-08 | 云南省农业科学院药用植物研究所 | 一种滇重楼规模化育苗的方法 |
CN102870564A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 四川农业大学 | 一种华重楼种苗快速、高效繁殖的方法 |
CN103460846A (zh) * | 2013-08-16 | 2013-12-25 | 苏州仁成生物科技有限公司 | 一种解除银鹊树种子休眠并提高育苗成活率的方法 |
-
2014
- 2014-07-18 CN CN201410342960.6A patent/CN104094762B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101822157A (zh) * | 2010-04-21 | 2010-09-08 | 云南省农业科学院药用植物研究所 | 一种滇重楼规模化育苗的方法 |
CN102870564A (zh) * | 2012-09-26 | 2013-01-16 | 四川农业大学 | 一种华重楼种苗快速、高效繁殖的方法 |
CN103460846A (zh) * | 2013-08-16 | 2013-12-25 | 苏州仁成生物科技有限公司 | 一种解除银鹊树种子休眠并提高育苗成活率的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
周浓等: "超声波对滇重楼种子萌发能力的影响", 《湖北农业科学》, vol. 51, no. 1, 31 January 2012 (2012-01-31) * |
王瑛: "促进特殊种子发芽的处理方法", 《种子科技》, no. 2, 31 December 2006 (2006-12-31) * |
陈翠等: "云南重楼种苗繁育技术", 《中国现代中药》, vol. 12, no. 2, 28 February 2010 (2010-02-28) * |
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104472064A (zh) * | 2014-11-17 | 2015-04-01 | 柳州市天姿园艺有限公司 | 一种巴西樱桃种子播种前的催芽处理方法 |
CN104488400A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-04-08 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种促进玉郎伞种子萌发的方法 |
CN104663193A (zh) * | 2015-01-04 | 2015-06-03 | 中国医学科学院药用植物研究所云南分所 | 一种快速实现滇重楼种子一次出苗的育苗方法 |
CN104686133A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-06-10 | 云南农业大学 | 一种滇重楼快速育苗方法 |
CN105103709A (zh) * | 2015-09-06 | 2015-12-02 | 广西壮族自治区药用植物园 | 一种促进土茯苓种子萌发的方法 |
CN105248278A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-20 | 金寨县绿野中药材专业合作社 | 一种七叶一枝花种子育苗方法 |
CN105359896A (zh) * | 2015-11-20 | 2016-03-02 | 李中校 | 一种重楼栽培有效防治病虫害的方法 |
CN106508349A (zh) * | 2016-10-21 | 2017-03-22 | 兴义市庆庆种植有限责任公司 | 一种重楼种苗的快速培育方法 |
CN107155553A (zh) * | 2017-04-27 | 2017-09-15 | 安徽省霍山县农伯乐开发有限公司 | 一种当归的高效益种植技术 |
CN109220057A (zh) * | 2018-10-25 | 2019-01-18 | 天全县营生食用菌种植农民专业合作社 | 一种重楼的育苗方法 |
CN109392356A (zh) * | 2018-12-17 | 2019-03-01 | 靖西市秀美边城农业科技有限公司 | 一种促进重楼种子提早萌发的方法 |
CN109526652A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-29 | 天全县远航农业有限公司 | 一种基于低温处理和酶处理的新型重楼高效育苗方法 |
CN116235762A (zh) * | 2023-05-12 | 2023-06-09 | 江西农业大学 | 一种多花黄精种子快速育苗的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104094762B (zh) | 2016-01-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104094762B (zh) | 一种滇重楼种苗快速培育方法 | |
CN106688849A (zh) | 菜心的无土栽培方法 | |
CN103828717A (zh) | 利用白芨块茎进行快速繁殖育苗方法 | |
CN107455259B (zh) | 一种牛大力的培育方法 | |
CN103404268A (zh) | 一种岗梅的育苗种植方法 | |
CN104396601A (zh) | 一种促进凤丹种籽丰产的整形修剪方法 | |
CN103430838A (zh) | 从华重楼根茎诱导丛生芽快速无性繁殖的新技术 | |
CN106797785A (zh) | 一种长豇豆的秋季高产栽培方法 | |
CN104770155A (zh) | 一种黄皮柳高产种植方法 | |
CN106888780A (zh) | 一种短季棉麦后夏直播早熟栽培方法 | |
CN103988696A (zh) | 一种芋头的大棚种植方法 | |
CN102119621A (zh) | 濒危药用植物桃儿七人工育苗方法 | |
CN105453752A (zh) | 一种促进重楼种子快速萌发的方法 | |
CN107324887A (zh) | 一种木瓜种子的繁育方法及木瓜幼苗专用肥料 | |
CN105453848A (zh) | 芥菜的绿色高产种植技术 | |
CN110367257A (zh) | 一种小麦玉米周年高产抗逆栽培浸种剂及其制备方法 | |
CN103843569A (zh) | 一种金银花培育方法 | |
CN104585014A (zh) | 一种良种大豆的选育方法 | |
CN104719125A (zh) | 一种耐热圆球形白萝卜选育方法 | |
CN104541842A (zh) | 一种轻度盐碱地苜蓿种植方法 | |
CN103907468A (zh) | 一种块状山药种薯苗床高效繁殖方法 | |
CN105557643A (zh) | 一种人工大量繁殖实验用桃蚜的方法 | |
CN105519337A (zh) | 一种花生一年三代加代育种技术 | |
CN106577232A (zh) | 一种曲茎石斛种子岩壁播种的自然繁殖方法 | |
CN103430751A (zh) | 一种天冬种苗的繁殖方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160106 Termination date: 20170718 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |