CN103930432B - 螯合的psma抑制剂 - Google Patents

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Abstract

提供了如本文定义的化合物，其用于(1)检测和/或鉴定呈现PSMA的细胞的诊断方法；(2)包含本发明的化合物以及药学上可接受的稀释剂的组合物；和(3)使前列腺癌细胞显像的方法。

Description

螯合的PSMA抑制剂
相关申请的交叉参考
本申请要求于2012年5月16日提交的美国临时申请第61/647,932号和2011年6月15日提交的美国临时申请第61/497,206的权益，该两篇临时申请通过参考以其整体并入。
政府兴趣声明
该申请得到国家癌症研究所的资助，基金号为R44CA153481-01A1和R01CA140617。美国政府对该发明有一定的权利。
背景技术
技术领域
本发明涉及对前列腺特异性膜抗原(PSMA)具有高度亲和性和特异性的小分子以及利用其实现诊断和治疗目的的方法。
相关技术概括
前列腺特异性膜抗原(PSMA)独特地在前列腺癌细胞表面上以及多种实体瘤的新血管系统中过表达。因此，PSMA作为检测和控制前列腺癌的临床生物标记已经引起注意。通常，这些方法利用特异性靶向PSMA的抗体来引导显像剂或治疗剂。例如，ProstaScint(Cytogen,Philadelphia,PA)已经被FDA批准用于检测前列腺癌并使之显像，其利用抗体来递送螯合的放射性同位素(铟-111)。然而，现在认识到，ProstaScint技术局限于死细胞检测，因此其临床相关性存在问题。
利用抗体进行癌症诊断和治理的成功性受限于诸如免疫原性和欠佳的血管通透性等的挑战。另外，与细胞表面靶标结合的大抗体成为随后的邻近细胞表面部位的其他抗体的结合的屏障，导致细胞表面标记降低。
除了用作递送诊断或治疗剂的抗体的细胞表面靶标之外，PSMA在很大程度上被忽视且独特的特性是其酶活性。即，PSMA能够识别并处理向二肽一样小的分子。尽管存在这些性质，但是就开发新型诊断和治疗策略而言，其在很大程度上还是未开发的。最近在文献中有若干实例描述了利用经标记的PSMA的小分子抑制剂来检测前列腺癌的结果。
在美国专利申请公布US-2007-0219165-A1号中已经描述了某些磷酰胺酯和磷酸酯PSMA抑制剂。
发明内容
本文提供了用于前列腺癌的PET诊断和治疗，其利用小分子抑制剂对PSMA的效力和特异性亲和性。诊断剂可用于监控患者并对其进行分级，以便用适宜的治疗剂进行治疗。
我们的目的包括PSMA-靶向与显像报告子或与治疗放射示踪物结合的肽模拟核(peptidomimetic core)。一方面，我们已经证实，99mTc-螯合物结构可用于放射性标记我们的PSMA抑制剂，而且该标记探针特异性靶向且内在化到表达PSMA的前列腺癌细胞和肿瘤中。
另一方面，我们已经开发了利用PET同位素68Ga-和螯合物-结构-PSMA抑制剂缀合物的直接标记方案，该方案可在典型的放射性药物学中进行，且可以提供有效的合成路径，同时保持必要的生物活性。这些PSMA显像结构可用作PET显像剂的基础，且能够容易地进行修饰，从而在螯合物结构中并入其他PET显像放射性核素(诸如89Zr和64Cu)和可用作靶向放射疗法的治疗剂的放射性金属(诸如186/188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac、223Ra)。
例如，可利用去铁敏-p-SCN或-p-SCN-Bn-NOTA、p-SCN-Bn-PCTA、p-SCN-Bn-Oxo-DO3A和DOTA-NHS胺-活性螯合物结构作为实例，对PSMA-靶向显像剂的设计进行修改，并针对螯合的89Zr或64Cu或68Ga标记最优化。标记条件可确保在临床放射性药物学中有效且可再现的标记，以实现前列腺肿瘤的PET显像。在螯合结构中，PSMA-靶向的显像剂还可用186/ 188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac、223Ra修饰，以实现具有治疗效力的PSMA靶向的放射性示踪物。
本文所标记的示踪物是体内用于PSMA阳性肿瘤的适宜显像剂。
因此，在一方面，本公开提供式
的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是0或更大(优选0、1或2)；和R包含与螯合剂结合的二价连接基，其中所述螯合剂任选与PET-活性反射性同位素结合。在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其是独立地外消旋的(rac)或者为S或R立体构型。因此，根据该发明的化合物包括具有下述立体构型组合的那些化合物及其混合物：
在另一方面，本公开提供药物组合物，其包含前述方面的化合物和药学上可接受的载体。
在另一方面，本公开提供用于使患者内的一种或多种前列腺癌细胞或肿瘤相关的血管显像的方法，包括向所述患者施用任一前述方面的化合物或药物组合物。
附图简述
图1具有螯合物结构的99mTc放射性标记的PSMA抑制剂
图2螯合99mTc放射性标记PSMA抑制剂上的吸收和内在化(参见，Nedrow-Byers,J.et al.,The Prostate.2011,(待发表))。
图399mTc放射性PSMA抑制剂的生物分布。
图4在pH4.5下，hCTT54/CTT1000在0-8小时内每小时的31P NMR光谱。三苯基氧化膦(TPPO)用作内标。
图5在pH3下，TG97/CTT2000在0-8小时内每小时的31P NMR光谱。三苯基氧化膦(TPPO)用作内标。
图6显示了Ga-68标记的CTT1156在注射到具有Ln-cap肿瘤的小鼠1小时后的生物分布。
发明详述
目前可用在PET显像研究中的同位素具有吸引力且是18F的潜在的更好的替代选择。由于68Ga、64Cu和89Zr的轻金属性能以及其与螯合剂(1)结合的能力，它们是评价PET显像的可用的同位素。我们已经选择了同位素186/188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac、223Ra作为具有有效治疗功效的放射性同位素。
已经显示，螯合剂DOTA(1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸)(或其修饰衍生物)是用于结合镓的优良配体；且DOTA-肽可以高特异性活性(2)用68Ga进行快速且有效的标记。我们已经制备出这些螯合剂并对其进行测试，而且这些类型的螯合剂已经常规用于PET显像剂(1)。68Ga金属同位素的基本原理由生物因素、成本因素和患者因素所驱动。68Ga是最具吸引力的放射性金属，因为其半衰期更接近18F的半衰期，其在施用之后很快显像，且对患者的暴露降低。已经显示，由于很多小分子和肽迅速扩散，68Ga的68分钟的半衰期非常近似地匹配这些分子的药代动力学，导致更好的肿瘤定位和更快速的血液清除。另外，选择68Ga的重要因素在于：其可通过商业可得的68Ge/68Ga发生器来有效控制成本地且连续地生产，这减轻了对使PET中心接近例如生产18F(2)所需的回旋加速器的需求。
根据Clinical Trials Network(www.clinicaltrials.gov)，目前存在四种利用64Cu标记的靶向剂的PET显像肿瘤学临床试验；两种在乳腺癌中利用64Cu-DOTA-曲妥单抗(3)，两种用于非小细胞肺癌，利用64Cu-ATSM(4)。有两种利用68Ga的正在进行的PET显像临床试验。一种利用68Ga标记的F(ab’)2-曲妥单抗，用于乳腺癌，一种利用68Ga-蛙皮素(5)，用于前列腺癌。在七种测试在乳腺癌和肾细胞癌中的显像能力的临床研究中，也利用抗体靶向显像对89Zr进行了测试(6,7)。
我们已经将安装金属PET放射性核素的分子方法保存到我们的PSMA-靶向抑制剂中。我们利用选择的胺活性双官能螯合剂功能化我们的PSMA-靶向抑制剂，随后用补充的金属放射性核素放射性标记这些缀合物。这些放射性核素的胺活性螯合剂结构是商业可得的，诸如DOTA-NHS以及下述表中所述的其他螯合剂，其中，所述螯合剂可在R基团中经由如本文所定义的二价连接基进行连接(下述中的“L”)：
如果必要，利用文献中的步骤可容易地制备其他双官能螯合剂。
在一个方面，本公开提供下式的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中
n是0或更大(例如，0-10或0-6或0-5或0-4或0-3，或者0、1或2)；和
R包含与螯合剂结合的二价连接基，其中所述螯合剂任选与PET-活性放射性同位素结合。
在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其独立地为外消旋的(rac)或为S或R立体构型。因此，根据该方面的化合物包括具有下述立体构型组合物的那些化合物及其混合物：
在一种实施方式中，所述化合物具有下式：
其中n是0或更大(例如，0-10或0-6或0-5或0-4或0-3，或者0、1或2)；和
R包含与螯合剂结合的二价连接基，其中所述螯合剂任选与PET-活性放射性同位素结合，
或其药学上可接受的盐。
在另一实施方式中，所述化合物具有下式：
R包含与螯合剂结合的二价连接基，其中所述螯合剂任选与PET-活性放射性同位素结合，或其药学上可接受的盐。
二价连接基包括下式的基团：-(C0-C10烷基-Q)0-1-C0-C10烷基-，其中Q是键、芳基(例如，苯基)、杂芳基、C3-C8环烷基或杂环基；且各烷基中不超过一个亚甲基任选且独立地被下式基团替换：-O-、-S-、-N(R00)-、-C(H)=C(H)-、-C≡C-、-C(O)-、-S(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR00)-、-OP(O)(OR00)-、-P(O)(OR00)O-、-N(R00)P(O)(OR00)-、-P(O)(OR00)N(R00)-、-OP(O)(OR00)O-、-OP(O)(OR00)N(R00)-、-N(R00)P(O)(OR00)O-、-N(R00)P(O)(OR00)N(R00)-、-C(O)O-、-C(O)N(R00)-、-OC(O)-、-N(R00)C(O)-、-S(O)O-、-OS(O)-、-S(O)N(R00)-、-N(R00)S(O)-、-S(O)2O-、-OS(O)2-、-S(O)2N(R00)-、-N(R00)S(O)2-、C(O)O-、-OC(O)N(R00)-、-N(R00)C(O)O-、-N(R00)C(O)N(R00)-、-OS(O)O-、-OS(O)N(R00)-、-N(R00)S(O)O-、-N(R00)S(O)N(R00)-、-OS(O)2O-、-OS(O)2N(R00)-、-N(R00)S(O)2O-或-N(R00)S(O)2N(R00)-，其中各R00独立为氢或C1-C6烷基。
在其他实施方式中，二价连接基选自下述式所示基团之一，其中，在各情况中，*-末端连接至螯合剂：
(a)*-(OCH2CH2)n-，其中n是1-20(例如，4-12或4或8或12)；
(b)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-*，其中
m是1-8；
各R1独立为天然或非天然氨基酸的侧链
(例如，各R1独立为氢、C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-C6烷基或杂芳基C1-C6烷基，其中烷基、芳基烷基和杂芳基烷基任选被1、2、3、4或5个R11基团取代，其中各R11独立为卤素、氰基、-OR12、-SR12、-N(R12)2、-C(O)OR12、-C(O)N(R12)2、-N(R12)C(=NR12)N(R12)2或C1-C6烷基，其中各R12独立为氢或C1-C6烷基)；
各R2独立为氢或与同一残基内的R1一起形成杂环基(例如，具有5-元)；
(c)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是1-30(例如，p是1-7)(例如，6-氨基己酸、-C(O)(CH2)5NH-*)；
(d)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，
其中G是-O-或-N(H)-，-r和q各自独立为0-30(例如，0-20；或0-10或0-6或1-6)
(例如，-(C(O)-苯基-N(H)(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中q是1-6；
或-(C(O)-(CH2)r-苯基-(CH2)q-NH)-*，其中r和q各自独立为0-6；
或者苯基上的两个取代基彼此为对位，诸如在4-氨基甲基苯甲酸中，其中r是0，且q是1；或如在4-氨基乙基苯甲酸中，其中r是0且q是2)；或
其中
L2是-(CH2)tN(H)-*，其中t是1-30；以及
L3是#-(CH2)u-C(O)-、#-(CH2)u-Z-Y-C(O)-、#-C(O)-(CH2)u-C(O)-或#–C(O)-(CH2)u-Z-Y-C(O)-，其中
L3的#末端连接至二苯并环辛炔或上面的三唑基，
u是1-30；
Y-(CH2)v-或**-CH2CH2-(OCH2CH2)n-，其中n是1-20(例如，4-12或4或8或12)，且其中**-末端连接至Z；
以及Z为-C(O)O-、-C(O)N(R00)-、-OC(O)-、-N(R00)C(O)-、-S(O)2N(R00)-、-N(R00)S(O)2-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R00)-、-N(R00)C(O)O-或-N(R00)C(O)N(R00)-，其中，各R00独立为氢或C1-C6烷基；
以及(f)上述的组合，其中在各种情况中，*-末端连接至螯合剂，诸如：
(i)-(CH2CH2O)n-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中n和p如上定义(例如，n是4且p是6)；
(ii)-(CH2CH2O)n-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-*，其中R1、R2、n和m如上定义(例如，n是4及m是2)；
(iii)-(CH2CH2O)n-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、n、q和r如上定义(例如，n是4，q是1，及r是0)；
(iv)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中R1、R2、m和p如上定义(例如，m是2且p是6)；
(v)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、R1、R2、m、q和r如上定义(例如，m是2，q是1，及r是0；或m是2，q是2，及r是0)；
(vi)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)–(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，及r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2以及r是0)；
(vii)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-*，其中R1、R2、m和p如上定义(例如，m是2且p是6)；
(viii)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-*，其中G、R1、R2、m、q和r如上定义(例如，m是2，q是1，及r是0；或m是2，q是2，及r是0)；
(ix)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，及r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2，及r是0)；
(x)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-(CH2CH2O)n-*，其中n和p如上定义(例如，n是4且p是6)；
(xi)-(C(O)-(CH2)0-1-CH(R1)N(R2))m-(CH2CH2O)n-*，其中R1、R2、n和m如上定义(例如，n是4及m是2)；和
(xii)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(CH2CH2O)n-*，其中G、n、q和r如上定义(例如，n是4，q是1，及r是0；n是4，q是2，及r是0)；
(xiii)-(C(O)(CH2)pN(H)C(O)(CH2)pNH-)*，其中各p独立如上定义(例如，各p是5，-C(O)(CH2)5NH-C(O)(CH2)5NH-*)；
(xiv)共价键。
在其他实施方式中，二价连接基选自下述式所示基团之一，其中，在各情况中，*-末端连接至螯合剂：
(xv)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是1-7、(例如，6-氨基己酸、-C(O)(CH2)5NH-*)；
(xvi)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G是-N(H)-，-r是0-6(例如，0-3或0-2或0或1或2或1-6)，q是1-6(例如，1-3或1-2或1或2)(例如，苯基上的两个取代基彼此为对位，诸如在4-氨基甲基苯甲酸中其中r是0且q是1；或如在4--氨基乙基苯甲酸中其中r是0且q是2)；或
(xvii)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，及r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2，及r是0)；
(xviii)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，及r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2，及r是0)；
(xix)-(C(O)(CH2)pN(H)C(O)(CH2)pNH-)*，其中各p独立如上定义(例如，各p是5，-C(O)(CH2)5NH-C(O)(CH2)5NH-)；
(xx)共价键。
在其他实施方式中，二价连接基选自下述式所示基团之一，其中，在各情况中，*-末端连接至螯合剂：
(xv)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是4-6(例如，6-氨基己酸、-C(O)(CH2)5NH-*)；
(xvi)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中G是-N(H)-，r是0-6且q是1-3(例如，苯基上的两个取代基彼此为对位，诸如4-氨基甲基苯甲酸中，其中q是1；或如4-氨基乙基苯甲酸中，其中q是2)；或
(xvii)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)–(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，或r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2，及r是0)；
(xviii)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中G、p、q和r如上定义(例如，p是6，q是1，及r是0；p是6，q是2，及r是0；p是5，q是1，及r是0；或p是5，q是2，及r是0)；
(xix)-(C(O)(CH2)pN(H)C(O)(CH2)pNH-)*，其中各p独立如上定义(例如，各p是5，-C(O)(CH2)5NH-C(O)(CH2)5NH-*)；
(xx)共价键。
在其他实施方式中，二价连接基选自下述式所示基团之一，其中，在各情况中，*-末端连接至螯合剂：
(xxi)-C(O)(CH2)5NH-*；
(xxii)
(xxiii)
(xxiv)
(xxv)
(xxvi)-C(O)(CH2)5NH-C(O)(CH2)5NH-*；
(xxvii)共价键。
在任意前述实施方式的实施方式中，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其独立地为外消旋的(rac)或为S或R立体构型。因此，根据该方面的化合物包括具有下述立体构型组合物的那些化合物及其混合物：
在任意前述实施方式的实施方式中，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其独立地为外消旋的(rac)或为S或R立体构型。因此，根据该方面的化合物包括具有下述立体构型组合物的那些化合物及其混合物：
在任意前述实施方式的实施方式中，所述化合物具有下式：
或其药学上可接受的盐。
在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其独立地为外消旋的(rac)或为S或R立体构型。因此，根据该方面的化合物包括具有下述立体构型组合物的那些化合物及其混合物：
最近，我们构建了含双官能螯合剂p-SCN-Bn-DTPA的CTT-54缀合物，并随后用99mTc对其进行标记，产生类似的SPECT探针99mTc-DTPA-SCN-CTT-54(图1)。
用于与放射性标记结合的适当化合物的实例包括但不限于(其中*-末端连接至螯合剂)：
在前述化合物的每一种中，二价连接基的(*)末端经-NCS基团与螯合基团连接，这是本领域技术人员熟悉的。例如，在二价连接基的(*)末端是氧的情况下，则硫代氨基甲酸酯基团(-OC(S)N(H)-)将连接基连接至螯合基团。类似地，在二价连接基的(*)末端是-N(H)-基团的情况下，硫脲基团(-N(H)C(S)N(H)-)将连接基连接至螯合基团。本领域技术人员可容易地想到由各种前述二价连接基和螯合基团所形成的化学键。
在其他实施例中，螯合基团可包含下述能够与二价连接基的(*)末端连接的官能团之一，这是本领域技术人员熟悉的；
其中X是卤素以及-OA是活化酯基团，诸如但不限于N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或4-硝基苯氧基。
即，例如，所述化合物可以具有下式：
或其药学上可接受的盐，其中
n是0或更大(例如，0-10或0-6或0-5或0-4或-3，或0、1或2)；
和
L是二价连接基；和
R1是螯合剂，其中所述螯合剂任选与PET-活性放射性同位素结合。
在另一实施例中，所述化合物可具有下式，
或其药学上可接受的盐，其中
n是0或更大(例如，0-10或0-6或0-5或0-4或0-3，或0、1或2)；和
L是二价连接基；和
R1是螯合剂，其中所述螯合剂任选与PET-活性放射性同位素结合。
在上述结构中，1*、2*和3*是手性中心，其独立地为外消旋的(rac)或为S或R立体构型。因此，根据该方面的化合物包括具有下述立体构型组合物的那些化合物及其混合物：
例如，R1可以是DOTA，其经过其四个羧酸基团中的任一进行结合：
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
在另一实施例中，R1可以是
前述化合物中每一种可与选自下述的放射性同位素螯合：68Ga、64Cu、89Zr、186/ 188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac和223Ra。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为89Zr的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为64Cu的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为68Ga的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为186/188Re的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为90Y的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为177Lu的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为153Sm的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为213Bi的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为225Ac的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，前述化合物中每一种可与为223Ra的放射性同位素螯合。
在某些实施方式中，化合物可选自下述或其药学上可接受的盐，
螯合剂可具有一种或多种下述特征(8,9)：
·高标记效率：68Ga的螯合结合大于60%(已纠正衰减)，高总收率：基于原始68Ga离子，最终纯化化合物>40%总收率(已纠正衰减)。
·高比活度>500Ci/mmol，通过HPLC测量
·高稳定性：制备后，>90%的标记化合物保持多达6小时。
·对PSMA的高抑制效力(IC50<10nM)(原型SFB-CTT-54的IC50是0.7nM)
·不可逆或缓慢可逆的PSMA抑制
·特异性结合LNCaP细胞，并最低限度结合PC3细胞(LNCaP吸收应大于PC3吸收的2倍，并且被CTT-54或2-PMPA阻断。
·高盐水和离体稳定性：室温下>90%在盐水和血液中稳定多达3h。
前述螯合剂可按照本领域技术人员熟悉的溶液相或固相方法来制备。
一方面，本公开提供了用于制备按照下式的化合物的固相合成方法，
或其药学上可接受的盐，其中n和R如根据任意前述方面和及其实施方式所定义，所述方法包括下述步骤：
提供下式的化合物，
其中
n是0或更大(例如，如上定义)；
R’是任选经保护的螯合基团；和
各RP独立为保护基，
和
当R’是未保护的螯合基团时，
任选使该化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合，以提供强放射性化合物(hot compound)，和
从所述强放射性化合物去除保护基；或
当R’的经保护的螯合基时，
从所述化合物去除保护基；和
任选使去保护的化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合。
前述化合物可如下制备：使用下式化合物修饰的第一树脂，
其中
V是如上定义的二价连接基；
和*-表示于树脂的连接点，
经历适合从所述第一树脂裂解下式化合物的条件
当R’是未保护的螯合基团时，
任选使所裂解化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合，以提供强放射性化合物，和
从所述强放射性化合物去除保护基；或
以及当R’是经保护的螯合基团时，
从所裂解的化合物去除保护基；和
任选使所述去保护化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合。
本文所用的“保护基”包括但不限于任选取代的苄基、叔丁酯、烯丙酯、烷基酯(例如，甲基、乙基)、芴基甲氧羰基(Fmoc)和氨基、羧酸和磷酸保护基，其描述于Greene'sProtective Groups in Organic Synthesis,4th Edition(其相关部分通过参考并入)中。
任选地，苄基包括但不限于未取代的苄基、三苯基甲基(三苯甲基)、二苯基甲基、邻硝基苄基、2,4,6-三甲基苄基、对溴苄基、对硝基苄基、对甲基苄基(PMB)、2,6-二甲氧苄基、4-(甲基亚磺酰基)苄基、4-磺基苄基、4-叠氮基甲氧苄基和胡椒基，以及公开于Greene’sProtective Groups in Organic Synthesis(其相关部分通过参考并入)中的羧酸和磷酸的苄基保护基。
前述方法中所用的树脂可以是本领域所熟悉的肽的固相合成中通常使用的那些树脂。例如所述树脂本身可包含聚(苯乙烯)，诸如1-2%二乙烯基本交联的聚(苯乙烯)颗粒，或聚丙烯酰胺，或聚乙二醇(PEG)。
用于从树脂裂解化合物的适合的条件将取决于被合成的化合物的性质以及化合物与树脂之间的化学键(即，前述式中的“V”)。例如，当使用下述各树脂时，可利用相应的裂解条件(其中表示与树脂的键)：
其中R’是任选被保护的螯合基团，其可以用本领域技术人员熟悉的前述保护基中的一种或更多中来保护。例如，R’可以是下述，其中未保护的R’可以任选与PET-活性放射性同位素(例如，68Ga)结合，
如本领域技术人员所知晓的，去除前述中的Rp基团导致形成其中Rp为氢的相应化合物或其盐。
当Rp是叔丁基时，所述方法可保持在无水条件下，以防止化合物降解，因为已知磷酰胺酯部分(phosphoramidate)在含水酸性介质中不稳定。在各实施方式中，可利用下述去保护条件中的每一种来去除叔丁基：
i)使化合物与选自下述的酸接触：三氟乙酸、盐酸、甲酸、冰醋酸、氯乙酸及其混合物；
ii)使化合物与溶剂中的酸(其选自如(i)所述)接触，所述溶剂选自：乙醚、乙酸乙酯、二噁烷、1,2-二氯乙烷、叔丁醇、甘醇二甲醚、甲基叔丁醚、四氢呋喃及其混合物；
iii)使化合物与纯酸接触；
iv)如任意上述，使化合物接触，且添加清除剂，诸如但不限于三乙基硅烷(TES)；
v)如任意上述，在室温与(例如，25℃)与180℃之间的温度下使化合物接触；
vi)如任意上述，使化合物接触，且微波加热；
vii)使化合物与碱(诸如但不限于NaOH)接触；
viii)如任意上述，使化合物接触，其中使反应进行约15秒至15分钟之间的时间期间；
ix)使化合物与三甲基碘硅烷(TMS-I可由三甲基氯硅烷和碘化钠原位形成)接触；
x)使化合物与三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf)和三乙胺(TEA)接触；
xi)使化合物与喹啉在大于150℃诸如180℃的升高的温度下接触；
xii)使化合物与LiI在乙酸乙酯中接触；
当Rp是任选取代的苄基(例如，未取代的苄基)时，适宜的去保护条件包括但不限于氢解条件(例如，H2和Pd/C)或利用甲酸铵和Pd/C的催化氢转移条件。可以使用其他加氢催化剂，这是本领域技术人员熟知的。
在某些实施方式中，可利用可选的氢源，其包括但不限于甲酸铵、甲酸钠，或者甲酸与三乙胺。在某些实施方式中，氢源为甲酸铵。
氢化可以在合适的溶剂中发生，所述溶剂选自但不限于下述：乙醇、四氢呋喃、水或磷酸盐缓冲盐水，或其混合物。
例如，在某些实施方式中，去保护可设置在筒中，其中Pd/C催化剂装载与层中或分布于惰性物质中，然后，将溶于溶剂(诸如乙醇)中的去保护化合物进一步溶于甲酸铵中并经过筒冲洗，产生去保护的物质，无需进一步纯化。
在上述任意实施方式的一个实施方式中，通过使用下式化合物改性的第二树脂与下述的化合物在适合产生第一树脂的条件下接触来制备第一树脂。适合的条件包括但不限于氧化偶联条件(例如，CCl4或I2，在有机碱性溶液(诸如DCM中的三乙胺)中)。
在另一实施方式中，通过使用下式化合物修饰的第三树脂顺序与亚磷酸二苄酯和任选取代的苄醇在适合产生第二树脂的条件下接触来制备第二树脂。适合的条件包括但不限于在干吡啶溶液中酯交换。
在另一实施方式中，通过使用下式的化合物改性的第四树脂与下述的化合物在适合产生第三树脂的条件下接触来制备第三树脂。适合的条件包括但不限于使氨基保护基(RP)去保护，任选洗涤树脂，使去保护的树脂与溶于二甲基甲酰胺(DMF)游离酸化合物并结合合适的酰胺偶联剂接触。
在氨基保护基是Boc基团(叔丁氧羰基)的情况下，Boc基团可用诸如三氟乙酸(TFA)的酸去除，之后任选用诸如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的溶剂洗涤。在氨基保护基是9-芴基甲氧羰基(Fmoc)基团的情况下，该Fmoc可通过使经保护的树脂与诸如哌啶的碱在诸如DMF的溶剂中接触来去除。
偶联剂包括但不限于二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-叔丁基-3-乙基碳二亚胺、N′-二-叔丁基碳二亚胺、N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺、1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺甲碘化物、1,3-二-对甲苯基碳二亚胺、1-羟基-苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、2-(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HCTU)O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷(PyBOP)、(羟基亚氨基)氰基乙酸乙酯(Oxyma)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(COMU)和S-(1-氧代-2-吡啶基)-N,N,N’,N’-四甲基硫脲四氟硼酸盐(TOTT)。
实施例
实施例1
通过HPLC确认，测定了99mTc-DTPA-SCN-CTT-54的放射化学纯度大于95%。利用PSMA(+)LNCaP细胞和PSMA(–)PC3细胞的体外研究证实了这种放射性标记的双官能螯合剂-PSMA抑制剂缀合物对PSMA+特异性得以保存(图2)。此外，将超过70%的与LNCaP细胞结合的这些分子在30分钟内内在化(internalized)。尽管随时间吸收的量增加，但是对于这些试剂而言，内在化很快。
在生物分布研究中，我们还证实了这种99mTc-DTPA-SCN-CTT-54的体内靶向。放射性标记的99mTc-(CO)3-DTPA-LW-54经尾部静脉被注入具有LNCaP(PSMA+)和PC3(PSMA-)移植瘤的雄性nu/nu小鼠中，并在2小时和4小时收集生物分布数据。数据清楚显示出LNCaP肿瘤中的选择性吸收，而在PC3异种移植中没有可检测信号(示于图3中的数据，4h时间点)。
这些数据显示，双官能螯合剂能够与PSMA靶向抑制剂CTT-54成功结合，所形成的缀合物可利用后标记法用金属放射性核素来标记。关于已选的双官能螯合剂与其他靶向剂结合时通过后标记法进行的64Cu、68Ga和89Zr放射性标记的在先文献进一步支持了在修改的方法中成功的可能性。
所有提到的同位素可得自商业来源(例如，68Ga来自IDB)。
用于本文螯合物的合适的放射性同位素包括但不限于64Cu、68Ga、89Zr、186/188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac和223Ra。这些是特别具有吸引力的同位素，原因在于其轻金属特性以及与螯合剂(1)结合的能力。如上所述，我们已经在我们的PSMA抑制剂上的螯合放射性标记方面获得初步的成功。
在某些实施例中，本文螯合物的标记效率可大于60%(已校正衰减)，且任意轻金属同位素具有大于40%的总收率(已校正衰减)。对于每种同位素而言，比活度可轻微变化，但取决于同位素变化仅为2-3倍。通常，每个患者施用1-10mCi显像剂。
施用本文的螯合PSMA抑制剂之后，可更改显像时间，以改变和/或最优化显像特征。由Pomper’s实验室进行的最近的论文(10)证明了在小鼠异种移植模型中在前列腺癌症肿瘤中利用可逆PSMA抑制剂68Ga-DOTA-脲基抑制剂的效用。然而，这是一张次佳的可逆抑制剂，其显示随时间进行PET显像降低以及肿瘤吸收减小。对比而言，PSMA抑制剂CTT-54在与肿瘤相关部分中的吸收随着时间持续增加。
68Ga具有相对短的半衰期。因此，成品显像剂制备与在人类或动物中应用之间的时间选择是重要的。因为在异种移植模型中与肿瘤的结合非常迅速，因此肿瘤的显像在可接收的时间范围内可成分进行。
64Cu和89Zr的衰减半衰期长得多(分别为12.7和78.4小时)。优势是三重的。首先，成品显像剂制备与在人类或动物显像之间的时间选择较不重要。第二，在显像剂注入与PET扫描之间有额外的时间，这允许任何未结合物质的额外的肾清除率以及从肾、肝和膀胱清除的额外时间。第三，较长的半衰期允许在单次注射显像剂的情况下对患者进行纵向研究。
目前，还没有当前市场化的商业89Zr/64Cu/68Ga标记的PET显像剂用于前列腺癌。PET市场是核显像市场中增长最迅速的部分(Chemical Engineering News MolecularImaging Volume83,Number30pp.25-34)。
68Ga可得得自GMP商业可得来源，其可被贮存多达一年，这种便利性可使该产品相比取决于接近回旋加速器的产品更具吸引力。发生器商业GMP来源存在，例如IDB销售iThemba GMP68镓发生器。母同位素68Ge的半衰期为271天，而且其可容易地发送至发生器范围内的医院，在那里其可贮存几乎一年。要求现场的发生器要最小化时间损失，原因在于还需要药物制备时间，以将镓-68作为示踪物附至药物螯合物分子，使得总制备可接近同位素半衰期。
实施例2
PSMA靶向分子的DOTA缀合物的代表性制备
无放射性(Cold)标准的代表性制备
强放射性(Hot)(68Ga)缀合物和无放射性(Cold)(69Ga)标准的可选代表性制备
实施例3
在一个实施例中，如在前述方案中所示，Ga-螯合基团连接至PMSA抑制剂。其中，使叠氮化物封端的螯合剂(例如，用30叠氮丙胺修饰的DOTA)在本领域熟知的无Cu条件下与DBCO-修饰的PMSA抑制剂反应，生成螯合剂标记的PSMA抑制剂。Ga-螯合物可在叠氮化物偶联步骤之前或在其之后形成。在另一实施例中，DBCO-修饰的PMSA抑制剂可包含聚环氧乙烷连接基，如在下式中所示。
实施例4化学合成
二苄基环辛炔(DBCO)-PEG4-NHS酯购买自Click Chemisty Tools(Scottsdale,AZ)。所有其他化学品和细胞培养试剂购自Fisher Scientific(Sommerville,NJ)或Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)。
L2-{[2-(4-氨基-4-羰基-丁酰氨基)-2-羰基乙氧基]-羟基-磷酰氨基}-戊二酸(pentanedioicacid)五钾盐(CTT-54,[7])和2-{[2-(4-氨基-4-羰基-丁酰氨基)-2-羰基乙氧基]-羟基-磷酰氧基}-戊二酸五钾盐(CTT-54.2,[8])如先前报告般合成(参见Nedrow-Byers JR,Jabbes,M.,Jewett,C.,Ganguly,T.,He,H.,Liu,T.,Benny,P.,Bryan,J.N.andBerkman,C.E.A phosphoramidate-based prostate-specific membrane antigen-targeted SPECT agent.The Prostate2011；and Maung J,Mallari JP,Girtsman TA,WuLY,Rowley JA,Santiago NM,Brunelle AN,Berkman CE.Probing for a hydrophobic abinding register in prostate-specific membrane antigen withphenylalkylphosphonamidates.Bioorg Med Chem2004；12(18):4969-4979.)。
DBCO-PEG4-CTT-54[5].将化合物7(16.7mg,0.0264mmol)溶于0.60ml的100mMK2CO3缓冲液中。将溶于0.50ml DMSO的DBCO-PEG4-NHS(20mg,0.041mmol)添加至7并搅拌3h。通过HPLC测定的百分比收率为98%，粗制物无需进一步纯化即用于随后的放射性标记步骤中。MALDI高分辨率质谱(M+H)；计算1022.3647，发现1022.4085,C45H58N5O20P+。
DBCO-PEG4-CTT-54.2[6].将化合物8(31.6mg,0.0229mmol)溶于0.60ml的100mMK2CO3缓冲液中。将溶于0.40ml DMSO DBCO-PEG4-NHS(25mg,0.036mmol)加至8并搅拌3h。通过HPLC测定的百分比收率为90%，粗制物无需进一步纯化即用于随后的放射性标记步骤中。MALDI高分辨率质谱(M-H+2Na)：计算1067.3121，发现1067.4208，C45H58N4Na2O21P+。
实施例5固相化学合成
将DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中的Fmoc-高丝氨酸-OH(1eq.)和DIEA(二异丙基乙胺)(2eq.)与2-氯三苯甲基氯树脂混合并温育过夜。排出溶液并用DMF洗涤树脂，之后在甲醇/DIEA/二氯甲烷的溶剂混合物中温育20min。
然后，利用标准固相肽合成方法，如方案1(树脂2)中所述用所需序列顺序装配该树脂。下面为试剂名单。
(i) DMF中的20%哌啶，10min
(ii) Fmoc-Glu-OBzl(2eq)，HBTU(2eq)，DIEA(4eq)，4h
(iii) 重复步骤(i)
(iv) Fmoc-4-(氨乙基)苯甲酸(2eq)，HBTU(2eq)，DIEA(4eq)，4h
(v) 重复步骤(i)
(vi) DOTA三苄基酯(1.2eq)，HBTU(2eq)，DIEA(4eq)，4h
再次将树脂排干，用DMF和二氯甲烷洗涤，并在真空中干燥2小时。然后使树脂在干二氯甲烷中膨胀20分钟，并与吡啶中的亚磷酸二苯酯(2eq)混合并温育12小时。这之后是与吡啶/二氯甲烷中的苄醇(2eq)温育过夜，得到树脂3，之后添加H-Glu(OBzl)-OBzl·pTsOH(2eq)、DIEA(4eq)和CCl4/二氯甲烷混合物(1/1)，并另外温育12h(树脂4)。充分洗涤并在真空中干燥2小时之后，将乙酸/二氯甲烷的裂解混合物(2:1)添加至干树脂中并温育1小时。过滤收集溶液并用二氯甲烷洗涤树脂。合并并浓缩滤液。残留物用冷乙醚处理，以提供粗制物。将粗制物通过柱色谱法纯化。浓缩适当的馏分，并在10%Pd/C和H2存在下在THF/水/NaHCO3(8eq.)中通过氢化作用还原18小时。滤除催化剂并用水洗涤(5mL)。合并滤液，浓缩至干燥，用乙腈、乙酸乙酯和乙醚洗涤，每种三次，真空干燥。
方案1.CTT1156的固相合成
实施例6稳定性研究
基于利用CTT54的丝氨酸基固件进行的初步标记和去保护研究，记录酸和碱的稳定性问题。CTT54及其已包含前体在碱性条件下的不稳定是由于丝氨酸上的β-消除产生了脱氢丙氨酸衍生物。酸不稳定性集中在CTT54的P-N键上，这排除了在HPLC流动相中应用酸调节剂。发现在CTT54骨架中用高丝氨酸或2(3-羟丙基)甘氨酸替换丝氨酸解决了酸和碱的稳定性问题。高丝氨酸类似物最初被称为hCTT54，后来更正式地被称为CTT1000。2(3-羟丙基)甘氨酸被称为TG97和CTT2000。预料到碱稳定性，因为与磷酸化丝氨酸残基相关的β-消除问题会被阻止。然而，酸稳定性是出乎意料的。除了稳定性改进之外，这些化合物仍保持与PSMA的结合：CTT1000IC50=15nM，不可逆；CTT2000IC50=27nM，不可逆。
pH稳定性研究
通过31P NMR在不同pH值下利用1M缓冲液来监控hCTT54的室温稳定性：8、7.5、7、6.5、5.5、4.5、4、3、2。利用下述1M缓冲液：HCl-KCl，pH2；柠檬酸盐，pH3&4；乙酸盐，pH4.5和5.5；1M Tris-马来酸盐，pH6.5&7；1M Tris-HCl，pH7.5&8。通过31P NMR测定pH稳定性的步骤如下详述。将样品(～4mg)溶于缓冲液中(～1mL的1M溶液)，得到约5mM分析物溶液(CTT1000或CTT2000)。必要时调整pH(通常利用HCl)；实际pH记录在光谱上，时间定义为t=0。获得初始31P NMR光谱(t～0.5h)并且每小时取得(1-8h)。31P NMR的外标为三苯基氧化膦(27ppm)。
下降至4.5，hCTT54/CTT1000的未结合的核稳定8小时，没有可检测到的水解；通过质谱在NMR样品中没有观察到可能的水解产物。这种酸稳定性使得能够在HPLC流动相中利用酸性调节剂和酸不稳定性保护基诸如tBu。下降至3，抑制剂核TG97/CTT2000稳定8小时，没有可检测到的水解。
实施例7放射显像研究
将在0.1M HCl中的0.68mci Ga-68(0.26mL)与75μl乙酸钠缓冲液(pH6.5)混合，将pH调整至4.5-5.0。将30μg CTT1156(10mg/mL)加至该混合物中并在90℃温育10min。通过HPLC分析标记(Luna5μHILIC200A250x4.6mm柱)，Ga-68标记的CTT1156从溶剂梯度洗脱。溶剂A10mM醋酸铵、溶剂B AcCN，开始于25%的A和75%的B，0-15min，溶剂A25%-50%，15-18min，1:1溶剂A和B，以及18-20min，溶剂A从50%到25%。
温育之后，将混合物冷却至室温。通过HPLC分析标记收率(0.1mci混合物注入(50μl)HILIC柱中)。在10min时洗脱出Ga-68标记的CTT1156，并用HILIC柱纯化。真空下用氮气流去除有机溶剂。
将0.080mci Ga-68标记的CTT1156(0.25ml)在上肋两侧注入具有Ln-cap肿瘤的小鼠中。
PET/CT动态扫描，从0到1小时。
将16μci Ga-68标记的CTT1156注入具有Ln-cap肿瘤的小鼠中，并在注入后1小时进行生物分布，如图6所示。
实施例84-硝基-苄基四异丙基磷酰二亚胺(phosphorodiamidite)[(iPr2N)2P(OpNb)]的合成
在0℃、氮气氛中，搅拌下，在40分钟内向二异丙胺(DIPA,50.0g,544mmol)的无水己烷(230mL)溶液中滴加三氯化磷(18.7g,136mmol)的无水己烷(30mL)溶液。将混合物在室温下搅拌3h，然后在回流下加热4天。在0℃、氮气氛中，搅拌下，在1h内向用TEA中和的反应混合物中添加4-硝基苄醇(pNb-OH,21g,MW153.14,136mmol)和TEA(13.8g,136mmol)的无水EtOAc溶液(100mL)。在室温搅拌30min后，滤除沉淀的盐并用己烷(50mL)洗涤一次。合并滤液并在减压下浓缩。将残留物溶于己烷(350mL)中，用乙腈(30mL×3)洗涤溶液，之后在减压下蒸发。在硅胶上通过柱色谱法纯化油状残留物(硅胶用己烷:TEA10:1充分预洗涤)，通过用己烷:TEA(100:1)洗脱获得为固体粉末的纯化(iPr2N)2P(OpNb)。MS：计算383.23，发现384.26。重量：24g，收率：46%。
实施例9N-Fmoc-L-高丝氨酸的合成
L-高丝氨酸(15g,MW119.12,0.126mol)和NaHCO3(22g,MW84,0.26mol)溶于水(600mL)中。使溶液在冰浴中冷却，之后添加丙酮(400mL)中的Fmoc-OSu(42.5g,MW337.3,0.126mol)。将混合物搅拌过夜。添加乙醚/水混合物(200mL/200mL)，并滤出固体。分离滤液并用乙基(100mL×2)洗涤水相两次，之后用3N HClaq(约100mL)酸化至pH3-4。悬浮液用乙醚(200mL×2)萃取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤一次并经Na2SO4干燥。蒸发后，得到白色固体(重量：38g，收率：88%)。
实施例10N-Fmoc-L-高丝氨酸苄酯的合成
将Fmoc-HS-OH(10g,MW341,29.3mmol)溶于二噁烷(75mL)中。搅拌的同时，将NaHCO3(2.7g,MW84,32mmol)水溶液(40mL)滴加到溶液中，之后搅拌30min。在减压下蒸发之后，将残留物溶于DMF(100mL)中。将溶液在冰浴中冷却，之后添加苄基溴(5.0g,MW171,29.2mmol)。使混合物搅拌5h。减压下蒸发溶剂，并用EtOAc/5%NaHCO3水溶液(100mL/100mL)分配残留物。分离有机相并将水相用EtOAc萃取两次(50mL×2)。合并有机相并用5%NaHCO3水溶液洗涤(50mL)，经Na2SO4干燥。蒸发溶剂，得到白色粉末(重量：7.5g，收率：60%)。
实施例11化合物1的合成
将Fmoc-HS-OBzl(5g,MW431.5,11.6mmol)和(iPr2N)2P(OpNB)(5.5g,MW383,14.4mmol)溶于DCM(100mL)中。将溶液在冰浴中冷却，之后添加四叠氮化二异丙基铵(diisopropylammonium tetrazolide)(DIHT,2.4g,MW170.26,14.1mmol)。使溶液在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂，并将残留物溶于乙腈中。滤出不溶性固体并用乙腈洗涤一次(10mL)。合并滤液，并在40℃用乙腈/水(25mL/15mL)中的5-SET(4.5g,MW130.13,34.6mmol)温育1h。蒸发后，残留物在EtOAc/水(100mL/50mL)中分配，用1N HCl(3x30mL)、10%NaHCO3(3x30mL)和盐水(30mL)洗涤一次，经Na2SO4干燥。残留物通过柱色谱法纯化(洗脱液：己烷/EtOAc,1/1)。重量：4.3g，收率：60%。
实施例12化合物2的合成
化合物1(3g,MW630.58,4.75mmol)、H-Glu(OBzl)2·TsOH(2.4g,MW499.5,4.8mmol)和三乙胺(TEA,2mL,MW101,d0.72,14.4mmol)在DCM(50mL)中混合。澄清液在冰浴中冷却并添加CCl4(1.4mL,MW153.82,d1.59,14.5mmol)，之后在室温下搅拌1h。蒸发溶剂，将残留物溶于EtOAc(50mL)中，用1N HCl(30mL×2)、5%NaHCO3(30mL×2)和盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥。蒸发后，残留物通过硅胶上的急骤层析纯化(洗脱液：己烷/EtOAc,1/1)。重量：3g，收率：70%。
实施例13化合物3的合成
将化合物2(3g,MW955.94,3.1mmol)用DCM(20mL)中的20%4-甲基哌啶温育10min。减压下蒸发溶剂，将残留物用己烷稀释并蒸发。残留物通过硅胶上的柱色谱法纯化(洗脱液：DCM/MeOH,5/1)，产生油状物(重量：1.5g)。将该油状物与DCM(75mL)中的Boc-Glu-OBzl(0.7g,MW337.4,2mmol)/HBTU(0.84g,MW379,2.2mmol)/NMM(0.7mL,MW101,d0.92,6mmol)混合3h。蒸发溶剂之后，将残留物溶于EtOAc(50mL)中，并将溶液用1N HCl(30mL×2)洗涤三次，5%NaHCO3(30mL×2)洗涤三次，以及盐水洗涤一次(30mL)，经Na2SO4干燥，然后通过硅胶上的急骤层析纯化(洗脱液：己烷/EtOAc,1/1)。重量：1.7g。总收率：52%。
实施例14CTT1000盐酸盐的合成
将化合物3(1.5g,MW1053,1.4mmol)用二噁烷(15mL)中的4M HCl溶液温育1h。蒸发溶剂，残留物用己烷稀释并蒸发至干燥。残留物在真空中干燥过夜，产生浅黄色固体。重量：1.4g。收率：100%。
三苄基DOTA酯(Bzl3-DOTA-OH·TFA)的合成路径
实施例151,4,7-三(苄氧羰基-甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷氢溴酸盐的合成
(1,4,7,10-四氮杂环十二烷)
在氩气氛下，将溶于25mL无水氯仿中的溴乙酸苄酯(15.2mL,MW229,d1.446,96mmol)滴加至1,4,7,10-四氮杂环十二烷(cyclen)(5g,MW172.28,29mmol)和三乙胺(41mL,MW101,290mmol)在250mL无水氯仿中的混合物中。将反应混合物搅拌20h。所得溶液用水洗涤(3x40mL)，有机相通过Na2SO4干燥。去除溶剂，粗制物通过硅胶上的急骤层析纯化(洗脱液：DCM/MeOH,5/1)，得到淡黄色油状物(重量：14g，收率：70%)。
实施例16叔丁基三苄基DOTA酯的合成
将1,4,7-三(苄氧羰基-甲基)-1,4,7,10-四氮杂环十二烷氢溴酸盐(13g,MW697.7,18.6mmol)溶于50mL无水乙腈和K2CO3(5.1g,MW138,37mmol)的混合物中。然后添加乙腈(15mL)中的溴乙酸叔丁酯(3mL,MW195,d1.32,20.3mmol)。使悬浮液在N2下于70℃搅拌12h。通过薄层色谱板监控反应。在所有原材料都消耗之后，过滤所得混合物。减压下浓缩滤液，残留物通过硅胶上的急骤层析纯化(DCM/MeOH,10/1)，得到叔丁基三苄基DOTA酯(12g，收率：90%)。
实施例17三苄基DOTA酯(Bzl3-DOTA-OH·TFA)的合成
在冰浴中将叔丁基三苄基DOTA酯(12g,MW730.89,16.4mmol)与95%TFA/TES(100mL)混合。使溶液在室温下温育过夜，之后蒸发。添加己烷(100mL)并将混合物蒸发至干燥。残留物用乙醚研磨两次(50mL×2)，然后通过硅胶上的急骤层析纯化(DCM/EtOH=5/1)，得到产物(重量：7g，收率：54%)。
CTT1156&1157的合成路线
实施例18N-Boc-4--氨基乙基苯甲酸(Boc-AEB-OH)的合成
将对氨基乙基苯甲酸盐酸盐(5g,MW201.5,24.8mmol)和NaHCO3(5.2g,MW84,62mmol)溶于水(200mL)中。将溶液在冰浴中冷却，之后添加乙腈(50mL)中的Boc2O(5.4g,MW218,24.8mmol)。将混合物搅拌过夜。减压下浓缩所得溶液。剩余的水溶液用3N HClaq酸化至pH3.0，过滤收集沉淀。将滤饼用水洗涤一次(30mL)并真空干燥，得到白色粉末(重量：4.5g，收率：59%)。
实施例19化合物5的合成
在DCM(50mL)中混合CTT1000-HCl(0.9g,MW1053,0.85mmol)、Boc-AEB-OH(0.23g,MW265.3,0.86mmol)、HBTU(0.39g,MW379,1.0mmol)和NMM(0.28mL,MW101,d0.92,2.5mmol)。使混合物搅拌过夜，之后浓缩。将残留物溶于EtOAc(50mL)中并用1M HCl洗涤两次(20mL×2)，用5%NaHCO3洗涤两次(20mL×2)，以及用盐水洗涤一次(20mL)，经Na2SO4干燥。残留物在蒸发后无需纯化直接施用。重量：0.84g。收率：82%。
实施例20化合物6(CTT1156前体)的合成
将化合物5(0.8g,MW1200,0.67mmol)和4M HCl在二噁烷(10mL)中混合并温育1h。蒸发溶剂，将残留物与己烷共蒸发一次(50mL)。残留物用Bzl3-DOTA-OH·TFA(0.5g,MW789,0.6mmol)、HBTU(0.26g,MW379,0.69mmol)和NMM(0.33mL,MW101,d0.92,3mmol)在DCM(50mL)中温育过夜。蒸发后，残留物溶于EtOAc(50mL)中并用1M HCl洗涤一次(20mL)，盐水洗涤一次(20mL)，5%NaHCO3洗涤一次(20mL)，经Na2SO4干燥。蒸发后，残留物通过硅胶上的急骤层析纯化(洗脱液：DCM/MeOH,100/1to100/5)。重量：220mg，总收率：21%。
实施例21CTT1156八钠盐的合成
将化合物6(220mg,MW1756.88,0.125mmol)溶于THF(15mL)中，之后添加重蒸馏水(10mL)中的NaHCO3(84mg,MW84,1.0mmol)和10%Pd/C(220mg)。在1atm H2下使氢化作用进行18h。滤出催化剂并用重蒸馏水洗涤两次(5mL×2)。合并滤液，并进一步通过注射器式滤器过滤。将滤液蒸发至干燥，残留物用乙腈研磨两次(25mL×2)，用丙酮洗涤一次(15mL)，乙酸乙酯三次(20mL×3)，以及乙醚一次(20mL)，在真空干燥5h，产生灰白色粉末。重量：115mg，收率：79%。
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定义
如本文所用的，术语“细胞”是指体外的、离体的或体内的细胞。在一些实施方式中，离体细胞可以是自诸如哺乳动物的生物体切割的组织样品的一部分。在一些实施方式中，体外细胞可以是细胞培养物中的细胞。在一些实施方式中，体内细胞是存活于诸如哺乳动物的生物体中的细胞。
如本文所用的，术语“接触”是指使体外系统或体内体系中所示的部分在一起。例如，使PSMA与化合物“接触”包括本文所述的化合物施用于个体或患者，诸如人类，以及，例如，将化合物引入含有含PSMA的细胞或纯化制剂的样品中。
如本文所用的，可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任意动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、犬、猫、猪、牛、羊、马或灵长类，最优选人类。
如本文所用的，短语“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的酸加成盐和溶剂合物以及碱加成盐和溶剂合物。这类药学上可接受的盐包括诸如下述的酸的盐：盐酸、磷酸、氢溴酸、磺酸、亚磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、硝酸、苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、马来酸、氢碘酸、链烷酸(诸如乙酸，HOOC-(CH2)n-COOH，其中n是0-4)等。无毒的药学上可接受的键加成盐包括诸如下述的碱的盐：钠盐、钾盐、钙盐、铵盐等。在某些实施方式中，药学上可接受的盐为钠盐。本领域技术人员知晓很多种无毒的药学上可接受的加成盐。
适合肠胃外施用(诸如例如，通过关节内(关节中)、静脉内、肌内、皮内、腹膜内以及皮下途径)的药物组合物包括水性和非水性等渗无菌注射液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与预期受体的血液等渗的溶质；以及包括水性和非水性无菌混悬剂，其可包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。组合物例如可通过静脉输注、经口、局部、腹膜内、膀胱内或鞘内施用。
如本文所用的，除非另外说明，短语“烷基”是指含有1-10个碳原子的直链或支链。烷基的代表性实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基和正癸基。当“烷基”基团是两个其他部分之间的连接基时，其还可以是直链或支链；实例包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CHC(CH3)-、-CH2CH(CH2CH3)CH2-。
如本文所用的，短语“芳基”是指苯基(即，单环芳基)，或含有至少一个苯环的双环体系，或者芳族双环体系，在该芳族双环体系中仅含碳原子。双环芳基可以是薁基、萘基或与单环环烷基、单环环烯基或单环杂环基稠合的苯基。该双环芳基通过该双环体系的苯基部分中所含的任意碳原子而连接至母分子部分，或通过萘环或薁环内的任意碳原子而连接至母分子部分。双环芳基的稠合的单环环烷基或单环杂环基部分任选被一个或多个氧代和/或硫代(thia)基团取代。双环芳基的代表性实例包括但不限于薁基、萘基、二氢茚-1-基、二氢茚-2-基、二氢茚-3-基、二氢茚-4-基、2,3-二氢吲哚-4-基、2,3-二氢吲哚-5-基、2,3-二氢吲哚-6-基、2,3-二氢吲哚-7-基、茚-1-基、茚-2-基、茚-3-基、茚-4-基、二氢萘-2-基、二氢萘-3-基、二氢萘-4-基、二氢萘-1-基、5,6,7,8-四氢萘-1-基、5,6,7,8-四氢萘-2-基、2,3-二氢苯并呋喃-4-基、2,3-二氢苯并呋喃-5-基、2,3-二氢苯并呋喃-6-基、2,3-二氢苯并呋喃-7-基、苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-4-基和苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基。在某些实施方式中，双环芳基是萘环或与下述稠合的苯环：5或6元单环环烷基、5或6元单环环烯基或5或6元单环杂环基，其中所述稠合环烷基、环烯基和杂环基被一个或两个独立为氧代或硫代(oxo或thia)的基团任选取代。
如本文所用的，短语“环烷基”是指单环或双环环烷基环体系。单环环体系含3-8个碳原子的环状烃基团，其中此类基团可以是饱和的或不饱和的，但不是芳族的。在某些实施方式中，环烷基基团是完全饱和的。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基和环辛基。双环环烷基环体系是桥连的单环或稠合的双环。桥连单环含单环环烷基环，其中该单环的两个非邻近的碳原子通过一个与三个其他碳原子之间的亚烷基桥连接(即，形式为-(CH2)w-的桥连基团，其中w为1、2或3)。双环环体系的代表性实例包括但不限于双环[3.1.1]庚烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷、双环[3.2.2]壬烷、双环[3.3.1]壬烷和双环[4.2.1]壬烷。稠合双环环烷基环体系含有与苯基、单环环烷基、单环环烯基、单环杂环基或单环杂芳基稠合的单环环烷基环。桥连的或稠合的双环环烷基通过单环环烷基内所含的任意碳原子连接至母体分子部分。环烷基基团被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。在某些实施方式中，稠合双环环烷基为与苯环、5或6元单环环烷基、5或6元单环环烯基、5或6元单环杂环基或5或6元单环杂芳基稠合的5或6元单环环烷基环，其中该稠合双环环烷基被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。
如本文所用的，“环烯基”是指单环或双环环烯基环体系。单环环体系是含有3-8个碳原子的环状烃基团，其中此类基团是不饱和的(即，含有至少一个环状碳碳双键)，但不是芳族的。单环环体系的实例包括环戊烯基和环己烯基。双环环烯基环是桥连的单环或稠合的双环。桥连单环含单环环烯基，其中该单环的两个非邻近的碳原子通过一个与三个另外碳原子之间的亚烷基桥连接(即，形式为-(CH2)w-的桥连基团，其中w为1、2或3)。双环环烯基的代表性实例包括但不限于降冰片烯基(norborneneyl)和双环[2.2.2]辛-2-烯基。稠合双环环烯基环体系含有与下述稠合的单环环烯基环：苯基、单环环烷基、单环环烯基、单环杂环基或单环杂芳基。桥连或稠合双环环烯基通过单环环烯基环内所含的任意碳原子连接至母体分子部分。环烯基基团被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。
如本文所用的，短语“杂芳基”是指单环杂芳基或含有至少一个杂放芳环的双环环体系。单环杂芳基可以是5或6元环。5元环由两个双键和一个、两个、三个或四个三氮原子以及任选的一个氧或硫原子组成。6元环由三个双键和一个、两个、三个或四个氮原子组成。5或6元杂芳基通过该杂芳基内所含的任意碳原子或任意氮原子连接至母体分子部分。单环杂芳基的代表性实例包括但不限于呋喃基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、吡咯基、四唑基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基和三嗪基。双环杂芳基由与苯基、单环环烷基、单环环烯基、单环杂环基或单环杂芳基稠合的单环杂芳基组成。双环杂芳基基团的稠合环烷基或杂环基部分被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。当双环杂芳基含有稠合环烷基、环烯基或杂环基环时，则双环杂芳基基团通过该双环环体系的单环杂芳基部分所含的任意碳或氮原子连接至母体分子部分。当双环杂芳基是稠合至苯环的单环杂芳基时，则双环杂芳基基团通过该双环环体系内的任意碳原子或氮原子连接至母体分子部分。双环杂芳基的代表性实例包括但不限于本命咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁二唑基、苯并噁噻二唑基、苯并噻唑基、噌啉基、5,6-二氢喹啉-2-基、5,6-二氢异喹啉-1-基、呋喃并吡啶基、吲唑基、吲哚基、异喹啉基、萘啶基(naphthyridinyl)、喹啉基、嘌呤基、5,6,7,8-四氢喹啉-2-基、5,6,7,8-四氢喹啉-3-基、5,6,7,8-四氢喹啉-4-基、5,6,7,8-四氢异喹啉-1-基、噻吩并吡啶基、4,5,6,7-四氢苯并[c][1,2,5]噁二唑基和6,7-二氢苯并[c][1,2,5]噁二唑-4(5H)-酮基。在某些实施方式中，稠合双环杂芳基是与下述稠合的5或6元单环杂芳环：苯环、5或6元单环环烷基、5或6元单环环烯基、5或6元单环杂环基或5或6元单环杂芳基，其中所述稠合环烷基、环烯基和杂环基被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。
如本文所用的，短语“杂环基”是指单环杂环或双环杂环。单环杂环是含有至少一个独立选自O、N和S的杂原子的3、4、5、6或7元环，其中该环是饱和的或不饱和的，但不是芳族的。3或4元环含一个选自O、N和S的杂原子。5元环含0或1个双键以及一个、两个或三个选自O、N和S的杂原子。6或7元环0、1个或2个双键以及一个、两个或三个选自O、N和S的杂原子。单环杂环通过该单环杂环内所含的任意碳原子或任意氮原子连接至母体分子部分。单环杂环的代表性实例包括但不限于氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基(azepanyl)、吖丙啶基、二氮杂环庚烷基(diazepanyl)、1,3-二噁烷基、1,3-二氧戊环基、1,3-二硫戊环基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、吗啉基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、硫代吗啉基-1,1-二氧化物(1,1-dioxidothiomorpholinyl)、噻吡喃基和三噻烷基。双环杂环是与苯基、单环环烷基、单环环烯基、单环杂环或单环杂芳基稠合的单环杂环。双环杂环通过该双环环体系的单环杂环部分内所含的任意碳原子或任意氮原子连接至母体分子部分。双环杂环基的代表性实例包括但不限于2,3-二氢苯并呋喃-2-基、2,3-二氢苯并呋喃-3-基、吲哚啉-1-基、吲哚啉-2-基、吲哚啉-3-基、2,3-二氢苯并噻吩-2-基、十氢喹啉基、十氢异喹啉基、八氢-1H-吲哚基和八氢苯并呋喃基。杂环基基团被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。在某些实施方式中，双环杂环基是与下述稠合的5或6元单环杂环：苯环、5或6元单环环烷基、5或6元单环环烯基、5或6元单环杂环基或5或6元单环杂芳基，其中双环杂环基被一个或两个独立为氧代或硫代的基团任选取代。
如本文所用的，短语“氧代(oxo)”是=O基团
如本文所用的，短语“饱和的”是指所提及的化学结构不含任何多重碳碳键。例如，如本文定义的饱和环烷基包括环己基、环丙基等。
如本文所用的，短语“硫代(thia)”是指=S基团。
如本文所用的，短语“不饱和的”是指所提及的化学结构含有至少一个多重碳碳键，但其不是芳族的。例如，如本文定义的不饱和环烷基包括环己烯基、环戊烯基、环己二烯基等。

Claims (25)

1.下式的化合物，
或其药学上可接受的盐，其中
n是1-10；且R为与螯合剂结合的二价连接基团，
其中所述二价连接基团选自下述，其中在各种情况中，*-末端被连接至所述螯合剂，
(a)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是1-30；
(b)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中r和q独立为0-30，以及G为-O-或-N(H)-；
(c)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是1-30，G为-O-或-N(H)-，且r和q各自独立为0–30，
(d)-(C(O)-(CH2)r-苯基-(G)0-1-(CH2)q-(C(O))0-1-NH)-(C(O)(CH2)p-(C(O))0-1-NH)-*，其中p是1-30，G为-O-或-N(H)-，且r和q各自独立为0–30，
(e)
其中，
L2是-(CH2)tN(H)-*，其中t是1至30；和
L3是#-(CH2)u-C(O)-、#-(CH2)u-Z-Y-C(O)-、#-C(O)-(CH2)u-C(O)-或#-C(O)-(CH2)u-Z-Y-C(O)-，其中
L3的#末端连接至上述的二苯并环辛炔或三唑基基团，
u是1至30；
Y是**-CH2CH2-(OCH2CH2)n-，其中n是1-20，且其中**-末端连接至Z；且
Z是-C(O)O-、-C(O)N(R00)-、-OC(O)-、-N(R00)C(O)-、-S(O)2N(R00)-、-N(R00)S(O)2-、-OC(O)O-、-OC(O)N(R00)-、-N(R00)C(O)O-或-N(R00)C(O)N(R00)-，其中各R00独立为氢或C1-C6烷基；或
(s)共价键，
其中所述螯合剂为任选与选自89Zr、64Cu、68Ga、186/188Re、90Y、177Lu、153Sm、213Bi、225Ac或223Ra的PET-活性或治疗放射性同位素结合的DOTA、NOTA、PCTA、DO3A或去铁敏。
2.如权利要求1所述的化合物，其中所述PET-活性放射性同位素为89Zr。
3.如权利要求1所述的化合物，其中所述PET-活性放射性同位素为64Cu。
4.如权利要求1所述的化合物，其中所述PET-活性放射性同位素为68Ga。
5.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为186/188Re。
6.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为90Y。
7.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为177Lu。
8.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为153Sm。
9.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为213Bi。
10.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为225Ac。
11.如权利要求1所述的化合物，其中所述治疗放射性同位素为223Ra。
12.如权利要求1所述的化合物，其中所述螯合剂为DOTA。
13.如权利要求1所述的化合物，其中所述螯合剂为NOTA。
14.如权利要求1所述的化合物，其中所述螯合剂为PCTA。
15.如权利要求1所述的化合物，其中所述螯合剂为DO3A。
16.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式
或其药学上可接受的盐。
17.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式
或其药学上可接受的盐。
18.如权利要求1所述的化合物，其为
19.药物组合物，其包含权利要求1-18任一项所述的化合物和药学上可接受的载体。
20.如权利要求1-18中任一项所述的化合物或包含权利要求1-18任一项所述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物在制备用于使患者中一个或多个前列腺癌细胞显像的试剂中的应用。
21.一种制备如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐的方法，其中所述方法包括：
提供下式的化合物
其中R’是任选经保护的螯合基团；
各RP独立为保护基；
当R’是未保护的螯合基团时，
任选使所述化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合，以提供强放射性化合物，和
从所述强放射性化合物去除所述保护基；或
当R’是经保护的螯合基团时，
从所述化合物中去除所述保护基；和
任选使去保护的化合物的螯合基团与PET-活性放射性同位素结合。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述化合物通过使利用下式的化合物
其中V是二价连接基团；
及*-表示与所述树脂的连接点，
进行修饰的第一树脂经受适合从所述第一树脂裂解下式化合物
的条件来制备。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述第一树脂通过使利用下式的化合物进行修饰的第二树脂与下式的化合物在适合产生所述第一树脂的条件下接触来制备。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述第二树脂通过使利用下式的化合物
修饰的第三树脂与亚磷酸二苄酯和任选取代的苄醇在适合产生所述第二树脂的条件下顺序接触来制备。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述第三树脂通过使用下式的化合物修饰的第四树脂与下式的化合物在适合产生所述第三树脂的条件下接触来制备。
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