CN103788183B - 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 - Google Patents
多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103788183B CN103788183B CN201210423075.1A CN201210423075A CN103788183B CN 103788183 B CN103788183 B CN 103788183B CN 201210423075 A CN201210423075 A CN 201210423075A CN 103788183 B CN103788183 B CN 103788183B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- polypeptide
- present
- diabetes
- detection means
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 101
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 86
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 83
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 26
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 25
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 16
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 abstract description 21
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical class O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 14
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 7
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 6
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 5
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 5
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 4
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 4
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 4
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 3
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 3
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 208000001921 latent autoimmune diabetes in adults Diseases 0.000 description 3
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 3
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 3
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- CVEPFOUZABPRMK-UHFFFAOYSA-N 2-methylprop-2-enoic acid;styrene Chemical compound CC(=C)C(O)=O.C=CC1=CC=CC=C1 CVEPFOUZABPRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000825079 Homo sapiens Transcription factor SOX-13 Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102100022435 Transcription factor SOX-13 Human genes 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 229940093476 ethylene glycol Drugs 0.000 description 2
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- WGLQHUKCXBXUDV-UHFFFAOYSA-N 3-aminophthalic acid Chemical compound NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1C(O)=O WGLQHUKCXBXUDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical class [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000023852 carbohydrate metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021256 carbohydrate metabolism Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000035850 clinical syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 208000004104 gestational diabetes Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- UQEAIHBTYFGYIE-UHFFFAOYSA-N hexamethyldisiloxane Polymers C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C UQEAIHBTYFGYIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000005660 hydrophilic surface Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxybutanediamide Chemical compound NC(=O)CCC(=O)NO HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002940 repellent Effects 0.000 description 1
- 239000005871 repellent Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6884—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids from lung
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/04—Endocrine or metabolic disorders
- G01N2800/042—Disorders of carbohydrate metabolism, e.g. diabetes, glucose metabolism
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/12—Pulmonary diseases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒。本发明的多肽由SEQ？ID？NO：1所示的氨基酸序列构成。本发明的多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒在糖尿病和/或结核病的诊断中是有用的。
Description
技术领域
本发明主要涉及多肽、包含该多肽的检测器件及检测试剂盒，属于生物技术领域。
背景技术
糖尿病(Diabetes Mellitus， DM)是由遗传和环境因素共同引起的一组以糖代谢紊乱为主要表现的临床综合征。胰岛素缺乏和胰岛素作用障碍单独或同时引起糖类、脂肪、蛋白质、水和电介质等的代谢紊乱，临床以慢性高血糖为主要特征。典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。
在欧洲糖尿病学会(European Association forthe Study of Diabetes，EASD)2011年会上，国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation，IDF)发布最新数据显示：2011年全世界糖尿病患病人数已达3.66亿，较2010年的2.85亿增加近30%。每年有460万人死于糖尿病，用于糖尿病的医疗费用高达4650亿美元。IDF主席Jean ClaudeManbaya教授说：“在2011年，每7秒钟就有1人因糖尿病死亡，警钟正在敲响”。据中国之声2011年11月报道，我国已确诊的糖尿病患者人数高达9240万人，为世界第一。全国20岁以上的成人中，糖尿病发病率高达9.7%。
糖尿病按其病因学分类可分为1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及特殊类型糖尿病。
目前医院主要依据临床表现（如1型糖尿病多发于青少年时期，且有典型的“三多一少”症状，依赖于胰岛素等）区分1型和2型糖尿病，对分型不明确的糖尿病患者如成人隐匿性自身免疫性糖尿病（latent autoimmune diabetes in adults，LADA）、及确诊1型糖尿病则需要检测1型糖尿病自身抗体来辅助诊断。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对糖尿病、特别是1型糖尿病的诊断有用的多肽、编码该多肽的核酸、包含该核酸的表达载体、导入了该表达载体的宿主细胞、抗该多肽的抗体、包含该多肽的检测器件、包含该多肽或该检测器件的检测试剂盒、以及该多肽在检测1型糖尿病中的用途、该多肽在制备用于检测1型糖尿病的试剂盒或检测器件中的用途。
此外，发明人还发现，本发明的多肽对于结核病的诊断也是有用的。因此，本发明还提供用于检测结核病的多肽、编码该多肽的核酸、包含该核酸的表达载体、导入了该表达载体的宿主细胞、抗该多肽的抗体、包含该多肽的检测器件、包含该多肽或该检测器件的检测试剂盒、以及该多肽在检测结核病中的用途、该多肽在制备用于检测结核病的试剂盒或检测器件中的用途。
即，本发明包含下述技术方案：
1. 由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成的多肽。
2. 编码权利要求1所述的多肽的核酸。
3. 包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4. 导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。
5. 一种检测器件，其包括：
固体载体，以及
连接于该固体载体上的权利要求1所述的多肽。
6.根据权利要求5所述的检测器件，其中，所述固体载体是SJ改性硅胶。
7. 一种检测试剂盒，其包括权利要求1所述的多肽、或者权利要求5或6所述的检测器件。
8. 抗权利要求1所述的多肽的抗体。
9. 权利要求1所述的多肽在制备用于检测1型糖尿病和/或结核病的试剂盒或检测器件中的用途。
将本发明的多肽应用于糖尿病(特别是1型糖尿病)和/或结核病的诊断，能够取得令人满意的效果。
附图说明
图1 将多肽通过化学共价固定于SJ改性硅胶表面的示意图。
图2 对化学合成的本发明的多肽进行确认的HPLC表征图谱。
图3 对化学合成的本发明的多肽进行确认的MS表征图谱。
图 4 对SJ改性硅胶（iPDMS薄膜）的制作过程进行说明的示意图。
图5 对多肽微阵列化学固定过程进行说明的图。
图6 说明多肽微阵列点样模式的示意图。
图7~9 显示对不同血清进行检测的结果的照片。
具体实施方式
本发明的多肽
本发明的多肽是30肽。本发明的30肽由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成，即：HYPNELLQEYNWELADQPQNLEEILMHCQT。如实施例所示，其对1型糖尿病病人的血清呈阳性反应，而对健康正常人或非1型糖尿病且非结核病人血清呈阴性反应。因此，该30肽作为1型糖尿病的诊断工具是有用的。此外，发明人还发现，如实施例所示，本发明的30肽对结核病人的血清呈阳性反应。因此，该30肽作为结核病的诊断工具也是有用的。优选地，本发明的30肽可用作结核病并发1型糖尿病的诊断工具。
本发明的多肽在有市售的情况下，可以使用市售品，此外，还可以适宜采用(1)化学合成方法、或(2)酶反应合成方法等公知方法来获得，其中化学合成更为简便。在化学合成本发明的多肽情况下，通过使用肽合成仪合成或者半合成该多肽来进行。作为化学合成方法，可以列举出例如肽固相合成法等。这样合成的肽可以采用常规手段例如离子交换色谱、反相高效液体色谱、亲和色谱等进行纯化。这样的肽固相合成方法以及其后的肽纯化都是本技术领域公知的。
此外，在通过酶反应生产本发明的多肽的情况下，可以采用例如国际公开小册子WO2004/011653号所述的方法。即，可以这样来生产：将一方的氨基酸或二肽的羧基末端被酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、与氨基酸处于游离状态的氨基酸(例如羧基保护的氨基酸)在肽合成酶的存在下进行反应，生成的二肽或三肽。作为肽合成酶，可以列举出：具有生成肽的能力的微生物的培养物、由该培养物分离的微生物菌体、或该微生物的菌体处理物、或该微生物来源的肽合成酶。
而且，除了上述的酶方法、化学合成方法以外，有些情况下，本发明的多肽还可能是天然存在(但未被分离出来)的。在天然存在的情况下，还可以将其分离出来。
本发明的核酸、表达载体宿主细胞，以及抗本发明的多肽的抗体
本发明还涉及编码该多肽的核酸(本发明的核酸)、包含该核酸的表达载体(本发明的表达载体)、导入了该表达载体的宿主细胞(本发明的宿主细胞)，它们优选可用于生产本发明的多肽。本发明的核酸、表达载体、宿主细胞可以采用本领域技术人员公知的方法来制备。本发明还涉及抗本发明的多肽的抗体，其可用于检测本发明的抗体。本发明的抗体可以采用本领域技术人员公知的方法来制备。
本发明的检测器件
本发明还涉及一种检测器件(本发明的检测器件)，其包括固体载体、以及连接于该固体载体上的本发明的多肽。
在本发明中，对固体载体没有特殊限制，只要是作为固体或不溶性材料(例如是可以通过过滤、沉淀、磁性分离等从反应混合物中分离的材料)的载体即可。
构成固体载体的材料包括但不限于：硅胶（聚二甲基硅氧烷，PDMS）、纤维素、特氟隆TM、硝基纤维素、琼脂糖、葡聚糖、壳聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、聚丙烯、尼龙、聚偏二氟乙烯、胶乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纤维、金、铂、银、铜、铁、不锈钢、铁氧体、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚乳酸、树脂、多糖类、蛋白(白蛋白等)、碳或它们的组合等。
固体载体的形状包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微细管、滤膜、板、微量板、碳纳米管、传感器芯片等。正如本技术领域公知的那样，薄膜或板等平坦的固体载体上可以设置凹坑、沟槽、滤膜底部等。
在本发明中，磁珠可以具有约25nm~约1mm范围的球体直径。在优选的实施方式中，磁珠具有约50nm~约10μm范围的直径。磁珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。
在本发明中，由Sepharose等高交联球形琼脂糖制成的珠子具有约24μm~约165μm范围的直径。优选地，高交联球形琼脂糖珠具有约24μm~约44μm范围的直径。高交联球形琼脂糖珠的尺寸可以根据特定的用途来进行选择。
具有疏水性表面的固体载体的例子包括可从Polysciences， Warrington， PA 或Spherotech，Liberville，IL购买的制品等聚苯乙烯胶乳珠。
二氧化硅(SiO2)-处理或二氧化硅(SiO2)基的固体载体的例子包括可从Polysciences，Warrington，PA购买的超常磁性二氧化硅珠等，其可以用于捕捉核酸(例如DNA)。或者，还可以使用可从Dynal Biotech购买的M-280等。
具有亲水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的细菌细胞、核酸以及其它成分。作为该磁珠的例子，可以列举出Polysciences，Warrington，PA销售的珠子(名称：Biomag(注册商标)羧基)、或者Bangs Laboratory，Inc.，Fishers， IN 的名称为MC02N/2928的珠子。或者，可以使用Dynal Biotech销售的M-270等。
在本发明的一个优选实施方式中，所述固体载体是SJ改性硅胶。苏州偲聚生物材料有限公司开发的一种硅橡胶材质的微阵列固体支撑材料(iPDMS薄膜，参见中国专利CN101265329A)。这种材料是以生物学研究常用的PDMS为基础，在其中加入特定的引发剂成份（使该材料可通过表面引发聚合反应（SIP）实现表面功能化修饰），再经过聚乙二醇甲基丙烯酸酯(poly(oligo(ethylene glycol) methacrylate) ,pOEGMA)表面修饰获得的。SJ改性硅胶具有优秀的抗蛋白质非特异性吸附(Nonspecific protein adsorption, NPA)能力，可以将复杂蛋白免疫检测中的非特异性蛋白质吸附控制到接近“绝对0”水平（接近或低于仪器的检测极限），不仅可以免除封闭和多次清洗的麻烦，还可以通过使用更强的信号扩增手段来提高蛋白质微阵列的灵敏性。而且其硅橡胶的本质赋予了该材料较强的机械性能和良好的可操作性。苏州偲聚已经成功地将SJ改性硅胶应用于11个肿瘤标志物组成的多指标联检微阵列ELISA试剂盒，实现了高通量和高灵敏的检测，证明了这种材料是一种优秀的蛋白质微阵列固体支撑材料。同时，这种材料还具有表面性质可调的特性，可以通过控制修饰反应时间在一定范围内调整其表面形貌。
本发明的多肽与固体载体的连接可以采用本领域技术人员公知的多肽与固体载体的连接方法来进行。例如，对于蛋白质/多肽与改性硅胶表面的连接而言，可以通过1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethyl ami-nopropyl)carbodiimide,EDC]和N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide,NHS)的反应将改性硅胶表面高分子链上的羧基（-COOH）基团改为活化基团，该活化基团可与蛋白/多肽上所带的氨基（-NH2）反应从而实现将蛋白/多肽固定于固体载体表面(参见图1)。
对于点样时使用的点样液中本发明的多肽的浓度没有特殊限制，本领域技术人员可以依常规选择，优选为1μg~1000μg/mL，更优选10μg~500μg/mL。此外，对于本发明的多肽在固体载体上分布的密度没有特殊限制，本领域技术人员可以依常规选择，优选为1~100点/10mm2，更优选5~50点/10mm2。
本发明的检测器件可以用于检测糖尿病（特别是1型糖尿病）和/或结核病、或者制备用于检测糖尿病（特别是1型糖尿病）和/或结核病的试剂盒。
本发明的检测试剂盒
本发明还涉及一种检测试剂盒(本发明的检测试剂盒)，其包括本发明的多肽或检测器件。该检测试剂盒优选用于检测糖尿病（特别是1型糖尿病）和/或结核病，更优选用于检测结核病并发1型糖尿病。
本发明的检测器件或本发明的多肽是本发明的检测试剂盒的要件。本发明的检测试剂盒还可以包括：
1.配好的血清稀释液或血清稀释液组分溶液：血清稀释液，例如有北京赛驰生物科技有限公司的样本稀释液（产品编号070021-S2）、郑州博威嘉生物科技有限公司的加样变色样本稀释液（产品编号bwj010103）等。该血清稀释液用来稀释血清，试剂盒检测的血清要稀释适当倍数，例如2~200倍，优选10~100倍。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
2.浓缩洗液：固体载体表面孵育血清及酶标二抗后，需用洗液清洗掉固体载体表面未结合的抗体和酶标二抗。浓缩洗液例如是1%的吐温20水溶液，使用时需稀释2~40倍、优选5~20倍。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
3.酶标二抗溶液：1型糖尿病病人或结核病病人血清中的1型糖尿病自身抗体或结核病抗体（IgG）可与固体载体（例如SJ改性硅胶）上的本发明的多肽结合，二抗可与抗体结合，而二抗上的标记物可与发光底物反应，从而发出可检测的光。酶标二抗可以是例如辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG。作为酶标二抗溶液，可以列举出北京中杉金桥生物技术有限公司生产的辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG(H+L)，产品编号ZB-2304。对酶标二抗在酶标二抗溶液中的浓度没有特殊限制，可以是例如1ng~1000ng/mL。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
4.发光液组分溶液：发光液可与二抗上标记的辣根过氧化物酶反应，使得反应发出仪器可检测到的化学光。发光液由两种溶液混合而成，分别是A液—过氧化氢溶液，及B液—发光氨溶液。发光氨（鲁米诺）只有用氧化剂处理过才会发光。通常使用双氧水和一种氢氧化物碱的混合水溶液作为激发剂。在辣根过氧化物酶催化下，双氧水分解为氧气和水：
2 H2O2 → O2 + 2 H2O
鲁米诺与氢氧化物反应时生成了一个双负离子，它可被过氧化氢分解出的氧气氧化，产物为一个有机过氧化物。该过氧化物很不稳定，立即分解出氮气，生成激发态的3-氨基邻苯二甲酸。激发态至基态转化中，释放的能量以光子的形式存在，波长位于可见光的蓝光部分。发光液组分溶液的例子例如Thermo Seientific公司的 SuperSignal® ELISAFemto Maximum Sensitivity Substrate，货号37074。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
5.一个或两个以上的反应腔体(例如中国专利授权公告CN202054829U)。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
6.其他用于检测糖尿病（特别是1型糖尿病）和/或结核病的检测分子（例如多肽、蛋白质、核酸等）。
本发明的检测试剂盒还可以包括：
7.使用说明书。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行更具体的说明，但并不是对本发明技术范围的限定。通过本说明书的记载，本领域技术人员可以容易的对本发明进行修饰/改变，这些包含在本发明的技术范围内。
1.30肽的制备与确认
实施例中使用的30肽具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，由吉尔生化（上海）有限公司合成，该多肽的表征图谱见图2和图3，可以确认合成了所述多肽。
2.检测器件的制备
检测芯片是以SJ改性硅胶（iPDMS薄膜）为固体支撑材料，在其上通过点样固定多肽溶液制备而成。改性硅胶是在传统的聚二甲基硅氧烷材料中加入带烯烃末端的、表面引发聚合反应的引发剂，并通过热交联（硅氢键键合）固定到聚二甲基硅氧烷的三维结构中，得到一种新的材料即SJ改性硅胶。其制作过程如图4所示。
其中的A和B为聚二甲基硅氧烷的两个组分，聚二甲基硅氧烷（Poly(dimethylsiloxane)，Sylgard 184）购买自美国道康宁（DowCorning）公司，包含液态组分A（成分为金属铂催化剂与带乙烯基的二甲硅氧烷高分子前体混合物）和交联剂B（成分为带有乙烯基和Si-H 基团的二甲基硅氧烷前体）两种成分。C 为末端带乙烯基的引发剂，购于杭州东伟公司。最后修饰上的高分子是寡聚乙二醇甲基丙烯酸酯单体（Oligo(ethyleneglycol) methacrylate，以下简称OEGMA，分子量Mw = 526）购买于Aldrich。将聚二甲基硅氧烷前体A和交联剂B 与带乙烯基末端的引发剂C 以A:B:C=10:1:0.5比例充分混合。通过固化反应制成透明的弹性硅橡胶，然后通过SIP 技术进行表面修饰即可得到SJ改性硅胶。实验表明，SJ改性硅胶的表面有足够高密度的、通过共价键固定的引发剂，其可以通过表面引发聚合反应（SIP）实现表面高分子修饰。使用poly(OEGMA)（聚乙二醇甲基丙烯酸酯）进行反应获得聚乙二醇（Polyethylene Glycol, PEG） 修饰的表面，实现较强的抗蛋白非特异性吸附的能力。
制好的SJ改性硅胶薄膜需保存在4℃冰箱中。
采用晶芯®PersonalArrayerTM 16个人点样仪在改性硅胶上制备多肽微阵列，过程为：
1）预处理
将SJ改性硅胶薄片（15×15mm2）浸泡在活化液中，30min后取出用去离子水淋洗3次，用氮气吹干，马上用于点样。
2）点样
将点样液稀释好并转移到384 孔板相应的微孔中，将带样本的384 孔板置于点样仪基台上，同时将预处理的改性硅胶薄片置于点样仪的基台上，马上进行点样。点样环境条件为室温（25℃），湿度设定为50%。制成的多肽微阵列上每个点的点样量约为0.6nL，样点半径为200μm。
3）化学固定
刚制好的多肽微阵列要放在恒温恒湿箱（26℃,60%湿度）中固定至少6h。化学固定过程如图5所示。
首先通过点样仪将包含有捕获多肽分子的缓冲液点在改性硅胶薄膜上，接着缓冲液开始蒸发，捕获多肽分子与SJ改性硅胶表面亲密接触并相互作用，通过化学结合，改性硅胶表面的ploy(OEGMA)高分子的末端-COOH 与多肽分子的-—NH2形成稳定共价键，进而将有化学活性的多肽分子固定在SJ改性硅胶表面。
5）装配
固定6h的多肽微阵列必须在两天内装配好。首先通过背胶将SJ改性硅胶薄片贴在专门的反应柱上，盖上反应腔体。一个反应器由两个反应柱和一个反应腔体组成。
6）保存
装配好的多肽微阵列，需要抽真空密封，保存在4℃的冰箱中，备用。
3.用检测器件进行检测
检验步骤
1、开始检测前，将浓缩清洗液按1:10的比例加入纯化水或蒸馏水进行稀释，稀释完成后直接使用。使用移液枪将2mL清洗液加到芯片表面，浸泡芯片3分钟，保证芯片表面被完全浸润。
2、将待测血清样本用样本稀释液按照1:40稀释混匀。
3、弃去浸泡芯片的清洗液，在芯片表面完全湿润的状态下，每个血清样本吸取200μL稀释后的血清加入到芯片反应器内。
4、将芯片反应器放入芯片固定座，放到摇床上，开启摇床，频率150转/分钟，室温孵育30分钟。
5、弃去芯片反应器内的血清样本，用15mL洗液清洗反应腔体和芯片表面3次。
6、清洗完成后，每个芯片反应器分别加入200μL酶标抗体溶液，将芯片反应器放入芯片固定座，放到摇床上，开启摇床，频率150转/分钟，室温孵育30分钟。
7、弃去芯片反应器内的酶标抗体溶液，用15mL洗液清洗反应腔体和芯片表面3次。
8、清洗完成后，取下反应腔体，每个芯片表面分别加入15μL发光底物液，使发光液能均匀的铺于芯片表面。
9、将加入了发光液的芯片置于凝胶成像仪中化学发光成像，并判读结果。
结核病病人血清由江苏省疾控中心提供，均为痰培养确诊了的结核病病人血清，1型糖尿病病人血清及其他疾病病人血清样本由合作医院提供。血清由相关人员用冰块/干冰等包裹运送或快递至实验室。
阴性对照有PBS缓冲液（即在第3步中不用待测血清孵育，而用PBS溶液孵育，其余步骤相同）的对照，血清稀释液的对照，及阴性病人（指健康人血清及非1型糖尿病且非结核病病人）血清的对照。
多肽微阵列的点样模式如图6所示。其中，三角形的20个点的样本为人IgG，作为实验的定位点；正方形的4个点的样本为PB点样液，作为实验的空白对照；圆形点的的样本是其他的1型糖尿病自身抗原蛋白多肽，作为实验的检测指标（这些多肽有响应说明检测血清中有1型糖尿病自身抗体）；星形点的样本多肽即为本发明的多肽SEQ ID NO：1，它是1型糖尿病自身抗原蛋白多肽，会对1型糖尿病患者血清产生响应，也会对结核病人血清产生响应。
实验结果如图7~8所示。其中，图7显示了阴性对照的检测结果，只有三角形所示的点的样本有响应。图8显示了1型糖尿病病人血清的检测结果，三角形、圆形和星形点的样本有响应。图9显示了结核病病人血清的检测结果，三角形和星形点的样本有响应。需要说明的是，仪器测得信号值由低到高，相应的信号点颜色由黑—白渐变。
<110> 苏州偲聚生物材料有限公司
<120> 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒
<130> Sg-10
<160> 1
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> I型糖尿病抗原性多肽
<400> 1
HYPNELLQEYNWELADQPQNLEEILMHCQT 30
Claims (8)
1.由SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列构成的多肽。
2.编码权利要求1所述的多肽的核酸。
3.包含权利要求2所述的核酸的表达载体。
4.导入了权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。
5.一种检测器件，其包括：
固体载体，以及
连接于该固体载体上的权利要求1所述的多肽。
6.根据权利要求5所述的检测器件，其中，所述固体载体是iPDMS薄膜。
7.一种检测试剂盒，其包括权利要求1所述的多肽、或者权利要求5或6所述的检测器件。
8.权利要求1所述的多肽在制备用于检测1型糖尿病的试剂盒或检测器件中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210423075.1A CN103788183B (zh) | 2012-10-30 | 2012-10-30 | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210423075.1A CN103788183B (zh) | 2012-10-30 | 2012-10-30 | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103788183A CN103788183A (zh) | 2014-05-14 |
| CN103788183B true CN103788183B (zh) | 2016-04-13 |
Family
ID=50664276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210423075.1A Expired - Fee Related CN103788183B (zh) | 2012-10-30 | 2012-10-30 | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103788183B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691448A (en) * | 1992-12-03 | 1997-11-25 | Baekkeskov; Steinunn | Reagents and methods for the diagnosis and treatment of diabetes and stiff man syndrome |
| CN101265329A (zh) * | 2007-03-16 | 2008-09-17 | 马雄明 | 一种表面带引发剂的聚二甲基硅氧烷及其制法和用途 |
-
2012
- 2012-10-30 CN CN201210423075.1A patent/CN103788183B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5691448A (en) * | 1992-12-03 | 1997-11-25 | Baekkeskov; Steinunn | Reagents and methods for the diagnosis and treatment of diabetes and stiff man syndrome |
| CN101265329A (zh) * | 2007-03-16 | 2008-09-17 | 马雄明 | 一种表面带引发剂的聚二甲基硅氧烷及其制法和用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Chromogranin A is an autoantigen in type 1 diabetes;Stadinski BD et al;《Nat Immunol》;20100331;第11卷(第3期);全文 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103788183A (zh) | 2014-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103665138B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098685B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098674B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788199B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788195B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098677A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788183B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098684B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098680B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788200B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098686B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788194B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788198B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788202B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788196B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788203B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN103788201B (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098667A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098683A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098668A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098673A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098681A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098670A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098672A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 | |
| CN104098682A (zh) | 多肽、包含该多肽的检测器件和检测试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C56 | Change in the name or address of the patentee | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: Xinghu Street Industrial Park of Suzhou city in Jiangsu province 215123 BioBAY No. 218 building C20 Room 201 Patentee after: SUZHOU SJ BIOMATERIALS Co.,Ltd. Address before: Xinghu Street Industrial Park of Suzhou city in Jiangsu province 215123 BioBAY No. 218 building A4 room 209 Patentee before: SUZHOU SJ BIOMATERIALS Co.,Ltd. |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160413 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |