CN103784437A - Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用 - Google Patents

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刘忠
王一飞
夏敏
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本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用。所述的Hsp90抑制剂为四氢吲唑酮，该化合物作为新型的肿瘤化疗药物增敏剂和增效剂，可以提高多药耐药性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，增强抗肿瘤化疗药物的作用效果。

Description

Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及一种Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用。
背景技术
多药耐药性（multidrugresistance,MDR）是指肿瘤细胞长期接触某一化疗药物，不但对该化疗药物产生抗药性，而且对那些从未接触过的，其结构、功能以及作用机制不相关的的其他化疗药物也产生交叉耐药性。MDR的产生涉及多种机制，是一个复杂的多因素的现象，这些因素包括细胞动力学、药代动力学和细胞耐药机制，涉及多条相关或独立的通路，包括细胞应激的改变，如DNA损伤修复能力增强或是耐受逆境，以及获得性逃避凋亡机制。
国内外针对多药耐药机制进行了广泛研究以寻求拮抗和/或逆转肿瘤细胞MDR的多药耐药逆转剂。当今逆转肿瘤MDR的方法主要是使用化学药物、天然药物以及免疫治疗和基因治疗，它们在理论上可在DNA、RNA和蛋白三个水平阻滞P-gp蛋白的功能发挥。其中，药物治疗是临床上最广泛应用的治疗方案，目前临床使用的多药耐药逆转药物主要包括维拉帕米、奎尼丁、环孢菌素A、潘生丁等等经典药物，还有GSTs的抑制剂利尿酸和丁硫氨酸亚砜胺、对乙酰氨基酚、硒酸钠等GSH抑制药物。然而其效果并不理想，而且高剂量会产生严重的毒副作用，亦无法特异性地作用于肿瘤细胞。此外，针对恶性肿瘤中多药耐药基因的高表达，可运用反义技术、核酶或新兴的RNAi技术，抑制甚至完全封闭有害基因，但基因治疗还存在着很多缺陷，比如靶向性的问题、易被DNA酶降解，高浓度的寡核营酸对细胞会产生毒性作用，治疗效果的持久性等，都限制了其实际应用价值。找到特异性强而毒性副作用小的MDR逆转剂具有重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用；
所述的Hsp90抑制剂为四氢吲唑酮；
所述的四氢吲唑酮为具有如下通式的化合物：
Figure BDA0000452333870000021
其中：
R1为三氟甲基或甲基；
R2为羟基或乙酰氧基；
所述的四氢吲唑酮优选为2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（AT-760）或2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（BJ-B11）；
所述的Hsp90抑制剂可作为新型的肿瘤化疗药物增敏剂和增效剂，可以提高多药耐药性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，增强抗肿瘤化疗药物的作用效果。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
（1）本发明发掘了一种Hsp90抑制剂作为肿瘤多药耐药性逆转剂的新用途；
（2）该化合物不仅具有抗肿瘤（见专利ZL200610087495.1）和抗病毒（见专利ZL200710064821.1和ZL201010299617.x）的作用，而且能够逆转肿瘤细胞多药耐药性。将其作为新型的肿瘤化疗药物增敏剂和增效剂，可以显著提高多药耐药性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，增强化疗药物的作用效果，具有良好的应用前景。
附图说明
图1是2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（AT-760）和2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（BJ-B11）对多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用结果图。
图2是2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（AT-760）和2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（BJ-B11）对K562/ADR细胞内阿霉素积累量的影响结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（AT-760）对多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用：
将K562/ADR细胞以2×105/mL的密度接种于96孔板，分组加入不同浓度化合物处理细胞。一组加入1μM AT-760和不同浓度（0、1、5、10、25、50和100μM）的化疗药物阿霉素（ADR），另一组仅加入不同浓度（0、1、5、10、25、50和100μM）的阿霉素，置于37℃、5%CO2培养箱内培养48h。作用完成后每孔加入20uL MTT(5mg/mL)，37℃继续孵育4h，之后从每孔中小心吸出90μL上清液。随后加入100μL DMSO，37℃避光孵育1h。于BIO-RAD550型酶标仪上570nm波长处测各孔吸收度值(参比波长630nm)，计算出细胞生长抑制率，并以阿霉素浓度作图，求出半数抑制浓度（IC50）和逆转倍数（reversal index,RI）。
图1的结果显示经过1μM的AT-760处理后，K562/ADR细胞对阿霉素的IC50从78.2μM降到了2.5μM，逆转倍数为31倍，显示AT-760可以逆转K562/ADR的多药耐药性，提高多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。
实施例2
2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（AT-760）对多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR内阿霉素积累量的影响：
将K562/ADR细胞以2×105/mL的密度接种于96孔板，加入不同化合物处理细胞。处理方法为每组加入20μM的阿霉素和不同浓度（0、0.5、1、2μM）的AT-760，培养4h后用冷的PBS缓冲溶液（pH7.4）清洗细胞3次终止反应。收集细胞，加入0.3M HCl-50%的乙醇溶液重悬细胞，并于超声波仪上破碎细胞后离心15min，取上清液加入盐酸-乙醇溶液，用荧光酶标仪测定阿霉素的荧光值，激发波长和发射波长分别为470nm和580nm。
图2所示结果显示AT-760可以增加K562/ADR细胞内阿霉素的蓄积量。加入0.5、1、2μM AT-760后可分别使K562/ADR细胞内阿霉素的蓄积量增加1.3、2.3和3.5倍，表明该化合物是通过增加化疗药物阿霉素在肿瘤细胞内的蓄积量而发挥逆转肿瘤多药耐药性的作用。
实施例3
2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（BJ-B11）对多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR的逆转作用：
将K562/ADR细胞以2×105/mL的密度接种于96孔板，分组加入不同浓度化合物处理细胞。一组加入1μM BJ-B11和不同浓度（0、1、5、10、25、50和100μM）的化疗药物阿霉素（ADR），另一组仅加入不同浓度（0、1、5、10、25、50和100μM）的阿霉素，置于37℃、5%CO2培养箱内培养48h。作用完成后每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，37℃继续孵育4h，之后从每孔中小心吸出90μL上清液。随后加入100μL DMSO，37℃避光孵育1h。于BIO-RAD550型酶标仪上570nm波长处测各孔吸收度值(参比波长630nm)，计算出细胞生长抑制率，并以阿霉素浓度作图，求出半数抑制浓度（IC50）和逆转倍数（reversal index,RI）。
图1的结果显示经过1μM的BJ-B11处理后，K562/ADR细胞对阿霉素的IC50从78.2μM降到了3.4μM，逆转倍数为23倍，显示BJ-B11可以逆转K562/ADR的多药耐药性，提高多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。
实施例4
2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺（BJ-B11）对多药耐药性肿瘤细胞K562/ADR内阿霉素积累量的影响：
将K562/ADR细胞以2×105/mL的密度接种于96孔板，加入不同化合物处理细胞。处理方法为每组加入20μM的阿霉素和不同浓度（0、0.5、1、2μM）的BJ-B11，培养4h后用冷的PBS缓冲溶液（pH7.4）清洗细胞3次终止反应。收集细胞，加入0.3M HCl-50%的乙醇溶液重悬细胞，并于超声波仪上破碎细胞后离心15min，取上清液加入盐酸-乙醇溶液，用荧光酶标仪测定阿霉素的荧光值，激发波长和发射波长分别为470nm和580nm。
图2所示结果显示BJ-B11可以增加K562/ADR细胞内阿霉素的蓄积量。加入0.5、1、2μM BJ-B11后可分别使K562/ADR细胞内阿霉素的蓄积量增加1.2、2.1和3.1倍，表明该化合物是通过增加化疗药物阿霉素在肿瘤细胞内的蓄积量而发挥逆转肿瘤多药耐药性的作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用，其特征在于：所述的Hsp90抑制剂为四氢吲唑酮。
2.根据权利要求1所述的Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用，其特征在于：
所述的四氢吲唑酮为具有如下通式的化合物：
Figure FDA0000452333860000011
其中：
R1为三氟甲基或甲基；
R2为羟基或乙酰氧基。
3.根据权利要求2所述的Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用，其特征在于：
所述的四氢吲唑酮为2-(4-羟基环己氨基)-4-(6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺或2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺。
4.根据权利要求1所述的Hsp90抑制剂在制备肿瘤多药耐药性逆转剂中的应用，其特征在于：
所述Hsp90抑制剂作为肿瘤化疗药物增敏剂和增效剂。
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