CN103720703A - 腺苷a2a受体特异性阻断剂对延髓呼吸中枢的作用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了腺苷A2A受体特异性阻断剂对延髓呼吸中枢的作用。本发明提供了腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备具有如下功能的产品中的应用：（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。本发明为相关治疗和预防提供了理论指导和实验依据。
Description
技术领域
本发明涉及腺苷A2A受体特异性阻断剂对延髓呼吸中枢的作用，具体涉及腺苷A2A受体特异性阻断剂对舌下神经根基本节律性呼吸放电和面神经后核内侧区吸气神经元放电的调节作用。
背景技术
呼吸是生命基本体征，是机体存活的前提。呼吸由呼吸肌在呼吸中枢的支配下完成。呼吸中枢指中枢神经系统内产生呼吸节律和调节呼吸运动是神经细胞群,分布在脊髓、延髓、脑桥、间脑和大脑皮层等不同部位，其中，延髓产生基本节律性呼吸，对于机体的存活至关重要。
腺嘌呤核苷简称腺苷,由戊糖和腺嘌呤结合而成，是组织产生的内源性嘌呤衍化物。腺苷与磷酸结合后变为一磷酸腺苷（adenosine monophosphate，AMP），一磷酸腺苷磷酸转变为二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP），二磷酸腺苷结合磷酸后变为三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate，ATP），即广为人知的ATP。所以，腺苷是腺嘌呤核苷酸的合成前体和代谢产物，在体内广泛存在，对多项生理活动和病理过程其中重要的调节作用。到目前为止，已有4种腺苷受体被发现：腺苷A1受体、腺苷A2A受体、腺苷A2B受体和腺苷A3受体，这4种亚型的腺苷受体均为G蛋白偶联受体，可与相应的G蛋白结合，通过调节腺苷酸环化酶、离子通道、磷脂酶等物质活性产生生物效应。
A2A受体主要分布在听神经核、纹状体和嗅结节等富集区,海马、皮层、杏仁核、下丘脑、丘脑以及小脑等处神经元也有A2A受体存在。A2A受体在外周部位存在于大动脉内皮细胞、肾脏、血小板、白细胞。
发明内容
本发明的目的是提供腺苷A2A受体特异性阻断剂对延髓呼吸中枢的作用。
本发明提供了腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。
本发明还保护一种产品，其活性成分为腺苷A2A受体特异性阻断剂所述产品的功能为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。
本发明还保护腺苷A2A受体特异性阻断剂的应用，为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。
本发明还保护腺苷A2A受体特异性阻断剂对哺乳动物延髓舌下神经根基本节律性呼吸放电的调节作用。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。所述调节作用为反向调节作用。所述哺乳动物可为Sprague–Dawley大鼠，具体可为2d新生大鼠。
本发明还保护腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为：对哺乳动物延髓舌下神经根基本节律性呼吸放电进行调节。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。所述调节为反向调节。所述哺乳动物可为Sprague–Dawley大鼠，具体可为2d新生大鼠。
本发明还保护腺苷A2A受体特异性阻断剂对哺乳动物延髓面神经后核内侧区吸气神经元放电的调节作用。所述调节作用为反向调节作用。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。所述哺乳动物可为Sprague–Dawley大鼠，具体可为2d新生大鼠。
本发明还保护腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为：对哺乳动物延髓面神经后核内侧区吸气神经元放电进行调节。所述腺苷A2A受体特异性阻断剂具体可为SCH58261。所述调节为反向调节。所述哺乳动物可为Sprague–Dawley大鼠，具体可为2d新生大鼠。
本发明研究发现腺苷A2A受体特异性阻断剂对大鼠延髓脑片舌下神经根基本节律性呼吸放电和面神经后核内侧区吸气神经元放电具有调节作用，为相关治疗和预防提供了理论指导和实验依据。
附图说明
图1为实施例1中，对照组9min时间点、19min时间点、29min时间点、39min时间点、49min时间点、59min时间点的检测结果。
图2为实施例1中，对照组、CGS21680-Ⅰ组、CGS21680-Ⅱ组和CGS21680-Ⅳ组10min时间点的检测结果。
图3为实施例1中，对照组、SCH58261-Ⅰ组、SCH58261-Ⅱ组和SCH58261-Ⅳ组10min时间点的检测结果。
图4为实施例2中舌下神经根基本节律性呼吸放电和面神经后核内侧区吸气神经元放电的检测结果；XII代表舌下神经根基本节律性呼吸放电，I代表面神经后核内侧区吸气神经元放电。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实验数据均以
表示，使用SPSS13.0软件重复测量数据的方差分析检验，多重比较采用LSD法进行分析，P≤0.05被认为有显著性差异。
将每次吸气性放电开始至放电结束的时间作为吸气时程(inspiratory time,TI)，以一次吸气性放电开始至下一个放电开始的时间作为呼吸周期(respiratorycycle,RC)，把一次放电的原始图进行积分获得放电积分幅度(integral amplitude,IA)。面神经后核内侧区，英文全称为the medial area of nucleus retrofacialis，缩写为mNRF，为舌下神经根基本节律性呼吸放电的起源部位。
Sprague–Dawley大鼠（清洁级；许可证号：SCXK豫-2010-0002）：河南省实验动物中心。BL-420F生物信号采集与分析系统：成都泰盟电子有限公司。直流前置放大器：上海嘉龙教学仪器厂，FZG-81。解剖显微镜：济南八一光学仪器厂。电子天平：Denver Instrument Company，YP1002。数字测氧仪：上海隆拓仪器设备有限公司，CY-12C。微电极放大器：成都泰盟电子有限公司，ME-200A。微电极推进器：NARISHIGESCIENTIIC INSTRUMENT LAB，QF5-1。微电极拉制仪：NARISHIGE SCIENTIIC INSTRUMENTLAB，PP-80。体视显微镜：济南八一光学仪器厂。
CGS21680（一种腺苷A2A受体的特异性激动剂），英文全称为“2-P-(2-CARBOXYETHYL)PHENETHYLAMINO-5'-N-ETHYLCARBOXAMIDOADENOSINEHYDROCHLORIDE”，中文全称为“2-对(2-羧乙基)苯乙氨基-5'-N-乙基甲酰胺基腺苷盐酸盐水合物”, 购自Sigma-Aldrich公司，产品目录号为“C141”。
SCH58261（一种腺苷A2A受体的特异性阻断剂），英文全称为“2-(2-FURANYL)-7-(2-PHENYLETHYL)-7H-PYRAZOLO[4,3-E][1,2,4]TRIAZOLO[1,5-C]PYRIMIDIN-5-AMINE”，中文全称为“7H-吡唑并[4,3-E][1,2,4]三氮唑并[1,5-C]嘧啶-5-胺,2-(2-呋喃基)-7-(2-苯基乙基)-”，购自Sigma-Aldrich公司，产品目录号为“S4568”。
人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF)：将NaCl126mmol、KCl5mmol、CaCl2 2mmol、MgSO4 1.3mmol、KH2PO4 1.2mmol、NaHCO3 26mmol和Glucose 30mmol溶于双蒸水并用双蒸水定容至1L；使用前用95％O2和5％CO2平衡1h以上。
微电极内液：将0.5mmol CH3COONa·3H2O溶于双蒸水并用双蒸水定容至1L。
实施例1、腺苷A2A受体对延髓脑片舌下神经根基本节律性呼吸放电的调节作用
一、制备包含mNRF的新生大鼠离体延髓脑片
1、2d的新生Sprague–Dawley大鼠用乙醚麻醉后在颈4和颈5之间断头处死，将头部置于0℃人工脑脊液中5s-10s以清洗和降温。
2、完成步骤1后，用眼科剪沿颅骨剪去正中皮肤和肌肉，从颈椎处剪开椎管并向吻端延伸，直至完整剪开颅骨、去除多余颅骨、暴露脑组织，用手术刀片轻轻割断颅底脑神经、游离出完整的脑组织，颈2至颈3间切去脊髓，在大脑底部切下脑干，制备出延髓-脊髓标本（保留脑片腹侧面的舌下神经根）；整个过程均在持续充以95％O2和5％CO2的0℃人工脑脊液中进行。
3、取步骤2得到的延髓-脊髓标本，腹侧面向上，在闩前后切下约900μm-1100μm的延髓脑片(含舌下神经根)；整个过程均在持续充以95％O2和5％CO2的0℃人工脑脊液中进行。
二、分组处理
取60只步骤一制备的延髓脑片，随机分为10组（每组6只），分别进行以下平行处理（整个过程持续充以95％O2和5％CO2）：
对照组：将延髓脑片置于灌流槽内，用人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流60min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm -220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电（RRDA）经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
CGS21680-Ⅰ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有10nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
CGS21680-Ⅱ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有20nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
CGS21680-Ⅲ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有40nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
CGS21680-Ⅳ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有60nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
SCH58261-Ⅰ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有10nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
SCH58261-Ⅱ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有20nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
SCH58261-Ⅲ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有40nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
SCH58261-Ⅳ组：将延髓脑片置于灌流槽内，用含有60nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流12min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析；
中和效应组：将延髓脑片置于灌流槽内，用人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流10min，然后用含有20nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流15min，用人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流20min，然后用含有20nmol/L CGS21680和40nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流15min，pH保持7.35-7.45，温度保持25-28℃；用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录、处理和分析。
三、结果分析
1、对照组的结果分析
对照组延髓脑片的RRDA在60min内无显著变化，说明本模型稳定可靠。持续灌流的60min中，9min时间点、19min时间点、29min时间点、39min时间点、49min时间点59min时间点的检测结果见图1和表1（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。表1中，将9min时间点的检测结果作为100，表格中显示的是其它各个时间点的检测结果与9min时间点的检测结果的比值。9min时间点的检测结果为：TI=0.97±0.09s，IA=348.29±20.67μV·s，RC=15.33±2.18s。
表1对照组的RRDA在60min内的变化
| TI | IA | RC | |
| 9min时间点 | 100 | 100 | 100 |
| 19min时间点101.33±5.47 | 102.24±9.03101.67±8.53 |
| 29min时间点100.21±4.89 | 101.67±7.3599.67±8.07 |
| 39min时间点98.50±6.67 | 100.33±5.65101.67±9.44 |
| 49min时间点99.24±7.82 | 98.74±8.5399.55±11.00 |
| 59min时间点97.13±5.67 | 95.83±6.6297.05±8.67 |
| F0.475 | 0.5420.731 |
| P0.743 | 0.6860.507 |
2、CGS21680组的结果分析
对照组、CGS21680-Ⅰ组、CGS21680-Ⅱ组、CGS21680-Ⅲ组和CGS21680-Ⅳ组10min时间点的检测结果见图2和表2（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。表2中，将对照组的检测结果作为100，表格中显示的是其它各个处理组的检测结果与对照组的检测结果的比值，对照组的检测结果为：TI=0.93±0.12s，IA=351.54±31.86μV·s，RC=13.96±2.49s。10nmol/L的CGS21680即具有促进RRDA兴奋的作用，可以增强IA。20nmol/L的CGS21680具有更显著的促进RRDA兴奋的作用，可以延长TI、增加IA、缩短RC。20nmol/L、40nmol/L、60nmol/L的CGS21680的促进RRDA兴奋的作用效果无统计学差异，说明20nmol/L的CGS21680已与神经元细胞膜A2A受体饱和结合，再增加CGS21680浓度也无受体可结合，已达到受体饱和浓度。
表2对照组、CGS21680-Ⅰ组、CGS21680-Ⅱ组、CGS21680-Ⅲ组和CGS21680-Ⅳ组的
检测结果
| TI | IA | RC | |
| 对照组 | 100 | 100 | 100 |
| CGS21680-Ⅰ组 | 103.42±4.31 | 106.24±3.37* | 98.81±4.91 |
| CGS21680-Ⅱ组 | 109.96±4.54** | 110.33±4.39** | 91.10±5.01** |
| CGS21680-Ⅲ组 | 111.33±4.68** | 109.34±5.23** | 89.67±4.99** |
| CGS21680-Ⅳ组 | 108.30±5.34** | 112.17±5.81** | 90.09±4.64** |
| F | 18.281 | 40.965 | 25.415 |
| P | 0.004 | 0.000 | 0.000 |
**P<0.01，与对照组比较。
CGS21680-Ⅱ组1min时间点、5min时间点和10min时间点的检测结果见表3（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。表3中，将1min时间点的检测结果作为100，表格中显示的是其它各个时间点的检测结果与1min时间点的检测结果的比值，1min时间点的检测结果为：TI=0.95±0.08s，IA=326.85±25.74μV·s，RC=14.02±2.33s。在5min时间点CGS21680的作用已达到稳定效果，选择9min时间点测量能真实、客观反映实验结果。
表3CGS21680-Ⅱ组1min时间点、5min时间点和10min时间点的检测结果
| TI | IA | RC | |
| 1min时间点 | 100 | 100 | 100 |
| 5min时间点 | 108.25±4.03** | 109.64±4.82** | 91.33±3.51** |
| 10min时间点 | 109.27±4.68** | 108.35±5.13** | 90.17±3.85** |
| F | 34.062 | 37.293 | 29.893 |
| P | 0.000 | 0.000 | 0.000 |
**P<0.01，与1min时间点比较。
3、SCH58261组的结果分析
对照组、SCH58261-Ⅰ组、SCH58261-Ⅱ组、SCH58261-Ⅲ组和SCH58261-Ⅳ组10min时间点的检测结果见图3和表4（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。表4中，将对照组的检测结果作为100，表格中显示的是其它各个处理组的检测结果与对照组的检测结果的比值，对照组的检测结果为：TI=0.96±0.06s，IA=328.67±33.34μV·s，RC=14.79±3.16s。20nmol/L的SCH58261即具有抑制RRDA的作用，可以缩短TI、减弱IA、延长RC。40nmol/L的SCH58261具有更显著的抑制RRDA的作用，可以缩短TI、减弱IA、延长RC。40nmol/L、60nmol/L的SCH58261的抑制RRDA的作用效果无统计学差异。
表4 对照组、SCH58261-Ⅰ组、SCH58261-Ⅱ组、SCH58261-Ⅲ组和SCH58261-Ⅳ组的
检测结果
| TI | IA | RC | |
| 对照组 | 100 | 100 | 100 |
| SCH58261-Ⅰ组 | 99.33±4.30 | 98.86±3.77 | 102.67±3.49 |
| SCH58261-Ⅱ组 | 95.67±3.95* | 96.63±3.26* | 106.22±3.67** |
| SCH58261-Ⅲ组 | 90.67±4.04**## | 89.71±3.80**## | 112.16±4.21**## |
| SCH58261-Ⅳ组 | 91.09±4.35**## | 91.67±4.44**## | 113.95±5.03**## |
| F | 31.261 | 33.154 | 50.698 |
| P | 0.000 | 0.000 | 0.000 |
*P<0.05，**P<0.01，与对照组比较；##P<0.01，与SCH58261-Ⅱ组比较。
SCH58261-Ⅲ组1min时间点、5min时间点和10min时间点的检测结果见表5（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。表5中，将1min时间点的检测结果作为100，表格中显示的是其它各个时间点的检测结果与1min时间点的检测结果的比值，1min时间点的检测结果为：TI=1.03±0.10s，IA=320.55±26.93μV·s，RC=14.64±3.25s。在5min时间点SCH58261的作用已达到稳定效果，选择9min时间点测量能真实、客观反映实验结果。
表5SCH58261-Ⅲ组1min时间点、5min时间点和10min时间点的检测结果
| TI | IA | RC | |
| 1min时间点 | 100 | 100 | 100 |
| 5min时间点 | 90.58±3.64** | 89.29±4.71** | 109.84±5.21** |
| 10min时间点 | 91.33±3.92** | 88.31±3.76** | 110.78±4.85** |
| F | 24.650 | 31.582 | 27.164 |
| P | 0.002 | 0.000 | 0.001 |
*P<0.05、**P<0.01，与1min时间点比较。
4、中和效应组的结果分析
中和效应组组的处理过程中，分为如下四个阶段：第一个阶段为人工脑脊液处理10min，第二个阶段为CGS21680处理15min，第三个阶段为人工脑脊液洗涤20min，第四个阶段为CGS21680+SCH58261处理15min。用人工脑脊液灌流起始作为0min,之后连续计时，即1-10min人工脑脊液灌流、11-25min CGS21680灌流，26-45min人工脑脊液灌流洗涤，46-60min CGS21680+SCH58261灌流。
5min时间点（即人工脑脊液处理5min）、20min时间点（即CGS21680处理10min）、35min时间点（即人工脑脊液洗涤处理10min）和55min时间点（即CGS21680+SCH58261处理10min）的检测结果见表6（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。CGS21680对具有促进RRDA兴奋的作用，第二个阶段与第一个阶段有显著差异。第一个阶段、第三个阶段和第四个阶段无显著差异，即SCH58261可完全阻断CGS21680对RRDA的兴奋的促进作用，即CGS21680对RRDA兴奋的促进作用是通过腺苷A2A受体实现的。
表6中和效应组的结果
| TI(s) | IA(μV.s) | RC(s) | |
| 5min时间点 | 0.92±0.11 | 339.67±19.76 | 14.26±2.86 |
| 20min时间点 | 1.13±0.09** | 370.42±20.09** | 11.67±2.99** |
| 35min时间点 | 0.88±0.10## | 326.91±21.45## | 15.04±2.88## |
| 55min时间点 | 0.89±0.08# | 322.56±25.67## | 15.67±2.70## |
| F | 11.834 | 25.249 | 29.152 |
| P | 0.002 | 0.000 | 0.000 |
**P<0.01，与5min时间点比较；#P<0.05、##P<0.01，与20min时间点比较。
实施例2、腺苷A2A受体对面神经后核内侧区吸气神经元放电的调节作用
一、制备包含mNRF的新生大鼠离体延髓脑片
同实施例1的步骤一。
二、分组处理
取6只步骤一制备的延髓脑片，进行以下处理（整个过程持续充以95％O2和5％CO2）：
将延髓脑片置于灌流槽内：先用人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流10min（稳定记录到面神经后核内侧区吸气神经元放电），然后用含20nmol/L CGS21680的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流15min，然后用人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流15min，然后用含40nmol/L SCH58261的人工脑脊液以5-7mL/min持续灌流15min；整个过程pH保持7.35-7.45、温度保持25-28℃。
记录面神经后核内侧区吸气神经元放电的方法为：用内含银-氯化银的吸附电极（内径180μm-220μm）加以负压吸附舌下神经根，将舌下神经根基本节律性呼吸放电经直流前置放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录，记录到脑片RRDA后，将U型不锈钢丝（将直径0.3mm粗的不锈钢丝弯成直径8mm的U型，横向粘上2根尼龙丝、2根尼龙丝相距3mm；起固定脑片的作用）轻轻放在脑片上，将拉制好并充灌微电极内液的玻璃微电极（交流电阻5-10 MΩ）固定在微电极推进器的探头上，在解剖显微镜下控制电极尖端进入液面、对准mNRF区垂直向下，直至进入脑片，操纵微电极推进器，使玻璃微电极垂直向下推进，每次推进12μm-15μm，记录到吸气神经元放电就停止推进（如果推进1000μm未记到神经元放电则操纵微电极推进器向上退出脑片，在旁侧200μm处重复推进），神经元放电与RRDA同步的即为吸气神经元，玻璃微电极采集的吸气神经元信号通过微电极放大器放大后输入BL-420F生物信号采集与分析系统进行记录。
整个处理过程分为如下四个阶段：第一个阶段为人工脑脊液处理10min，第二个阶段为CGS21680处理15min，第三个阶段为人工脑脊液洗涤15min，第四个阶段为SCH58261处理15min。用人工脑脊液灌流起始作为0min,之后连续计时，即1-10min人工脑脊液灌流、11-25min CGS21680灌流，26-40min人工脑脊液灌流洗涤，41-55minSCH58261灌流。
5min时间点（即人工脑脊液处理5min）、20min时间点（即CGS21680处理10min）、35min时间点（即人工脑脊液洗涤处理10min）和50min时间点（即SCH58261处理10min）的检测结果见图4和表7（均为从该检测时间点开始连续6个呼吸的平均值）。CGS21680具有促进面神经后核内侧区吸气神经元放电兴奋的作用，体现为：增加神经元spike频率（spike frequency,SF）、延长bursting放电持续时间（bursting lasting,BL），增强bursting放电积分幅度（bursting integral amplitude， BIA）、缩短bursting放电间隔（bursting interval，BI）。SCH58261具有抑制面神经后核内侧区吸气神经元放电兴奋的作用，体现为：降低SF、缩短BL，减弱BIA、延长BI。
表7四个阶段的检测结果
| BL(s)BIA(μV.s)BI(s) | SF(Hz) |
| 5min时间点0.93±0.09563.67±45.3215.43±2.37 | 18.25±2.22 |
| 20min时间点1.14±0.11 ** 781.63±53.94**11.24±2.42** | 24.39±3.83** |
| 35min时间点0.89±0.09 578.76±49.3115.11±2.19 | 18.22±3.05 |
| 50min时间点0.62±0.08 **##455.81±39.46**##18.67±2.33 **## | 10.67 ±2.61 **## |
| F17.89429.11325.729 | 13.511 |
| P0.0000.0000.000 | 0.002 |
**P<0.01，与5min时间点比较；##P<0.01，与20min时间点比较。
Claims (9)
1.腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：
（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；
（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；
（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；
（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；
（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；
（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；
（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。
2.一种产品，其活性成分为腺苷A2A受体特异性阻断剂所述产品的功能为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：
（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；
（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；
（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；
（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；
（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；
（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；
（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。
3.腺苷A2A受体特异性阻断剂的应用，为如下（a）和/或（b）和/或（c）和/或（d）和/或（e）和/或（f）和/或（g）：
（a）缩短舌下神经根基本节律性呼吸放电的吸气时程；
（b）延长舌下神经根基本节律性呼吸放电的呼吸周期；
（c）降低舌下神经根基本节律性呼吸放电的放电积分幅度；
（d）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的spike频率；
（e）缩短面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电持续时间；
（f）降低面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电积分幅度；
（g）延长面神经后核内侧区吸气神经元放电的bursting放电间隔。
4.如权利要求1或3所述的应用或如权利要求2所述的产品，其特征在于：所述腺苷A2A受体特异性阻断剂为SCH58261。
5.腺苷A2A受体特异性阻断剂对哺乳动物延髓舌下神经根基本节律性呼吸放电的调节作用。
6.腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为：对哺乳动物延髓舌下神经根基本节律性呼吸放电进行调节。
7.腺苷A2A受体特异性阻断剂对哺乳动物延髓面神经后核内侧区吸气神经元放电的调节作用。
8.腺苷A2A受体特异性阻断剂在制备产品中的应用，所述产品的功能为：对哺乳动物延髓面神经后核内侧区吸气神经元放电进行调节。
9.如权利要求5所述的调节作用，如权利要求6所述的应用，如权利要求7所述的调节作用，或，如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述腺苷A2A受体特异性阻断剂为SCH58261。
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|---|---|---|---|---|
| CN104288770A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 新乡医学院 | 腺苷a2a受体激动剂的一种新用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1871244A (zh) * | 2003-09-19 | 2006-11-29 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 作为腺苷受体配体的噻唑并吡啶衍生物 |
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2013
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Non-Patent Citations (2)
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|---|
| 李巷等: "腺苷A2A受体阻断剂对戊四氮全面性癫痫发作模型及点燃模型的抑制作用", 《神经损伤与功能重建》 * |
| 李巷等: "腺苷A2A受体阻断剂对戊四氮全面性癫痫发作模型及点燃模型的抑制作用", 《神经损伤与功能重建》, vol. 7, no. 2, 31 March 2012 (2012-03-31) * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN104288770A (zh) * | 2014-09-30 | 2015-01-21 | 新乡医学院 | 腺苷a2a受体激动剂的一种新用途 |
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