CN103417546B - 亚甲蓝的一种麻醉后促清醒的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及亚甲蓝的一种麻醉后促清醒的新应用。在动物完全麻醉后，注射一定剂量的亚甲蓝，能够加快动物清醒，缩短麻醉时间，在一定程度上减少麻醉过量的发生。亚甲蓝的此种新用途将有助于亚甲蓝在动物实验和临床上缓解和对抗麻醉过量。使用一定浓度的戊巴比妥钠对实验动物实施麻醉，随后对完全麻醉的动物注射一定浓度的亚甲蓝溶液，其浓度小于亚甲蓝的毒性剂量。随后观察动物清醒时间，通过与生理盐水比较，判断亚甲蓝的促醒效果。结果亚甲蓝溶液能够明显缩短动物在戊巴比妥钠麻醉后清醒所需要的时间，减少清醒潜伏期，减少麻醉过量的发生。亚甲蓝的该种用途，有望为临床提供一种安全便捷的促醒措施，减少患者因为麻醉过量导致的可能的损伤。

Description

亚甲蓝的一种麻醉后促清醒的用途

技术领域

本发明涉及亚甲蓝的一种麻醉后促清醒的新应用。在动物完全麻醉后，注射一定剂量的亚甲蓝，能够加快动物清醒，缩短麻醉时间，在一定程度上减少麻醉过量的发生。亚甲蓝的此种新用途将有助于亚甲蓝在动物实验和临床上缓解和对抗麻醉过量。

背景技术

亚甲蓝(methyleneblue)，又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝、甲烯蓝、瑞士蓝(Swissblue)，国际非专利药品(INN)名称为methylthioniniumchloride。是一种芳香杂环化合物。亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中蓝色，但遇锌、氨水等还原剂会被还原成无色形态。被用作化学指示剂、染料、生物染色剂和药物使用。

已经证明的亚甲蓝本身系氧化剂，根据其在体内的不同浓度，对血红蛋白有两种不同的作用。低浓度时6-磷酸-葡萄糖脱氢过程中的氢离子经还原型三磷酸吡啶核苷传递给亚甲蓝，使其转变为还原型的白色亚甲蓝；白色亚甲蓝又将氢离子传递给带三价铁的高铁血红蛋白，使其还原为带二价铁的正常血红蛋白，而白色亚甲蓝又被氧化为亚甲蓝。亚甲蓝的还原-氧化过程可反复进行。高浓度时，亚甲蓝不能被完全还原为白色亚甲蓝，因而起氧化作用，将正常血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。由于高铁血红蛋白易与CN-结合形成氰化高铁血红蛋白，但数分钟后二者又离解，故仅能暂时抑制CN-对组织中毒的毒性。

亚甲蓝静注后作用迅速，基本不经过代谢即随尿排出，口服在胃肠道的pH条件下可被吸收，并在组织内迅速还原为白色亚甲蓝。在6天内74％由尿排出，其中22％为原形，其余为白色亚甲蓝，且部分可能被甲基化。少量亚甲蓝通过胆汁，由粪便排出。

亚甲蓝对化学物亚硝酸盐、硝酸盐、苯胺、硝基苯、三硝基甲苯、苯醌、苯肼等和含有或产生芳香胺的药物(乙酰苯胺、对乙酰氨基酚、非那西丁、苯佐卡因等)引起的高铁血红蛋白血症有效。对先天性还原型二磷酸吡啶核苷高铁血红蛋白还原酶缺乏引起的高铁血红蛋白血症效果较差。对异常血红蛋白M伴有高铁血红蛋白血症无效。对急性氰化物中毒、能暂时延迟其毒性。

亚甲蓝在临床主要包括下面4方面的应用：

1.治疗高铁血红蛋白血症；低浓度的亚甲蓝治疗亚硝酸盐、硝酸盐、苯胺、硝基苯、三硝基甲苯、苯醌、苯肼以及含有或产生芳香胺的药物(如乙酰苯胺、对乙酰氨基酚、非那西丁、苯佐卡因)等引起的高铁血红蛋白血症。对先天性还原型二磷酸吡啶核苷高铁血红蛋白还原酶缺乏引起的高铁血红蛋白血症效果较差。对异常血红蛋白M伴有高铁血红蛋白血症无效。

2.治疗氰化物中毒：高浓度的亚甲蓝治疗氰化物中毒，原理与亚硝酸钠相同。对急性氰化物中毒，能暂时延迟其毒性。

3.可外用于口腔溃疡。

4.近年来，本药还试用于尿路结石、闭塞性脉管炎和神经性皮炎等方面。

亚甲蓝静脉注射过速，可引起头晕、恶心、呕吐、胸闷、腹痛、剂量过大，除上述症状加剧外，还出现头痛、血压降低、心率增快伴心率失常、大汗淋漓和意识障碍。用药后尿呈蓝色，排尿时可有尿道口刺痛。

麻醉过量是动物实验和临床手术中常见的现象。根据个体体重或者体表面积计算的麻醉剂剂量，在某些个体上会出现明显的清醒时间延长、深度抑制等，甚至死亡，或者预后明显的后遗症。麻醉过量发生的原因至今仍然不甚清楚，推测与个体差异和基因多态性有关。不幸的几乎所有的麻醉剂都会发生麻醉过量，而麻醉过量的发生往往提示个体的特异性，导致通用的抢救手段效果不确定，因此麻醉过量仍然是困扰动物实验和临床研究的重要问题。

本发明主要针对动物实验和临床研究中醉常用的麻醉剂之一戊巴比妥钠，探讨戊巴比妥钠麻醉后亚甲蓝的促醒效果，以期为动物实验和临床中麻醉过量基础和干预的研究提供参考。

发明内容

本发明涉及亚甲蓝的一种麻醉后促清醒的新应用。在动物完全麻醉后，注射一定剂量的亚甲蓝，能够加快动物清醒，缩短麻醉时间，在一定程度上减少麻醉过量的发生。亚甲蓝的之中新用途将有助于亚甲蓝在动物实验和临床上缓解和对抗麻醉过量。

本发明的申请人使用一定浓度的戊巴比妥钠对实验动物实施麻醉，随后对完全麻醉的动物注射一定浓度的亚甲蓝溶液，其浓度小于亚甲蓝的毒性剂量。随后观察动物清醒时间，通过与生理盐水比较，判断亚甲蓝的促醒效果。结果亚甲蓝溶液能够明显缩短动物在戊巴比妥钠麻醉后清醒所需要的时间，减少清醒潜伏期，减少麻醉过量的发生。亚甲蓝的该种用途，有望为临床提供一种安全便捷的促醒措施，减少患者麻醉剂过量导致的相关损伤。

本发明的方法包括以下内容：

首先进行实验动物和材料

1.按照实验动物标准获得小鼠或者大鼠，品系、雌雄不限，12小时光照/12小时黑暗、室温饲养，正常饮水，饲喂专用饲料。按照《实验动物管理条例》管理和饲养动物充分考虑动物福利。

2.戊巴比妥钠，分子量248.25，CAS号57-33-0，溶解于注射用水或生理盐水中，4℃保存。

3.亚甲蓝，CAS号61-73-4，分子量319.85，龙胆紫，溶解于注射用水或生理盐水中，棕色瓶避光4℃保存。

麻醉

根据实验动物操作建议，采用腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，剂量为50～60mg/kg。采用翻正反射等方法检查麻醉效果，待动物完全麻醉后监控小鼠呼吸，并注意麻醉动物保温，避免动物死亡。

亚甲蓝促醒

动物完全麻醉后根据体重，腹腔或静脉注射亚甲蓝溶液，观察给药后动物清醒的时间。对照可采用同样剂量的生理盐水腹腔或静脉注射。为避免亚甲蓝和麻醉剂可能的直接作用，亚甲蓝的给药部位应尽量避免与麻醉剂分开。

统计分析

将亚甲蓝和生理盐水后动物清醒时间举行统计分析，统计方法为成组设计t检验或者非参数检验，取决于资料是否满足正态分布和方差齐性标准，计算获得t值或者u值，通过P值判断亚甲蓝的促醒作用。P≥0.05就可以此浓度和给药方法的前提下亚甲蓝没有促醒作用，P＜0.05则亚甲蓝具有促醒作用。

结论

实验结果发现，对于同等条件麻醉的小鼠，注射亚甲蓝的动物清醒时间明显早于注射生理盐水的对照组，经过统计分析，两组之间的P＜0.05，说明亚甲蓝具有促醒作用，能够加快动物清醒，缩短麻醉时间。

亚甲蓝的该用途具有重要意义，在动物实验中经常出现麻醉过量的现象，如不及时处理，会导致动物死亡。在麻醉后注射一定剂量的亚甲蓝能够减缓动物损伤，加快动物清醒，在动物实验和动物保护方面具有重要应用前景。

具体实施方式

实施例一腹腔注射亚甲蓝能够明显加快麻醉小鼠的清醒

材料

1.实验用昆明小鼠，SPF级，军事医学科学院实验动物中心提供。雄性，体重18～22克，12小时光照/12小时黑暗环境饲养，室温(23～26℃、RH35～50％)下正常饮水，饲喂军事医学科学院实验动物中心提供的小鼠专用饲料。

2.戊巴比妥钠干粉(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)，1％比例溶解于生理盐水中，保存。

3.亚甲蓝溶液(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)，浓度为1％，棕色瓶避光4℃保存。

4.精确到秒的计时器。

麻醉

根据实验动物操作建议，对昆明小鼠采用腹腔注射戊巴比妥钠麻醉小鼠，剂量为50mg/kg。试验开始前小鼠禁食不禁水过夜，以减少麻醉过量导致的死亡。采用翻正反射方法检查麻醉效果，待小鼠完全麻醉后监控小鼠呼吸，并注意麻醉动物保温。

亚甲蓝促醒

注射麻醉剂12分钟后检查小鼠麻醉情况，完全麻醉的小鼠可开始亚甲蓝促醒试验，未完全麻醉的小鼠退出实验。根据体重，腹腔注射亚甲蓝溶液(0.02g/kg体重)，观察给药后动物清醒的时间。对照采用同样剂量的生理盐水腹腔注射。为避免亚甲蓝和麻醉剂可能的直接作用，麻醉剂统一从小鼠左侧腹腔注射，而亚甲蓝统一从小鼠右侧腹腔注射。

统计分析

将亚甲蓝和生理盐水后小鼠清醒时间举行统计分析，统计方法为成组设计t检验或者非参数检验，取决于资料是否满足正态分布和方差齐性标准，计算获得t值或者u值，通过P值判断亚甲蓝的促醒作用。P≥0.05就可以此浓度和给药方法的前提下亚甲蓝没有促醒作用，P＜0.05则亚甲蓝具有促醒作用。

结果

1小鼠麻醉情况：由于个体差异，戊巴比妥钠50mg/kg体重腹腔注射38只昆明小鼠，1只在注射12分钟后没有完全麻醉，而一只12分钟时已经死亡。未完全麻醉和麻醉过量的比例为2.6％。其余动物均能够在12分钟后完全麻醉。

2亚甲蓝注射后动物清醒时间：

如表1所示，其中两组数据分别进行了排序。

表1.两种药物注射后麻醉小鼠清醒时间(min)

结果显示，小鼠同剂量戊巴比妥钠麻醉后清醒时间具有较大的个体差异，两组数据均不满足正态分布和方差齐性的要求，因此采用非参数检验(U检验)，计算u值和P值，结果发现P＝0.013，因为P值小于0.05，说明两组数据具有统计学差异，即小鼠在使用50mg/kg的戊巴比妥钠麻醉后，腹腔注射0.02g/kg体重的亚甲蓝，能够加快动物清醒，缩短麻醉时间。

上述结果在图1中呈现更加明显。

图1两种药物注射后麻醉小鼠清醒时间(min)

结论

昆明种小鼠在使用50mg/kg的戊巴比妥钠麻醉后12分钟时，腹腔注射0.02g/kg体重的亚甲蓝，与注射生理盐水组比较，能够明显加快动物清醒，缩短麻醉时间平均缩短时间为14～39分钟。

附图说明

图1：两种药物注射后麻醉小鼠清醒时间(min)，Cont.为生理盐水组，MB为亚甲蓝组。

Claims (10)

1.亚甲蓝单独作为药物在制备动物接受戊巴比妥钠麻醉后促醒制剂方面的应用。

2.亚甲蓝单独作为药物在制备动物戊巴比妥钠麻醉过量后处置制剂方面的应用。

3.亚甲蓝作为添加物在制备动物接受戊巴比妥钠麻醉后促醒制剂方面的应用。

4.亚甲蓝作为添加物在制备动物戊巴比妥钠麻醉过量制剂的应用。

5.亚甲蓝作为药物在制备临床上针对患者接受戊巴比妥钠麻醉后促清醒制剂方面的应用。

6.亚甲蓝作为药物在制备临床上针对患者戊巴比妥钠麻醉过量后处置制剂方面的应用。

7.亚甲蓝作为添加剂在制备临床上针对患者接受戊巴比妥钠麻醉后促清醒制剂、保健品、应急保健食品方面的应用。

8.亚甲蓝作为添加剂在制备临床上针对患者戊巴比妥钠麻醉过量麻醉后处置制剂、保健品、应急保健食品方面的应用。

9.根据权利要求1，2，3和4任一所述的应用，其中亚甲蓝的浓度范围下限是0.001％，上限是0.1％。

10.根据权利要求5，6，7和8任一所述的应用，其中亚甲蓝的浓度范围下限是0.01％，上限是0.05％。