CN103381165B - Chukrasone A在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
体外活性实验表明Chukrasone？A具有很强的抗幽门螺旋杆菌(<i>Helicobacter？pylori</i>，Hp)活性。Chukrasone？A可用于急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病的治疗及在制备治疗急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡药物中得到应用。本发明涉及的Chukrasone？A在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。
Description
技术领域
本发明属于生物制药技术领域，尤其涉及ChukrasoneA在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)是一种革兰氏阴性螺旋状细菌。研究显示，幽门螺杆菌是急、慢性胃炎以及胃、十二指肠溃疡的主要致病原因,并可能与胃癌和胃粘膜相关性淋巴样组织(MALT)恶性淋巴瘤发病有关。最近，世界卫生组织将Hp归为I类致癌物，它在胃癌发展中起主导作用。目前流行的治疗Hp感染的方案是同时服用质子泵抑制剂(PPI)加两种抗生素(克拉霉素，阿莫西林、四环素、甲硝唑等选二种)的三联疗法。影响三联疗法的最主要因素被认为是Hp对抗菌剂的耐药性；另一严重问题是质子泵抑制剂会诱发消化不良，大量抗菌剂则导致消化道内菌群的严重毁灭。因此，寻找高效、安全的抗Hp活性一类新药物成为一个重要和迫切的任务。
本发明涉及的化合物ChukrasoneA是一个2012年发表(Liu,H.B.etal.,2012.ChukrasonesAandB:PotentialKv1.2PotassiumChannelBlockerswithNewSkeletonsfromChukrasiatabularis.OrganicLetters14(17),
4438–4441.)的新骨架化合物，该化合物拥有全新的骨架类型，目前的用途仅仅涉及活性钾离子通道抑制活性(Liu,H.B.etal.,2012.ChukrasonesAandB:PotentialKv1.2PotassiumChannelBlockerswithNewSkeletonsfromChukrasiatabularis.OrganicLetters14(17),4438–4441.)，对于本发明涉及的ChukrasoneA在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。
发明内容
本发明的目的是研究ChukrasoneA在抗幽门螺杆菌药物中的应用。
所述化合物ChukrasoneA结构如式(Ⅰ)所示：
ChukrasoneA的体外实验表明，ChukrasoneA具有很强的抗幽门螺旋杆菌活性，纸片法显示其抑菌圈直径为26mm(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5个随机的临床菌株(Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和1个标准菌株(ATCC43504)的生长，最小抑菌浓度(MIC)均为0.5μg/ml。用氨苄西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制的最小浓度(MIC)为2.0μg/ml。
本研究结果显示，ChukrasoneA的抑制幽门螺旋杆菌活性的能力比氨苄西林强，说明对于与幽门螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病来讲，ChukrasoneA是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗以及相关药物的制备。
本发明涉及的ChukrasoneA在制备治疗抗幽门螺杆菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于幽门螺杆菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于幽门螺杆菌感染的防治显然具有显著的进步。
具体实施方式
本发明所涉及化合物ChukrasoneA的制备方法参见文献(Liu,H.B.etal.,2012.ChukrasonesAandB:PotentialKv1.2PotassiumChannelBlockerswithNewSkeletonsfromChukrasiatabularis.OrganicLetters14(17),4438–4441.)。
以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
实施例1：本发明所涉及化合物ChukrasoneA片剂的制备：
取20克化合物ChukrasoneA，加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片机制成1000片。
实施例2：本发明所涉及化合物ChukrasoneA胶囊剂的制备：
取20克化合物ChukrasoneA，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混匀，装胶囊制成1000片。
下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
ChukrasoneA的药理实验
1)供试菌株
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)标准菌株ATCC43504购于美国菌种保存中心(AmericanTypeCultureCollection，ATCC)。15株Hp临床菌株采自江苏省人民医院消化科、江苏省中医院检验科和南京市儿童医院胃镜室接受胃镜检查的患者；在连续胃镜检查中对消化性溃疡、十二指肠球炎或疣状胃炎的患者，先经快速尿素酶实验确定为Hp阳性者，再取胃窦黏膜1-2块，切碎后接种于含8％马血清、三甲氧苄氨嘧啶(trimethropin,TMP)1.25g/L、多粘菌素(polymyxin)B2500U/L、万古霉素(vancomycin)10mg/L的Columbia选择性琼脂培养基中，于37℃在微氧环境下(5％O2,10％CO2和85％N2)培养72小时。收集细菌，经涂片革兰氏染色，氧化酶、触酶和尿素酶鉴定为阳性后，传代纯培养，所得菌株作为实验菌株。
2)菌株培养
我们采用微需氧袋(购自上海医科大学)进行HP的菌株培养，它可通过化学反应产生Hp所需要的微需氧环境。
3)生物活性测定
采用纸片法(Microbiologicalpapermethod)测定化合物对幽门螺杆菌的抑制作用，用琼脂稀释法来测定供试样品的最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)。
I.纸片法实验
(A)准备培养基将配制好的Columbia培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至50-60℃，加8％马血清或绵羊血，混匀倾注于已经灭菌的培养皿中，每皿7-10ml，培养基厚度为1.5mm(无菌操作)。
(B)转接实验菌(涂菌)用微量取样器取稀释好的108CFU/ml(1OD660＝108CFU/ml)Hp的菌悬液0.1ml均匀地涂抹在适宜的培养皿表面。倒置于37℃烘干箱中15min后取出，目的使琼脂表面干燥，备用。
(C)贴样品纸片用微量取样器取6μl待测样品(质量浓度2mg/ml)注入已经灭菌的圆滤纸片上。用无菌镊子镊取含样品的纸片和对照空白纸片，按无菌操作分别纸片紧贴于含菌琼脂表面，每隔一定距离贴一张纸片。每种菌做3皿，所得结果求其平均值。
(D)培养将各平皿置于微需氧袋中，封口，打开气体发生器，再置于37℃培养箱中培养72h。
(E)测抑菌圈直径取出平板后，分别测量各纸片周围抑菌圈直径的大小。参照对照组的结果，可得出待测样品敏感实验的结果。重复三次。
II.琼脂稀释法测定MIC
(A)药物平板的制备首先将测试的化合物用二甲基亚砜(DMSO)溶液配制成0.5mg/ml的母液，再用无菌水稀释，最终配成10.0，8.0，6.0，4.5，4.0，3.5，3.0，2.5，2.0，1.5，1.0，0.5和0.25μg/ml的浓度系列，DMSO在介质中的浓度小于1％。将1ml配制好的测试化合物溶液与保温于50℃的9ml哥伦比亚培养基另加1ml保温于50℃的马血清充分混匀，浇制入培养皿中冷却即成。
(B)转接实验菌(涂菌)用微量取样器吸取稀释好的1×108CFU/mlHp的菌悬液0.1ml均匀地涂抹在培养皿表面，倒置于37℃烘干箱中15min后取出，目的使琼脂表面干燥，备用。
(C)确定MIC将待测培养皿在微需氧袋(含：85％N2,10％CO2和5％O2)中，保温37℃培养72小时，观察Hp生长情况，与空白组相对照，以完全没有菌生长的样品最低浓度为最低抑菌浓度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)值。阳性对照为氨苄西林(Ampicillin)。
3、ChukrasoneA的药理实验结果
体外实验表明，ChukrasoneA具有很强的抗幽门螺旋杆菌活性，纸片法显示其抑菌圈直径为26mm(ATCC43504)。用琼脂稀释法显示它能完全抑制5个随机的临床菌株(Hp001、Hp003、Hp004、Hp018和Hp036)和1个标准菌株(ATCC43504)的生长，最小抑菌浓度(MIC)均为0.5μg/ml。用氨苄西林作阳性对照，其对6株测试菌完全抑制的最小浓度(MIC)为2.0μg/ml。
结论：ChukrasoneA抑制幽门螺旋杆菌活性的能力比氨苄西林强，说明对于与幽门螺旋杆菌密切相关的急、慢性胃炎、胃、十二脂肠溃疡等疾病来讲，ChukrasoneA是一个极具开发潜力的化合物。它可直接用于相应疾病的治疗以及相关药物的制备。
Claims (1)
1.ChukrasoneA在制备抗幽门螺杆菌药物中的应用，所述化合物ChukrasoneA结构如式（Ⅰ）所示：
式（Ⅰ）。
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Non-Patent Citations (1)
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| Chukrasones A and B: Potential Kv1.2 Potassium Channel Blockers with New Skeletons from Chukrasia tabularis;Hong-Bing Liu et. al;《Organic Letters》;20120810;第14卷(第17期);第4438–4441页 * |
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