CN103250488A - 一种促进秦艽种子萌发的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种促进秦艽种子萌发的方法。本发明提供了一种促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性的方法，包括如下步骤：先将植物种子浸泡在含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中处理，得到处理后植物种子；再将所述处理后的植物种子播种，实现促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性。本发明的实验证明，本发明在播种前采用含有赤霉素和硫酸亚铁水溶液浸泡种子；使种子萌发时在发芽率、发芽势、发芽指数有显著提高，且在5℃和35℃萌发条件发芽率、发芽势、发芽指数也有显著提高。本发明操作简单，成本低廉，可以广泛使用。经过本方法处理后的种子发芽快，出苗整齐，对低温和高温的抗性显著增强，具有良好的市场应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种促进秦艽种子萌发的方法。
背景技术
秦艽（Gentiana macrophylla Pall.）为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属多年生草本植物，是国家药典规定的秦艽药材的4种原植物之一，生长于海拔2000-4950m的亚高山草旬及灌丛，以根入药，有祛风除湿、退虚热、止痹痛、健胃、利胆等功效，被用作中国草药已有两千多年的历史，是国家三级重点保护的药用植物物种之一。近年来，由于秦艽药用价值的提高，市场需求量的增加，导致过度采挖，致使野生资源日趋减少。为了缓解其濒危程度，保护秦艽资源，开展野生变家种是一种途径。秦艽主要是靠种子来进行有性繁殖，种子繁殖的植株生长繁茂，根茎粗大，但其种子小、寿命短、产量低，且有后熟作用。在生产实践中，秦艽只有春播和秋播两个播种期，并且在播种过程中存在发芽率低、发芽不整齐等情况，严重制约着秦艽的规范化种植和生产；在组织培养中，由于种子种皮厚且坚硬，按照常规的方法培养无菌苗，萌发率及其低下，限制了利用基因工程手段对秦艽进行改良育种等方面的研究。因此，为了秦艽的大规模栽培和规范化生产以及利用秦艽种子进行组织培养及遗传操作，研究如何缩短秦艽种子发芽时间、提高种子发芽率及种子抗性成为了本领域亟待解决的技术问题。
为了解决发芽问题，生产上通常采用药剂处理、温差处理、物理处理等方法。试验表明，药剂方法中用赤霉素（刘丽莎,姬可平.秦艽种子发芽特性的研究[J].中草药,2002,3(33):269-271）、NaCl、KNO3（滕红梅,曹晓燕,王喆之.不同培养条件及预处理对秦艽种子萌发的影响[J].种子,2008,11:87-91）等处理、物理方法中用频率为40kHz超声处理15min（滕红梅,曹晓燕,王喆之.不同培养条件及预处理对秦艽种子萌发的影响[J].种子,2008,11:87-91）、温差方法中用20℃的热水浸泡处理（张西玲,王岚,刘丽莎.麻花秦艽种子发芽特性的研究[J].中药材,2004,3(27):160-161）等具有促进秦艽种子萌发的作用。但是这些方法仍不能解决缩短种子发芽时间及提高抗性方面的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性的方法。
本发明提供的方法，包括如下步骤：先将植物种子浸泡在含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中，得到处理后植物种子；再将所述处理后的植物种子播种，实现促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5-200。
上述方法中，所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5、10、20、40、80、120、160或200。
上述方法中，所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素的终浓度为50、100、200或400mg/L，硫酸亚铁的质量百分含量为0.2%；
或所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素的终浓度为50mg/L，硫酸亚铁的质量百分含量为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%或1%。
上述方法中，所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液为如下溶液A或溶液B：
每1L所述溶液A按照如下方法制备：将50mg、100mg、200mg或400mg赤霉素、2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液A；
每1L所述溶液B按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g、4g、6g、8g或10g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液B。
上述方法中，每1L所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液按照如下方法制备：将50mg赤霉素和2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液。
上述方法中，所述浸泡时间为6-24小时；所述浸泡时间具体为12小时。
上述方法中，所述浸泡条件为20℃、黑暗；
所述植物种子与所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液的配比为1g:3ml；
在所述浸泡前，还包括如下步骤：将植物种子过筛，选取粒径为0.45-0.6mm的植物种子；所述筛的筛孔直径为0.45mm。
上述方法中，在播种前还包括如下步骤：将处理后植物种子依次进行洗涤、干燥。
上述方法中，所述促进植物种子萌发体现在提高植物种子发芽率、提高植物种子发芽势、提高植物种子发芽指数和/或缩短植物种子发芽时间；
所述提高植物种子萌发耐受性为在提高植物种子萌发耐高温能力和/或提高植物种子萌发耐低温能力；所述高温具体为35℃，所述低温具体为耐5℃；
所述植物为双子叶植物或单子叶植物，所述双子叶植物具体为秦艽。
本发明的另一个目的是提供一种用于促进植物种子萌发的溶液。
本发明提供的溶液，为含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液，其中，赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5-200；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比具体为1：5、10、20、40、80、120、160或200；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液进一步具体为如下溶液A或溶液B：
每1L所述溶液A按照如下方法制备：将50mg、100mg、200mg或400mg赤霉素、2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液A；
每1L所述溶液B具体按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g、4g、6g、8g或10g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液B。
本发明的实验证明，本发明的方法在播种前采用含有赤霉素和硫酸亚铁水溶液浸泡种子；其中，赤霉素是植物界广泛存在的植物激素，用其处理种子可有效的打破种子的休眠，促进萌发，帮助种子通过萌发的初始阶段，诱发种子活力；对于大多数需光种子来说，外源赤霉素可以代替红外诱导种子的暗萌发；硫酸亚铁常用作微肥对种子进行施加，铁作为微量元素的一种在植物体内含量很少，但却是植物生长不可缺少的。一定浓度的微量元素浸种处理，可以活化种子体内的酶系统，促进种子储藏物质的分解，加速种子萌发的过程。因此，采用本发明的方法，使种子萌发在发芽率、发芽势、发芽指数有显著提高，且在5℃和35℃萌发条件下与常规种子在发芽率、发芽势、发芽指数上存在差异。本发明操作简单，成本低廉，可以广泛使用。经过本方法处理后的种子发芽快，出苗整齐，对低温和高温的抗性显著增强，具有良好的市场应用前景。
附图说明
图1为不同溶液引发后各个处理的累计发芽率
图2为不同溶液引发后各个处理的每日发芽数
图3为5℃和35℃下各个处理的累计发芽率
图4为5℃和35℃下各个处理的每日发芽数
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、促进秦艽种子萌发的方法
一、选种
陕西省宝鸡市陇县购买秦艽种子，首先通过风选去掉大杂、秕粒及破损的种子，然后过0.45mm的筛子，选用大小均匀、饱满种子（粒径在0.45-0.6mm）。
二、消毒
将经过一选取的种子采用质量百分含量为0.1%的次氯酸钠水溶液浸泡30分钟消毒，取出后用清水冲洗干净并滤干，得到消毒后种子。
三、促进秦艽种子萌发处理条件的摸索
1、不同溶液处理
1）播种前处理
赤霉素(GA)处理组：将上述二消毒后的种子，分别用浓度为50、100、200、400mg/L的赤霉素水溶液按种子质量(g)：溶液体积(ml)为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
硫酸亚铁（FeSO4）处理组：将上述二消毒后的种子，分别用质量分数为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的硫酸亚铁水溶液按种子质量(g)：溶液体积(ml)为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
CK组：上述二消毒后的种子不做任何处理。
2）播种萌发培养
将上述各组处理后的种子分别转入含有纸质芽床的培养皿（为在培养皿中放置发芽纸）中，每皿100粒，重复4次，放在20℃恒温、12h/12h光暗交替的培养箱中，从第5d开始（以种子放入培养皿记作发芽第0天）每天记录各个处理的发芽种子数（以胚根长度大于1mm为种子发芽），直至发芽结束（不同组的发芽结束时间不一样，CK的发芽结束时间为第19天、GA的发芽结束时间为第13天、FeSO4的发芽结束时间为第11天），计算发芽率、发芽势和发芽指数。
发芽率为在适宜的萌发条件下，发芽结束时，发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4的发芽率分别是在第19、13、11天统计。
发芽势为在规定时间内发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4的发芽势均是在第6天统计。
发芽指数（GI）=∑（Gt／Dt）；Dt指发芽日数，Gt指与Dt相对应的每天发芽种子数。
赤霉素处理组的结果如表1：
表1为不同浓度赤霉素（GA）水溶液处理的结果
硫酸亚铁处理组的结果如表2所示：
表2为不同浓度硫酸亚铁（FeSO4）水溶液处理的结果
从上述结果可以看出，与CK相比，不同浓度的GA、FeSO4处理均可以显著（P<0.05）提高种子的发芽率、发芽势和发芽指数。GA随着浓度的增加，发芽率差异不显著（P<0.05），发芽势和发芽指数呈增高趋势，存在差异显著（P<0.05）；FeSO4随着浓度的增加，发芽率、发芽势和发芽指数差异不大。
因此，出于成本考虑，选择低浓度FeSO4（0.2%）和不同浓度的GA组合或者不同浓度FeSO4和低浓度的GA(50mg/L)组合进行后续试验摸索。
2、单独溶液和混合溶液处理
1）播种前处理
单独不同浓度赤霉素水溶液处理组：将上述二消毒后的种子，用浓度为50mg/l、100mg/l、200mg/l或400mg/l赤霉素水溶液按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
单独硫酸亚铁水溶液处理组：将上述二消毒后的种子，用质量分数为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%的硫酸亚铁水溶液按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
CK组：上述二消毒后的种子不做任何处理。
含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液A处理组：将上述二消毒后的种子，用含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液A按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液A为0.2%FeSO4+50mg/L GA、0.2%FeSO4+100mg/LGA、0.2%FeSO4+200mg/L GA或0.2%FeSO4+400mg/L GA：
每1L的0.2%FeSO4+50mg/L GA按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g硫酸亚铁（硫酸亚铁终浓度为0.2%）溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.2%FeSO4+50mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：40。
每1L的0.2%FeSO4+100mg/L GA按照如下方法制备：将100mg赤霉素、2g硫酸亚铁（硫酸亚铁终浓度为0.2%）溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.2%FeSO4+100mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：20。
每1L的0.2%FeSO4+200mg/L GA按照如下方法制备：将200mg赤霉素、2g硫酸亚铁（硫酸亚铁终浓度为0.2%）溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.2%FeSO4+200mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：10。
每1L的0.2%FeSO4+400mg/L GA按照如下方法制备：将400mg赤霉素、2g硫酸亚铁（硫酸亚铁终浓度为0.2%）溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.2%FeSO4+400mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5。
含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液B处理组：将上述二消毒后的种子，用含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液B按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液B为0.4%FeSO4+50mg/L GA、0.6%FeSO4+50mg/L GA、0.8%FeSO4+50mg/L GA或1.0%FeSO4+50mg/L GA：
每1L的0.4%FeSO4+50mg/L GA按照如下方法制备：将50mg赤霉素、4g硫酸亚铁溶于水（硫酸亚铁终浓度为0.4%），再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.4%FeSO4+50mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：80。
每1L的0.6%FeSO4+50mg/L GA按照如下方法制备：将50mg赤霉素、6g硫酸亚铁溶于水（硫酸亚铁终浓度为0.6%），再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.6%FeSO4+50mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：120。
每1L的0.8%FeSO4+50mg/L GA按照如下方法制备：将50mg赤霉素、8g硫酸亚铁溶于水（硫酸亚铁终浓度为0.8%），再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到0.8%FeSO4+50mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：160。
每1L的1.0%FeSO4+50mg/L GA按照如下方法制备：将50mg赤霉素、10g硫酸亚铁溶于水（硫酸亚铁终浓度为1%），再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到1.0%FeSO4+50mg/L GA；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：200。
2）播种萌发
将上述各组处理后的种子分别转入纸质芽床的培养皿中，每皿100粒，重复4次，放在20℃恒温、12h/12h光暗交替的培养箱中，从第5d开始（以种子放入培养皿记作发芽第0天）每天记录各个处理的发芽种子数（以胚根长度大于1mm为种子发芽），直至发芽结束（不同组的发芽结束时间不一样，CK的发芽结束时间为第19天、GA的发芽结束时间为第13天、FeSO4的发芽结束时间为第11天、GA+FeSO4混合溶液的发芽结束时间为第10天）。
计算发芽率、发芽势和发芽指数。
发芽率为在适宜的萌发条件下，发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4和GA+FeSO4混合溶液的最终发芽率分别是在第19、13、11、10天统计。
发芽势为在规定时间内发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4和GA+FeSO4混合溶液的发芽势是在第6天统计。
发芽指数（GI）=∑（Gt／Dt）；Dt指发芽日数，Gt指与Dt相对应的每天发芽种子数。
单独不同浓度赤霉素水溶液处理组、单独硫酸亚铁水溶液处理组和CK组的处理结果如前面表1和表2所示。
GA+FeSO4混合溶液的结果如表3所示：
表3为不同浓度FeSO4与GA组合处理后的结果
| 处理 | 发芽率 | 发芽势 | 发芽指数 |
| 0.2%FeSO4+50mg/L GA | 93.4±1.7a | 82.9±2.3a | 16.8±0.3a |
| 0.2%FeSO4+100mg/L GA | 94.3±1.0a | 83.5±1.3a | 16.9±0.2a |
| 0.2%FeSO4+200mg/L GA | 93.3±1.9a | 82.8±2.5a | 16.6±0.4a |
| 0.2%FeSO4+400mg/L GA | 94.7±1.2a | 83.0±1.0a | 17.0±0.1a |
| 0.4%FeSO4+50mg/L GA | 95.7±0.6a | 83.0±4.4a | 17.2±0.3a |
| 0.6%FeSO4+50mg/L GA | 94.7±1.2a | 81.7±3.8a | 16.9±0.2a |
| 0.8%FeSO4+50mg/L GA | 93.7±1.2a | 81.0±1.0a | 16.7±0.2a |
| 1.0%FeSO4+50mg/L GA | 95.0±1.0a | 83.3±2.3a | 17.1±0.1a |
从上述表1-表3可以看出，与CK组、单独的不同浓度FeSO4处理组（0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%）、单独不同浓度赤霉素水溶液处理组（50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L）相比，8种浓度的GA+FeSO4混合溶液的发芽率有所提高，尤其发芽势和发芽指数显著高于单独处理组和对照组，且发芽结束时间明显比单独或对照提前。
8种浓度的GA+FeSO4混合溶液处理组的发芽率、发芽势和发芽指数没有显著差异，因此，考虑成本，可以最优选用0.2%FeSO4+50mg/L GA作为处理，重复上述实验，以单独0.2%FeSO4、单独50mg/L GA处理和CK处理为对照，结果如表4所示。
表4不同溶液处理后的结果
| 处理 | 发芽率 | 发芽势 | 发芽指数 |
| 0.2%FeSO4 | 91.3±2.9a | 44.7±1.5b | 14.0±0.3b |
| 50mg/L GA | 90.7±1.2a | 19.0±2.0c | 11.8±0.1c |
| 0.2%FeSO4+50mg/L GA | 94.8±1.0a | 77.0±1.0a | 16.2±0.1a |
| ck | 82.0±1.7b | 1.5±0.6d | 8.5±0.5d |
可以看出，0.2%FeSO4+50mg/L GA处理组处理后种子的发芽率、发芽势和发芽指数仍然均高于其他组。
统计0.2%FeSO4组、50mg/L GA组、0.2%FeSO4+50mg/L GA组和CK组在不同发芽天数的发芽数及累积发芽率，结果如图1和图2所示，
0.2%FeSO4组（FeSO4）在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天每日发芽种子数分别为0、0、36.7、11.0、2.3、0、0、0、0、0；
50mg/L GA组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天每日发芽种子数分别为0、0、15.0、18.5、13.5、4.3、0、0、0、0；
0.2%FeSO4+50mg/L GA组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天每日发芽种子数分别为0、0、48.7、2.3、0.3、0、0、0、0、0；
CK组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天每日发芽种子数分别为0、0、1.0、9.0、14.0、9.3、4.3、1.5、1.0、0；
0.2%FeSO4组（FeSO4）在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20天累积发芽率分别为0、0、44.7、84.7、91.3、91.3、91.3、91.3、91.3、91.3；
50mg/L GA组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天累积发芽率分别为0、0、19.0、59.0、83.7、90.7、90.7、90.7、90.7、90.7；
0.2%FeSO4+50mg/L GA组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22累积发芽率分别为0、0、77.0、94.0、94.8、94.8、94.8、94.8、94.8、94.8；
CK组在发芽第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天累积发芽率分别为0、0、1.5、15.7、51.0、69.3、77.3、81.0、81.7、82.0。
从上述结果进一步证明，0.2%FeSO4+50mg/L GA为最佳处理溶液配方。
3、含有赤霉素和硫酸亚铁的溶液浸泡种子的不同时间摸索
1）播种前处理
不同浸泡时间处理组：将上述二消毒后的种子，用最佳含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下分别浸泡1、3、6、12或24小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子；
每1L所述含有不同浓度的赤霉素和硫酸亚铁的水溶液（0.2%FeSO4+50mg/L GA）按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到含有不同浓度的赤霉素和硫酸亚铁的水溶液；其中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1:40。
2）播种萌发
将上述处理后的种子分别转入纸质芽床的培养皿中，每皿100粒，重复4次，放在20℃恒温、12h/12h光暗交替的培养箱中，从第5d开始（以种子放入培养皿记作发芽第0天）每天记录各个处理的发芽种子数（以胚根长度大于1mm为种子发芽），直至发芽结束。
计算发芽率、发芽势、和发芽指数；
发芽率为在适宜的萌发条件下，发芽的种子数与供试种子数的百分比，GA+FeSO4混合溶液的最终发芽率在第10天统计。
发芽势为在规定时间内发芽的种子数与供试种子数的百分比，GA+FeSO4混合溶液的发芽势是在第6天统计。
发芽指数（GI）=∑（Gt／Dt）；Dt指发芽日数，Gt指与Dt相对应的每天发芽种子数。
结果如表5所示，
表5为不同浸泡处理时间发芽率、发芽势和发芽指数
可以看出，浸泡6-12h的发芽势和发芽指数均高于其他组，尤其浸泡12h发芽率、发芽势和发芽指数均高于其他组。
重复上述实验，结果如表7所示：
表7为发芽率、发芽势和发芽指数
可以看出，20℃黑暗条件下浸泡6-12h的发芽率、发芽势和发芽指数均高于其他；尤其浸泡12h为最佳浸泡时间。
上述实验表明：促进秦艽种子萌发的方法可以采用播种前选用最佳含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液浸泡12h处理，可以提高植物种子发芽率、提高植物种子发芽势和/或提高植物种子发芽指数；与不进行任何处理相比，尤其缩短了种子发芽时间。
实施例2、促进秦艽种子萌发处理后种子抗性测定
一、选种：与实施例1的一相同；
二、消毒：与实施例1的一相同；
三、含有赤霉素和硫酸亚铁的溶液处理
1）播种前处理
将上述二消毒后的种子，用上述实施例1得到的含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液0.2%FeSO4+50mg/L GA、0.2%FeSO4+400mg/L GA和1.0%FeSO4+50mg/L GA按种子质量（g）：溶液体积（ml）为1:3在20℃黑暗条件下浸泡12小时；然后用清水冲洗并滤干，放在20℃下风干，得到处理后种子。
2）播种萌发
将上述处理后的种子分别转入纸质芽床的培养皿中，每皿100粒，重复4次，分别放在5℃和35℃恒温、12h/12h光暗交替的培养箱中，处理5d（以种子放入培养皿记作发芽第0天）后转入20℃恒温、12h/12h光暗交替的培养箱中正常培养。从第6d开始（以种子放入培养皿记作发芽第0天）每天记录各个处理的发芽种子数（以胚根长度大于1mm为种子发芽），直至发芽结束。
以不进行溶液处理（CK）组、单独50mg/L GA处理组和单独0.2%FeSO4处理组为对照。
计算发芽率、发芽势和发芽指数。
发芽率为在适宜的萌发条件下，发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4和GA+FeSO4混合溶液的最终发芽率分别是在第19、15、12、10天统计（抗性实验种子的初始发芽时间推迟导致终止时间与正常条件下的发芽终止时间不一致）。
发芽势为在规定时间内发芽的种子数与供试种子数的百分比，CK、GA、FeSO4和GA+FeSO4混合溶液的发芽势是在第8天统计（因为抗性实验种子的初始发芽时间推迟导致发芽势与正常条件下的发芽势时间不一致）。
发芽指数（GI）=∑（Gt／Dt）；Dt指发芽日数，Gt指与Dt相对应的每天发芽种子数。
结果如表8所示：
表8为发芽率、发芽势和发芽指数
从上表可以看出，与单独处理和CK组相比，混合处理组在5℃和35℃条件下的发芽率、发芽势和发芽指数均提高。
统计0.2%FeSO4+50mg/L GA组和CK组在5℃和35℃条件下每日发芽数及累积发芽率，结果如图3和图4所示，
图4为5℃和35℃下各个处理的每日发芽数；
0.2%FeSO4+50mg/L GA组在5℃发芽条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天每日发芽种子数分别为0、0、0、29.0、14.0、2.0、0、0、0、0；
CK组在5℃发芽条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天每日发芽种子数分别为0、0、0、0、6.7、18.3、12.3、3.8、0.8、0；
图3为5℃和35℃下各个处理的累积发芽率；
0.2%FeSO4+50mg/L GA组在35℃发芽条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天累积发芽种子数分别为0、0、0、63.7、95.0、96.3、96.3、96.3、96.3、96.3；
CK组在35℃发芽条件下第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22天累积发芽种子数分别为0、0、0、2.3、19.3、52.0、77.3、85.3、88.0、88.0；
可以看出，与不进行任何处理组相比，在含有50mg/L赤霉素和0.2%硫酸亚铁的水溶液浸泡12h处理后的种子，在萌发时耐寒（耐5℃）也耐热（耐35℃）。
Claims (10)
1.一种促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性的方法，包括如下步骤：先将植物种子浸泡在含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中，得到处理后植物种子；再将所述处理后的植物种子播种，实现促进植物种子萌发和/或提高植物种子萌发耐受性；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5-200。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5、10、20、40、80、120、160或200。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素的终浓度为50、100、200或400mg/L，硫酸亚铁的质量百分含量为0.2%；
或所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素的终浓度为50mg/L，硫酸亚铁的质量百分含量为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%或1%。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液为如下溶液A或溶液B：
每1L所述溶液A按照如下方法制备：将50mg、100mg、200mg或400mg赤霉素、2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液A；
每1L所述溶液B按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g、4g、6g、8g或10g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液B。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：每1L所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液按照如下方法制备：将50mg赤霉素和2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述浸泡时间为6-24小时；所述浸泡时间具体为12小时。
7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述浸泡条件为20℃、黑暗；
所述植物种子与所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液的配比为1g:3ml；
在所述浸泡前，还包括如下步骤：将植物种子过筛，选取粒径为0.45-0.6mm的植物种子；所述筛的筛孔直径为0.45mm。
8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：在播种前还包括如下步骤：将处理后植物种子依次进行洗涤、干燥。
9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：所述促进植物种子萌发体现在提高植物种子发芽率、提高植物种子发芽势、提高植物种子发芽指数和/或缩短植物种子发芽时间；
所述提高植物种子萌发耐受性为在提高植物种子萌发耐高温能力和/或提高植物种子萌发耐低温能力；所述高温具体为35℃，所述低温具体为耐5℃；
所述植物为双子叶植物或单子叶植物，所述双子叶植物具体为秦艽。
10.一种用于促进植物种子萌发的溶液，为含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液，其中，赤霉素和硫酸亚铁的质量比为1：5-200；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液中赤霉素和硫酸亚铁的质量比具体为1：5、10、20、40、80、120、160或200；
所述含有赤霉素和硫酸亚铁的水溶液进一步具体为如下溶液A或溶液B：
每1L所述溶液A按照如下方法制备：将50mg、100mg、200mg或400mg赤霉素、2g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液A；
每1L所述溶液B具体按照如下方法制备：将50mg赤霉素、2g、4g、6g、8g或10g硫酸亚铁溶于水，再滴加0.1ml的硫酸，用水补足体积，得到溶液B。
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