CN102883746A - 癌症治疗 - Google Patents
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Abstract
一种基于细胞的疫苗延长了癌症患者的存活期。该疫苗包括一个剂量的转染有HLA A1与gp96-Ig（人gp96，其中内质网滞留信号KDEL被人IgG1的Fc部分代替）的辐照培养的肺腺癌细胞（AD100），并且被皮内注射到患有晚期、复发性或转移性非小细胞肺癌（NSCLC）的患者体内。与用安慰剂治疗相似患者相比，该疫苗的施用增加了患者的平均存活时间。而且，患者对该疫苗的免疫应答（由T细胞产生的抗原诱导的干扰素γ）与存活时间相关。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年5月21日提交的美国临时专利申请序列号61/347,336的优先权，通过引用以其全文结合在此。
关于联邦资助研究的声明
本发明是在由国立卫生研究院授予的授权号PO1CA109094下在美国政府支持下完成的。美国政府对本发明有一定的权利。
发明领域
本发明总体上涉及医学、肿瘤学、以及免疫学领域。更具体而言，本发明涉及使用基于细胞的疫苗来延长非小细胞肺癌（NSCLC）患者的生命的组合物和方法。
背景技术
尽管有许多进展，在发达国家中癌症仍然是死亡和发病的主要原因之一。虽然现在已经揭示了肿瘤发生的许多分子机制，大多数侵袭性肿瘤的标准治疗仍然是手术切除、化学疗法以及放射疗法。虽然这些方法日益成功，但它们各自仍然引起许多所不希望的副作用。在许多不同类型的癌症中，NSCLC是最常见和最致命的一种。
NSCLC在美国的年发病人数超过135,000（所有类型的肺癌患者的总数为170,000）。NSCLC在转移或复发之后几乎是致死无疑的，五年存活率<5%。肺肿瘤的年死亡率高于结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌的年死亡率。化学疗法对于NSCLC疾病的治疗效果是差的。III期临床试验已经典型地证明反应率为15%到30%，中位存活期小于一年。对在最佳支持性疗法和化学疗法之间的转移性NSCLC患者进行随机化的临床研究的最近的荟萃分析得出结论，在存活期方面的平均潜在增益（mean potentialgain）只有六个星期。最近还报道了在NSCLC方面的许多新药和组合，但这些方案仅在<10%的患者中导致了完全反应并且对存活期影响极小。与更好的存活期相关的因素包括III期疾病（相对于IV期）、无体重减轻、良好的体力状态、正常的乳酸脱氢酶（LDH）、较少的转移部位、没有向生命器官（如脑、脑膜、骨髓以及肝）的转移、以及较长的复发间隔。显然，有效的治疗需要创新的策略。
概述
本发明涉及以下发现，即一种基于细胞的疫苗可以延长癌症患者的存活期并且减缓疾病的进展。在做出这一发现的过程中，将包括一个剂量的转染有HLA A1与gp96-Ig（人gp96，其中内质网滞留信号KDEL被人IgG1的FC部分代替）的培养的肺腺癌细胞（AD100）的一种疫苗辐照处理并且皮内注射到患有晚期、复发性或转移性NSCLC的患者体内。结果显示，与用安慰剂治疗的相同患者的平均存活时间相比，该疫苗的施用增加了患者的平均存活时间。而且，患者对该疫苗的免疫应答与存活时间相关。
因此，在一个方面，本发明的特征在于一种治疗在人类受试者中的癌症的方法。这种方法包括向受试者施用一种包括多个宿主细胞的疫苗的步骤，每个宿主细胞共同表达至少一种肿瘤抗原以及被修饰以便从每个宿主细胞分泌的一种热休克蛋白。在该方法中，该受试者的存活时间相比于患有相同类型和阶段的癌症的其他受试者的预期存活时间可以是增加的。该方法可能另外包括在施用该疫苗之前和/或之后分析该受试者的血液中的CD8T淋巴细胞的步骤。
这些宿主细胞可以是癌细胞（例如源自与该受试者中的癌症相同类型和/或等级的一个细胞系）。在该人类受试者中的癌症是一种肺癌的情况下，这些宿主细胞可以是肺癌细胞。作为一个例子，在该肺癌是非小细胞肺癌的情况下，这些宿主细胞可以是非小细胞肺癌细胞。这些宿主细胞可以是来自该受试者的或者对该受试者是异基因的，并且可以在施用该疫苗之前对这些宿主细胞进行辐照处理（例如，用来防止在施用之后这些细胞复制同时允许发生热休克蛋白的分泌持续几天或若干天）。可以皮内施用该疫苗。在一个实例中，该疫苗是在一天之内在受试者的皮肤的多个部位施用的。
本发明的另一个方面是一种包含多个宿主细胞的用来治疗在人类受试者中的癌症的疫苗的用途，其中每个宿主细胞共同表达至少一种肿瘤抗原以及被修饰以便从每个宿主细胞分泌的一种热休克蛋白。在此用途中，该受试者的存活时间相比于患有相同类型和阶段的癌症的其他受试者的预期存活时间可以是增加的。在该人类受试者中的癌症是一种肺癌的情况下，这些宿主细胞可以是肺癌细胞。作为一个例子，在该肺癌是非小细胞肺癌的情况下，那么这些宿主细胞可以是非小细胞肺癌细胞。这些宿主细胞可以是来自该受试者的或者对该受试者是异基因的，并且可以在施用该疫苗之前对这些宿主细胞进行辐照处理（例如，用来防止在施用之后这些细胞复制同时允许发生热休克蛋白的分泌持续几天或若干天）。并且，可以例如在一天之内在受试者的皮肤的多个部位皮内施用该疫苗。
除非另有定义，在此所使用的所有技术术语均与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的具有相同的含义。通常理解的生物学术语的定义可以在Rieger等人的遗传学词汇：经典及分子，第五版，施普林格出版社：纽约，1991（Rieger et al.,Glossary of Genetics:Classical andMolecular,5th edition,Springer-Verlag:New York,1991）；以及Lewin的基因V，牛津大学出版社：纽约，1994（Lewin,Genes V，Oxford University Press:New York,1994）中找到。
虽然与在此描述的那些相似或等效的方法和材料可以用于本发明的实践或测试，以下描述了适合的方法和材料。在此提及的所有专利文献和出版物通过引用以其全文结合在此。在发生冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。另外，以下所讨论的具体实施方案仅仅是说明性的而不旨在限制。
附图简要说明
图1是卡普兰-迈耶（Kaplan-Meier）曲线的曲线图，显示了叠加在来自另一项研究的历史数据上的来自临床研究的患者存活期数据。刻度线指示在该指示的时间点处于存活状态的患者。
图2是显示在由外周血CD8+T细胞响应于AD100细胞所产生的IFNγ与总存活期之间的关联的曲线图。
图3是一系列曲线图，显示了在IFN-γ酶联免疫斑点（ELIspot）中检测的CD8CTL频率（左图）、在血液中的FoxP3(+)CD4的频率（中图）、以及中位存活期（右图）。
详细说明
本发明涵盖有关治疗癌症的方法和组合物。以下描述的优选实施方案说明了这些组合物和方法的调适。虽然如此，根据这些实施方案的说明，基于以下提供的说明可以完成和/或实践本发明的其他方面。
生物学方法
在此描述了涉及常规免疫学和分子生物学技术的方法。这些免疫学方法在本领域中通常是已知的，并且描述于方法论专著如Coligan等人编著的当代免疫学实验手册，约翰·威利父子出版公司，纽约（CurrentProtocols in Immunology,Coligan et al.,ed.,John Wiley&Sons,New York）中。分子生物学的技术详细描述于以下专著中，如Sambrook等人编著的分子克隆：实验室手册，第2版，第1-3卷，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约，2001（Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2nd ed.,vol.1-3,Sambrook et al.,ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,2001）；以及Ausubel等人编著的当代分子生物学实验手册，格林出版与威利交叉科学，纽约（Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel etal.,ed.,Greene Publishing and Wiley-Interscience,New York）。细胞培养技术在本领域中通常是已知的，并且详细描述于以下方法学专著中，如R IanFreshney所著的动物细胞培养：基础技术手册，第4版，威利-利斯公司，霍博肯，新泽西州，2000（Culture of Animal Cells:A Manual of BasicTechnique,4th edition,by R Ian Freshney，Wiley-Liss,Hoboken,N.J.,2000）；以及Maureen A Harrison和Ian F Rae的细胞培养的一般技术，剑桥大学出版社，剑桥，英国，1994（General Techniques of Cell Culture,by Maureen AHarrison and Ian F Rae,Cambridge University Press,Cambridge,UK,1994）。蛋白质纯化的方法论述于由Deutscher M P编辑的蛋白质纯化指南：酶学方法，第182卷，学术出版社，圣地亚哥，加利福尼亚，1990（Guide to ProteinPurification:Methods in Enzymology，Vol.182,Deutscher M P，ed.,AcademicPress,San Diego,Calif.,1990）。在McPhee和Papadakis的当代医学诊断与治疗2010，第49版，麦格劳-希尔医学，2010（McPhee and Papadakis,CurrentMedical Diagnosis and Treatment 2010,49th Edition,McGraw-Hill Medical,2010）以及Fauci等人的哈里森内科学原理，第17版，麦格劳-希尔专业出版，2008（Fauci et al.,Harrison’s Principles of Internal Medicine,17thEdition,McGraw-Hill Professional,2008）中描述了医疗治疗的一般方法。
肿瘤性疾病的治疗
在此描述的这些组合物和方法通过向受试者施用一种药物组合物用于治疗人类受试者中的肿瘤性疾病（如癌症）是有用的，该药物组合物包括表达一种或多种肿瘤相关抗原并且分泌一种热休克蛋白（如gp96的一种分泌形式）的细胞。0}该人类受试者可以是男性、女性、成人、儿童、老年人（65岁以及大于65岁），以及患有其他疾病的那些。特别优选的受试者是那些在用化学疗法、放射疗法、外科手术和/或生物制剂治疗之后其疾病进展的患者。尽管这种技术被认为对于治疗源于肺组织的癌症（如NSCLC）是特别有效的（与当前治疗方式相比），对用在此描述的这些疫苗的治疗敏感的任何类型的一种癌症都可能是靶向的。其他类型的癌症包括源于膀胱、乳房、结肠、直肠、子宫内膜、子宫颈、肾、血液（如白血病和淋巴瘤）、皮肤（如黑色素瘤）、胰、前列腺、甲状腺、睾丸以及卵巢的癌症。
对一个癌症病人的成功治疗可以被评定为预期存活期的延长、抗肿瘤免疫应答的诱导或癌症的具体特征的改善。可能被改善的癌症的特征的例子包括肿瘤大小（如T0、Tis、或者T1-4）、转移状态（如M0、M1）、可观测肿瘤的数目、淋巴结累及（如N0、N1-4、Nx）、等级（即等级1、2、3、或4）、阶段（如0、I、II、III或IV期）、细胞上或体液中某些标志物的存在或浓度（如AFP、B2M、β-HCG、BTA、CA 15-3、CA27.29、CA 125、CA 72.4、CA 19-9、降钙素、CEA、嗜铬素A（chromgrainin A）、EGFR、激素受体、HER2、HCG、免疫球蛋白、NSE、NMP22、PSA、PAP、PSMA、S-100、TA-90、以及甲状腺球蛋白）、和/或相关的病理（如腹水或水肿）或症状（如恶病质、发热、食欲缺乏、或疼痛）。如果可以按百分比来度量，该改善可以是至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、或90%（如存活期、或肿瘤的体积或线性尺寸）。
疫苗组合物
本发明包括药物组合物和药剂，该药物组合物和药剂包括或使用表达一种或多种肿瘤相关抗原并且分泌一种热休克蛋白（例如gp96的一种分泌形式）的细胞作为一种活性成份。这些细胞可能来自于从患者外植的肿瘤产生的一个或多个人肿瘤细胞系（如单个肿瘤细胞系、或相同癌症类型或不同癌症类型的多个肿瘤细胞系），或者可能是人细胞系（如HEK293），该人细胞系不是由一种癌症衍生的而是被工程化以便表达一种或多种肿瘤相关抗原。可以对这些细胞进行辐照以防止它们的复制，同时允许热休克蛋白分泌持续至少1、2、3、4、5、6、或7天（例如，以至少2000、4000、6000、8000、10,000、或12,000拉德的剂量）。它们也可以被工程化为表达另一种标志物（如一种人MHC蛋白）。可以将用于该疫苗的这些细胞冷冻储存，并且正好在使用之前在一种无菌的、药学上可接受的液体（如USP级盐水或一种缓冲盐溶液）中进行复原。药学上可接受的载体以及药物制剂的清单可以在作为本领域内的标准文本的雷明登氏药物科学（Remington’s Pharmaceutical Sciences）以及在USP/NF中找到。可以向这些组合物中加入其它的物质（例如人血清白蛋白和/或DMSO），并且采取其它的步骤来稳定和/或保存这些组合物、和/或促进它们施用到受试者。
疫苗施用
可以通过任何适合的技术向动物或人施用本发明的这些组合物。典型地，这种施用将是肠胃外的（例如皮内、皮下、肌内、或者腹膜内注射）。在通过注射施用这些组合物的实施方案中，针的大小应当选择为使剪切降低至最低限度以便保护这些细胞的完整性（例如，根据不同的应用，大于14、16、18、20、22、或24号）。这些组合物优选地是通过多次注射（例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、40、45、或50次注射）或通过在多个部位（如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、或14个部位）的连续输注（如使用一个泵）而施用的。
在一个实例中，在多个身体部位进行了皮肤注射以便降低局部皮肤反应的程度。在一个给定的接种日，患者接受由一个注射器进行施用的指定总剂量的细胞，将该总剂量分为3-5个独立的皮内注射剂量（例如至少0.4ml、0.2ml、或0.1ml)，各自在肢体中在针头进入处距离最近的相邻注射相距至少大约5cm（如至少4.5、5、6、7、8、9、或10cm）。在后续的接种日中，这些注射部位按照顺时针或者逆时针的方式在不同肢体间轮流。
疫苗接种的剂量和次数
一个治疗有效量是能够在治疗的动物或人体内产生医学上所希望的结果的量。本发明的这些组合物的有效量是对患者产生临床疗效的量，该临床疗效是通过预期存活期的增加（与相似患者的平均值相比）或者以上描述的一种或多种癌症特征的改善来度量的。正如在医疗领域熟知的，对于任何一种动物或人体采用的剂量取决于很多因素，包括受试者的尺寸、体表面积、年龄、待进行施用的具体组合物、性别、施用的时间和途径、全身健康状况、以及同时进行施用的其他药物。每次施用的优选剂量为在体外培养中分泌至少100、500、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、或9000mg/ml/天的分泌形式的热休克蛋白的那些细胞数量。每一剂量中的细胞数量可以在从100,000到100,000,000（例如大约100,000；250,000；500,000；750,000；1,000,000；2,000,000；5,000,000；10,000,000；20,000,000；50,000,000；或者100,000,000+/-20%、10%、或5%）的范围内。该剂量可以重复给予，如每小时一次、每日一次、一周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次。
作为一种施用方案的一个例子，在每次治疗出诊（每周或每隔一周）时都要进行癌症以及毒性的临床评价。在给予疫苗接种之前的每个疗程的第1天获得用于免疫学评价的血样。对于在第一个疫苗接种过程结束时具有疾病稳定迹象或反应性NSCLC、以及可接受的毒性（自身免疫<2级，并且其他身体系统≤2级）的患者，按照相同的剂量和时间表以一个另外的过程进行处理。如果在第二个疗程结束时患者具有疾病稳定迹象或反应性NSCLC、以及可接受的毒性（自身免疫<2级，并且其他身体系统≤2级），则对其按照相同的剂量和时间表给予第三个疗程。
实例
实例I-药物
名称Ad100-gp96Ig-HLAA1，短gp96-疫苗（gp96-Ig和HLAA1转染的NSCLC细胞系）。在美国专利申请序列号11/878,460中描述了这种药物。一种人肺腺癌细胞系是在1994年从一位肺癌患者的活组织检查建立的并被指定为Ad#100。该患者是一位74岁的白人男性，他于1993年出现由于髂嵴的骨侵蚀以及原发性和转移性肺腺癌的肺结节引起的骨盆痛的始发症状。用于培养的癌细胞是通过骨髓穿刺从髋骨破坏区获得的。患者的骨盆接受了放射治疗，但在诊断一个月之后终止。衍生自这个患者的该细胞系被保持在标准培养基（在下文中描述）中进行培养，并且不受支原体、病毒或其他外源因子的污染。该细胞系是均质的，可粘附于塑料，并且以大约26h的分裂率生长。该细胞系经过检验并且确定为没有下列物质：HIV-1、HIV-2、HTLV-1、HTLV-2、HBV、腺病毒、多瘤病毒、CMV、EBV、HHV6、HCV、VZV、细小病毒B19、HPV、以及支原体。
用质粒cDNA“B45-neo-gp96Ig-HLA A1”转染Ad100并且用G418进行选择。B45是一种通过缺失衣壳编码基因L1和L2并且进一步缺失潜在转化基因E5、E6以及E7而衍生自牛乳头瘤病毒的载体。该载体包含两个真核cDNA表达盒；在这种情况下，HLA A1由金属硫蛋白启动子驱动而gp96-Ig由巨细胞病毒（CMV）启动子驱动。该穿梭载体还含有用于在大肠杆菌中进行选择的β-内酰胺酶基因以及用于在胸苷激酶启动子下进行转染的Ad100细胞的G418选择的新霉素抗性基因。该B45载体的E1和E2基因编码两种病毒蛋白，这些病毒蛋白对于质粒的游离型复制以及编码的cDNA的高水平表达是必需的。通过包含人β-珠蛋白基因的一个非编码部分进一步增强cDNA的高水平表达。该疫苗细胞系被永久性地转染（无需新的转染）并且保持在G418中在定期再选择条件下，以确保质粒-附加体在转染细胞中的维持。
使用特异性抗体通过荧光激活细胞分选术（FACS）分析来确定人HLA A1的表达。将在70%或以上的细胞上表达HLA A1的制剂用于疫苗接种。通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测gp96-Ig融合蛋白的Ig部分来测量gp96-Ig的表达。将在24小时内由106个细胞产生≥60ng的gp96-Ig的细胞用于疫苗接种。
将该细胞系在无菌条件下于GMP设备中进行扩增。针对每批次通过FDA要求和批准的测定法来确定没有细菌、病毒、酵母、以及支原体以及内毒素的水平。
FCS、IMDM、胰蛋白酶EDTA、HBSS以及G418是从GIBCO获得的并且经检验不含外源试剂。DMSO来自Sigma并且同样不含外源因子。人血清白蛋白以及缓冲盐水溶液均为医药级。将这些批次的细胞在组织培养瓶中扩增到大约1-5x109个细胞，然后通过FACS来检测表达的HLA A1的存在并且通过ELISA检测gp96Ig的存在。收集细胞，洗涤，并且在4°C下再悬浮于缓冲盐水+10%DMSO+0.5%人血清白蛋白中，等分为5x107/0.5ml，并且在4°C下用钴辐照器在12,000拉德下进行辐照。取出样品用于生物学和安全性分析。将剩余的等分部分在-135°C下冷冻并储存。
为了确保经辐照之后该疫苗细胞系虽然失去复制能力但仍保持生物活性，对在12,000拉德辐照之后的AD100-gp96-Ig-HLA A1细胞系进行如下测试：在软琼脂中的集落形成：在铺板的108个辐照细胞中未检测到集落；Gp96-Ig分泌：在随后的辐射14天之后接近0ng，而未辐照的对照组保持gp96-Ig产生；对于最早的48h，在这些辐照细胞中的胸腺嘧啶掺入是增加的（与对照组相比），这是由于DNA修复引起的（辐照细胞在一周后显示没有胸腺嘧啶摄取，而与此相反，对照组细胞继续增殖并摄取胸腺嘧啶）；并且在装配以及衰变的年度调整时对该钴辐照器进行校准。该钴辐照器是一个全景辐照器（panoramic irradiator），其辐射剂量仅取决于每年调整的辐照源的自然衰退（physical decay）。
待注射的该疫苗含有辐照的Ad100细胞，这些细胞在至少70%的细胞上表达HLAA1并且产生≥60ng gp96-Ig/24hx1百万个细胞；经台盼蓝拒染法测得的生存力≥70%。将这些细胞再悬浮于具有0.5%人血清白蛋白、10%DMSO的缓冲盐水中。
实例II-CD8应答
CD8细胞是用来自干细胞技术（Stem Cell Technologies）（加拿大，温哥华）的Rosette-Sep试剂盒从15ml血液中纯化得到的。这个过程通过阴性选择产生大约150万个纯度大约85%的CD8细胞，还消除了具有抗CD56的NK细胞。主要的污染细胞是B细胞。将CD8细胞（20,000）分为一式三份在酶联免疫斑点（ELI-spot）平板中用1,000个细胞激发48h，这些细胞各自为自体肿瘤细胞、AD100-HLA A1-gp96Ig（疫苗）、AD100（未转染）、Mel-A1（HLAA1转染的黑色素瘤）、SCLC-A1（A1转染的小细胞肺癌）、以及K562（NK靶），或者对于CD8细胞无激发。使用适当的酶联免疫斑点抗体（Becton&Dickinson）测定IFN-γ、IL-4以及颗粒酶B的分泌。样品被分为一式三份来进行并且通过来自C.T.L（CellularTechnologies Ltd,克利夫兰，俄亥俄州）的自动酶联免疫斑点分析仪（ELI-spot reader）进行定量。
实例III-临床结果
通过Kaplan-Meier法估计无进展存活期和总存活期，利用施用方案队列进行分层。确定了相应的中位存活时间（具有90%的置信限），正如在参与试验6、12、18、24、以及36个月后保持存活的患者的累积百分比。在可能的范围内，使用比例风险回归分析来评定无进展存活期和总存活期与施用方案分配、所接受的治疗（如总剂量、疫苗接种次数）、基线特征以及免疫应答的各种度量（如CD8成倍增加）的关系。
实例IV：患有IIIB/IV期非小细胞肺癌（NSCLC）并且具有多种预治疗方案的患者的I阶段研究。
限定参与试验的患者群的特征为：局部晚期或转移性IIIB/IV期非小细胞肺癌，ECOG体力状态0-2，以及多种预治疗，包括化学疗法、放射疗法和生物调节剂治疗。患者被分到三个组中的一个。被编入到组1中的患者每两周一次接受9个剂量的AD100-gp96-A1，被编入到组2中的患者每周一次接受18个剂量的AD100-gp96-A1，而被编入到组3中的患者每周两次接受36个剂量的AD100-gp96-A1。对3个组的每一个来说，AD100-gp96-A1的总剂量在治疗过程中是恒定的。在用AD100-gp96-A1治疗的同时不给予任何另外的佐剂或治疗。
实例V：在一个时期（One Time Period）的结果
在参与本研究的最早的12位患者中，1位在接受疫苗接种之前去世，9位被编入组1（每两周一次的剂量），1位被编入组2（每周一次的剂量），并且1位被编入组3（每周两次的剂量）。所有患者均无与疫苗相关的严重不良事件（SAE）报告，但都经历了注射疫苗部位反应，包括红斑和轻微肿胀。一位患者在接受疫苗后一个月之内去世，然而该患者的SAE报告确定其死亡是由于疾病的进展而不是疫苗治疗引起的。12位已经接受至少一个疫苗剂量的患者的总存活期绘制在图1中。
图1将该研究数据与来自Massarelli研究（肺癌39:55061，2002）的历史数据进行叠加。由于Massarelli研究是根据患者已经接受的先前治疗的次数来分析病人的存活期和反应的最佳研究之一，对于本研究它是一个优异的比较标准（comparator）。Massarelli研究提供了针对已经进行了4线治疗的患者的存活数据。图1数据自其推导出的患者在用AD100-gp96-A1治疗之前平均在5.3线治疗时失败（中位数为4线，不包括外科手术和放射疗法）。
为了评价患者的免疫应答，在接受疫苗之前以及随后每隔6周的时间间隔（在每个疗程之间）从每位患者抽取外周血样。然后评价了外周血淋巴细胞响应于AD100疫苗细胞或其他不相关细胞系的刺激的细胞因子如干扰素-γ以及颗粒酶B的产生。还通过流式细胞术分析了外周血的淋巴细胞亚群组成。参考图2，从被编入组1中的四位患者收集的数据证明了由CD8+T细胞产生的干扰素γ与总存活期之间的关联。
若干患者在没有完成全疗程时实现了疾病稳定。一位患者在这个时间点治疗后存活了超过20个月，另一位患者在治疗后存活了18个月。在治疗过程中测量的AD100-gp96-A1特异性T细胞应答的量值显得是存活期增加的预测。
患者1003在参与试验时具有局部晚期和进行性疾病，伴随着显著的胸腔积液。患者1006在整个一侧肺部具有一个大的扩散的肿块，该肿块对于气管隆凸（carina）是局部侵袭性的。这两位患者归入IIIB/IV期NSCLC的T4胸腔积液和T4侵袭性亚型。迄今为止进行的最大规模的将IIIB/IV期NSCLC与各种亚型的相对存活期进行比较的研究（WilliamWN等人，Chest 2009;136）确定了只有具有改善的总存活期的IIIB/IV期NSCLC的亚型是患有T4卫星疾病（T4-satellite disease）的患者。发现了具有T4侵袭性或胸腔积液的患者具有与IV期疾病患者无差别的总存活期。因此，并没有证据表明，与其他参与试验的患者相比，在参与试验时这些患者的疾病具有改善的总体预后。另外，对这个小群体的患者来说，再阳性淋巴结或者转移病灶的数目和部位与总存活期之间似乎没有清楚的关联。尽管患者1011与任何参与的患者相比具有最晚期的疾病，他已经实现了疾病稳定并且他几乎完成了所有3个疗程。
实例VI：在后面时期（Later Time Period）的结果
19位患者参与了试验并且在经过18周的期间以三个给药方案被接种了总量为4.5x108个疫苗细胞：给药方案（DS-1）为9次疫苗接种（每次5x107个细胞），每2周接种一次（组1）；给药方案（DS-2）为18次疫苗接种（每次2.5x107个细胞），每周接种一次（组2）；以及给药方案（DS-3）为36次疫苗接种（每次1.25x107个细胞），每周接种两次（组3）。在6、12、以及18周之后测量了在基线的免疫应答和临床反应。该疫苗在所有的给药方案中均良好耐受，在接种部位具有最低限度的预期副作用。它产生了在IFN-γ的ELI斑点（图3，左）中检测的显著的CD8CTL频率，并且在一些患者中产生了在血液中的降低的FoxP3(+)CD4细胞频率的趋势（图3，中）。估计中位存活期为8.0个月（95%置信区间：6.7到18.2），是预期存活期估计值的两倍（图3，右）。虽然由于DS-2和DS-3的不完全自然增长（incomplete accrual）使上述比较结果受到限制，在DS-2（每周疫苗接种）中的四位患者中的两位以及在DS-3（每周两次疫苗接种）中的三位患者中的两位均存活了比在DS-1中的11位患者的中位存活时间（7.1个月）更长的时间。确切地说，有两位患者在8.3和20个月时死亡（分别在DS-2和DS-3中)并且有两位患者在9.7和11.5个月时仍然存活（分别在DS-3和DS-2中）。
其它实施方案
应当理解的是，虽然结合其详细说明描述了本发明，前述的说明旨在说明而不是限制本发明的范围，本发明的范围是由所附权利要求书的范围来限定的。其他方面、优点、以及修改落在以下的权利要求书的范围之内。
Claims (9)
1.一种包含多个宿主细胞的疫苗用来治疗人类受试者中的癌症的用途，其中每个宿主细胞共同表达至少一种肿瘤抗原以及被修饰以便从每个宿主细胞分泌的一种热休克蛋白。
2.根据权利要求1所述的用途，其中该受试者的存活时间相比于患有相同类型和阶段的癌症的其他受试者的预期存活时间是增加的。
3.根据权利要求1所述的用途，其中该宿主细胞是一种癌细胞。
4.根据权利要求3所述的用途，其中在该人类受试者中的癌症是一种肺癌并且这些宿主细胞是肺癌细胞。
5.根据权利要求4所述的用途，其中该肺癌是非小细胞肺癌并且这些宿主细胞是非小细胞肺癌细胞。
6.根据权利要求1所述的用途，其中这些宿主细胞对于该受试者是异基因的。
7.根据权利要求1所述的用途，其中这些宿主细胞是被辐照的。
8.根据权利要求1所述的用途，其中该疫苗是皮内施用的。
9.根据权利要求8所述的用途，其中该疫苗是在一天之内在受试者的皮肤的多个部位施用的。
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