CN102823547A

CN102823547A - 一种抗药性胡瓜新小绥螨品系

Info

Publication number: CN102823547A
Application number: CN2012102991122A
Authority: CN
Inventors: 陈霞; 张艳璇; 林坚贞; 季洁
Original assignee: Institute of Plant Protection of FAAS
Current assignee: Institute of Plant Protection of FAAS
Priority date: 2012-08-22
Filing date: 2012-08-22
Publication date: 2012-12-19

Abstract

本发明公开了一种抗药性胡瓜新小绥螨品系及其选育方法，包括毒力测定、抗性品系的选育、交互抗性的测定。该品系不仅保留原有的胡瓜新小绥螨作为天敌优良特性，而且该品系对大环内酯抗生素类杀虫杀螨剂阿维菌素的抗性提高到了原来的64.62倍，对烟碱类杀虫剂吡虫啉的抗性提高了18.85倍，对有机磷类杀虫杀螨剂毒死蜱的抗性提高了27.75倍；对菊酯类杀虫剂高效氯氰菊酯的抗性提高了58.16倍。本发明的选育方法简单，具备显著的经济和社会效益。

Description

一种抗药性胡瓜新小绥螨品系

技术领域

本发明属于天敌捕食螨技术领域，具体涉及一种抗药性胡瓜新小绥螨品系及其选育方法。

背景技术

胡瓜新小绥螨作为一种优良天敌被发现以来已成为国际上各天敌公司的主要产品，目前在农业生产中大量应用的胡瓜新小绥螨均为敏感品系，对大多数农药非常敏感，但是各种农作物都存在胡瓜新小绥螨所不能控制的病虫害需要用农药进行防治，而在释放敏感品系胡瓜新小绥螨的果园、大田如果使用农药则会将生防园的捕食螨杀死杀伤，使生防园重新又恢复成化防园。在长期大量使用化学农药的果园发现敏感品系的胡瓜新小绥螨释放到果树上（没有再使用农药）在叶片上爬行十分钟左右就死亡了。作用在使用捕食螨敏感品系时不能使用化学农药。胡瓜新小绥螨在我国农作物上大面积推广应用的过程中遇到了如何与害虫综合治理中的其他防治方法合理结合，尤其是与化学防治方法相协调的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗药性胡瓜新小绥螨品系及其选育方法，该品系不仅保留原有的胡瓜新小绥螨作为天敌优良特性，而且该品系对大环内酯抗生素类杀虫杀螨剂阿维菌素的抗性提高到了原来的64.62倍，对烟碱类超高效杀虫剂吡虫啉的抗性提高了18.85倍，对有机磷类杀虫杀螨剂毒死蜱的抗性提高了27.75倍；对菊酯类杀虫剂高效氯氰菊酯的抗性提高了58.16倍。本发明的选育方法简单，具备显著的经济和社会效益。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗药性胡瓜新小绥螨品系的选育方法包括以下步骤：

（1）抗性品系的选育：采用胡瓜新小绥螨敏感品系为抗性品系筛选的原始材料，以90%阿维菌素原粉用喷雾法进行逐代筛选，称取0.1g阿维菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成与毒力测定中相同的6组浓度，每处理重复4次；用玻片浸渍法测定亲代成螨对阿维菌素的毒力后，计算出LC₅₀，再用此LC₅₀浓度进行群体筛选；从敏感品系中取出5日龄的健壮成螨用该代LC₅₀浓度处理，用直径12 cm培养皿，内置直径10 cm吸满水的海绵一块，海绵上放入洗净的甘薯叶片，叶缘用脱脂棉花围成细圈以防止螨外逃或内迁，再用零号毛笔轻轻挑起选出的成螨放入上述叶片上，每皿50只，共20皿；用华丰A-06手扣小型喷雾器装入药液对挑有胡瓜新小绥螨的培养皿进行喷雾至叶片全湿透，5s后立即用滤纸吸干药液，处理后24h未死亡的个体继续用粉螨饲养，当雌成螨产卵后，挑取在24 h内产下的卵分别饲养，以避免世代重叠，每3代处理一次，设4次重复；连续用同一LC₅₀浓度筛选3次后，即9代进行一次毒力测定，再用该测定所得LC₅₀继续筛选；共用阿维菌素原粉药剂处理18次；获得的抗性品系经120代饲养检测抗性衰退后，用相同方法对此品系进行抗性再筛选；

（2）交互抗性的测定：用烟碱类杀虫剂、有机磷类杀虫杀螨剂和菊酯类杀虫剂进行毒力测定；在抗性汰选前, 测定一系列药剂的毒力基线值, 待抗性选择完成后, 再用这些药剂进行毒力测定；以敏感品系作对比，计算抗阿维菌素品系对这些农药抗性提高倍数。

本发明的有益效果：

该品系不仅保留原有的胡瓜新小绥螨作为天敌优良特性，而且该品系对大环内酯抗生素类杀虫杀螨剂阿维菌素的抗性提高到了原来的64.62倍，对烟碱类杀虫剂的抗性提高了18.85倍，对有机磷类杀虫杀螨剂的抗性提高了27.75倍，对菊酯类杀虫剂的抗性提高了58.16倍。本发明的选育方法简单，选育出的抗性品系作为优良天敌可防治蓟马、红蜘蛛、锈壁虱等害虫害螨又解决了与化学防治方法相协调的问题，具备显著的经济和社会效益。

附图说明

图1是胡瓜新小绥螨对阿维菌素的抗性发展趋势。

图2是胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系对阿维菌素抗性的衰退趋势拟合曲线。

具体实施方式

材料与方法

1.1 供试虫源

胡瓜新小绥螨N. cucumeris由福建省农业科学院植物保护研究所天敌产业化基地提供，以室内饲养繁殖5年以上、不接触任何药剂的胡瓜新小绥螨种群作为实验室敏感品系。

２试验方法

毒力测定：参照FAO推荐的测定害螨抗药性的标准方法—玻片浸渍法（slide-dip method）对胡瓜新小绥螨雌成螨进行毒力测定^[17]。将双面胶带剪成2 cm长，贴在载玻片一端，用镊子揭去粘胶上的纸片。用零号毛笔轻轻挑起5日龄的健壮雌成螨并将其背部轻轻粘在胶带上，注意不要粘住螨足、口器及须肢，每块载玻片粘40头螨，排成数排。将粘有胡瓜新小绥螨雌成螨的载玻片放在大瓷盘上（瓷盘内置一块吸满水的大海绵），置于25±1℃、RH 85%下，经4 h后在双目解剖镜下观察，挑去死亡或不活泼个体，再补充至30头。接着将粘有螨的载玻片浸入相应浓度待测药液中并轻轻摇动，5 s后取出，迅速用吸水纸吸干螨体及周围多余药液。玻片按不同的浓度放回上述大瓷盘中，置于25±1℃、RH 85%下，经24 h后在双目解剖镜下检查死亡螨数及存活螨数，死亡标准是：以小号毛笔轻轻触动螨体，无任何反应者为死亡。每次测定设6组药剂浓度（阿维菌素原粉浓度设：180，90，45，22.5，11.25和5.625mg/L）和一组清水处理为对照，对照组死亡率在10%以内为有效试验，每处理重复4次。

1.2.2 抗性品系的选育：采用胡瓜新小绥螨敏感品系为抗性品系筛选的原始材料，以90%阿维菌素原粉用喷雾法进行逐代筛选，称取0.1g阿维菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成与毒力测定中相同的6组浓度，每处理重复4次。用玻片浸渍法测定亲代成螨对阿维菌素的毒力后，计算出LC₅₀，再用此LC₅₀浓度进行群体筛选。从敏感品系中取出5日龄的健壮成螨用该代LC₅₀浓度处理，用直径12 cm培养皿，内置直径10 cm吸满水的海绵一块，海绵上放入洗净的甘薯叶片，叶缘用脱脂棉花围成细圈以防止螨外逃或内迁，再用零号毛笔轻轻挑起选出的成螨放入上述叶片上，每皿50只，共20皿；用华丰A-06手扣小型喷雾器装入药液对挑有胡瓜新小绥螨的培养皿进行喷雾至叶片全湿透，5s后立即用滤纸吸干药液，处理后24h未死亡的个体继续用粉螨饲养，当雌成螨产卵后，挑取在24 h内产下的卵分别饲养，以避免世代重叠，每3代处理一次，设4次重复。连续用同一LC₅₀浓度筛选3次后，即9代进行一次毒力测定，再用该测定所得LC₅₀继续筛选。共用阿维菌素原粉药剂处理18次。获得的抗性品系经120代饲养检测抗性衰退后，用相同方法对此品系进行抗性再筛选。

交互抗性的测定：用吡虫啉、毒死蜱和高效氯氰菊酯进行毒力测定。在抗性汰选前, 测定一系列药剂的毒力基线值, 待抗性选择完成后, 再用这些药剂进行毒力测定(方法同1.3.1)。以敏感品系作对比，计算抗阿维菌素品系对这三种农药抗性提高倍数。

３　数据统计及分析

EXCEL统计软件进行分析与处理。以药剂浓度的对数值为自变量，以对应的死亡率机率值为应变量，计算出毒力回归方程、致死中浓度（LC₅₀）及其95%置信区间、相关系数等参数。抗药性倍数按式（1）计算，抗性衰退率按式（2）计算。以LC₅₀的95%置信限是否有重叠作为判断不同种群间药剂敏感度差异是否显著的标准。

=供试种群的LC₅₀/敏感种群的LC₅₀ （1）

抗性衰退率（%）=（用药后种群的LC₅₀-停用药后种群的LC₅₀）×100/用药后种群的LC₅₀ （2）

2 结果与分析

胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系的选育

胡瓜新小绥螨对阿维菌素抗性发展动态：在室内用胡瓜新小绥螨敏感品系为抗性品系筛选的原始材料，用90%阿维菌素原粉进行逐代筛选,结果见表1。

表1 胡瓜新小绥螨对阿维菌素的抗性发展动态

Figure 2012102991122100002DEST_PATH_IMAGE001

由表1可见，胡瓜新小绥螨抗性从敏感品系在饲养36代期间用药筛选了13次时抗性发展比较缓慢，在饲养从36代到54代期间用药筛选了5次的抗性发展迅速；在 18次汰选54代的过程中，抗性倍数总体呈明显的增加，其LC₅₀值由敏感品系的2.5270 mg/L上升到163.2930 mg/L，抗性品系F₅₄的抗药性比敏感品系增加了64.62倍。

2.1.2 胡瓜新小绥螨对阿维菌素抗性发展趋势：以测定毒力的选育代数为自变量，抗性倍数为因变量，将胡瓜新小绥螨阿维菌素抗性品系的抗性发展趋势进行方程拟合，结果表明其抗性发展符合逻辑斯蒂模型，拟合方程为y=120.4141/(1+e^{(4.88914-0.0935x)})，相关系数R为0.9951（图1）。这说明胡瓜新小绥螨对阿维菌素抗性发展趋势与大多害虫产生抗药性的发展趋势相同，开始时缓慢上升，上升到一定阶段后有一个量的飞越，然后再缓慢上升。

2.2 胡瓜新小绥螨对阿维菌素的抗性的稳定性

抗阿维菌素的胡瓜新小绥螨品系在温度25±1℃、相对湿度RH85%人工气候箱中饲养饲养繁殖，经过30代不接触药剂后，抗性迅速衰退至原有抗性的1/2左右，抗性衰退率达52.03%，在不接触药剂60代后，抗性衰退率达到78.46%，此后抗性衰退速率缓慢，抗性品系不接触任何药剂繁殖90代和120代后的抗性仍时敏感品系的10倍以上。抗性品系在不接触药剂60代、90代和120代测得的抗性衰退率均在80%左右，致死中浓度置信区间大部分重叠。

表2 胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系对阿维菌素抗性的衰退趋势

对胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系的抗性衰退趋势进行方程拟合，以相对筛选代数为自变量，抗性倍数为因变量，结果表明其抗性衰退率趋势符合二次曲线函数模型（图2），拟合方程：y=63.0980-1.1738x-0.0063x ², 相关系数R为0.9914。

2.3 胡瓜新小绥螨对阿维菌素抗性的再增长

胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系在温度25±1℃、相对湿度RH85%人工气候箱中饲养饲养繁殖，经过60代不接触药剂，抗性衰退至敏感品系的13.92倍时，再采用阿维菌素原粉药剂汰选，结果表明胡瓜新小绥螨对阿维菌素的再增长抗性发展较快，用药剂汰选8次24代后，致死中浓度达到110.4856mg/L，抗性迅速升至敏感品系的43.72倍，与第一次筛选至45代时的抗性水平相当。

表3 重新用药后胡瓜新小绥螨抗性品系对阿维菌素抗性的再增长趋势

Figure 2012102991122100002DEST_PATH_IMAGE003

2.4 胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系的交互抗性

表4 胡瓜新小绥螨抗阿维菌素品系的交互抗性

R代表抗性品系；S代表敏感品系。胡瓜钝绥抗阿维菌素品系对吡虫啉和毒死蜱的交互抗性结果见表5。试验结果敏感品系与抗性品系LC₅₀值的95 %置信限都没有交叉,表明筛选出的抗性品系对供试的吡虫啉和毒死蜱具有显著交互抗性，其中对吡虫啉的抗性提高了18.85倍，对高效氯氰菊酯的抗性提高了58.16倍，对毒死蜱的抗性提高了27.75倍。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种抗药性胡瓜新小绥螨品系，其特征在于：所述的品系对大环内酯抗生素类杀虫杀螨剂阿维菌素的抗性提高到了原来的64.62倍，并对烟碱类杀虫剂的抗性提高了18.85倍，对有机磷类杀虫杀螨剂的抗性提高了27.75倍，对菊酯类杀虫剂的抗性提高了58倍；而该抗药性品系在无药剂选择压力来维持抗的条件下经过繁殖２年种群对阿维菌素、烟碱类、有机磷类和菊酯类的抗药性仍是敏感品系的10倍以上；该抗性品系的产卵量、存活率与寿命等生物学特性与敏感品系无显著性差异，种群参数中的净生殖率、内禀增长率和周限增长率与敏感品系无显著性差异，平均世代历期和种群加倍时间比敏感品系略短一点，捕食功能反应试验结果该抗性品系对叶螨等害虫害螨的捕食作用与敏感品系无显著性差异。

2.一种抗药性胡瓜新小绥螨品系的选育方法，其特征在于：所述的选育方法包括以下步骤：

（1）抗性品系的选育：采用胡瓜新小绥螨敏感品系为抗性品系筛选的原始材料，以90%阿维菌素原粉用喷雾法进行逐代筛选，称取0.1g阿维菌素原粉先用5ml丙酮溶解，再用清水配成与毒力测定中相同的6组浓度，每处理重复4次；用玻片浸渍法测定亲代成螨对阿维菌素的毒力后，计算出LC₅₀，再用此LC₅₀浓度进行群体筛选；从敏感品系中取出5日龄的健壮成螨用该代LC₅₀浓度处理，用直径12 cm培养皿，内置直径10 cm吸满水的海绵一块，海绵上放入洗净的甘薯叶片，叶缘用脱脂棉花围成细圈以防止螨外逃或内迁，再用零号毛笔轻轻挑起选出的成螨放入上述叶片上，每皿50只，共20皿；用华丰A-06手扣小型喷雾器装入药液对挑有胡瓜新小绥螨的培养皿进行喷雾至叶片全湿透，5s后立即用滤纸吸干药液，处理后24h未死亡的个体继续用粉螨饲养，当雌成螨产卵后，挑取在24 h内产下的卵分别饲养，以避免世代重叠，每3代处理一次，设4次重复；连续用同一LC₅₀浓度筛选3次后，即9代进行一次毒力测定，再用该测定所得LC₅₀继续筛选；共用阿维菌素原粉药剂处理18次；获得的抗性品系经120代饲养检测抗性衰退后，用相同方法对此品系进行抗性再筛选；

（2）交互抗性的测定：用烟碱类杀虫剂、有机磷类杀虫杀螨剂和菊酯类杀虫剂进行毒力测定；在抗性汰选前, 测定一系列药剂的毒力基线值, 待抗性选择完成后, 再用这些药剂进行毒力测定；以敏感品系作对比，计算抗阿维菌素品系对这些农药抗性提高倍数。