CN102803221A

CN102803221A - 氘代的ω-二苯基脲及其衍生物以及包含这些化合物的药物组合物

Info

Publication number: CN102803221A
Application number: CN2011800143917A
Authority: CN
Inventors: 冯卫东; 高小勇; 代晓俊; 盛泽林; 陆惠萍
Original assignee: Suzhou Zelgen Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Suzhou Zehuang Biopharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2010-03-18
Filing date: 2011-03-17
Publication date: 2012-11-28
Anticipated expiration: 2031-03-17
Also published as: CN102803221B

Abstract

提供氘代的ω-二苯基脲及衍生物以及药学上可接受的盐。还提供含有药物学上可接受的载体和氘代的ω-二苯基脲及衍生物以及药学上可接受的盐的药物组合物。所述氘代二苯基脲可用于治疗和预防癌症以及相关的疾病。

Description

氘代的 ω-二苯基脲及其衍生物以及包含这些化合物的药物组合物

技术领域

本发明涉及氘代的 ω-二苯基脲及衍生物以及含该化合物的药物组合物。背景技术

已知的 ω-二苯基脲衍生物是 c-RAF激酶活性的化合物。例如在 WO 2000/042012 中公开了一类 ω-羧基芳基取代的二苯基脲，及其在治疗癌症以及相关疾病中的用途。

to-二苯基脲化合物如索拉非尼 (Somfenib)最先被发现是 c-RAF激酶的抑制剂，之后不断的研究发现它还能抑制 MEK 和 ERK 信号传导通路、血管内皮生长因子 -2(VEGFR-2)、血管内皮生长因子 -3(VEGFR-3)、以及血小板源生长因子 - β (PDGFR- β；)的酪氨酸激酶的活性 (Curr Pharm Des 2002;8:2255 - 2257), 因此它被称之为多激酶抑制剂，具有双重抗肿瘤作用。

索拉非尼 (Sorafenib；)，商品名 Nexavar, 是由拜耳公司和 ONXY公司共同研制的一种新型的口服多激酶抑制剂，由于它在一项针对晚期肾癌的 ΙΠ期临床研究中的卓越表现， 2005年 12月被 FDA快速批准用于治疗晚期肾细胞癌， 2006年 11月在中国上市。然而,索拉非尼 (Somfenib) 具有多种副作用，例如高血压、体重减轻、皮疹等。

然而，本领域仍需要开发对 mf激酶有抑制活性、或更好药效学性能的化合物。发明内容

本发明的目的就是提供一类新型的具有 mf¾酶抑制活性和更好药效学性能的化合物及其用途。在本发明的第一方面，提供了一种式所示的氘代的 ω-二苯基脲化合物、或其晶型、药学上可接受的盐水合物或溶剂合物：

式中：

X 是 Ν或者 Ν⁺-0-；

R¹是卤素 (如 F,C1或 Br)，一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

R²是未氘代的、一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基，或者部分或全部卤素取代的 C1-C4垸基； R³、 R R R R R¹⁰、 R"、 R¹²、 R¹³、 R¹⁴分别是氢、氘、或卤素 (如 F,C1, 或 Br) ;

R⁶是氢、氘、或一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

R⁷是氢、氘、或一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

附加条件是 R²、 R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰、 R"、 R¹²、 R¹³或 R¹⁴中至少一个是氘代的或氘。

在另一优选例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量 (0.015%) ,较佳地大于 30%,更佳地大于 50%,更佳地大于 75%,更佳地大于 95%, 更佳地大于 99%。

在另一优选例中，式（I)化合物中的除 H 之外的其他元素（如 N、 C、 0、 F 等）全部或基本上（>99wt%)为丰度最高的天然存在的元素，例如 ¹⁴N、 ¹²C、 ¹⁶0和 ¹⁹F。

在另一优选例中，式①化合物至少含有 1个氘原子，更佳地 3个氘原子，更佳地 5个氘原子。

在另一优选例中， R¹选自卤素；更佳的是氯；

在另一优选例中， R²是三氟甲基；

在另一优选例中， R⁶或 R⁷分别独立地选自：氢、氘、氘代的甲基、或氘代的乙基；更佳地，选自一氘甲基、二氘甲基、三氘甲基、一氘乙基、二氘乙基、三氘乙基、四氘乙基、或五氘乙基。

在另一优选例中， R⁶或 R⁷分别独立地选自：氢、甲基或三氘甲基。

在另一优选例中， R³、 R⁴或 R⁵分别独立地选自：氢或氘。

在另一优选例中， R⁸、 R⁹、 R^1Q或 R¹¹分别独立地选自：氢或氘。

在另一优选例中， R¹²、 R¹³或 R¹⁴分别独立地选自：氢或氘。

在另一优选例中，所述化合物是选自下组的优选化合物：

4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基]酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( N-Γ, Γ,Γ-三氘代甲基)吡啶酰胺；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ, Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧)苯基)脲；

4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基)脲基)苯氧基 )-2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基)吡啶 -1-氧化物；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧) 苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν- Γ-氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

N-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲;

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(2-氘 -4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧) 苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(2,6-二氘 -4-(2-氘 -6-(Ν-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -Ν'-(4-(2-氘 -6-(Ν-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-甲基 -Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4- 吡啶基氧;)苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N， N-二 (Γ,Γ,Γ-三氘甲基)氨基甲酰基) -4- 吡啶基氧)苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基) -Ν，-(2,6-二氘 -4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-氘 -6-(Ν-Γ,Γ， 1，-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧) 苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,2，,2，,2，-五氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧)苯基)脲；

或 Ν-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ, Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲。

在本发明的第二方面，提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。

在本发明的第三方面，提供了一种药物组合物，它含有药学上可接受的载体和本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。

在另一优选例中，所述的药物组合物还含有另外的治疗药物，所述的另外的治疗药物为癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、肾病、血管发生 (angiogenesis；)、前列腺疾病的药物。

更佳地，所述的治疗药物包括 (但并不限于；)： 5-氟尿嘧啶、 AV412、阿瓦斯丁 ™( avastin, bevacizumab)、贝沙罗汀 (bexarotene)、硼替佐米 (bortezomib)、骨化三醇 (calcitriol)、卡奈替尼 (canertinib)、卡培他滨 (capecitabine)、碳钼 (carboplatin)、塞来考昔 (celecoxib；)、西妥昔单抗 (cetuximab；)、 CHR-2797、顺铂 (cisplatin)、达沙替尼（dasatinib)、地高辛（digoxin)、 enzastaurin、埃罗替尼（Erlotinib)、依托泊甙 (etoposide)、依维莫司 (everolimus)、氟维司群 (fulvestrant)、吉非替尼 (gefitinib)、 2,2- 二氟脱氧胞嘧啶核苷 (gemcitabine；)、金雀异黄素 (genistein；)、伊马替尼 (imatinib；)、依立替康 (irinotecan)、拉帕替尼 (lapatinib)、来那度胺 (lenalidomide)、来曲唑 (letrozole)、亚叶酸 (leucovorin)、马妥珠单抗 (matuzumab；)、奥沙利铂 (oxaliplatin)、紫杉醇 (paclitaxel)、帕尼单抗 (panitumumab；)、 PEG化的粒细胞集落刺激因子 (pegfilgrastin；)、 PEG化的 α- 干扰素 (peglated alfa-interferon)、培美曲塞 (pemetrexed)、 Polyphenon® E、沙钼 (satraplatin)、西罗莫司 (sirolimus)、舒尼替尼 (sutent, sunitinib)、舒林酉麦 (sulindac)、泰索帝 (taxotere)、替莫唑胺 (temodar、 temozomolomide) > Torisel (temsirolimus) > TG01、 tipifarnib > 曲妥单抗 (trastuzumab)、丙戊酉麦 (valproic acid) > 长春氟宁 (vinflunine)、 Volociximab、 vorinostat禾口 XL647。

在本发明的第四方面，提供了本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的用途，它们被用于制备抑制磷酸激酶 (如 mf激酶) 的药物组合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗和预防以下疾病：癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、肾病、血管发生 (angiogenesis；)、或前列腺疾病。

在另一优选例中，所述的癌症包括 (但并不限于；)：非小型细胞肺癌、子宫癌、直肠癌、脑癌、头癌、颈癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、固体肿瘤、肾癌、血癌、肝癌、胃癌、或胰腺癌。

在本发明的第五方面，提供了一种治疗方法，它包括步骤：给需要治疗的对象施用本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或施用本发明第三方面中所述的药物组合物，从而抑制磷酸激酶 (如 mf¾酶)。较佳地，所述的疾病包括：癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、肾病、血管发生、或前列腺疾病。

在本发明的第六方面，提供了制备化合物 N-(4-氯 -3-(三氟甲基）苯基) -_Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧)苯基)脲的方法，

所述方法包括：

(a) 在惰性溶剂中及碱存在下: 式 in化合物与式 V化合物反应，形成所述化合物;

碱

式中， X为 Cl、 Br、 I、或 OSO₂CF_{3 ;}

或者，所述方法包括：

(b) 在惰性溶剂中，式 IX化合物与 CD₃NH₂或 CD;NH₂ · HC1反应，形成所述的化合物；

CD₃NH₂ 或

瞧 ' HC I

κ

式中， R为 C1-C8直链或支链垸基，或芳基；

或者，所述方法包括：

(c) 在惰性溶剂中， 4-氯 -3-三氟甲基苯异氰酸酯 (環)与式 5化合物反应，形成所述的化合物；溶剂

或者，所述方法包括：

(d) 在惰性溶剂中，在 CDI和 ( 11₂(：1₂存在下，式 5化合物与式 6化合物反应，形成所述的化合物。

在另一优选实施例中，式 III化合物是通过以下该方法制备: (i) 对羟基苯胺（ I )和4-氯 -3-三氟甲基苯胺 ( II )缩合得到 ΙΠ化合物:

I II III

或者（ii)对甲氧基苯胺( X )和 4-氯 -3-三氟甲基苯胺 ( II )或 4-氯 -3-三氟甲基苯异氰酸酯 (環)反应生成 XI化合物：

cr ^ Vffl XI

然后， XI化合物在酸或碱条件下，脱甲基得到 ΙΠ化合物 _t

在另一优选例中，式 VII化合物通过以下方法制备：

VI化合物与对羟基苯胺在碱作用下，生成 νπ化合物：

式中， X是氯、溴或碘； R为 C1-C8直链或支链垸基，或芳基。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文 (如实施例;)中具体描述的各技术特征可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再累述。附图说明

图 1是雄性 SD大鼠口服 3mg/kg对照化合物 CM4306后的血清药物浓度 (ng/ml)曲线图。

图 2是雄性 SD大鼠口服 3mg/kg本发明化合物 CM4307后的血清药物浓度 (ng/ml) 曲线图。

图 3是 CM4306和 CM4307对人肝细胞癌 SMMC-7721裸鼠移植模型的抑制作用曲线图。图中， "treatment"表示治疗的时间为 14天。随后为停药后的观察期。治疗前 5天是模型制备期。

图 4显示了 CM4306, CM4308和 CM4309对人肝细胞癌 SMMC-7721裸鼠移植模型的抑制作用 (Mean土 SEM；)。图中， "treatment"表示治疗的时间为 14天。 " control" 表示空白对照。具体实施方式

本发明人经过研究，意外地发现，本发明的氘代的 ω-二苯基脲及其药学上可接受的盐与未经氘代的化合物相比，具有明显更优异的药物动力学和 /或药效学性能，因此更适合作为抑制 mf¾酶的化合物，进而更适用制备治疗癌症以及相关疾病的药物。在此基础上完成了本发明。

以氘代化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧）苯基）脲（化合物 CM4307)和未氘代的 Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基) -_Ν'-(4-(2-(Ν-甲基氨基甲酰基; )-4-吡啶基氧；)苯基)脲 (化合物 CM4306)为例，

药代动力学实验结果显示， CM4307比 CM4306的半衰期 Τ_1/2延长，曲线下面积 AUC。__∞CM4307比 CM4306显著增加， CM4307比 CM4306表观清除率减少。

在人肝细胞癌 SMMC-7721裸鼠移植模型进行的药效学实验结果显示，在 100mg/kg每日的剂量下每日灌胃给药连续 2周， CM4306的抗肿瘤活性的评价指标相对肿瘤增值率 T/CC/c 为 32.2% ; 而 CM4307的抗肿瘤活性的评价指标相对肿瘤增值率 T/CC/c 为 19.6%，故抗肿瘤活性的绝对值提高 10%以上，相对值提高约 60%(32.2%/19.6%-1=64%), 表现出更为显著的抑制肿瘤生长的作用。

同样， CM4309半衰期也显著延长，并且表现出非常显著的抑制肿瘤生长的作用。

如本文所用， "卤素"指？、 Cl、 Br、和 I。更佳地，卤原子选自 F、 C1和 Br。如本文所用， "垸基 "包括直链或支链的垸基。优选的垸基是 C1-C4垸基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。

如本文所用， "氘代"指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代。氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语 "一个或多个氘代的"与 "一次或多次氘代"可互换使用。

在另一优选例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量是大于天然氘同位素含量 (0.015%), 更佳地大于 50%, 更佳地大于 75%, 更佳地大于 95%, 更佳地大于 97%, 更佳地大于 99%, 更佳地大于 99.5%。在另一优选例中，式①化合物至少含有 1个氘原子，更佳地 3个氘原子，更佳地 5个氘原子。

如本文所用，术语 "化合物 CM4306 "指化合物 4-(4-(3-(4-氯 -3 三氟甲基;)苯基] 酰脲;) -苯氧基;) -Ν-甲基吡啶酰胺。

如本文所用，术语 "化合物 CM4307 "指化合物 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基;)苯基] 酰脲) -苯氧基) -2-( N-l，,r,r-三氘代甲基)吡啶酰胺。

如本文所用，术语 "化合物 CM4308 "指化合物 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基;)苯基] 酰脲； )-3-氟 -苯氧基;) 甲基吡啶酰胺。

如本文所用，术语 "化合物 CM4309 "指化合物 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基;)苯基] 酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( N-1 ', Ι Μ，-三氘代甲基)吡啶酰胺。

如本文所用，术语 " TsOH "表示对甲苯磺酸。活性成分

如本文所用，术语 "本发明化合物 "指式 ω所示的化合物。该术语还包括及式 ω 化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

如本文所用，术语 "药学上可接受的盐"指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。制备方法

下面更具体地描述本发明式 ω结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便的制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易的进行。

本发明使用的未氘代的 ω-二苯基脲及其生理上相容的盐的制备方法是已知的。对应氘代的 ω-二苯基脲的制备可以用相应的氘代起始化合物为原料，用同样的路线合成。例如，本发明式①化合物可按 WO 2000/042012中所述的制备方法制备，不同点在于在反应中用于氘代的原料代替非氘代的原料。

通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度 (如 0°C〜80 °C，优选0 〜50 )下进行。反应时间通常为 0.1小时 -60小时，较佳地为 0.5-48小时。

以化合物 CM4307为例，一种优选的制备流程如下：

IV V

X CI, Br, I 碱合成路线一

如合成路线一所示，对羟基苯胺 (化合物 I )和 3-三氟甲基 -4-氯 -苯胺 (化合物 II )在

NN'-羰基二咪唑、光气或三光气作用下，反应得到 1-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基; )-3-(4-羟基苯基;)脲 (化合物 ΙΠ)。吡啶甲酸甲酯 (化合物 IV)和氘代甲胺或氘代甲胺盐酸盐在碱 (例如碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、三乙胺、吡啶等;)的作用下、或直接混合反应，得到吡啶 -2-(N-l，,r,r-三氘代甲基;)甲酰胺 (化合物 V)。化合物 ΙΠ和化合物 V在碱 (如叔丁醇钾、氢化钠、氢化钾，碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠;)和任选的催化剂 (如碘化亚铜和脯氨酸、或碘化亚铜和吡啶甲酸)的作用下，得到化合物 CM-4307。上述反应在惰性溶剂，如二氯甲垸、二氯乙垸、乙腈、正己垸、甲苯、四氢呋喃、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等中，温度 0〜200°C下进行。

以化合物 CM4307为例，另一种优选的制备流程如下：

II YD! CD₃NH₂ 或

or CD-,NHvHCI

合成路线二

如合成路线二所示，吡啶甲酸酯 (化合物 VI)和对羟基苯胺 < 合物 I )在碱 (如叔丁醇钾、氢化钠、氢化钾，碳酸钾、碳酸铯、磷酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠)和任选的催化剂 (如碘化亚铜和脯氨酸、或碘化亚铜和吡啶甲酸)的作用下，得到胺 (化合物 w)。再和化合物 II在 NN'-羰基二咪唑、光气或三光气作用下、或和 4-氯 -3-三氟甲基-吡啶异氰酸酯 (化合物 VIII)反应得到脲 (化合物 IX)。化合物 IX和氘代甲胺或氘代甲胺盐酸盐在碱 (例如碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、三乙胺、吡啶等)的或直接混合反应得到化合物 CM4307。上述反应在惰性溶剂，如二氯甲垸、二氯乙腈、正己垸、甲苯、四氢呋喃、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等中，温度 0〜200°C下进行。

以化合物 CM4307

合成路线三

如合成路线三所示，对甲氧基苯胺 (化合物 X)和化合物 II在 NN'-羰基二咪唑、光气或三光气作用下、或和 4-氯 -3-三氟甲基-吡啶异氰酸酯 (化合物環)反应得到脲 (化合物 XI) 利用本领域已知的各种去甲基方法得到 1-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -3-(4-羟基苯基) 脲 (化合物 m)。然后使用和合成路线一中描述的同样方法，或本领域已知的各种合成方法，化合物 ΙΠ和化合物 V反应得到化合物 CM4307。上述反应在惰性溶剂，如二氯甲垸、二氯乙垸、乙腈、正己垸、甲苯、四氢呋喃、 Ν,Ν-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等中，温度 0〜200°C下进行。

以化合物 CM4307为例，一种特别优选的制备流程如下：

合成路线四

此外，用化合物 3-氟 -4-氨基-苯酚替换化合物 4，采用上述合成路线，可制得 CM4309 o

氘代可以通过氘代甲胺引入的。氘代甲胺也可以通过已知的文献方法如下方法制备，如氘代硝基甲垸的氢化加氢反应。

10 % Pd-C, H₂

CD₃N0₂ ^ » CD₃NH₂ 式中， r.t.表示室温。

或者，可通过以下反应得到氘代甲胺或其盐酸盐。硝基甲垸在碱 (氢化钠、氢化钾、氘代氢氧化钠、氘代氢氧化钾、碳酸钾等；)，或在相转移催化剂下，和氘水反应得到氘代硝基甲垸，如有必要，重复上述实验，以得到高纯度的氘代硝基甲垸。氘代硝基甲垸还原，如锌粉、镁粉、铁或镍等作用下，得到氘代甲胺或其盐酸盐。

D,0 还原

CH-,ΝΟ· 2 CDu-3,ΝΟ^,2 CD₃NH₂-HCI 或 CD₃NH₂ 再者可以通过以下反应得到氘代甲胺或其盐酸盐。

CD₃OD CD₃NH₂-HCI 或 CD₃NH₂ 关键中间体 3也可以通过如下方法从氘代甲醇合成。

3

其具体合成方法在实施例 1中有详细的说明药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的对磷酸激酶 (Kinase)例如 mf激酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由对磷酸激酶 (Kinase)例如 mf激酶介导的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病：癌症，心血管疾病，肥胖病，糖尿病等等。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中 "安全有效量"指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有 l-2000mg本发明化合物 /剂，更佳地，含有 10-200mg本发明化合物 /剂。较佳地，所述的 "一剂" 为一个胶囊或药片。

"药学上可以接受的载体"指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。 "相容性"在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物 (如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等；)、明胶、滑石、固体润滑剂 (如硬脂酸、硬脂酸镁；)、硫酸钙、植物油 (如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等；)、多元醇 (如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂 (如吐温 ®)、润湿剂 (如十二垸基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括 (但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外 (静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂 (或载体;)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：（a) 填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；（b) 粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯垸酮、蔗糖和阿拉伯胶；（C) 保湿剂，例如，甘油； (d) 崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；（e) 缓溶剂，例如石蜡; (f) 吸收加速剂，例如，季胺化合物；（g) 润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；（h) 吸附剂，例如，高岭土；和 (i) 润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二垸基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、 1,3- 丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、娇味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八垸醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物 (如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于 60kg体重的人而言，日给药剂量通常为 l〜2000mg，优选 20〜500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。本发明的化合物与现有技术中已知的不携带氘的化合物相比，具有一系列优点。本发明的主要优点包括：

(1) 本发明化合物对磷酸激酶 (Kinase)例如 mf激酶具有优异的抑制性。 (2) 通过氘化这一技术改变生物体中的代谢，使药物的代谢变得困难，这导致初次通过效应 (First-pass effect)的降低。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，其也可以长效制剂的形式改善适用性。

(3)通过氘化还改变了药物动力学作用，因为氘代化合物完全形成另一水合物膜，以致在生物体中的分布明显不同于未氘代的化合物。

(4) 用氘取代化合物中的氢原子，由于其同位素效应，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。

实施例 1 : ^(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-^-(4-(2-(^1，,1，,1，-三氘甲基氨基甲酰基) -4-

CM4307

1、 4-氯吡啶-2-(^-1，,1，,1，-三氘代甲基)甲酰胺(3)的制备

在配有尾气处理装置的 250 mL单颈圆底烧瓶中，加入氯化亚砜 (60 mL), 维持温度在 40〜50 °C之间，向其中缓慢的滴加无水 DMF(2 mL), 滴加完毕后，继续搅拌 10 分钟，在 20分钟内向其中分批加入烟酸 (20 g， 162.6 mmol) , 溶液的颜色逐渐由绿色转变为浅紫色。将温度升到 72 °C，搅拌回流 16小时，产生大量的固体沉淀物。冷却到室温，用甲苯 (100 mL)稀释，浓缩至近干，然后再用甲苯稀释，浓缩至干。过滤，用甲苯洗涤，得到淡黄色的 3-氯 -吡啶 -2-甲酰氯固体。冰浴下将此固体慢慢的加入到氘代甲胺的四氢呋喃饱和溶液中，维持温度低于 5 °C，继续搅拌 5小时。浓缩，加乙酸乙酯，析出白色固体，滤除，滤液用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，得到淡黄色的 4-氯吡啶 -2-(N-l，,r,r-三氘代甲基)甲酰胺 (3) (20.68 g) , 收率 73%。 'H NMR (CDCI3, 300 MHz): 8.37 (d, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.96(br, 1H), 7.37(d, 1H).

2、 4-(4-氨苯氧基)-2-吡啶-(^-1，,1，,1，-三氘代甲基)甲酰胺(5)的制备

向 100 mL干燥的无水 DMF中依次加入对氨基苯酚 (9.54 g, 0.087 mol) , 叔丁醇钾 (10.3 g, 0.092 mol)，溶液变成深褐色，室温下搅拌 2小时后，向其中加入 4-氯吡啶 -2-(N-r, l，,r-三氘代甲基）甲酰胺 (3)(13·68 g, 0.079 mol) , 无水碳酸钾 (6.5 g, 0.0467 mol) , 将反应液温度升到 80°C后继续搅拌过夜。 TLC检测反应完毕，冷却到室温，将反应液倒入乙酸乙酯 (150 mL)和饱和食盐水 (150 mL)的混和溶液中，搅拌分层，静置后分液，水层用乙酸乙酯萃取 (100 mLx3)，合并萃取液，用饱和水洗涤 (100 mLx3)，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到淡黄色的 4-(4-氨苯氧基) -2-吡啶 -(N-Γ, Γ,Γ-三氘代甲基) 甲酰胺 (18.00 g)，收率 92%。

1H NMR (CDC1₃, 300 MHz): 8.32 (d, 1H), 7.99 (br, 1H), 7.66 (s, 1H), 6·91〜6·85 (m, 3H), 6.69 (m, 2H), 3.70 (br, s, 2H).

3、 ^(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)-^-(4-(2-(^1，,1，,1，-三氘甲基氨基甲酰基)-4-吡啶基氧)苯基)脲 (CM4307)的制备

向 120 mL二氯甲垸中加入 5-氨基 -2-氯 -三氟甲基苯 (15.39 g, 78.69 mol) , Ν,Ν'- 羰基二咪唑 (CDI)(13.55 g, 83.6 mmol) , 室温搅拌 16小时后，向其中缓慢的滴加 4-(4- 氨苯氧基) -2-吡啶 -(N-Γ, Γ,Γ-三氘代甲基)甲酰胺 (18 g, 73 mmol)的二氯甲垸 (180 mL) 溶液，室温下继续搅拌 18小时。 TLC检测反应完毕，旋去部分二氯甲垸溶剂至 100 mL 左右，室温放置数小时，有大量白色固体析出，抽滤，固体用大量二氯甲垸洗涤。滤液浓缩去除部分溶剂后，又析出部分固体，合并两次固体，用大量二氯甲垸再次洗涤，得到白色粉状的 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ, Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲 CM4307纯品 (20.04 g) , 收率 58%。

1H NMR (CD₃OD, 300 MHz): 8.48 (d, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.55 (m, 5H), 7.12 (d, 1H), 7.08 (s, 2H), ESI-HRMS m/z: C21H13D3C1F3N403, Calcd. 467.11 , Found 490.07 (M+Na)⁺.

另外，可将化合物 CM4307溶于二氯甲垸中，与过氧苯甲酸进行反应，制得相应的氧化产物： 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基)脲基)苯氧基 )-2-(Ν-Γ,Γ, Γ-三氘甲基氨基甲酰基;)吡啶 -1-氧实施例 4-氯吡啶 -2-(N-l ,r,r-三氘代甲基)甲酰胺 (3)的制备

3 a) 将邻苯二甲酰亚胺 (14.7g, O.lmol), 氘代甲醇 (3.78g, 0.105mol, 1.05equiv)，三苯基膦 (28.8g, O.llmol, l.lequiv)溶于无 DEAD(l.lequiv)的四氢呋喃溶液，滴加完毕后室温搅拌一小时过柱提纯，或者溶剂旋干后，加适量 DCM 于冰箱冷冻析出固体后过滤，滤液旋干，再快速过柱，得纯品氘代甲基邻苯二甲酰亚胺 14 收率 90%

b) 氘代甲基邻苯二甲酰亚胺 (12.5g, 0.077mol)溶于适量盐酸 (6N 50ml)中，于封管中回流 24-30小时，反应液冷却至室温后，置于冰箱中冷却到零度以下，过滤析出的固体，用冷的去离子水洗涤，收集滤液，旋蒸除水并干燥得加入无水 DCM(lOOml)于氘代甲胺盐酸盐中，并加入 4-氯烟酸甲酯盐酸盐 (6.52g, 0.038mol, 0.5 equiv),碳酸钠 (12.2g, 0.12mol, 1.5equiv),反应瓶密封，置于冰箱中反应一天。 TLC 检测反应，完毕后水洗，干燥，浓缩，过柱提纯。得化合物 4-氯吡啶 -2-(N-r,l',r- 三氘代甲基;)甲酰胺 (3), 5.67g, 收率 86% 。其结构特征与实施例 1一致。实施例化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν -(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按实施例 1中所述的方法，不同点在于：用 CD₂HNH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν -(4-(2-(Ν-Γ-氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：按买施例 1中所述的方法，不同点在于：用 CDH₂NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 5 化合物 N-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按实施例 1中所述的方法，不同点在于：用 5-氨基 -2-氯-三氘甲基苯替换 5-氨基 -2-氯-三氟甲基苯， CH₃NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 6 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1中所述的方法，不同点在于：用 2-氘 -6-羧基吡啶替换烟酸， CH₃NH₂ 替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 Ί 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(2-氘 -4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲；

按买施例 1中所述的方法，不同点在于：用 2-氘 -6-羧基吡啶替换烟酸， 3-氘 -4- 氨基苯酚替换对氨基苯酚， CH₃NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 8 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(2,6-二氘 -4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1 中所述的方法，不同点在于：用 2-氘 -6-羧基吡啶替换烟酸， 3， 5- 二氘 -4-氨基苯酚替换对氨基苯酚， CH₃NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 9 化合物 N-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -N，-(4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1中所述的方法，不同点在于：用 2-氘 -6-羧基吡啶替换烟酸，用 5-氨基 -2-氯-三氘甲基苯替换 5-氨基 -2-氯-三氟甲基苯， CH₃NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 10 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N-甲基 -Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基;) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1 中所述的方法，不同点在于：用 CD₃CH₃NH替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 11 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N，N-二 (Γ,Γ,Γ-三氘甲基)氨基甲酰基; )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：按买施例 1 中所述的方法，不同点在于：用 (CD₃；) ₂NH替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 12 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(2,6-二氘 -4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基； )-4-吡啶基氧；)苯基)脲的制备：

按实施例 1中所述的方法，不同点在于：用 3， 5-二氘 -4-氨基苯酚替换对氨基苯酚，从而制得目标化合物。实施例 13 化合物 Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-氘 -6-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1中所述的方法，不同点在于：用 2-氘 -6-羧基吡啶替换烟酸，从而制得目标化合物。实施例 14 化合物 Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1 中所述的方法，不同点在于： CH₃CD₂NH₂替换 CD₃NH₂，从而制得目标化合物。实施例 15 化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,2，,2，,2，-五氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按买施例 1 中所述的方法，不同点在于： CD₃CD₂NH₂替换 CD₃NH₂从而制得目标化合物。实施例 16 化合物 N-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧;)苯基;)脲的制备：

按实施例 1中所述的方法，不同点在于：用 5-氨基 -2-氯-三氘甲基苯替换 5-氨基 -2-氯-三氟甲基苯，从而制得目标化合物。实施例 17: 化合物 CM4307的合成

1： 4-氯 -3-三氟甲基苯基异氰酸酯 A4的制备

将三光气 (167g， 0.56 mol, 0.5eq)溶于氯仿 (500 mL),接好尾气吸收装置，在 5 °C 下滴加 N-甲基吗啉 (11.4g， 0.11 mol, O.leq)的氯仿 (100 mL)溶液，滴加完毕后，于 10 °〇继续滴加 4-氯 -3-三氟甲基苯胺 (220g， 1.13 mol, l.Oeq)的氯仿 (700 mL)溶液。升温至 40 °C搅拌 15小时，升温至 50°C搅拌 5小时，升温至 60〜65°C回流 5小时。常压除去溶剂，减压蒸馏 (油温 110〜120°C，真空度 200Pa)收集 95〜100°C馏分得到标题化合物，为无色液体 200g，纯度 98.7%, 收率 84%。

2： 4-氯吡啶-2-(^-1，,1，,1，-三氘代甲基)酰胺(中间体 A2)的制备

方法 1:

将 4-氯 -2-吡啶甲酸甲酯 (50g， 0.29mol, leq)置入盛有 250mL四氢呋喃的三口瓶中，搅拌并加入 1,1,1-三氘代甲胺盐酸盐 (31g， 0.44mmol, 1.5eq), 400目的无水碳酸钾 (80g， 0.58mol, 2eq), 室温搅拌反应 20 小时后加入水 (250mL)和甲基叔丁基醚 (150mL), 搅拌后分层，获得有机相。水相用甲基叔丁基醚萃取 (lOOmL), 合并有机相并加入无水硫酸钠干燥并过滤，减压除去溶剂得到标题化合物，为浅黄色液体 48g，纯度 99%, 收率 96%。

1HNMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 7.64(dd, J= 2Hz, 5.2Hz, 1H), 7.97(d,J= 1.6Hz, 1H), 8.54(d,J= 5.2Hz, 1H), 8.74(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₇H₄D₃C1N₂0: 173, found： 174 [M +H]+

方法 2:

将 4-氯 -2-吡啶甲酸甲酯 (130g， 0.76 mol, leq)溶于无水乙醇 (1.3 L)的中，搅拌并加入 1,1,1-三氘代甲胺盐酸盐 (80g， 1.13 mol, 1.5eq)，无水碳酸钾 (313 g， 2.67 mol, 3eq), 室温搅拌反应 50小时。过滤，并用乙醇 (260mL X2)洗涤，滤液减压除去溶剂，加入乙酸乙酯 (400 mL)，并用饱和食盐水 (250 mLX 2)洗涤，用乙酸乙酯 (100 mLX2) 反萃水相，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂得到标题化合物，为浅黄色液体 109g，纯度 98%, 收率 83%。

MS (ESI, m/z) calcd. for C₇H₄D₃C1N₂0: 173, found： 174 [M +H]+

3: l-(4-氯 -3-三氟甲基-苯基) -3-(4-羟基-苯基) -脲 A5的制备

方法 1:

在室温下，将 4-氨基 -苯酚 (5g， 45.82mmol, leq)溶于二氯甲垸 (40mL)中，并将 4-氯 -3-三氟甲基苯基异氰酸酯 (10.7g， 48.11mmol, 1.05eq)的二氯甲垸 (40mL)溶液滴加到上述溶液中，室温搅拌反应 16小时，过滤并用二氯甲垸 (10X2)洗涤，得到标题化合物，为浅褐色固体 14.2g，纯度 97%, 收率 94%。

1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 6.70(dd,J= 2Hz, 6.8Hz, 1H), 7.22(dd,J= 2Hz, 6.4Hz, 1H), 7.58-7.24(m, 1H), 8.10(d, J= 2Hz, 1H), 8.50(br, 1H), 9.04(br, 1H), 9.14(br, 1H). MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₄H₁₀ClF₃N₂O₂: 330, found： 331 [M +H]'

A6 A5

将 4-氯 -3-三氟甲基苯基异氰酸酯 (5.15g， 26mmol, 1.05eq)溶于二氯甲垸 (30 mL)，室温搅拌 20小时，滴加对甲氧基苯胺 (3.07g, 25mmol, leq)的二氯甲垸 (20 mL) , 室温搅拌反应 20小时。过滤，并用二氯甲垸 (5 mL X 2)洗涤，固体溶于乙酸乙酯 (50 mL)，并用稀盐酸洗涤 (IN, 10 mL) , 饱和食盐水洗涤 (20 mL)，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到白色固体 1-(4-氯 -3-三氟甲基-苯基; )-3-(4-甲氧基-苯基；) -脲 A6(4.5g)，收率 52%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 3.73(s, 3H), 6.86-6.90(m, 2H), 7.35-7.39(m, 2H), 7.59-7.65(m, 2H), 8.1 l(d, J = 2Hz, 1H), 8.65(br, 1H), 9.09(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₅H₁₂C1F₃N₂0₂: 344, found： 345[M +H]+ 将 l-(4-氯 -3-三氟甲基-苯基) -3-(4-甲氧基-苯基) -脲 A6(344 mg， lmmol, leq)溶于乙酸 (4 mL)，加入氢溴酸 (40%, 1 mL) , 回流 5小时，冷却至室温，并加入冰水 (10 mL) , 用乙酸乙酯 (20 mL)萃取，并用饱和碳酸氢钠溶液 (10 mL)洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到标题化合物，为浅黄色固体 140mg，纯度 90%, 收率 42%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 6.70(dd, J = 2Hz, 6.8Hz, 1H), 7.22(dd, J = 2Hz, 6.4Hz, 1H), 7.58-7.24(m, 1H), 8.10(d, J = 2Hz, 1H), 8.50(br, 1H), 9.04(br, 1H), 9.14(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₄H₁₀ClF₃N₂O₂: 330, found： 331 [M +H]⁺

4： 4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基】酰脲)-苯氧基)-2-( ^-1，,1，,1，-三氘代甲基)吡啶酰胺 CM4307的制备

在室温下，将 1-(4-氯 -3-三氟甲基-苯基) -3-(4-羟基-苯基) -脲 A5(4g， 12.10mmol, leq)溶于 N， N-二甲基甲酰胺 (20mL)，分批加入叔丁醇钾 (4.6g， 41.13mmol, 3.4eq) , 搅拌反应 3小时，加入 4-氯吡啶 -2-(N-l，,r,r-三氘代甲基)酰胺 (2.3g， 13.31mmol, l . leq) 与碳酸钾 (0.8g， 6.05mmol， 0.5eq) , 加热至 80度搅拌反应 1.5小时。冷却至室温，加入乙酸乙酯 (200mL)，过滤除去无机盐，用饱和食盐水洗涤 (50mL X 3)，分层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤减压除去溶剂，向固体中加入乙腈 (15mL)回流搅拌 2小时，冷却至室温过滤得到 CM4307 , 为浅黄色固体 3.4g，纯度 96%, 收率 60%。 1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 7.15(dd, J = 2.8Hz, 5.6Hz, 1H), 7.17-7.19(m,2H) 7.40(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.59-7.69(m, 4H), 8.13(d, J = 2.4Hz, 1H), 8.51(d, J = 6Hz, 1H), 8.75(br, 1H), 8.90(br, 1H), 9.22(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₂₁H₁₃D₃C1F₃N₄0₃: 467, found： 468 [M +H]+ 实施例 18: 化合物 CM4307的合成

CM4307.TSOH

1： 4-氯吡啶-2-(^-1，,1，,1，-三氘代甲基)酰胺(中间体 A2)的制备

在氮气保护下，将四氢呋喃 (10.86 kg)加入到 30L反应釜中，开启搅拌，依次投入 1,1 ,1-三氘代甲胺盐酸盐 (1.50 kg, 21.26mol, 1.5eq)、 4-氯 -B比啶 -2-甲酸甲酯 (2.43 kg, 14.16mol， leq)、无水碳酸钾 (3.92 kg, 28.36mol, 2eq)。于 33 °C反应 15h，加入纯水 (12.20 kg) ,并用甲基叔丁基醚萃取两次 (3.70 kgx2) ,合并有机层，加入无水硫酸钠 (0.50 kg)搅拌干燥 1小时；过滤，在水温 40±2°C、真空度≤-0.09Mpa下，滤液减压脱溶，得到标题化合物，为淡黄色油状液体 2.41 kg, 纯度 99.0%, 收率 98%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 7.64(dd, J = 2Hz, 5.2Hz, 1H), 7.97(d, J = 1.6Hz, 1H), 8.54(d, J = 5.2Hz, 1H), 8.74(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₇H₄D₃C1N₂0: 173, found： 174 [M +H]+

2： 4-(4-氨苯氧基) - 2-吡啶-(^-1，,1，,1，-三氘代甲基)酰胺(中间体 A3)的制备方法 1:

在氮气保护下，将二甲亚砜 (2.75 kg)加入到 20 L的反应釜中，开启搅拌，投入 4-氯吡啶 -2-(Ν-Γ, Γ,Γ-三氘代甲基)酰胺 (2.41kg， 13.88mol, leq)、 4-氨基苯酚 (1.62 kg, 14.84mol， 1.08eq) , 再投入叔丁醇钾（1.66 kg, 14.79mol, l . leq)。釜温稳定后，升温并保持釜内温 80°C反应 4小时。将釜温降至 40°C后，加入异丙醇 (7.90kg)搅拌稀释反应液，再用异丙醇洗涤反应釜，并转移至 30 L的反应釜；在氮气保护下滴加盐酸 (5.81 kg), 滴加完毕后，搅拌并离心过滤，并加入纯化水洗涤；离心的固体转入 50 L的反应釜，加入纯化水 (21.00kg)搅拌使之全部溶解；在氮气保护下，缓慢滴加碳酸钾溶液于上述 50L反应釜 (2.5 kg碳酸钾溶于 7升纯化水)，约 1.5小时滴加完毕；放料离心过滤，用纯化水洗涤产品，并真空干燥 24小时，得到标题化合物，为淡棕色晶体 2.72 kg, 纯度 99.9%, 收率 78%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 5.19(br, 2H), 6.66-6.68(m, 2H), 6.86-6.88(m, 2H), 7.07(dd, J = 2.8Hz, 5.6Hz, 1H), 7.36(d, J = 2.8Hz, 1H), 8.45(d, J = 5.6Hz, 1H), 8.72(br, 1H).

I, m/z) calcd. for C₁₃H₁₀D₃N₃O₂Cl: 246, found： 247[M +H]⁺

在室温下，将 4-氯吡啶 -2-(N-l，,r,r-三氘代甲基)酰胺 (4.3g， 24.77mmol , leq) 溶于四氢呋喃 (20mL)中，室温搅拌并加入 4-氨基苯酚 (2.7g， 24.77mmol, leq) , 四丁基硫酸氢铵（1.68g， 4.95mmol， 0.2eq) , 氢氧化钠固体 (1.35g， 33.69mmol, 1.36eq)。缓慢滴加 45%的氢氧化钠水溶液 (氢氧化钠 (1.32 g)溶于水 (1.6 mL)) , 加热至 67°C并搅拌反应 20小时。冷却至 20°C下，使反应混合物的温度不超过 25 °C的速度加入 37 % 的浓盐酸 (10mL)。搅拌 1小时，过滤并用四氢呋喃洗涤 (20mL 将得到的固体溶解于水中 (60mL)，将反应液温度降至 10-20°C，缓慢滴加 22.5%的氢氧化钠溶液 (2.6mL))，调节 pH = 3-3.5，继续滴加 22.5%的氢氧化钠溶液 (3.4mL)，调节 pH =7-8，有浅黄色固体析出，在滴加过程中，保持体系温度不超过 20度。过滤并用水 (12 mL X 2)洗涤，真空干燥得到浅黄色的 4-(4-氨基 -苯氧基;) -N-氘代甲基吡啶 -2-甲酰胺 5.01g，纯度 99%, 收率为 82%。

MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₃H₁₀D₃N₃O₂Cl: 246, found： 247[M +H]⁺

3： 4-(4-(3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基】酰脲)-苯氧基)-2-( ^-1，,1，,1，-三氘代甲基)吡啶酰胺 (CM4307)的制备

在氮气保护下，向 50L 干燥的反应釜加入二氯甲垸 (17.30 kg)与二甲亚砜 (2.92 kg) , 室温搅拌并加入 4-(4-氨苯氧基) - 2-吡啶 -(Ν-Γ, Γ,Γ-三氘代甲基)酰胺 (2.65kg， 10.76mol)。将 4-氯 -3-三氟甲基苯基异氰酸酯 (2.50kg， 11.26mol, 1.05eq)溶于二氯甲垸 (7.00kg)中，并滴加至反应釜中，室温反应 lOmin, 用冰盐水降至 3±2°C。向反应釜中滴加 10.60kg的纯化水，并控制温度为 3±2°C，滴完后继续搅拌 30min，放料离心过滤，用二氯甲垸 (7.00kg)洗涤产品，将得到的产品用真空干燥 24h，得到类白色粉末状固体 4.8kg，纯度 99.8%, 收率 95.4%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 7.15(dd, J = 2.8Hz, 5.6Hz, 1H), 7.17-7.19(m,2H) 7.40(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.59-7.69(m, 4H), 8.13(d, J = 2.4Hz, 1H), 8.51(d, J = 6Hz, 1H), 8.75(br, 1H), 8.90(br, 1H), 9.22(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₂₁H₁₃D₃C1F₃N₄0₃: 467, found： 468 [M +H]+ 实施例 19 : 基于 4-氯吡啶-2-^-1，,1，,1，-三氘代甲基)酰胺（中间体 A2)合成 CM4

氯 -3-三氟甲基-苯基) -3-(2-氟 -4-羟基-苯基) -脲 B2的制备

在室温下，将 3-氟 -4-氨基 -苯酚 (500mg， 3.93mmol, leq)溶于 N， N-甲基甲酰胺 (3mL)中，并将 4-氯 -3-三氟甲基苯基异氰酸酯 (917mg， 4.13mmol, 1.05eq)的二氯甲垸 (3mL)溶液滴加到上述溶液中，室温搅拌反应 16 小时，加入水 (10mL)并用乙酸乙酯 (20mL)萃取，用饱和食盐水 (10 mL X 3)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后固体用石油醚 (15 mL)与乙酸乙酯 (5 mL)回流搅拌 2小时，冷却至室温过滤得到标题化合物，为褐色固体 1.2g，纯度 98%, 收率 89%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 6.56-6.59(m, 1H), 6.64(dd, J = 2.4Hz, 12.4Hz, 1H), 7.59-7.63(m, 3H),8.11(br, 1H), 8.28(br, 1H), 9.34(br, 1H), 9.69(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₄H₉C1F₄N₂0₂:348, found： 349 [M +H]⁺

3: 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基】酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( N-l，,l，,l，-三氘代甲基)吡啶酰胺 (CM4309)的制备

将叔丁醇钾 (906mg， 8.09mmol, 1.4eq)溶于 N， N-甲基乙酰胺 (DMA, 5mL)中，在 0度下缓慢滴加 1-(4-氯 -3-三氟甲基-苯基) -3-(2-氟 -4-羟基-苯基) -脲 (2.8g， 8.09mmol, 1.4eq)的 DMA(5mL)溶液至上述溶液，在室温下搅拌反应 20分钟，升温至 100°C缓慢滴加 4-氯 -N-氘代甲基吡啶 -2-甲酰胺 (lg， 5.78mmol, leq)的 DMA(5mL)溶液，滴加完毕后，冷却至室温，向反应液中加入乙酸乙酯 (200mL)稀释并搅拌 0.5小时，过滤除去无机盐，用水洗涤 (5mL X 3)，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂，粗品通过层析柱分离 (石油醚：乙酸乙酯 =4: 1)得到 520mg的 CM4309,为褐色固体，纯度 98%,收率 20%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 7.06-7.10(m, 1H), 7.19(dd, J = 2.4Hz, 5.6Hz, 1H), 7.35(dd, J = 2.8Hz, 12Hz, 1H), 7.43(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.63(m, 2H), 8.14(br, 1H), 8.17(t, J = 8.8Hz, 1H), 8.53(d, J = 5.6Hz, 1H), 8.75(d, J = 1.6Hz, 1H), 8.78(br, 1H), 9.54(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₂₁H₁₂D₃C1F₄N₄0₃:485, found： 486 [M +H]⁺ 实施例 20: 基于 4-氯吡啶-2-^-1，,1，,1，-三氘代甲基）酰胺（中间体 A2)合成 CM430

(4-氯 -3-三氟甲基-苯基) -氨基甲酸苯酯 B3的制备

将 4-氯 -3-三氟甲基苯胺 (4.9g， 25mmol, leq)加入至二氯甲垸 (50mL)中，室温下缓慢滴加氯甲酸苯酯 (3.9g， 25mmol, leq)的二氯甲垸 (10mL)溶液，继续搅拌反应 1 小时。加入稀盐酸 (IN, 50mL) , 再用水洗涤 (40mL X 3)，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂得到标题化合物，为类白色产品 7.5g，纯度 99%, 产率 94%。

1H NMR(DMSO-d6 , 400 MHz): δ 7.25 -7.30(m, 3H), 7.45(t, J = 8Hz, 2H), 7.67-7.78(m, 2H), 8.07(d, J = 2Hz, 1H), 10.73 (br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₁₄H₉C1F₃N0₂:315, found： 316[M +H]⁺

4-[4-({[4-氯 -3- (三氟甲基)苯基】甲酰基 }氨基) -3-氟苯氧基】 -N-氘代甲基吡啶 -2-甲酰胺 CM4309的制备

在室温下，将 (4-氯 -3-三氟甲基-苯基;) -氨基甲酸苯酯 (0.95g， 3.0mmol, leq)溶于吡啶 (10mL)，并加入 4-(4-氨 -3-氟-苯氧基) - 2-吡啶 -(Ν-Γ,Γ, Γ-三氘代甲基)酰胺 (0.79g， 3.0mmol, leq) , 升温至 85 °C搅拌反应 2小时。减压除去溶剂，加入乙酸乙酯 (50mL)，用稀盐酸洗涤 (IN, 10mL) , 用饱和食盐水 (10mL)洗涤，分层，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，加入乙酸乙酯 (3mL)，搅拌 1小时，过滤得到标题化合物，为类白色固体 0.5g，纯度 96%, 收率 35%。 1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 7.06-7.10(m, 1H), 7.19(dd, J = 2.4Hz, 5.6Hz, 1H), 7.35(dd, J = 2.8Hz, 12Hz, 1H), 7.43(d, J = 2.4Hz, 1H), 7.63(m, 2H), 8.14(br, 1H), 8.17(t, J = 8.8Hz, 1H), 8.53(d, J = 5.6Hz, 1H), 8.75(d, J = 1.6Hz, 1H), 8.78(br, 1H), 9.54(br, 1H).

MS (ESI, m/z) calcd. for C₂₁H₁₂D₃C1F₄N₄0₃:485, found： 486 [M +H]⁺

实施例 21: CM4309甲磺酸乙醇合物 (4309 · MeS0₃H · CH₃CH₂OH)的制备将 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基]酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( Ν-Γ,Γ,Γ-三氘代甲基) 吡啶酰胺 (2.1 g， 4.33 mmol, leq)悬浮于乙醇 (50 mL)中，加热回流至溶液澄清，趁热过滤除去不溶物后，将滤液加热回流，加入甲磺酸 (85%, 8.66mmol, 0.6mL, 2 eq), 澄清液保持 0.5分钟左右，关掉油浴自然冷却至室温，搅拌 1小时，过滤得到不溶物， 50度真空干燥 20小时，得到标题化合物，为淡红色固体 2.25g，收率为 89%。

1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.05(t, J = 6.8Hz, 3H), 2.48(s, 3H), 3.44(q, J = 6.8Hz, 2H), 7.11(dd, J = 1.2Hz, 8.4Hz, 1H), 7.31(dd, J = 2.8Hz, 6Hz, 1H), 7.38(dd, J = 2.4Hz, 11.6Hz, 1H), 7.61-7.65(m, 3H), 8.14-8.19(m, 2H), 8.60(d, J = 6Hz, 1H), 8.90(t, J = 1.2Hz, 1H), 8.99(br, 1H), 9.39(br, 1H), 9.66(br, 1H).

熔点： 157.5 °C-158.rC 实施例 22: 大鼠中的药代动力学评价

8只雄性 Sprague-Dawley大鼠， 7-8周龄，体重约 210g，分成 2组，每组 4只 (大鼠编号：对照组为 13-16; 实验组为 9-12)，单次口服给予 3mg/kg剂量的 (a)对组合物：未氘代的 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲（对照化合物 CM4306)或（b)实施例 1 制备的 N-(4-氯 -3-(三氟甲基；)苯基) -_Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧)苯基)脲（本发明化合物 CM4307), 比较其药代动力学差异。

大鼠采用标准饲料饲养，给予水和利眠宁。实验的前一天晚上停止给予利眠宁，给药后 2小时重新给予利眠宁。试验前 16小时开始禁食。药物用 30% PEG400溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后 0.083 小时， 0.25 小时， 0.5 小时， 1 小时， 2 小时, 4 小时， 6小时， 8小时和 24小时。

令大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集 300 uL血样于试管。试管内有 30 ul l% 肝素盐溶液。使用前，试管于 60°C烘干过夜。在随后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。

血样采集后，立即温和地颠倒试管至少 5 次，保证混合充分后放置于冰上。血样在 4°C5000 rpm离心 5分钟，将血清与红细胞分离。用移液器吸出 100 uL血清到干净的塑料离心管中，表明化合物的名称和时间点。血清在进行 LC-MS分析前保存在 -80°C。其结果如图 1-2所示。结果显示， CM4307比 CM4306的半衰期 T_1/2延长 [分别为 11.3 ±2.1小时和 8.6 ± 1.4小时]，曲线下面积 AUC。__∞CM4307比 CM4306显著增加 [分别为 11255 ±2472 ng-h/mL和 7328 ±336 ng-h/mL] , CM4307比 CM4306表观清除率减少 [分别为 275 ± 52mL/h/kg和 410 ± 18.7 mL/h/kg]。

从上面结果看出，本发明化合物在动物体内具有更好的药物动力学，因而具有更好的药效学和治理效果。

另外，通过氘化，本发明化合物在生物体中的代谢过程有所改变。特别地使苯基上的羟化变得困难，这导致初次通过效应 (First-pass effect)的降低。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，其也可以长效制剂的形式改善适用性。

另外，通过氘化还改变了药物动力学作用，因为氘代化合物完全形成另一水合物膜，以致在生物体中的分布明显不同于未氘代的化合物。实施例 23: CM4307对人肝细胞癌 SMMC-7721裸小鼠移植瘤生长抑制的药效学评价

Balb/c nu/nu裸小鼠， 6周龄，雌性， 70只，购自上海试验动物资源中心 (上海西普尔-必凯实验动物有限公司；)。

SMMC-7721细胞购自中科院上海生命科学院 (上海，中国；)。

肿瘤裸鼠移植模型的建立：收获对数生长期的 SMMC-7721细胞，计数后将细胞悬于 IxPBS , 调整细胞悬液浓度至 1.5xl0⁷/ml。用 lml注射器在裸鼠右侧腋下皮下接种肿瘤细胞， 3xl0⁶/0.2ml/鼠。共接种 70只裸鼠。

在肿瘤体积达到 30-130mm³时，将动物进行随机分组，共获得 58只动物，使各组肿瘤差异小于均值的 10%，并开始给药。

试验剂量分组设置见下表：

试验期间每周测定两次动物体重和肿瘤大小。每日观察记录临床症状。给药结束时，拍照记录肿瘤大小。每组处死一只小鼠取肿瘤组织，固定于 4%多聚甲醛。给药结束后，继续观察，当肿瘤均值大于 2000mm³，或动物出现濒死状态时，处死动物，做大体解剖，取肿瘤组织固定于 4%多聚甲醛。

肿瘤体积 (； Tumor volume, TV)的计算公式为： TV=axb²/2。其中 a、 b分别代表肿瘤测量长和宽。相对肿瘤体积 (relative tumor volume, RTV)计算公式为： RTV=Vt/V。。其中 V。为分组给药时的肿瘤体积， Vt为测量时的肿瘤体重。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增值率 T/C(%)，计算公式为： T/C(;%;KT_RTV/C_RTV)xl00%。 T_RTV为治疗组 RTV, C_RTV为阴性对照组 RTV。

疗效评价标准：相对肿瘤增值率 T/C(%)≤ 40%并经统计学分析 p<0.05为有效。结果如图 3所示。 CM4306和 CM4307单剂量 10、 30、 100mg/kg 每日灌胃给药连续 2周，两个化合物均表现剂量依赖性的抑制肿瘤生长作用。给药结束时， CM4306 的 T/C%分别为 56.9%、40.6%和32.2%。0^4307的170；%)分别为53.6%、40.8%和19.6%。其中 100mg/kg剂量组的 17。％均<40%，肿瘤体积与对照组比较有显著差异 (ρθ.01),表现显著的抑制肿瘤生长的作用。

CM4307的高剂量 100mg/kg组比 CM4306高剂量组肿瘤抑制作用强 (最佳 T/C %分别为 19.6%和 32.2%,dl5)，瘤体积组间比较有显著差异 (p<0.01)。与 CM4306相比， CM4307的抑瘤率的绝对值提高 10%以上，相对幅度提高约 60%(32.2%/19.6%-1=64%)，表现出更为显著的抑制肿瘤生长的作用。

此外，试验过程中未见其他药物相关毒性反应。实施例 24 对于 c-Kit、 PDGFR-β蛋白酪氨酸激酶分子水平抑制活性

1、实验方法

本实施例采用酶联免疫吸附法 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)测定二苯基脲化合物对 _C-Kit、 PDGFR-β蛋白酪氨酸激酶分子水平抑制活性。

测定的化合物： CM4306、 CM4308(4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基]酰脲) -3-氟- 苯氧基;) -N-甲基吡啶酰胺)、 CM4309o

主要试剂：

反应底物 Poly(Glu,Tyr)_4:1购自 Sigma 公司；抗磷酸化酪氨酸的单克隆抗体 PY99 购自 Santa Craz公司；辣根过氧化物酶标记羊抗鼠的 IgG 购自 Calbiochem 公司； ATP、 DTT、 OPD 购自 Amresco 公司；酶标板购自 Coming 公司； Sul l248 购自 Merk公司。

实验方法：

参见 Roskoski, R., Jr. Sunitinib: a VEGF and PDGF receptor protein kinase and angiogenesis inhibitor. Biochem Biophys Res Commun, 356: 323-328, 2007，具体包括：激酶反应底物 Poly(Glu,Tyr)_4:1用无钾离子的 PBS稀释成 20 μ_β/πι1,包被酶标板。在包被好酶标板孔内加入受试的二苯基脲样品 (受试样品先用 DMSO配制成 10-² Μ的储存液，临用前用反应缓冲液稀释到所需浓度，加至实验孔内，使其在 100 μΐ反应体系的终浓度为 10-⁵mol/L)。同时设立阳性对照孔，加入阳性对照化合物 Sul l248。

加入用反应缓冲液稀释的 ATP溶液（ATP终浓度 5 μΜ)，最后，加入用反应缓冲液稀释的受试酪氨酸激酶。反应体系总体积为 100 μ1。同时设立阴性对照孔和无酶对照孔。

将反应体系置于湿盒内， 37。C摇床避光反应 1 h，反应结束后 T-PBS洗板三次。加入抗体 PY99 100 μΐ/孔， 37°C摇床反应 30 min。 T-PBS洗板三次。加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠的 IgG 100 μΐ/孔， 37°C摇床反应 30 min。 T-PBS洗板三次。加入 OPD显色液 100 μΐ/孔，室温避光反应 1-10 min。加入 2 M H₂S0₄50 μΐ中止反应，用可调波长式微孔板酶标仪 VERSAmax测 ₄₉₂值。

通过下列公式计算样品的抑制率：

化合物 OD值 -无酶对照孔 OD值

的抑制率％ )χ100%

阴性对照 OD值 -无酶对照孔 OD值

2、实验结果

以上实验结果为两次试验的均值.

3、评价标准和结果评价

在阳性对照化合物的抑制活性符合参考范围的前提下，受试化合物在实验浓度 10—⁵mol/L下，抑制率大于 50%判定其有效；抑制率小于 50%判定无效。

结果显示， CM4306、 CM4308、 CM4309对蛋白酪氨酸激酶 c-Kit、 PDGF -β 的抑制率大于 50%，故在分子水平具有显著的针对 c-Kit、 PDGF -β酪氨酸激酶的抑制活性。实施例 25 CM4306、 CM4308和 CM4309的大鼠药代动力学研究

3雄性 SD大鼠，体重 220 g左右，禁食过夜后，同时灌胃给予 4 mg/kg (折算成碱) CM4306、 CM4308和 CM4309的混合溶液 [PEG400为载体]。分别在给药后 0.25， 0.5 , 1.0, 2.0, 3.0, 5.0, 7.0, 9.0, 24， 36, 48和 72 h采血，用 LC/MS/MS测定血浆中 CM4306和 CM4307的浓度。大鼠灌胃给予 4 mg/kg CM4306, CM4308和 CM4309后的药动学参数化合物大鼠 Tmax Cmax AUC(O-t) AUC(O-oo) MRT(O-oo) tl/2z

编号 h ng/mL Ng-h/mL ng-h/mL h h

CM4306 7 8.0 642 23431 24613 28.2 14.8

8 2.0 1568 40239 41544 23.2 12.8

9 8.0 651 24571 25008 23.9 10.0 平均值 6.0 954 29414 30388 25.1 12.5 标准差 3.5 532 9392 9663 2.7 2.4

CM4308 7 6.0 279 9327 9541 24.1 11.7

8 1.0 817 18558 18973 21.7 11.4

9 8.0 378 11473 11605 21.0 10.1 平均值 5.0 491 13119 13373 22.2 11.1 标准差 3.6 286 4831 4958 1.6 0.9

CM4309 7 24.0 470 22220 27384 45.9 26.7

8 1.0 933 35592 41702 39.1 23.4

9 8.0 530 25601 28899 36.7 20.9 平均值 11.0 644 27804 32661 40.6 23.7 标准差 11.8 252 6953 7866 4.8 2.9 结果显示， CM4309(23.7hr± 2.9hr)的 tl/2 显著高于 CM4306(12.5hr± 2.4hr)和 CM4308(l l.lhr±0.9hr；)。

CM4309(32611 ng'h/mL ±7866 ng-h/mL) 的 AUC(0-∞)显著高于 CM4308(13371 ng-h/mL + 4958 ng-h/mL)。实施例 26

CM4306、 CM4308和 CM4309的体内药效学研究

肿瘤裸鼠移植模型的建立：收获对数生长期的 SMMC-7721细胞，计数后将细胞悬于 lxPBS , 调整细胞悬液浓度至 1.5xl0⁷/ml，在裸鼠右侧腋下皮下接种肿瘤细胞， 3xl0⁶/0.2ml/鼠。共接种 45只裸鼠。在肿瘤体积达到 30-130mm³时，将动物进行随机分组，共获得 34只动物，使各组肿瘤差异小于均值的 10%, 并开始给药。对照组 10 只裸鼠，治疗组每组 8只裸鼠。 CM4306、 CM4308和 CM4309单剂量 30mg/kg每日灌胃给药连续 2周；停药后继续观察，直至肿瘤体积大于 2000mm³，试验期间每周测定两次动物体重和肿瘤大小。化合物溶解在 Cremophor EL/ethanol/water (12.5: 12.5:75)中。

肿瘤体积 (Tumor volume, TV)的计算公式为： TV=axb²/2。其中 a、 b分别代表肿瘤测量长和宽。相对肿瘤体积 (relative tumor volume, RTV)计算公式为： RTV=Vt/V。。其中 V。为分组给药时的肿瘤体积， Vt为测量时的肿瘤体重。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增值率 T/C(%)，计算公式为： T/C(%)=Cr_RTV/C_RTV;)xl00%。 T_RTV为治疗组 RTV, C_RTV为阴性对照组 RTV。

疗效评价标准： T/C(%)≤ 40%并经统计学分析 p<0.05为有效。

给药结束后， CM4306 30mg/kg的 17。(％)为 64.1%， CM4308的 17。(％)为 51.0%, CM4309为 27.0%。其中 CM4309在 30mg/kg的抑制率<40%，肿瘤体积与对照比较有显著差异 (p<0.01)，表现显著的抑制肿瘤生长的作用。在相同剂量下， CM4306 和 CM4308 的瘤体积之间没有显著差异 (p>0.05), 而 CM4309 与 CM4306(p<0.05)和 CM4308(p<0.01)的瘤体积之间有显著差异（图 4) 。实施例 27 药物组合物

化合物 CM4307(实施例 1) 20g

淀粉 140g

微晶纤维素 60s

实施例 28 药物组合物

化合物 CM4309(实施例 19) 20g

淀粉 140g

微晶纤维素 60g

按常规方法，将上述物质混合均匀后，得到 1000颗胶在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

权利要求

1.一种式 (I)所示的氘代的 ω-二苯基脲化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：

巾：

X 是 Ν或者 Ν+-0-；

R¹是卤素，一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

R²是未氘代的、一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基，或者部分或全部卤素取代的 C1-C4垸基；

R³、 R⁴、 R⁵、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰、 R"、 R¹²、 R¹³、和 R¹⁴分别是氢、氘、或卤素；

R⁶是氢、氘、或一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

R⁷是氢、氘、或一个或多个氘代的或全氘代的 C1-C4垸基；

附加条件是 R²、 R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰、 R"、 R¹²、 R¹³或 R¹⁴中至少一个是氘代的或氘。

2. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，是!《。

3. 如权利要求 1或 2所述的化合物，其特征在于， R¹是氯。

4. 如权利要求 1-3中任一所述的化合物，其特征在于， R²是三氟甲基。

5.如权利要求 1-4中任一所述的化合物，其特征在于， R⁶或 R⁷分别独立地选自：氢、氘、部分或全氘代的甲基、或者部分或全氘代的乙基。

6.如权利要求 1-5中任一所述的化合物，其特征在于， R³、 R⁴或 R⁵分别独立地选自：氢或氘；和 /或

R⁸、 R⁹、 R^1Q或 R¹¹分别独立地选自：氢或氘；和 /或

R¹²、 R¹³或 R¹⁴分别独立地选自：氢或氘。

7.如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，所述化合物是以下化合物或其药学上可接受的盐：

4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基]酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( N-Γ,Γ,Γ-三氘代甲基)吡啶酰胺; N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基)脲；

4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基)脲基)苯氧基 )-2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基)吡啶 -1-氧化物；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧) 苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ-氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

N-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲;

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-氘 -6-(N-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(2-氘 -4-(2-氘 -6-(Ν-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧) 苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(2,6-二氘 -4-(2-氘 -6-(Ν-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基;)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-氘 -6-(Ν-甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基) 脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-甲基 -Ν-Γ, Γ， 1，-三氘甲基氨基甲酰基) -4- 吡啶基氧;)苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -N，-(4-(2-(N， N-二 (Γ,Γ,Γ-三氘甲基)氨基甲酰基) -4- 吡啶基氧;)苯基)脲；

N-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基) -N，-(2,6-二氘 -4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )—4-吡啶基氧)苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-氘 -6-(Ν-Γ，Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ-二氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧) 苯基)脲；

Ν-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,2，，2，,2，-五氘乙基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲；

或 Ν-(4-氯 -3- (三氘甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧;)苯基;)脲。

8. 一种制备药物组合物的方法，其特征在于，包括步骤：将药学上可接受的载体与权利要求 1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。

9.一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和权利要求 1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

10. 一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和 N-(4-氯 -3- (三氟甲基）苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基 )-4-吡啶基氧）苯基）脲或 4-(4-(3-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基]酰脲) -3-氟-苯氧基) -2-( Ν-Γ ,1， ,1， -三氘代甲基)吡啶酰胺、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

11 . 如权利要求 9或 10所述的药物组合物，其特征在于，它还含有另外的治疗药物，所述的另外的治疗药物为癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、肾病、血管发生 (angiogenesis；)、前列腺疾病的药物。

12.—种权利要求 1 所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的用途，其特征在于，用于制备抑制磷酸激酶 (如 mf激酶)的药物组合物。

13. 如权利要求 12所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物用于治疗和预防以下疾病：癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、肾病、血管发生 (angiogenesis；)、或前列腺疾病。

14. 一种制备化合物 N-(4-氯 -3- (三氟甲基)苯基) -Ν，-(4-(2-(Ν-Γ,Γ,Γ-三氘甲基氨基甲酰基) -4-吡啶基氧)苯基)脲的方法，

其特征在于，所述方法包括：

(a) 在惰性溶剂中以及碱存在下，式 III化合物与式 V化合物反应，形成所述化合 N CONHCD;

V 碱

式中， X为 Cl、 Br、 I或

或者，所述方法包括：

(b) 在惰性溶剂中，式 IX化合物与 CD₃NH₂或 CD₃NH₂ * HC1反应，形成所述的化合物；

CD肌或

OOR 圆 HC I

κ

式中， R为 C1-C.8直链或支链垸基，或芳基；

或者，所述方法包括：

(c) 在惰性溶剂中， 4-氯 -3-三氟甲基苯异氰酸酯 (環)与式 5化合物反应，形成所述的化合物；

或者，所述方法包括：

(d) 在惰性溶剂中，在 CDI和。¾ ₂存在下，式 5化合物与式 6化合物反应，形成所述的化合物。