CN102759559A - 一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，它包括：一超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，其厚度＜1mm；一带有等距微孔的加样薄膜；染色剂。本发明采用自制的塑料薄板作为模具，所制备的琼脂糖板厚度为＜1mm，甚至可达0.8mm，电泳通电顺畅，染色时间缩短，且染色完全，脱色时间极短，蛋白质分离的分辨率很高，且与加样薄膜配套使用点样以代替传统的锯齿物理成孔后点样，操作更简便，且根据胶板宽度已预先配置相应的已刻制的长条状微孔，点样效果极佳；通过试剂盒适用范围实验结果可知，本发明提供的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类可精确的检测出：白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白；本发明提供了一种临床上有关血清蛋白电泳分离图谱的分析产品，有助于对疾病的正确诊断，其应用前景十分广阔。
Description
技术领域
本发明涉及一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒及其制备方法。
背景技术
现有技术中的琼脂糖凝胶电泳板的配置方法，其厚度往往超过3mm，不仅影响蛋白质迁移率，还影响染色效果，因为太厚染料不易渗透进去，蛋白质条带往往形成空泡，对扫描定量结果直接造成影响；另外，脱色时间也很长。此外，超薄型琼脂糖电泳胶板(厚度＜1mm)，如通过齿状加样模具在胶板上留下凹槽来加样会导致电泳胶板破损，无法使用。从而导致采用琼脂糖凝胶电泳板不适用于分离血清蛋白类的诊断试剂盒，而使得现有产品中价格均较高。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒及其制备方法。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其包括：一超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，其厚度＜1mm；一带有等距微孔的加样薄膜；染色剂。
作为一种优选方案，所述超薄琼脂糖凝胶电泳胶板宽度与加样薄膜宽度比为1∶1.1～1.5。
作为进一步优选方案，所述微孔的数量为5～10个。
作为进一步优选方案，所述微孔为长条形，长为2～7mm，宽0.3～0.8mm；最佳为长5mm，宽0.5mm。
作为进一步优选方案，所述染色剂为0.1％氨基黑10B。
制备上述超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，包括以下步骤：
d)制备超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，将1％的琼脂糖用沸水浴融化后且冷却至60℃左右，倒入长10cm、宽7cm，厚0.8mm的塑料模板中，用一直尺或三角尺的一边将凝胶拉平，待凝固后，将一裁成与胶板同样大小的保险薄膜贴于凝胶板上，放置塑料盒中；
e)制备加样薄膜，取一张教学用投影胶片，裁取长10cm，宽2cm的长条状，在其中间位置用手术刀片刻制8个线状排列的加样微孔，微孔长5mm，宽0.5mm，两孔间隔3.5mm；
f)放置染色剂，包装。
与现有技术相比，本发明采用自制的塑料薄板作为模具，所制备的琼脂糖板厚度为＜1mm，甚至可达0.8mm，电泳通电顺畅，染色时间缩短，且染色完全，脱色时间极短，蛋白质分离的分辨率很高，且与加样薄膜配套使用点样以代替传统的锯齿物理成孔后点样，操作更简便，且根据胶板宽度已预先配置相应的已刻制的长条状微孔，加样时，可将这膜紧贴于琼脂糖胶板上，将血清点在各孔上，吸收几分钟后取掉即可，点样效果极佳；通过试剂盒适用范围实验结果可知，本发明提供的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类可精确的检测出：白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。鉴于血清蛋白电泳图谱是了解患者血清蛋白质全貌的有价值的方法，可用为初筛实验。如急性炎症或急性时相反应时常以α1、α2区带加深为特征；妊娠型α1区带增高，伴有β区带增高；肾病综合征、慢性肾小球肾炎时呈现白蛋白下降，α2、β球蛋白升高；缺铁性贫血时可由于转铁蛋白的升高而呈现β区带增高，而慢性肝病或肝硬变呈现白蛋白显著降低，γ球蛋白升高2～3倍，示免疫球蛋白多克隆高，甚至可见β-γ桥，还可在γ区呈现细而密的寡克隆区带；单克隆免疫球蛋白异常症(M蛋白血症)则在电泳区带α-γ区呈现致密而深染，高度集中的蛋白克隆增生区带(M蛋白区带)。因此，分析血清蛋白电泳分离图谱，有助于对疾病的正确诊断，其应用前景十分广阔。
附图说明
图1为本发明提供的制备超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板的模具示意图；
图2为本发明提供的制备超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板与加样薄膜配套使用时的示意图；
图3为本发明提供的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例及对比例对本发明作进一步详细、完整地说明。
实施例
1.制备超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒
a)制备超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，将1％的琼脂糖用沸水浴融化后且冷却至60℃左右，倒入长10cm、宽7cm，厚0.8mm的塑料模板(如图1所示)中，用一直尺或三角尺的一边将凝胶拉平，待凝固后，将一裁成与胶板同样大小的保险薄膜贴于凝胶板上，放置塑料盒中；
b)制备加样薄膜，取一张教学用投影胶片，裁取长10cm，宽2cm的长条状，在其中间位置用手术刀片刻制8个线状排列的加样微孔，微孔长5mm，宽0.5mm，两孔间隔3.5mm(如图2所示)；
c)放置染色剂，包装。
图3为本发明提供的超薄型糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类试剂盒的结构示意图，其中包括琼脂糖凝胶板1、加样膜2、染色剂3、厚度合适的海绵4和包装盒5。
2.试剂盒使用方法
(1)取一超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，揭去表面膜放一旁待用，将加样膜条根据点样位置紧贴于胶板表面，要求无气泡。
(2)点样：取患者血清各3μl点样于孔中，等待3分钟以使血清吸收。
(3)电泳：点样端接负极，电压150V电泳30min。
(4)染色：将胶板铺于平皿内，吸2mL染色剂加于胶板上，将前面的表面膜铺于其上，染色15min。
(5)将膜弃去，胶板用脱色液(根据说明书自配)浸泡，直至背景透明。
(6)扫描：用扫描仪定量各蛋白质条带百分比。
3.试剂盒性能检测
3.1待检血清蛋白：
白蛋白
α1-球蛋白
α2-球蛋白
β-球蛋白
γ-球蛋白
3.2精密度试验
3.2.1批内精密度试验：取一血清在同张凝胶板上点样8份，电泳后扫描求得结果。分别计算均值(x)，标准差(s)，变异系数(CV)。如表1所示。
表1批内精密度试验结果
| 均值(x) | 标准差(s) | 变异系数(CV％) | |
| 白蛋白 | 59.8 | 1.040 | 1.74 |
| α1-球蛋白 | 3.55 | 0.120 | 3.37 |
| α2-球蛋白 | 8.13 | 0.238 | 2.92 |
| β-球蛋白 | 5.16 | 0.141 | 2.73 |
| γ-球蛋白 | 23.4 | 1.088 | 4.65 |
3.2.2批间精密度试验：同一血清分用5块凝胶板分别电泳。电泳后扫描求得结果。分别计算均值(x)，标准差(s)，变异系数(CV)。如表2所示。
表2批间精密度试验结果
| 均值(x) | 标准差(s) | 变异系数(CV％) | |
| 白蛋白 | 60.4 | 2.40 | 3.97 |
| α1-球蛋白 | 3.66 | 0.398 | 10.8 |
| α2-球蛋白 | 8.16 | 0.478 | 5.85 |
| β-球蛋白 | 5.406 | 0.418 | 7.75 |
| γ-球蛋白 | 21.9 | 2.304 | 8.21 |
3.3抗震性实验
将试剂盒用汽车运送15公里，或将试剂盒颠倒放置1小时，均不影响琼脂糖凝胶的物理性状。
3.4保存期实验
将试剂盒放置4℃冰箱保存3个月，其性能完好。
3.5准确性实验(比对实验)
分别用法国SEBIA全自动电泳仪及配套血清蛋白电泳试剂盒和本试剂盒测定10份血清样本。结果表明两检测系统间的相对误差均＜10％。
最后有必要在此说明的是：以上实例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于，它包括：一超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，其厚度＜1mm；一带有等距微孔的加样薄膜；染色剂。
2.根据权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于：所述超薄琼脂糖凝胶电泳胶板宽度与加样薄膜宽度比为1∶1.1～1.5。
3.根据权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于：所述微孔的数量为5～10个。
4.根据权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于：所述微孔为长条形，长为2～7mm，宽0.3～0.8mm。
5.根据权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于：所述染色剂为0.1％氨基黑10B。
6.根据权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，其特征在于：它还包括一包装盒。
7.制备权利要求1所述的超薄型琼脂糖凝胶电泳胶板分离血清蛋白类诊断试剂盒，包括以下步骤：
a)制备超薄琼脂糖凝胶电泳胶板，将1％的琼脂糖用沸水浴融化后且冷却至60℃左右，倒入长10cm、宽7cm，厚0.8mm的塑料模板中，用一直尺或三角尺的一边将凝胶拉平，待凝固后，将一裁成与胶板同样大小的保险薄膜贴于凝胶板上，放置塑料盒中；
b)制备加样薄膜，取一张教学用投影胶片，裁取长10cm，宽2cm的长条状，在其中间位置用手术刀片刻制8个线状排列的加样微孔，微孔长5mm，宽0.5mm，两孔间隔3.5mm；
c)放置染色剂，包装。
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Non-Patent Citations (1)
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| 吴惠毅等: "超薄型琼脂糖凝胶电泳快速检测LDH同工酶", 《临床检验杂志》 * |
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