CN102749239A - 一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法 - Google Patents

一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102749239A
CN102749239A CN2012102386549A CN201210238654A CN102749239A CN 102749239 A CN102749239 A CN 102749239A CN 2012102386549 A CN2012102386549 A CN 2012102386549A CN 201210238654 A CN201210238654 A CN 201210238654A CN 102749239 A CN102749239 A CN 102749239A
Authority
CN
China
Prior art keywords
phospholipid bilayer
construction method
phospholipid
novel
wrinkled state
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2012102386549A
Other languages
English (en)
Inventor
邵志峰
李林
丹尼尔·恰科夫
孙洁林
沈轶
胡钧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Jiaotong University
Original Assignee
Shanghai Jiaotong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Jiaotong University filed Critical Shanghai Jiaotong University
Priority to CN2012102386549A priority Critical patent/CN102749239A/zh
Publication of CN102749239A publication Critical patent/CN102749239A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

本发明公开了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤：提供一基底，所述基底为云母或其它基底；在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。本发明提出的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，该层新基底还可用于其它生物样品的制备，如磷脂双分子层、蛋白质等等。本发明可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。

Description

一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法
技术领域
本发明涉及磷脂双分子层制备领域，且特别涉及一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法。
背景技术
细胞是生命体的基本生命单元，它是由细胞膜包裹住的，从而能维持其内部结构的稳定性，保证正常的生命活动。
细胞膜不单是细胞的物理屏障，也是在细胞生命活动中重要的功能结构组成。细胞膜的主要组成部分是磷脂双分子层、镶嵌蛋白质以及糖被，而磷脂双分子层是细胞膜的基本支架，它对整个细胞的功能实现具有重要的作用。
磷脂双分子层是由上下两层磷脂分子组成的，每个磷脂分子由头部和尾巴组成，头部是亲水的，由磷脂和胆碱组成，尾巴是疏水的，由两条碳链组成
由于磷脂双分子层在生物细胞结构和功能上的重要作用，并且它具有丰富的相变——液态、胶态，对于某些磷脂还有褶皱态，许多科研工作者对它进行了研究，使用的仪器主要有原子力显微镜、X射线等等。在利用这些仪器对磷脂双分子层进行研究的时候，必须在基底上制备样品，因此如何制备更接近于自然状态下的样品就成为首要解决的问题。
磷脂双分子层的褶皱态是介于液态和胶态之间的一种中间态，它可以利用温度的控制来形成。但是，许多仪器并不具有温度控制的功能，因此，我们只有使用其它方法来引导褶皱态。
褶皱态的实现方法主要有利用三羟甲基氨基甲烷(Tris)方法，而本发明的方法制备的样品进一步消除了基底对生物样品的影响，因此更接近于自然状态。
发明内容
本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。
为了达到上述目的，本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤：
提供一基底，所述基底为云母或其它基底；
在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；
在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。
进一步的，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构。
进一步的，所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。
进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括将溶解于氯仿中的磷脂样品利用氮气吹干，放置在通风橱中20小时。
进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括加入500ul的20mM氯化钠溶液，使得磷脂分子溶液浓度达到2mg/ml，并超声振动，直至溶液变清澈。
进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括在4mm*4mm新揭开的云母表面上滴上25ul的2mg/ml磷脂溶液，放置在4℃的环境中16小时。
进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括将该样品放置于60℃环境中，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括加入25μl的2mg/ml磷脂溶液，放置在4℃的环境中48小时。
进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括将该样品升温至60℃，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
本发明公开了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其包括利用囊泡融合的方法在云母上制备一层胶态下的磷脂双分子层，在该层新基底上再制备一层磷脂双分子层从而稳定实现其褶皱态。并且该层新基底还可用于其它生物样品的制备，如磷脂双分子层、蛋白质等等。本发明可使制备的生物样品更接近于自然状态，适合生物学的研究，且操作手段简单、成本低廉。
附图说明
图1所示为本发明较佳实施例的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法流程图。
具体实施方式
为了更了解本发明的技术内容，特举具体实施例并配合所附图式说明如下。
本发明介绍了一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其包括利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法在云母或其它基底表面制备一层胶态下的磷脂双分子层，在该层新基底上再制备一层磷脂双分子层从而稳定实现其褶皱态。
请参考图1，图1所示为本发明较佳实施例的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法流程图。本发明提出一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，包括下列步骤：
步骤S100：提供一基底，所述基底为云母或其它基底；
步骤S200：在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；
步骤S300：在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。
根据本发明较佳实施例，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构，在本实施例中，利用原子力显微镜在溶液环境中观察到的在该新型基底上制备的磷脂双分子层所实现的褶皱态，样品表面呈以一定周期高低起伏的形貌，周期约为28纳米，起伏为0.5-0.7纳米。
所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。
进一步的，所述囊泡融合的构建方法包括：先将磷脂粉末利用天平称量后放入小玻璃瓶中，再加入氯仿溶解，使其浓度达到20mg/ml。每次取出50ul溶解于氯仿中的磷脂样品，滴入另外一个玻璃管中，使用氮气吹干，然后放置在通风橱中约20小时，以便残留的氯仿挥发出去。然后加入500ul的20mM氯化钠溶液使其浓度变为2mg/ml，随后将该玻璃管放入超声仪中超声振动，直到溶液变清澈为止，时间大约需要4小时。
取25ul的2mg/ml磷脂溶液，将其滴在4mm*4mm新揭开的云母表面上，将该样品放置在饱和湿度环境下以避免云母表面的液滴干掉，环境温度为4℃，放置大约16小时后，取出样品，放入烘箱中，缓慢升温到60℃，烘烤大约40分钟，关闭烘箱，缓慢降温，大约2小时后样品可用，值得一提的是，在烘烤的过程中，样品必须一直处于饱和湿度的环境中且样品表面不可暴露于空气中。
进一步的，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括：在第一磷脂双分子层上加入25ul的2mg/ml磷脂溶液，再将该样品放入饱和湿度的环境中，温度控制在4℃左右，让磷脂囊泡在磷脂双分子层上吸附48小时后，取出样品，利用烘箱加热到60℃，烘烤40分钟左右，关闭烘箱，缓慢降温，取出样品，即可得到磷脂双分子层的褶皱态样品。
利用该方法制备的磷脂双分子层新型基底还可用于其它生物样品，如蛋白质、DNA等等，其优点是可让这些生物分子更接近于自然状态。
虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然其并非用以限定本发明。本发明所属技术领域中具有通常知识者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作各种的更动与润饰。因此，本发明的保护范围当视权利要求书所界定者为准。

Claims (9)

1.一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：
提供一基底，所述基底为云母或其它基底；
在所述基底表面制备一层胶态下的第一磷脂双分子层；
在所述第一磷脂双分子层上再制备一层第二磷脂双分子层，从而稳定实现其褶皱态。
2.根据权利要求1所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所形成的磷脂双分子层褶皱态具有一定周期上下起伏的结构。
3.根据权利要求1所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述胶态下的第一磷脂双分子层利用囊泡融合或其它平面磷脂双分子层制备的方法来实现。
4.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括将溶解于氯仿中的磷脂样品利用氮气吹干，放置在通风橱中20小时。
5.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括加入500ul的20mM氯化钠溶液，使得磷脂分子溶液浓度达到2mg/ml，并超声振动，直至溶液变清澈。
6.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括在4mm*4mm新揭开的云母表面上滴上25ul的2mg/ml磷脂溶液，放置在4℃的环境中16小时。
7.根据权利要求3所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述囊泡融合的构建方法包括将该样品放置于60℃环境中，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
8.根据权利要求1所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括加入25μl的2mg/ml磷脂溶液，放置在4℃的环境中48小时。
9.根据权利要求8所述的新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法，其特征在于，所述第二磷脂双分子层的制备方法包括将该样品升温至60℃，烘烤40分钟，再缓慢降温至室温。
CN2012102386549A 2012-07-10 2012-07-10 一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法 Pending CN102749239A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102386549A CN102749239A (zh) 2012-07-10 2012-07-10 一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012102386549A CN102749239A (zh) 2012-07-10 2012-07-10 一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102749239A true CN102749239A (zh) 2012-10-24

Family

ID=47029605

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012102386549A Pending CN102749239A (zh) 2012-07-10 2012-07-10 一种新型磷脂双分子层褶皱态的构建方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102749239A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111100789A (zh) * 2018-12-24 2020-05-05 天津大学 一种基于特超声声孔效应的磷脂膜开孔系统及方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005114192A1 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Centre National De La Recherche Scientifique A device for binding a target entity to a bait entity and detection methods using the same
CN101704685A (zh) * 2009-10-29 2010-05-12 复旦大学 一种在液相中原位制备脂双分子层膜的方法与装置

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005114192A1 (en) * 2004-05-13 2005-12-01 Centre National De La Recherche Scientifique A device for binding a target entity to a bait entity and detection methods using the same
CN101704685A (zh) * 2009-10-29 2010-05-12 复旦大学 一种在液相中原位制备脂双分子层膜的方法与装置

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANNE L. PLANT: "Self -Assembled Phospholipid/Alkanethiol Biomimetic Bilayers on Gold", 《LANGMUIR》 *
ILYA REVIAKINE ET AL.: "Formation of Supported Phospholipid Bilayers from Unilamellar Vesicles Investigated by Atomic Force Microscopy", 《LANGMUIR》 *
YE FANG AND JIE YANG: "Role of the Bilayer-Bilayer Interaction on the Ripple Structure of Supported Bilayers in solution", 《J. PHYS. CHEM》 *
潘勇等: "人工磷脂双分子层模型的原子力显微镜研究", 《中国医学物理学杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111100789A (zh) * 2018-12-24 2020-05-05 天津大学 一种基于特超声声孔效应的磷脂膜开孔系统及方法
CN111100789B (zh) * 2018-12-24 2023-08-11 天津大学 一种基于特超声声孔效应的磷脂膜开孔系统及方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Moerz et al. Protein adsorption into mesopores: a combination of electrostatic interaction, counterion release, and van der Waals forces
Dietrich et al. Two-dimensional nature of the active Brownian motion of catalytic microswimmers at solid and liquid interfaces
Vella et al. Measuring markers of liver function using a micropatterned paper device designed for blood from a fingerstick
Jeong et al. Active nanorheology with plasmonics
Cheng Formula for the viscosity of a glycerol− water mixture
Shim et al. Control and measurement of the phase behavior of aqueous solutions using microfluidics
Magdanz et al. Stimuli‐responsive microjets with reconfigurable shape
Takahara et al. Neutron scattering study on dynamics of water molecules in MCM-41
Nakashima et al. Interfacial synthesis of hollow TiO2 microspheres in ionic liquids
Seelig et al. Phospholipids and proteins in biological membranes. Deuterium NMR as a method to study structure, dynamics, and interactions
Butt et al. On the derivation of Young's equation for sessile drops: nonequilibrium effects due to evaporation
Luty et al. Calculating electrostatic interactions using the particle− particle particle− mesh method with nonperiodic long-range interactions
Hatton et al. Past, present, and future of periodic mesoporous organosilicas the PMOs
Li et al. Preparation of Fe3O4@ ZrO2 core− shell microspheres as affinity probes for selective enrichment and direct determination of phosphopeptides using matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry
Römer et al. Channel activity of a viral transmembrane peptide in micro-BLMs: Vpu1-32 from HIV-1
Hassanali et al. The dissociated amorphous silica surface: Model development and evaluation
Mousavi et al. Reference electrodes with salt bridges contained in nanoporous glass: An underappreciated source of error
Morishige et al. Effect of pore shape on freezing and melting temperatures of water
Zhu et al. Giant unilamellar vesicle microarrays for cell function study
Aksan et al. Isothermal desiccation and vitrification kinetics of trehalose− dextran solutions
Sato Origin of organism-dependent biogenic silica quartz formation
Majumdar et al. Dielectric profile and electromelting of a monolayer of water confined in graphene slit pore
Pirc et al. An oomycete NLP cytolysin forms transient small pores in lipid membranes
Liu et al. Uniform, Anticorrosive, and Antiabrasive Coatings on Metallic Surfaces for Cation–Metal and Cation− π Interactions
Zhao et al. Lysozyme adsorption on porous organic cages: a molecular simulation study

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20121024