CN102626406A - 西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用。本发明的西松烷型二萜flexibilide有较强的PGC-1α抑制活性，其或其药用盐可应用制备PGC-1α抑制剂。PGC-1α参与线粒体能量代谢及糖脂代谢的特点，表明其在代谢调控中具有重要的地位和全能性，预示PGC-1α抑制剂—西松烷型二萜flexibilide在现代医学中将极具应用潜力，尤其是用于制备治疗糖尿病、肥胖等代谢性疾病药物。

Description

西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用

技术领域：

本发明属于海洋生物有效成分应用领域，具体涉及西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用。

背景技术：

生命起源于海洋，海洋特殊生态环境中的生物资源已成为拓展天然药用资源的新空间，也是目前资源最丰富、保存最完整、最具有新药开发潜力的新领域。海洋天然产物越来越受到重视，已经成为发现重要先导药物的主要源泉和研制开发新药的基础。

软珊瑚是一种非常常见的海洋低等无脊椎动物，属于腔肠动物门(Coelenterate)，珊瑚虫纲(Anthozoa)，八放珊瑚亚纲，软珊瑚目(Alcyonacea)，主要分布在热带及亚热带海域。我国南海地处亚热带，海域辽阔，软珊瑚资源极为丰富，是世界上软珊瑚集中分布的海域之一。据报道，该类海洋生物全球有6100多种，其中中国有约500种。短指软珊瑚分布十分广泛，种类繁多，目前已经知道的大约有100个种，其中有40多个种已经进行了化学成分研究，其主要类别包括甾体类、萜类、脂肪酸、含氮化合物(包括生物碱，神经酞胺和核苷等)等。其生理活性涉及抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、细胞毒、抗心脑血管、防污等各个方面的活性。

西松烷二萜属于十四元大环二萜，最早于1951年分离自植物Pine oleresins和烟草中，后来相继从海洋生物中分离得到了一系列西松烷二萜类化合物(cembranoid diterpenes)。这类化合物结构中大都有氧(羟基、羰基、酰氧基、环氧、过氧桥)取代，结构变化多样，在动物中主要存在于腔肠动物柳珊瑚科(gorgonians；海扇)和软珊瑚科(alcyonaceans，softcoral，海鸡头)珊瑚中。西松烷二萜flexibilide，其结构如式(I)所示，最早被澳大利亚学者从软珊瑚Sinulariaflexibilis中分离得到，我国学者也从南海的软珊瑚中分离得到，以前的研究也指出西松烷二萜flexibilide具有较显著地抗炎和抗菌活性。

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α，PGC-1α)参与热调节、能量代谢和其他控制各器官和系统表型特征的关键生物学过程。PGC-1α与激活转录因子及核受体相互作用，从而实现骨骼肌收缩调节以及代谢适应过程中所需的细胞核和线粒体编码基因的调控。

式(I)

发明内容：

本发明的第一个目的是提供西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用。

本发明人通过实验发现，西松烷型二萜flexibilide具有较强的PGC-1α抑制活性，因此本发明提供西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用。

由于PGC-1α参与线粒体能量代谢及糖脂代谢的特点，表明其在代谢调控中具有重要的地位和全能性，预示PGC-1α抑制剂—西松烷型二萜flexibilide在现代医学中将极具应用潜力，尤其是用于制备治疗糖尿病、肥胖等代谢性疾病药物。

因此，本发明的第二个目的是提供西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备治疗代谢性疾病药物中的应用。

所述的代谢性疾病优选为糖尿病或肥胖。

本发明的西松烷型二萜flexibilide有较强的PGC-1α抑制活性，其或其药用盐可应用制备PGC-1α抑制剂。PGC-1α参与线粒体能量代谢及糖脂代谢的特点，表明其在代谢调控中具有重要的地位和全能性，预示PGC-1α抑制剂—西松烷型二萜flexibilide在现代医学中将极具应用潜力，尤其是用于制备治疗糖尿病、肥胖等代谢性疾病药物。

具体实施方式：

以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限制。

实施例1：

西松烷型二萜flexibilide的制备

取采自我国南海海域的短指软珊瑚Sinularia sp.湿重7公斤，剪碎，先用20升体积分数95％的工业酒精室温下提取3次，后用氯仿-乙酸乙酯(体积比为1∶1)混合溶液提取2次，合并提取液，减压浓缩提取液得到155克提取物。将提取物混悬于5升水中，加入5升氯仿萃取3次，合并萃取液，减压浓缩萃取液得到101克氯仿部位浸膏。所得浸膏用3升体积分数85％乙醇水溶液溶解后，加入3升石油醚(60-90)萃取3次，取乙醇部分，减压浓缩，得到体积分数85％乙醇部位30克，体积分数85％乙醇浸膏经过硅胶(10-40μ)中压柱层析(柱高46cm，柱径6cm，流速40mL/min)，依次用体积比从1/100、1/50、1/20、1/10、1/6的氯仿/甲醇溶液梯度洗脱，每个体积比各4升，其中体积比为1/20的氯仿/甲醇洗脱部分回收溶剂后得到11克深红色固体，再用硅胶(10-40μ)中压柱层析(柱高20cm，柱径2cm，流速30mL/min)，用6升石油醚/乙酸乙酯(体积比为2/1)洗脱，并用薄层层析追踪检测馏分，得到9个部位，其中第七个部位(硅胶薄层层析板上比移值分别为0.45和0.40的混合物，展开剂为石油醚和乙酸乙酯，体积比为2∶1)用高效液相色谱分离，选用YMC半制备柱(ODS-A，12nm，S-50μm)，流动相为体积比67/33的甲醇/水洗脱，流速为2ml/min，得到化合物1(5.0mg，tR＝38min)。

由¹H和¹³C NMR谱可以看出化合物1有20个C信号，6.47(1H，d，J＝2.0Hz)和5.69(1H，d，J＝2.0Hz)显示该化合物含有一个环外α-亚甲基内脂环，¹³C NMR谱中，167.3，140.1，125.9以及连氧的碳信号82.7显示化合物含有一个ε内脂单元，5.25(1H，t)三重峰与1.66处的甲基单峰显示该化合物含有一个三取代的双键，碳信号74.1，62.9，58.9以及氢信号3.98和2.81显示化合物含有两个连氧的次甲基碳和一个连氧的季碳。¹H和¹³C NMR数据与文献报道的西松烷型二萜flexibilide一致(J.Nat.Prod.，2000，63，1543-1545)，因此本实施例分离的化合物1就是西松烷型二萜flexibilide，其结构如式(I)所示。

¹H NMR(CDCl₃)δ：6.47(1H，d，J＝2.0Hz；H-17)，5.69(1H，d，J＝2.0Hz；H-17)，5.25(1H，t，J＝8.0Hz；H-7)，3.98(1H，d，J＝10.0Hz；H-3)，2.81(1H，dd，J＝9.0，4.5Hz；H-11)，1.66(3H，s)，1.45(3H，s)，1.32(3H，s)；13C NMR(CDCl3)δ：167.3(C-16)，140.1(C-15)，134.5(C-7)，127.9(C-17)，125.6(C-8)，82.7(C-3)，74.1(C-4)，62.9(C-11)，58.9(C-12)，38.6(C-9)，35.9(C-5)，34.8(C-13)，33.7(C-1)，33.0(C-2)，27.8(C-14)，25.3(C-10)，24.9(C-19)，22.6(C-6)，15.4(C-18)，15.4(C-20).

实施例2：

西松烷型二萜对PGC-1α抑制实验研究

实验原理：

利用人胚肾293(HEK293)细胞，在人胚肾293(HEK293)细胞的PGC-1αpromoter基因后转入荧光素酶(luciferase)基因(PGC-1αpromoter基因后转入荧光素酶(luciferase)基因的人胚肾293细胞购自于promega公司)，以Steady-

Luciferase Assay Substrate为底物，采用荧光检测法，以白色384孔平底微孔板中检测酶活性。荧光素酶也随PGC-1α转录水平改变而改变，检测其作用底物后荧光强弱变化信号。(参考文献：Handschin，C.，et al.，Anautoregulatory loop controls peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1 alphaexpression inn muscle.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica，2003.100(12)：p.7111-7116.2.Kunisada，Y.，M.Shoji，and M.Hosoya，AGeneExpression-Based Screening System for Compounds Influencing Differentiation of MouseEmbryonic Stem Cells.Journal ofBiomolecular Screening，2012.17(2)：p.140-151.)。

操作步骤：

1.第一天在384孔细胞培养板中按每孔3000个加入PGC-1αpromoter基因后转有荧光素酶基因的人胚肾293细胞，80μl/孔细胞接板。

2.24小时后，加入0.8μl含有西松烷型二萜flexibilide的DMSO溶液，以不含西松烷型二萜flexibilide的DMSO溶液作为对照。

3.24小时后，吸走60μl培养液，加入20μl底物。

4.避光保存20分钟，检测荧光信号。其结果如表1所示：

表1：西松烷型二萜flexibilide对PGC-1α活性百分比

筛选状态	浓度	活性百分比(％)
			初筛	10ug/ml	7.19
复筛	10μg/mL	17.20±50.10
			复筛	3.3μg/mL	69.39±1.68

初筛是大批量筛选的一个结果，复筛是对初筛结果的进一步检测。

“活性百分比”表示的是加入西松烷型二萜flexibilide后体现的活性相对于没有加入西松烷型二萜flexibilide的对照组(加入DMSO的对照组)的活性百分比，对抑制剂来说活性百分比越小则化合物的抑制率越大。表1中的数据表明来源于软珊瑚的西松烷型二萜flexibilide对PGC-1α活性具有显著地抑制，因此可应用制备PGC-1α抑制剂。由于PGC-1α参与线粒体能量代谢及糖脂代谢的特点，表明其在代谢调控中具有重要的地位和全能性，预示PGC-1α抑制剂—西松烷型二萜flexibilide在现代医学中将极具应用潜力，尤其是用于制备治疗糖尿病、肥胖等代谢性疾病药物。

Claims (3)

1.西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备PGC-1α抑制剂中的应用。

2.西松烷型二萜flexibilide或其可药用盐在制备治疗代谢性疾病药物中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的代谢性疾病为糖尿病或肥胖。