CN102212115A - 新发现的丙型肝炎病毒抗原表位 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物信息学和免疫学技术，它提供新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，其序列是：抗原表位多肽P7(774-782)AAWYIKGRL；所述的抗原表位多肽在制备治疗丙型肝炎药物中的应用；所述的抗原表位多肽在制备丙型肝炎疫苗中的应用。它经体内、体外实验证明这个抗原表位具有免疫原性。
Description
技术领域
本发明涉及生物信息学和免疫学技术，预测了新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，初步的体内、体外实验证明这个抗原表位具有免疫原性。
背景技术
丙型肝炎病毒（HCV）是引起慢性肝病的主要病原体之一，全世界约有HCV感染者1.7 亿-2.0亿，我国人群HCV感染率约3.2%，估计全国感染者在4000 万以上。HCV感染后，约50% -85%转为慢性肝炎，其中20%-30%发展为肝硬化，部分转为肝细胞肝癌（HCC），严重危害人类健康，已成为全球性的、严峻的公共卫生问题。迄今为止，尚缺乏理想的抗病毒治疗措施，干扰素治疗也不太令人满意。由于HCV病毒变异率高，以保护性中和抗体为主的预防性HCV疫苗的研究步履维艰，因此，寻求抗HCV的疫苗和有效抗病毒药物一直是研究的热点。
HCV基因组有9.6kb，编码3010aa的多肽，由结构蛋白（Core、E1和E2）和7个非结构蛋白（p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）组成。HCV感染后，机体细胞模式识别受体（pattern recognition receptors，PRR）感受外来分子的侵入，诱导细胞内信号转导，产生I类干扰素等固有免疫反应，以抵抗病毒的侵袭；同时通过DC介导特异性细胞免疫，清除病毒感染，恢复细胞的“健康状态”。对急性HCV 感染病人观察发现，如病人能早期出现针对包膜蛋白的抗体,则有利于病毒清除。早期疫苗研究中也证明了HCV 确实具有中和抗原表位,用真核载体表达的重组膜蛋白免疫黑猩猩,可以保护动物免受同株病毒的攻击。由于HCV中和抗原表位存在于编码包膜糖蛋白的E区，而HCV E区基因高度变异，尤其是E2区N端存在高变区（HRV1和HRV2），从而使机体产生的中和抗体因抗原变异而缺乏保护力，不能有效地清除病毒准种或其它型别病毒株的感染。
近年来, 应用更特异的ELISPOT法检测免疫活性细胞在特异性表位肽刺激下的细胞因子分泌,分别观察CD4+ Th细胞和CD8+ CTL细胞介导的免疫反应。动态观察发现，早期有强烈Th 免疫反应的病人,HCV病毒检查阴转,若Th 免疫反应下降,病毒血症又可复发,说明Th细胞免疫反应在病毒清除中的重要作用。最近有研究发现，HCV感染的患者若能在感染的早期产生较强的针对HCV各个蛋白的多表位特异性CTL，则患者的感染多表现为自限性；而当患者特异性CTL的活性较低或仅针对个别表位时，则可导致HCV感染的持续状态，并可造成肝组织的慢性损伤，提示CTL活性对HCV感染的控制具有重要作用。黑猩猩感染实验能更仔细地观察初次感染时不同时相的免疫反应，结果说明CD4+ T细胞和CD8+ T细胞均在HCV清除和维持病毒抑制状态中发挥重要作用。
由于HCV疫苗研究的必要性和迫切性,自1989 年HCV基因获得克隆以来,人们一直在致力于疫苗的研究,但是进展缓慢。早些时候，人们注重发展HCV包膜糖蛋白或多肽亚单位疫苗，同HIV 疫苗的研究一样，由于HCV包膜糖蛋白高度的变异特性，使以产生中和性抗体控制病毒感染和复制的研究遇到困难。HCV疫苗难以实现的主要原因归纳为以下三点: ① HCV基因组变异率较高，病毒准种多，缺乏保护性抗体，不能预防黑猩猩和人类再次感染，传统的预防性疫苗的研究遇到困难；② HCV复制能力差，感染力弱，使体内病毒滴度较低，在体外又不易培养,病毒复制感染过程及发病机制仍不清楚，而且HCV 编码的某些蛋白,如核心蛋白和NS蛋白还可能与HCV的致癌性有关,免疫原的选择以及强度均受到一定的限制；③ 缺乏理想的体外感染细胞模型,动物模型除黑猩猩外,其他动物,即使灵长类动物,如狒狒、恒河猴等都不能为HCV 所感染，限制了对疫苗评价的研究。近10年来，HCV疫苗研究的焦点主要集中在核酸疫苗、病毒载体疫苗、重组多表位疫苗以抗原递呈细胞为载体的DC疫苗等。
重组多表位疫苗因其可以同时携带多个相关目标抗原以及辅助性表位，能够有效地应对病原微生物变异和免疫反应中HLA限制性等不利因素。已在肿瘤疫苗、HIV疫苗和HCV疫苗的研究方面进行了探索，显示其在诱导细胞免疫反应方面具有独特的优势。为了诱导出针对多个HCV表位的特异性细胞免疫反应，选择HCV基因组中不同区的多表位，进行科学设计、合理组合是目前HCV疫苗开发研究的热点。越来越多的证据表明,要获得具有较强免疫原性的HCV多肽，必须能广泛地激发机体的CD4+和CD8+T细胞介导的免疫反应, 必须具有HCV不同区段的多个表位。同时，细胞免疫反应无论是CTL还是Th反应,免疫原在抗原递呈细胞(APC) 内都要经过一个复杂的加工及由主要组织相容性抗原(MHC)递呈的过程，其I类和II类抗原分别递呈能激活CD8+ T细胞和CD4+T细胞的抗原表位。在多表位疫苗的设计中还要考虑所选择的表位必须要能覆盖不同人群的HLA 限制型,才能使疫苗对绝大多数个体都有作用。
最近(2007年)，以色列学者Vider-Shalit等，根据CTL表位由MHC-I类分子呈递抗原（胞质溶胶途径）的分子免疫学知识，基于基因组学和生物信息学分析工具，以互联网上的HCV蛋白数据库 LANL（包含已报道的所有HCV基因型）为对象，依次运用模拟退火算法计算肽切割的概率、应用残基结合能线形组合方法计算与TAP结合的概率、应用BIMAS算法计算与包含所有HLA多态性的MHC结合概率，从中选取一些覆盖大多数人群的HLA限制性表位；然后，运用HLALigand、MHCBN、AntiJen等数据库去验证，在此基础上分析这些表位在所有已报道HCV基因型中的保守性以及去除与人自身肽相似性强的表位，将这些候选的表位按照遗传学算法进行串联，两个表位用潜在氨基酸序列可以被切割。这样获得的多表位组合是来自几乎所有HCV基因型及亚型，同时既能够被有效呈递，又能够覆盖大多数人群HLA多态性，并为小鼠实验研究设计了HCV多表位基因序列，该序列由225aa组成，含有25个CTL表位。
近10年来，随着对HCV持续感染机制的认识，结合我们多年的HCV研究工作基础，通过与国、内外学者交流，我们提出了HCV疫苗研究的新理念：需要结合HCV的生物学特性、感染发病特征、抗病毒免疫机制，改变“单纯预防”为“预防与治疗相结合”，改变“多次接种为多次反复接种”，发展能够诱导出强大的、针对多个病毒表位的、持续较长时间的特异性CD8+和CD4+T细胞反应的疫苗研究策略，以诱导持续免疫应答和维持病毒抑制状态为“基本目标”的HCV疫苗研究的新理念。因此，我们首先要发现能够诱导出特异性T细胞反应的HCV抗原表位。
受此启发，我们应用生物信息学方法，预测了涵盖中国人HLA I 类和HLA II类基因座等位基因频率较高的抗原表位，包括HCV基因不同区的多个CTL表位和Th表位。选择HCV 核心（C）区、NS3、NS4、NS5区的CTL表位和Th表位共12个，进行优势组合串联，设计、合成了重组HCV多表位疫苗的基因序列，进行了真核表达，并用此基因疫苗在小鼠体内诱导出体液和细胞免疫应答。这预测的12个表位均做了体外实验，其中一个表位能刺激T细胞增殖并产生IFN－γ，用这个表位合成的多肽疫苗免疫小鼠能诱导出细胞免疫应答。
发明内容
本发明的目的是提供新发现的丙型肝炎病毒抗原表位P7(774-782) AAWYIKGRL，经体内、体外实验表明，这个抗原表位具有免疫原性。
本发明的技术方案是：提供新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，其序列是：抗原表位多肽P7(774-782) AAWYIKGRL。
所述的抗原表位多肽在制备治疗丙型肝炎药物中的应用。
所述的抗原表位多肽在制备丙型肝炎疫苗中的应用。
本发明的特点是：经体内、体外实验表明这种构建疫苗序列为多肽P7(774-782) AAWYIKGRL，它具有免疫原性。
附图说明
下面结合实施例附图对本发明做进一步说明，但不做为对本发明的限定：
图1 是重组质粒pEGFP-mcg双酶切鉴定（1：DL2000 Marker;2，3，4，5：为HindⅢ+BamHⅠ双酶切pEGFP-mcg）；
图2 是重组质粒pEGFP-mcg转染COS-7细胞后mRNA的提取及RT-PCR（M：DL2000 Marker；1，2：pEGFP-mcg转染COS-7细胞后mRNA提取后的RT-PCR结果）；
图3是荧光显微镜下观察转染效果（×400）（其中：A：pEGFP-N1转染COS-7细胞组；B：重组载体pEGFP-mcg 转染COS-7组）；
图4是western blot检测目的蛋白的表达（1：mcg-EGFP融合蛋白的表达；2：EGFP蛋白的表达）；
图5A.LaneM：KB Ladder （ Lane1：pcDNA3.1-mcg plasmid； Lane 2：pcDNA3.1-mcg PCR鉴定结果；Lane 3：pcDNA3.1-mcg 用EcoR I 酶切鉴定结果）；
图5B.pcDNA3.1-mcg的测序鉴定；
图6.pcDNA3.1-Em基因免疫小鼠体内诱导产生的特异性抗体；
图7.pcDNA3.1-Em基因免疫小鼠脾淋巴细胞特异性淋巴细胞增殖反应；
图8 倒置显微镜下PBMC的形态学变化（×200）（其中A：合成肽刺激72 h后；B：阴性对照72 h后）；
图9 IFN-γ的检测结果（A:11号肽组IFN-γ的检测结果；B：6号肽组IFN-γ的检测结果；1：实验组；2：阳性对照；3：阴性对照 ）；
图10A ELISPOT斑点形态（其中：A:11号肽刺激组；B:6号肽刺激组；C：阳性对照组；D：阴性对照组）；
图10B 肽刺激HCV患者PBMC产生的斑点数（1：11号肽刺激组；2：6号肽刺激组；3：阳性对照组；4：阴性对照组）；
图11多肽免疫小鼠特异性淋巴细胞增殖反应。
具体实施方式
实施例1. 重组HCV多表位疫苗的基因序列的设计：
1、建立HCV蛋白质组数据库
以关键词：organism:"hepatitis c virus" AND name:"genome polyprotein" AND fragment:no AND reviewed:yes 搜索uniprot蛋白质数据库（http://beta.uniprot.org/），选择中国流行的HCV 基因型1b、2a、2b、3a、3b、6a的蛋白质序列构建数据库（表1）。该数据库包含有17株HCV蛋白质组序列。
表1.选定的HCV蛋白质组数据库
| Uniprot ID NO. | genotype | isolate strain |
| P26663 | 1b | BK |
| Q9WMX2 | 1b | Con1 |
| Q03463 | 1b | HC-J1 |
| O92972 | 1b | HC-J4 |
| P26662 | 1b | Japanese |
| Q00269 | 1b | HC-JT |
| Q913V3 | 1b | HCR6 |
| P29846 | 1b | Taiwan |
| P26660 | 2a | HC-J6 |
| Q99IB8 | 2a | JFH-1 |
| P26661 | 2b | HC-J8 |
| Q9DHD6 | 2b | JPUT97017 |
| Q81495 | 3a | k3a |
| Q81258 | 3a | NZL1 |
| Q81487 | 3b | Tr-Kj |
| Q5I2N3 | 6a | 6a33 |
| O39927 | 6a | EUHK2 |
2、HCV多聚蛋白蛋白酶体初步剪切预测：
经计算，17株HCV蛋白质组可形成51799条九肽单体，采用PepCleave（http://peptibase.cs.biu.ac.il/PepCleave_II/）预测蛋白质序列可能的蛋白酶水解9肽，选用bad overweight score打分矩阵。预测的可能蛋白酶体水解（Score>0）9肽共有8347个，其中不同位置不同病毒株的非重复九肽达4075条。编写perl语言脚本处理PepCleave结果输出序列，仅保留九肽部分序列，并保存成fasta格式序列文件。通过Blast比对，去除同源性100%序列，剩余3789条蛋白酶体可能水解九肽。
3、针对中国人HLA基因频率的重组HCV多表位疫苗基因序列的生物学设计：
用通过多聚蛋白蛋白酶体剪切预测得到的3789条蛋白酶体水解九肽，通过PREDTAP（http://antigen.i2r.a-star.edu.sg/predTAP/）软件隐马尔可夫模型（Hidden Markov Models method，HMM）计算3789条与TAP结合能力，获取其中TAP-binding score 大于等于6的九肽共514条。
采用BIMAS（http://www-bimas.cit.nih.gov/molbio/hla_bind/）分别预测上述514条候选九肽与HLA-1 A2、A24、A3、B7超型和B40亚型分子结合情况。选取结合力打分大于1的九肽。
初步确定HCV候选表位肽段：
分别统计HLA-1 A类分子A2、A3、A24超型共有和B7、B40共有的可能结合CTL表位及其覆盖的病毒株及基因型。，采用函数分别计算HLA-1 A和B类分子CTL表位抗原肽的总分。其中，Si预测CTL表位各对应HLA-1超型的分值，fi为该超型在中国人群中的表型频率。综合评价各CTL表位打分值、覆盖的病毒基因型、病毒株占本研究中HCV数据库的比例及该九肽对于不同HLA分子（超型）的预测结合能力，初步选择CTL表位（表2）。
表2.构建多肽疫苗的CTL表位筛选结果
| CTL表位肽 | 覆盖HLA-1超型 | 病毒基因型 | 覆盖毒株比 | CTL表位定位 |
| FLARLIWWL | A2、A3、A24 | 1b | 6/8 | NS2-3(838-846) |
| VLSDFKVWL | A2、A3、A24 | 6a | 2/2 | NS5A(1991-1999) |
| ALYDVIQKL | A2、A3、A24 | 3a、3b | 2/3 | RDRP(2604-2612) |
| ALYDVVSTL | A2、A3、A24 | 1b | 7/8 | RDRP(2593-2601) |
| SMMAFSAAL | A2、A3、A24 | 2a、2b | 4/4 | NS4B(1793-1801) |
| ALYGVWPLL | A2、A3、A24 | 1b | 5/8 | P7(789-797) |
| AALENLVVL | B7、B40 | 5/8 | 1b | E2-P7 (746-754) |
| AAWYIKGRL | B7、B40 | 6/8 | 1b | P7(774-782) |
| GAAVGSIGL | B7、B40 | 10/14 | 1b 、2a、2b | NS4B(1836-1844) |
| AEQFKQKAL | B7、B40 | 7/8 | 1b | NS4B(1725-1733) |
| AYAARVPEL | A24 | 2/2 | 2b | E1（335-343） |
| GLSPAITKY | A3 | 1/2 | 2a | E2（708-716） |
④ HCV重组多表位肽疫苗构建：
采用上述选择CTL表位九肽构建多肽疫苗，并作蛋白酶体剪切校验。保证多肽疫苗通过蛋白酶体剪切后，各CTL表位肽能够得以还原，并经MHC分子递呈，进行后续免疫反应。由于CTL候选表位肽均经蛋白酶体剪切预测筛选，因此在多肽疫苗构建过程中，没有考虑链接肽。
构建多表位肽疫苗序列为：
FLARLIWWL-VLSDFKVWL-ALYDVIQKL-ALYDVVSTL-SMMAFSAAL-ALYGVWPLL-AALENLVVL-AAWYIKGRL-GAAVGSIGL-AEQFKQKAL-AYAARVPEL-GLSPAITKY
原构建性CTL表位在该多肽疫苗经蛋白酶体剪切后全部得以还原，且均为优势剪切（剪切分值高）。
4、收集已报道的部分HCV表位资料信息如下（表3）：
表3. 已报道的部分HCV表位资料
实施例2. 根据我们预测的12个抗原表位，进行重组优势表位免疫学特性研究方法的初步探索
1、表位选择及重组：根据我们预测的12个抗原表位，进行优势组合串联，基因合成后计作Em。
2、真核表达载体的构建：将得到的针对中国人HLA基因频率的重组HCV多表位疫苗基因序列mcg克隆入带有绿色荧光蛋白标签的真核表达载体pEGFP-N1，并通过脂质体转染COS7细胞，RT-PCR及western blot检测其表达，并在荧光显微镜下直接观察mcg-EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位。结果所构建的真核表达载体pEGFP-mcg在 COS-7细胞中成功表达，在空载体pEGFP-N1转染组中，绿色荧光弥散分布于COS-7胞核及胞浆中；重组质粒pEGFP-mcg转染组中，绿色荧光分布于COS-7胞浆中。RT-PCR检测得到了目的片段；western blot在39KD处可见清晰的目的条带。成功构建HCV 复合CTL多表位基因的真核表达载体，并能在COS-7细胞中瞬时表达，为HCV 复合CTL多表位疫苗的研究奠定了基础。
3、将得到的针对中国人HLA基因频率的重组HCV多表位疫苗基因序列mcg克隆入真核表达载体pcDNA3.1，构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1-mcg，并鉴定（图5A,5B）。
用含HCV多表位抗原基因Em的真核表达载体pcDNA3.1-Em基因免疫BALB/c小鼠，检测免疫小鼠特异性抗体，进行特异性淋巴细胞增殖实验、细胞因子的诱生及其测定及特异性CTL杀伤实验等免疫小鼠体液免疫、细胞免疫检测。结果pcDNA3.1-Em在小鼠体内诱发了较高滴度的抗体，抗体水平在6～8周达到高峰，然后迅速降低(图6)。小鼠脾淋巴细胞增殖实验显示，基因免疫组刺激指数（2.6）高于空载体对照组1.9（P<0.05）和生理盐水对照组0.8（P<0.01）。细胞毒分析结果显示，在效靶比为100∶1时，基因免疫组杀伤率达到最高，为43.2%，显著高于pcDNA3.1空载体对照组29.2%（P<0.05）和生理盐水对照组10.1%（P<0.01）(图7)，从而证实了HCV多表位基因疫苗能在小鼠体内诱发特异性细胞免疫应答。但存在抗体滴度不高，抗体维持时间短，细胞免疫应答不强等不足。因此，寻找和设计更为安全、有效，尤其是更能激发特异性细胞免疫应答的新型疫苗是极为必要的。
4、预测的HCV CTL表位免疫学鉴定：
①用计算机预测的每条肽体外刺激外周血单个核细胞，观察其增殖情况，ELISA方法检测培养上清中IFN-γ水平的变化。结果：P7(774-782) AAWYIKGRL刺激HCV患者外周血单核细胞后，患者PBMC出现了明显的增殖；加入合成肽后第2天，镜下观察可见细胞生长良好，体大，个圆，折光性好，阳性对照孔可见满视野多个小细胞增殖团，实验孔可见散在小细胞增殖团，培养4d左右，可见散在的小细胞团较前增大，形成明显的集落团（图8A）。阴性对照孔未见明显的集落团出现（图8B）。
②选择其中反应性较好的7份（第8、15、17、18、23、31、37份。其中第8、17、18、37号样本对11号肽NS4B(1793-1801)反应，第15、23、31号样本对6号肽P7(774-782)反应）血培养标本收集培养上清检测细胞因子水平， 11号肽组和6号肽组的IFN-γ水平均比对照组有明显的升高，且有统计学意义（p<0.01）。培养上清中的实验组IFN-γ水平明显高于阴性对照组（p<0.05）（图9），说明预测的HCV CTL 表位P7(774-782) AAWYIKGRＬ能够引起一定水平的细胞免疫。
③对合成肽刺激能引起一定免疫反应的丙肝患者进行HLA-1类等位基因分型，结果如表4所示，合成肽刺激引起一定免疫反应的丙肝患者的HLA-1类等位基因型与计算机预测的完全相同。
表4 对合成肽刺激引起免疫反应的丙肝患者HLA-1类等位基因分型结果（n=7）
MHC-预测表位肽亲和力和稳定性分析：人T细胞与预测表位肽共孵育，流式检测细胞表面HLA-A02分子表达，分析肽与HLA的亲和力；加HLA-A02合成阻断剂，流式检测荧光强度，计算平均荧光指数（Mean fluorescence intensities ，MFI），分析肽与HLA结合的稳定性。每条肽和T细胞所产生的半量最大MFI计算为半量最大结合水平（half-maximal binding level ，BL50），已知HLA-A2 肽YLLPRRGPRL作为阳性对照，肽 LPGCSFSIF作为阴性对照，每条肽重复三次试验，结果用均数±标准差（±s）表示（表5）。
表5. HCV来源的肽和HLA-A2分子的结合及HLA-A2复合物的稳定性
| HCV肽 | 氨基酸序列 | BL50(μM) | 稳定性(h) |
| NS2-3(838-846) | FLARLIWWL | 136.1±1.2 | 2.9±0.5 |
| NS5A(1991-1999) | VLSDFKVWL | 149.0±0.8 | 2.4±0.6 |
| RDRP(2604-2612) | ALYDVIQKL | 137.2±1.1 | 2.7±1.3 |
| RDRP(2593-2601) | ALYDVVSTL | 155.9±1.3 | 2.1±0.8 |
| P7 (789-797) | ALYGVWPLL | 172.6±1.9 | 2.5±1.5 |
| NS4B(1793-1801) | SMMAFSAAL | 33.6±0.7 | 17.5±1.2 |
| Core(35-44) | YLLPRRGPRLa | 46.3±1.6 | 13.3±0.9 |
| Core(169-177) | LPGCSFSIFb | 132.8±2.1 | 2.0±1.3 |
a. 已知HLA-A2 肽YLLPRRGPRL作为阳性对照
b. HLA-B7肽 LPGCSFSIF作为阴性对照
选择上面已做过HLA-1类等位基因分型的7个HCV患者，以PHA做为阳性对照。如图2-4所示，阴性对照孔的斑点数为（0～2）SFC/105 PBMC；阳性对照孔的斑点数为（98～136）SFC/105 PBMC ；HCV感染者第8、17、18、37号样本的PBMC 在受到肽NS4B（1793-1801） SMMAFSAAL刺激后斑点数为（56～94）SFC/105 PBMC，其中HCV感染者8、18份样本的PBMC对该肽刺激有阳性反应（减去阴性对照后，斑点数>5 SFC／105 PBMC）；HCV感染者第15、23、31号样本的PBMC 在受到肽P7(774-782) AAWYIKGRL刺激后斑点数为（23～35）SFC/105 PBMC；除HCV感染者23号样本之外，剩余样本的PBMC对该肽刺激后的结果为：肽刺激孔斑点数减去阴性对照斑点数后，斑点数≥5SFC／105PBMC，结果判为阳性。ELISpot技术是验证合成肽免疫原性的经典方法，本研究对ELISA方法初步确定有免疫原性的肽用ELISpot技术进一步证明。由图10A和图10B可知，肽P7(774-782) AAWYIKGRＬ具有较好的免疫原性。
5、HCV多肽疫苗免疫学特性分析
将HCV NS4B(1793-1801) SMMAFSAAL和P7(774-782) AAWYIKGRL加上HCV Th表位NS3（1248-1261）GYKVLVLNPSVAAT，与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin，KLH)连接，制成HCV多表位肽疫苗，将其肌肉免疫小鼠，以PBS，KLH＋佐剂和佐剂免疫组为对照，探讨多肽疫苗在小鼠中抗HCV的细胞免疫反应。结果，取免疫8周后小鼠脾细胞，体外以肽池刺激，加入MTS，测定刺激指数cpm值，实验组cpm:2.85；KLH+佐剂组cpm:1.43；佐剂组cpm:1.12；PBＳ组cpm:0.65。实验组/对照组：P<0.01，差异显著，提示多肽疫苗可以诱导特异性的细胞免疫应答。
Claims (3)
1.新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，其序列是：抗原表位多肽P7(774-782) AAWYIKGRL。
2.根据权利要求1所述的新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，其特征是：所述的抗原表位多肽在制备治疗丙型肝炎药物中的应用。
3.根据权利要求1所述的新发现的丙型肝炎病毒抗原表位，其特征是：所述的抗原表位多肽在制备丙型肝炎疫苗中的应用。
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| CN (1) | CN102212115A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102757484A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-10-31 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种hcv多表位肽疫苗及其应用 |
| CN103601809A (zh) * | 2013-07-30 | 2014-02-26 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种hcv多表位肽与截短型ns3、dc活化分子eda重组蛋白疫苗及其应用 |
-
2011
- 2011-05-31 CN CN2011101434080A patent/CN102212115A/zh active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 李端 等: "中国丙型肝炎病毒细胞毒性T淋巴细胞表位预测及其多表位疫苗设计", 《中华肝脏病杂志》 * |
| 陈丽萍 等: "中国人HCV CTL复合多表位抗原基因免疫血特性研究", 《中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102757484A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-10-31 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种hcv多表位肽疫苗及其应用 |
| CN103601809A (zh) * | 2013-07-30 | 2014-02-26 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种hcv多表位肽与截短型ns3、dc活化分子eda重组蛋白疫苗及其应用 |
| CN103601809B (zh) * | 2013-07-30 | 2016-08-10 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种hcv多表位肽与截短型ns3、dc活化分子eda重组蛋白疫苗及其应用 |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
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