CN101952411B - 用于核酸定量分析的反应器 - Google Patents

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Abstract

提供使用衰减波检测技术，定量分析靶核酸的反应器及其使用方法。该反应器包括有腔的基体、排列在基体上的缓冲层、排列在缓冲层上的盖板以及入口和出口。该反应器对于PCR处理来讲是热和化学稳定的并适用于衰减波检测技术。

Description

用于核酸定量分析的反应器
发明背景
当前用于生物分析和新出现的基因组学领域的重要技术是DNA的聚合酶链反应(PCR)扩增。由于这个有力的工具，从否则不能检测量的DNA开始，并为随后的分析产生足够量的材料成为可能。PCR使用重复性的一系列步骤，以产生位于两个起始(“引物”)序列之间的多核苷酸序列的拷贝。开始用模板、两个引物序列(长度通常约15-30个核苷酸)、PCR缓冲剂、游离的三磷酸脱氧核苷(dNTP)和热稳定性DNA聚合酶(通常来自嗜热水生菌(Thermus aquaticus)的TAQ聚合酶)，将这些成分混合，并加热以分开双链DNA。随后的冷却步骤允许引物退火至单链DNA分子上的互补序列，该单链DNA分子含待扩增的序列。通过DNA聚合酶完成靶序列的复制，这产生与模板互补的DNA链。重复该过程，使目标序列的拷贝数加倍，且多个循环使拷贝数呈指数增加。
因为PCR需要在高温和低温之间反复循环，所以PCR装置必须由能够经得起此类温度变化的材料制备。此类材料必须在高温下机械和化学稳定，并能够经得起反复的温度变化，而没有机械性降解。此外，材料必须与PCR反应本身相容，且不抑制聚合酶或与DNA结合。
常规的PCR典型地在试管、微量培养板和毛细管中进行，它们均可以被方便地密封。然而，这些试管、微量培养板和毛细管的几何形状使它们不适用于衰减波检测方法。
附图简述
通过参考阐述此类实施方案的以下描述和附图，可最好地理解本发明的实施方案。在图中：
图1举例说明了筒状体(cartridge)的视图，该筒状体能够按照微阵列的PCR方法，衰减波检测荧光标记的扩增子。
图2举例说明了筒状体的侧视图，该筒状体能够按照微阵列的PCR方法，衰减波检测荧光标记的扩增子。
图3举例说明了另一个筒状体的视图，该筒状体能够按照微阵列的PCR方法，衰减波检测荧光标记的扩增子。
图4举例说明了另一个筒状体的侧视图，该筒状体能够按照微阵列的PCR方法，衰减波检测荧光标记的扩增子。
定义
当用于本文时，某些术语具有以下含义。用于本说明书的所有其它术语和短语具有本领域的技术人员将理解的其通常含义。此类通常含义可通过参考技术词典获得，技术词典为例如Hawley’s CondensedChemical Dictionary第11版，Sax和Lewis编辑，Van Nostrand Reinhold，New York，N.Y.，1987和The Merck Index，第11版，Merck & Co.，Rahway N.J.1989。
当用于本文时，术语“和/或”是指与该术语相关的任何一个项目、项目的任何组合或所有的项目。
当用于本文时，单数形式“一”和“该”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地说明。因此，例如，涉及“一种制剂”包括此类制剂中的许多，以致于一种化合物X的制剂包括化合物X的多个制剂。
当用于本文时，术语“约”是指指定值10％的变化，例如，约50％含有从45％至55％的变化。对于整数范围，术语约可以包括大于和小于所述整数的一个或两个整数。
当用于本文时，术语“扩增子”是指聚合酶链反应(PCR)的产物。扩增子是已经使用扩增技术合成的DNA片段(例如有两个引物的双链DNA)。扩增子可包含例如用荧光分子在5’端标记的引物。
当用于本文时，术语“阵列”和“微阵列”是指元件(即实体)在材料或装置内的排列。按照另一种含义，术语“阵列”是指两个或多个测定区域在基体(substrate)上的有序排列(例如行和列)。
当用于本文时，术语“衰减”是指随距离呈指数式衰减的近场驻波(nearfield standing wave)。当用于光学时，当正弦波按大于临界角的角度内反射离开界面，以使总内反射发生时，形成衰减波。
当用于本文时，术语“杂交”是指互补核酸的配对。
当用于本文时，术语“动力”用于表示诱导样品在反应器内沿流动通路移动的任何手段，并包括跨越反应器任何部分的电势施加、跨越反应器任何部分的压力差施加或其任何组合。
当用于本文时，术语“核酸分子”是指任何含有核酸的分子，包括但不限于DNA或RNA。
当用于本文时，术语“光学检测通路”是指形成通路的检测工具的构型或排列，由此电磁辐射能够从外部来源传输至用于接收辐射的工具，其中辐射横穿反应室。
当用于本文时，术语“聚合酶链反应”(PCR)是指K.B.Mullis，美国专利号4,683,195、4,683,202和4,965,188中的方法。
当用于本文时，术语“反应器”是指装置，该装置可以用于涉及流体的任何数量的化学过程。主要的目标方法是使用聚合酶链反应的DNA扩增。任选，DNA扩增可与一种或多种其它类型的操作一起进行。
当用于本文时，术语“稳定性”是指材料经受变质或置换，并提供可信度和可靠性的能力。
当用于本文时，术语“基体”是指能够支撑相关测定组分(例如测定区域、细胞、测试化合物等)的材料。
当用于本文时，术语“靶核酸”是指待检测病原体固有的多核苷酸。多核苷酸是遗传物质包括例如DNA/RNA、线粒体DNA、rRNA、tRNA、mRNA、病毒RNA和质粒DNA。
当用于本文时，术语“不透水的”是指材料，其中水不会通过该材料。
发明详述
本发明提供使用衰减波检测技术，定量分析靶核酸的反应器及其使用方法。该反应器包括有腔的基体、排列在基体上的缓冲层、排列在缓冲层上的盖板以及入口和出口。该反应器对于PCR处理来讲是热和化学稳定的，并适用于衰减波检测技术。
发生在反应器内的PCR过程需要特别的温度条件，例如高温和低温的循环周期。液体和反应室的温度变化由加热和冷却系统调节。
在高温下，样品液体膨胀并增加反应室内的压力。相反，在低温下，样品液体收缩并减少反应室内的压力。反应室的任何变形将在盖层与基体之间引起不完全的粘附，并导致泄漏。在PCR扩增的情况下，甚至少量的小泄漏可能导致假阳性。为了防止该泄漏，使用缓冲层。
对于靶核酸的实时定量分析，已经公开了利用衰减波检测技术的几种方法，包括例如在以下文献中描述的技术：Xu(美国专利申请公布号2006/0088844)和2007年11月5日提交的标题为“寡核苷酸微阵列的定量方法”的PCT专利申请序号PCT/CN2007/003124。
在描述靶核酸实时定量分析的这些方法中，使用聚合酶链反应(PCR)扩增样品中的靶核酸。通过将靶核酸置于含核苷酸腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)(总称为dNTP)、DNA聚合酶和引物的缓冲剂中，开始PCR。引物是短链的DNA，具有与靶核酸特定区域互补的序列。引物引发靶核酸的复制。可用荧光分子在5’端荧光标记引物，或荧光标记dNTP。
该类PCR方法具有三个主要步骤：变性、退火和延伸。在变性步骤中，将混合物加热至约94℃(摄氏度)，在该点靶DNA分开成为单链。使混合物快速冷却。当温度降至约60℃时，退火步骤发生，其中荧光标记的引物杂交或结合至其在靶核酸上的互补序列。延伸步骤可在约60℃进行或可升至72-78℃的范围。在该步骤中，DNA聚合酶在溶液中使用dNTP，以延伸荧光标记的退火引物，并形成称为扩增子的新DNA链。将混合物简单地再加热回到约94℃，以分开新产生的双螺旋链，形成单链的核酸，该单链核酸开始PCR过程的另一个循环。通过PCR过程的每个循环，原始靶核酸的拷贝数大致成倍。
PCR缓冲剂可另外包含荧光标记的引物，即荧光染料分子与它们连接，以便在每个PCR循环完成之后，所产生的扩增子被荧光标记的引物。使用称为靶核酸探针的探针DNA链，使靶核酸的扩增子局部化。靶核酸探针具有与靶核酸相同的互补核苷酸序列。按已知的二维图案将靶核酸探针固定至基体表面，且基体表面形成含PCR成分的反应池(cell)的一部分。
PCR缓冲剂也可包括涂覆剂或表面活性剂，以通过修饰反应器内表面来防止非特异性结合。此类涂覆剂的实例包括聚环氧乙烷三嵌段共聚物、分子量约200-约8000的聚乙二醇(PEG)、天然聚合物例如牛血清白蛋白(BSA)或提供期望的表面特征，尤其是减少生物分子例如蛋白质和核酸吸附的那些特征的任何其它部分。
典型地通过任何合适的方法，将含待扩增的样品和合适缓冲剂与试剂的溶液引入反应器内。样品的引入可使用任何常规方法来实现，此类方法包括电动力学注射、水力注射、自发的流体置换等。对于大部分来说，使用的具体方法将取决于通道的构型以及引入精确体积样品的需要。
在PCR方法的退火和延伸阶段期间，将靶扩增子杂交至其相应的靶核酸探针。用合适波长的光的衰减波照射杂交的荧光标记的扩增子，以激活荧光标记的引物或荧光标记的dNTP的荧光染料分子。该衰减波在通过靶核酸探针固定至其上的基体表面进入反应池之后，功率呈指数式衰减，有约300nm的有效穿透范围。这表示衰减波穿透很远，足于进入反应池，以激活杂交至那些靶核酸探针的荧光标记的扩增子，但是在反应池的主体中，它不激活溶液内的荧光标记分子(例如荧光标记的引物或荧光标记的dNTP)。通过在基体表面上的各种位置监测荧光强度，可以测定相应靶核酸的扩增子的当前丰度。结果用于按类似于实时PCR计算的方式，获得在原始样品中特定靶的丰度的定量测量。
反应器
在一个实施方案中，图1图示阐述了可以用于进行化学过程例如PCR的反应器。装置一般表示为11，包含基体13，基体13具有平的表面15并包含腔17。缓冲层19显示排列在基体13的平的表面15之上。盖板21显示排列在缓冲层19的上表面23之上。
在使用装置之前，在基体13的平的表面15上，将盖板21的下面25与缓冲层19的上表面23对齐，并相对放置(见例如图2)。盖板21与缓冲层19和腔17联合形成反应室，在该反应室内进行期望的化学过程。将流体例如待分析的样品、分析试剂、反应物等，从外部来源通过入口27，引入反应室。出口29确保流体的通道从反应室到外部容器。因此，通过在基体13上将盖板21与缓冲层19对齐，形成密封，来关闭反应器。在一些实施方案中，缓冲层19不固化。在其它实施方案中，缓冲层19固化。该密封导致反应室的形成，流体可通过入口27引入该反应室内，并通过出口29除去。具有合适大小、硬度和化学抗性的一组塞子(例如橡胶)可用于密封反应室的入口27和出口29。
在另一个实施方案中，图3图示阐述了可以用于进行化学过程例如PCR的反应器。装置一般表示为11，包含基体13，基体13具有平的表面15并包含腔17。缓冲层19显示排列在基体13的平的表面15之上。盖板21显示排列在缓冲层19的上表面23之上。
在使用装置之前，在基体13的平的表面15上，将盖板21的下面25与缓冲层19的上表面23对齐，并相对放置(见例如图4)。盖板21与缓冲层19和腔17联合形成反应室，在该反应室内进行期望的化学过程。将流体例如待分析的样品、分析试剂、反应物等从外部来源通过入口27，引入反应室。出口29确保流体的通道从反应室到外部容器。因此，通过在基体13上将盖板21与缓冲层19对齐，形成密封，来关闭反应器。在某些实施方案中，缓冲层19不固化。在其它实施方案中，缓冲层19固化。该密封导致反应室的形成，流体可通过入口27引入该反应室内，并通过出口29除去。具有合适大小、硬度和化学抗性的一组塞子(例如橡胶)可用于密封反应室的入口27和出口29。
基体和盖板
按照期望用于特定应用的物理性质和化学性质，来选择在实施方案中用于形成基体和盖板的材料。关于与它们接触的任何试剂，在使用的反应条件下(例如关于pH、电场等)，基体和盖板应该是化学惰性的和物理稳定的。因为PCR涉及相对高的温度，所以在使用的温度范围内所有的材料均为化学和物理稳定的很重要。为了用于光学检测方法，使用的材料应该透光，典型地对于在约150nm-800nm范围波长的光可以透过。
例如，在某些实施方案中，基体包括平的(即二维的)玻璃、金属、复合材料、塑料、二氧化硅或其它生物相容性或生物惰性复合材料。可使用许多基体。基体可以是生物的、非生物的、有机的、无机的或其中任何基体的组合，作为颗粒、链、沉淀物、凝胶、片、管状物、球、容器、毛细管、垫、薄片、膜、板、载片等存在。基体可具有任何便利的形状例如圆盘形、正方形、球形、环形等。基体一般是平的，但可采用各种备选的表面构型。例如，基体可包含提高或降低合成发生的区域。基体及其表面可以形成在其上进行本文所述反应的刚性载体。也选择基体及其表面，以提供合适的光吸收性质。例如，基体可以是聚合的Langmuir Blodgett膜、玻璃、官能化的玻璃、Si、Ge、GaAs、GaP、SiO2、SiN4、改性硅或各种凝胶或聚合物中的任何一种，例如聚四氟乙烯、聚偏二氟乙烯、聚苯乙烯、聚碳酸酯或其组合。
用于形成本发明反应器的合适材料包括但不限于聚合物材料、陶瓷(包括氧化铝等)、玻璃、石英、金属、复合材料及其层压材料。
在一个实施方案中，基体是玻璃。在其它实施方案中，基体是聚合物材料。
聚合物材料将通常为有机聚合物，是天然存在或合成、交联或非交联的均聚物或共聚物。具体的目标聚合物包括但不限于聚烯烃例如聚丙烯、聚酰亚胺、聚碳酸酯、聚酯、聚酰胺、聚醚、聚氨酯、多氟烃、聚苯乙烯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯聚合物(ABS)、丙烯酸酯和丙烯酸聚合物例如聚甲基丙烯酸甲酯和其它取代的和未取代的聚烯烃及其共聚物。
基体和盖板也可由“复合材料”即由不同的材料组成的组合物制备。复合材料可以是嵌段复合材料例如A-B-A嵌段复合材料、A-B-C嵌段复合材料等。或者，复合材料可以是不均匀的材料组合，即其中材料不同于分离相或不同材料的均匀组合。当用于本文时，术语“复合材料”用于包括“层压”复合材料。当用于本文时，术语“层压材料”是指由相同或不同材料的几个不同粘合层形成的复合材料。其它复合材料基体包括聚合物层压材料、聚合物-金属层压材料例如用铜涂覆的聚合物、陶瓷-金属或聚合物-金属复合材料。
可将基体和盖板的表面化学改性，以提供期望的化学或物理性质，例如，以减少分子部分吸附至反应室的内壁，并减少电渗流动。例如，玻璃、聚合物或陶瓷基体和/或盖板的表面可涂覆有或官能化以包含电中性分子类物质、两性离子基团、亲水性或疏水性低聚物或聚合物等。通过具有活性位点或官能团例如羧基、羟基、氨基和卤代烷基的聚酰亚胺、聚酰胺和聚烯烃(例如聚乙烯醇、聚羟基苯乙烯、聚丙烯酸、聚丙烯腈等)，或用可修饰以便包含此类活性位点或官能团的聚合物，将这些基团化学键合至可以提供各种期望表面性质的表面是可能的。改性的基体是官能化以便包含表面结合的水溶性聚合物例如聚环氧乙烷(PEO)的聚酰亚胺，这趋向于在DNA扩增和涉及杂交技术的其它方法中减少不需要的吸附并使非特异性结合最小化。也可使用表面活性剂(例如聚环氧乙烷三嵌段共聚物，例如可按商品名“普卢兰尼克”、聚氧乙烯脱水山梨糖醇或“吐温”得到的那些)、天然聚合物(例如牛血清白蛋白或“BSA”)或提供期望表面性质尤其是减少生物分子例如核酸或蛋白质吸附的其它部分，使基体表面有利地改性。
也应该强调，单一基体的不同区域可具有化学不同的表面。例如，反应室可具有一个例如用聚环氧乙烷等涂覆或官能化的内表面，而反应室的另一个内表面可不涂覆或官能化。以这种方式，存在于相同基体的不同组件和特征可用于进行不同的化学或生物化学过程，或在单一化学或生物化学过程中的不同步骤。
基体可以是导热率大于约0.1W/mK，或大于约0.5W/mK，或大于约1W/mK的导热性材料。这允许在快速加热和冷却循环期间快速的热传递。
在一个实施方案中，基体是导热率大于约1W/mK的导热性聚丙烯。导热性聚丙烯通常包括用作加热元件的材料。合适的导热性材料可包括例如铁、镍、钴、铬；碳钢纤维、磁性不锈钢纤维、镍纤维、铁磁性涂覆的导电纤维、铁磁性涂覆的非导电纤维及其合金。
在一个实施方案中，加热基体，以提高反应器的温度。在另一个实施方案中，冷却基体，以降低反应器的温度。在还另一个实施方案中，将基体加热，且然后冷却，以调节反应器的温度。
在一个实施方案中，盖板是玻璃。
缓冲层
在反应器中，在基体与盖板之间使用缓冲层。缓冲层应该对基体和盖板具有良好的粘附。缓冲层应该也不能被样品中使用的液体透过。缓冲层应该能够经得起4℃-95℃延长时间(例如1-2小时)的反复循环。缓冲层也应该不干扰PCR过程和检测系统。
可使用各种缓冲层，虽然所选择的任何缓冲层应该能够经得起在置于反应室内的任何样品材料的处理期间产生的力，例如，在样品材料的分布期间发生的力、在样品材料的热处理期间发生的力等。在例如涉及热循环的处理的地方，那些力可能很大。在一个实施方案中，用于与样品处理装置连接的缓冲层应该显示低荧光，并与用于与PCR连接的过程和材料相容。
在一个实施方案中，缓冲层可显示密封剂和/或粘合剂的性质。此类缓冲层可更适用样品处理装置的高体积生产，因为它们通常不涉及用于熔融粘合的高温结合过程，它们也不存在在液体粘合剂、溶剂粘合、超声粘合等的使用中固有的操作问题。
在一个实施方案中，缓冲层可包括确保缓冲层的性质不受水的不利影响的材料。例如，缓冲层不应该丧失粘附、丧失粘合强度、软化、膨胀、或响应在样品装载和处理期间暴露至水而变得不透明。并且，缓冲层不应该包含可在样品处理期间被提取至水中，因此可能损害装置性能的任何组分。
此外，缓冲层可以是单一材料或两种或多种材料的组合或掺混物。缓冲层可由例如溶剂涂覆、丝网印刷、辊印刷、熔融挤出涂覆、熔融喷涂、罐头接缝补涂(stripe coating)或层压方法得到。缓冲层可以具有各种厚度，只要它满足显示以上的性质和特性。为了达到最大的粘合精确度，且如果需要，为了用作钝化层，缓冲层应该是连续的且无小孔或多孔性。
可以施加在本领域中已知的任何粘合剂组合物作为缓冲层。在例如以下的文献中描述了合适的粘合剂组合物：“粘附和粘合”，聚合物科学与工程的百科全书，第1卷，第476-546页，Interscience出版社，第二版，1985年。在一个实施方案中，粘合剂组合物是不透水的。合适的不透水的粘合剂包括例如天然橡胶胶乳基粘合剂、合成橡胶基粘合剂、硅基粘合剂和热熔粘合剂。对于本发明的目的，也可以使用许多其它粘合剂，具体的选择取决于互相粘合的两个表面的性质、完成粘合的环境和所得产品的预定用途。在以下文献中可以找到粘合剂的彻底讨论：“Ullmann氏工业化学百科全书”，VCH VerlagsgesellschaftGmbH，德国，1985年，A1卷，第221-267页和“化学技术百科全书”，第4版，John Wiley & Sons，NYC，1991年，第1卷，第445-466页。也使用可固化的粘合剂。然而，也可使用接触粘合剂、压敏粘合剂、橡胶基粘合剂、乳液粘合剂、热熔粘合剂、天然产物粘合剂、聚氨酯粘合剂、丙烯酸粘合剂、环氧树脂粘合剂、苯酚粘合剂和聚酰亚胺粘合剂。
合适的密封剂组合物类别也可包括例如聚氨酯、聚异丁烯、丁基橡胶、弹性体、环氧化物(epoxys)、天然橡胶和合成橡胶、聚硅氧烷、聚硫化物、丙烯酸酯及其组合。密封剂组合物可包括极性基因和/或反应基团(例如硅烷、氨酯、酯、疏基及其组合)，以提供足够的与靶基体(例如玻璃和塑料)的共价和/或极性(例如氢键)键合。
在一个实施方案中，缓冲层可由疏水性材料组成。在一个实施方案中，缓冲层可由聚硅氧烷材料组成。
在一个实施方案中，使用硅密封剂。聚硅氧烷密封剂通常包括聚硅氧烷聚合物、一种或多种填充剂、交联组分例如反应性硅烷和催化剂的混合物。聚硅氧烷聚合物具有硅氧烷主链，并包括侧链烷基、烷氧基或乙酰氧基。此类基团水解至硅烷醇基，其通过缩合形成更大的链。聚硅氧烷密封剂可通过塞缝枪、铲或其它合适的方法来施加，并通过暴露于潮湿的空气中固化。聚硅氧烷密封剂具有低收缩性质，并可在宽温度范围内施加和使用。由于其温和的固化条件，室温硫化(RTV)硅橡胶密封剂尤其有用。合适的室温硫化(RTV)硅橡胶密封剂包括例如一种组分的RTV橡胶(KE3475，Shin-Etsu Chemical Co.，Ltd.，日本)和一部分湿固化的RTV(SE 9120，Dow Corning Corporation，Midland，MI，美国)。
除湿固化硅密封剂材料之外，也可使用可辐射固化的硅密封剂。合适的可紫外辐射固化的聚硅氧烷密封剂组合物通常包含(i)含辐射敏感性官能团的有机聚硅氧烷，和(ii)光引发剂。辐射敏感性官能团的实例包括丙烯酰基、异丁烯酰基、疏基、环氧基和烯基醚基团。光引发剂的类型取决于在有机聚硅氧烷中辐射敏感性基团的性质。光引发剂的实例可包括二芳基碘盐、锍盐、苯乙酮、二苯甲酮和苯偶姻及其衍生物。尤其有用的不饱和有机硅化合物类型每分子具有至少一个连接至硅的脂族不饱和有机基团。脂族不饱和有机硅化合物包括硅烷、聚硅烷、硅氧烷、硅氮烷、以及通过亚甲基或聚亚甲基或亚苯基连接在一起的含硅原子的单体材料或聚合物材料。
缓冲层也可选自聚硅氧烷类材料，该聚硅氧烷类材料基于聚硅氧烷聚合物与增粘性树脂的组合，如例如“聚硅氧烷压敏粘合剂”，压敏粘合剂技术手册，第3版，第508-517页所述。聚硅氧烷压敏粘合剂的疏水性、其经受高温的能力及其结合至各种不同表面的能力是已知的。
可能在PCT专利申请公布号WO 00/68336中描述了一些合适的组合物。其它合适的组合物可基于聚硅氧烷-聚脲基压敏粘合剂家族。在以下专利中描述了此类组合物：美国专利号5,461,134；美国专利号6,007,914；PCT专利申请公布号WO 96/35458；PCT专利申请公布号WO 96/34028；和PCT专利申请公布号WO 96/34029。此类压敏粘合剂基于聚硅氧烷-聚脲聚合物与增粘剂的组合。需要时，增粘剂可以选自官能(反应性)和非官能增粘剂类增粘剂。需要时，可以改变一种或多种增粘剂的水平，以便将期望的粘性赋予粘合剂组合物。例如，在一个实施方案中，压敏粘合剂组合物可以是增粘的聚二有机硅氧烷寡脲(oligurea)链段共聚物，包括(a)软聚二有机硅氧烷单元、硬聚异氰酸酯残基单元，其中聚异氰酸酯残基是聚异氰酸酯减去-NCO基团，任选软和/或硬的有机聚胺单元，其中异氰酸酯单元和胺单元的残基通过脲键连接；和(b)一种或多种增粘剂(例如硅酸酯树脂等)。
在一些实施方案中，阻挡层可以是例如单侧面或双侧面的不透水粘合带。在其它实施方案中，阻挡层可以是例如用不透水的粘合剂涂在一个侧面或两个侧面的垫圈。在其它实施方案中，阻挡层可以是例如不透水的层压材料。
制备
可以使用任何常规方法制备基体，该方法包括但不限于微模塑和铸造技术、压花法、表面显微机械加工和主体显微机械加工。后一种技术涉及通过直接蚀刻入主体材料内形成微观结构，通常使用湿化学蚀刻或活性离子蚀刻。表面显微机械加工涉及由沉积在基体表面上的膜制备。
虽然前述讨论已经将DNA用作核酸，但是将本文公开的方法应用至其它核酸，包括RNA序列或RNA序列与DNA序列的组合，对本领域的合格技术人员来说将是显而易见的。
应该理解，本发明的某些描述已经进行了简化，以仅举例说明与清楚理解本发明有关的那些元件和限制，同时为了清楚的目的删除了其它元件。本领域的那些普通技术人员在考虑本发明的描述之后，将认识到为了实施本发明，可能需要其它元件和/或限制。然而，因为普通技术人员在考虑了本发明的描述之后，就可容易地确定此类其它元件和/或限制，并不必完全理解本发明，所以本文中不提供此类元件和限制的讨论。
实施例
以下实施例举例说明上述发明。本领域的技术人员将容易地认识到，在实施例中所述的技术和试剂提示可以实施本发明的许多其它方法。
实施例1
该实施例举例说明微阵列反应器的制备，该反应器用于使用聚合酶链反应(PCR)方法和衰减波检测技术，定量分析核酸。
反应室由玻璃盖板和导热性聚丙烯基体制成。使玻璃盖板的内表面化学改性，以减少荧光物质和其它污染物的吸附。按已知的二维图案，将靶核酸探针固定至玻璃盖板的内表面。玻璃盖板也是透明的且适用于衰减波检测技术。
使用模塑法制备具有内腔的导热性聚丙烯基体。将入口和出口整合至基体内。将玻璃盖板和聚丙烯基体装配，并通过缓冲层密封在一起，形成反应器。在装载样品之后，用橡胶塞密封入口和出口。
为了防止热循环反应器的液体泄漏，在基体与盖板之间使用缓冲层。将可固化的硅橡胶(得自Shin-Etsu Chemical Co.，Ltd.，Japan的KE3475)用作缓冲层。该硅橡胶不透水，且能够经得起4℃-95℃的温度。在固化之后，该硅橡胶也不会干扰PCR过程或显示低荧光。为了防止损伤玻璃盖板、聚丙烯基体和固定化的靶探针，硅橡胶是室温硫化(RTV)材料。
将样品和各种分析试剂及反应物从外部来源通过入口引入反应室内。当通过入口引入液体时，出口用作气孔。在样品和各种分析试剂及反应物加入之后，将合适大小、硬度和化学抗性的一组橡胶塞用于密封反应室的入口和出口。
当使用反应器用于核酸检测时，通过PCR温度循环程序加热和冷却反应器及其内部试剂。例如，将半导体冷却器用于加热/冷却由导热性聚丙烯材料制成的基体。在PCR过程期间，在每一扩增循环中的退火/延伸步骤，使室内的靶DNA呈指数式扩增，并使扩增的DNA产物杂交至固定在玻璃盖板内表面上的靶探针。玻璃盖板适用于通过衰减波进行荧光检测。玻璃盖板可由例如K9光学玻璃制成，该K9光学玻璃的折光指数大于在反应器内的PCR/杂交缓冲剂的折光指数。荧光分子例如CY5可用于PCR引物标记。CY5在649nm激发最大并在670nm发射最大。
已经参考各种具体的实施方案和技术描述了本发明。然而，应该理解可进行许多变化和修改，而仍然在本发明的精神和范围内。

Claims (9)

1.一种用于靶核酸定量分析的反应器，所述反应器包括：
导热性聚丙烯基体，所述基体具有第一个平的相对表面和第二个平的相对表面，所述基体具有从所述第一个平的相对表面凹陷的腔；
具有平的上表面和平的底表面的缓冲层，所述平的底表面的排列在所述基体的第一个平的表面之上并与之粘附；
K9光学玻璃盖板，所述盖板排列在所述缓冲层的所述平的上表面之上，其中靶核酸探针固定至该玻璃盖板的内表面，所述缓冲层的所述平的上表面粘附至该盖板的底表面，所述盖板与所述腔和缓冲层联合限定反应室，其中所述缓冲层不干扰靶核酸的PCR分析；和
至少一个入口和至少一个出口，它们通过所述基体与反应室相通，确保来自外部来源的流体通道进入并穿过所述反应室，并因此限定流体流动通路；
其中所述靶核酸定量分析使用聚合酶链反应(PCR)方法和衰减波检测技术，其中衰减波通过靶核酸探针固定至其上的所述玻璃盖板进入反应室，并且其中该玻璃盖板的折光指数大于在反应室内的流体的折光指数。
2.权利要求1的反应器，其中所述基体、缓冲层和盖板各自独立地由化学惰性材料组成，所述化学惰性材料是热稳定的并抗污染。
3.权利要求1的反应器，其中基体的导热率大于约1W/mK。
4.权利要求1的反应器，其中所述缓冲层为不透水的密封剂。
5.权利要求4的反应器，其中所述不透水的密封剂是室温硫化的硅橡胶。
6.一种用于靶核酸定量分析的方法，所述方法包括：
(a)将样品流体引入反应器内，所述样品流体包含一种或多种靶核酸、一种或多种荧光标记的引物、一种或多种任选荧光标记的dNTP、热稳定性核酸聚合酶和缓冲剂，所述反应器包括：
导热性聚丙烯基体，所述基体具有第一个平的相对表面和第二个平的相对表面，所述基体具有从所述第一个平的相对表面凹陷的腔；
具有平的上表面和平的底表面的缓冲层，所述平的底表面的排列在所述基体的第一个平的表面之上并与之粘附；
K9光学玻璃盖板，所述盖板排列在所述缓冲层的所述平的上表面之上，其中靶核酸探针固定至该玻璃盖板的内表面，所述缓冲层的所述平的上表面粘附至该盖板的底表面，所述盖板与所述腔和缓冲层联合限定反应室，其中所述缓冲层不干扰靶核酸的PCR分析；和
至少一个入口和至少一个出口，它们通过所述基体与反应室相通，确保来自外部来源的流体通道进入并穿过所述反应室，并因此限定流体流动通路；
(b)施加动力，以使样品流体沿流动通路移动进入所述反应室；
(c)密封至少一个入口和至少一个出口；
(d)在所述反应室中加热样品流体，以将一种或多种双链靶核酸分离为单链靶核酸；
(e)冷却样品，以允许一种或多种荧光标记的引物杂交至所述单链靶核酸，且所述单链靶核酸通过热稳定性核酸聚合酶进行复制；和
(f)重复步骤(d)和(e)，以达到期望的扩增程度；
(g)由杂交至一种或多种靶核酸的一种或多种荧光标记的扩增子激活一种或多种荧光反应；和
(h)检测用于定量分析一种或多种靶核酸的所述一种或多种荧光反应，其中通过使用预定波长的衰减波激活所述一种或多种荧光反应，该衰减波通过靶核酸探针固定至其上的所述玻璃盖板进入反应室，并且其中该玻璃盖板的折光指数大于在反应室内的流体的折光指数。
7.权利要求6的方法，其中所述动力包含施加电压差或压力差的工具。
8.权利要求6的方法，其中所述基体的导热率大于约1W/mK。
9.权利要求6的方法，其中所述缓冲层是不透水的密封剂。
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Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2227537A4 (en) 2007-12-24 2014-05-07 Honeywell Int Inc REACTOR FOR THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF NUCLEIC ACIDS
US8058005B2 (en) 2008-10-23 2011-11-15 Honeywell International Inc. Method for single nucleotide polymorphism and mutation detection using real time polymerase chain reaction microarray
FR2946763B1 (fr) * 2009-06-11 2011-11-18 Novembre Lunettes a branches d'aspect variable
FR2949575B1 (fr) * 2009-08-31 2012-03-02 Oxibis Exalto Sas Lunettes a branches doublees d'un element de decor mobile
US9539571B2 (en) 2010-01-20 2017-01-10 Honeywell International Inc. Method to increase detection efficiency of real time PCR microarray by quartz material
US9635222B2 (en) 2014-08-03 2017-04-25 PogoTec, Inc. Wearable camera systems and apparatus for aligning an eyewear camera
EP3175289A4 (en) 2014-08-03 2018-04-18 Pogotec, Inc. Wearable camera systems and apparatus and method for attaching camera systems or other electronic devices to wearable articles
US9628707B2 (en) 2014-12-23 2017-04-18 PogoTec, Inc. Wireless camera systems and methods
US11357272B2 (en) * 2015-05-19 2022-06-14 Oscar Mendez Protective skin shields
US10070673B2 (en) * 2015-05-19 2018-09-11 Oscar Mendez Protective skin shields system
WO2016201261A1 (en) 2015-06-10 2016-12-15 PogoTec, Inc. Eyewear with magnetic track for electronic wearable device
US10481417B2 (en) 2015-06-10 2019-11-19 PogoTec, Inc. Magnetic attachment mechanism for electronic wearable device
US10341787B2 (en) 2015-10-29 2019-07-02 PogoTec, Inc. Hearing aid adapted for wireless power reception
US20170251748A1 (en) * 2016-03-04 2017-09-07 Jarkko Imppola Detachable veil device
US11558538B2 (en) 2016-03-18 2023-01-17 Opkix, Inc. Portable camera system
USD812129S1 (en) 2016-09-02 2018-03-06 Osten C. Pinkney Eye glass frame
USD805124S1 (en) 2016-10-14 2017-12-12 Oscar Mendez Protective skin shield
WO2018089533A1 (en) 2016-11-08 2018-05-17 PogoTec, Inc. A smart case for electronic wearable device
US10365505B2 (en) * 2017-09-18 2019-07-30 Lin Yun Chen Side piece structure of a pair of glasses
DE112017008224B4 (de) * 2017-11-21 2023-12-14 Nanohelix Co., Ltd. Zusammensetzung für polymerasereaktion
WO2020102237A1 (en) 2018-11-13 2020-05-22 Opkix, Inc. Wearable mounts for portable camera
US11200105B2 (en) * 2018-12-31 2021-12-14 Micron Technology, Inc. Normalization of detecting and reporting failures for a memory device
SG10201902905UA (en) * 2019-04-01 2020-11-27 Delta Electronics Int’L Singapore Pte Ltd Thermal cycling system
DE102020130870B3 (de) * 2020-11-23 2022-05-05 Johannes Gutenberg-Universität Mainz, Körperschaft des öffentlichen Rechts Mikrofluidische Durchflusszelle und System zur Analyse oder Diagnostik von Biofilmen und Zellkulturen sowie deren Verwendung

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3819189A (en) * 1973-10-04 1974-06-25 R Goode Golf training aids
US4105304A (en) * 1976-11-08 1978-08-08 Alfred Baker Side glare-eliminating device for securement to eyeglasses and other suitable mounting structures
US4115356A (en) * 1977-07-18 1978-09-19 Dow Corning Corporation Self adhering room temperature vulcanizable silicone elastomers
US4607397A (en) * 1984-09-27 1986-08-26 Chevron Research Company Portable hard hat
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) * 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US5214119A (en) 1986-06-20 1993-05-25 Minnesota Mining And Manufacturing Company Block copolymer, method of making the same, dimaine precursors of the same, method of making such diamines and end products comprising the block copolymer
GB9119735D0 (en) * 1991-09-16 1991-10-30 Secr Defence Gene probe biosensor method
US6287850B1 (en) 1995-06-07 2001-09-11 Affymetrix, Inc. Bioarray chip reaction apparatus and its manufacture
US5830645A (en) * 1994-12-09 1998-11-03 The Regents Of The University Of California Comparative fluorescence hybridization to nucleic acid arrays
US5544361A (en) * 1995-01-19 1996-08-13 Gary A. Davidson Headgear mountable protective face shield
ES2178708T3 (es) 1995-04-25 2003-01-01 Minnesota Mining & Mfg Copolimeros segmentados de polidiorganosiloxanos y poliurea, y un procedimiento para obtenerlos.
WO1996035458A2 (en) 1995-04-25 1996-11-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company Tackified polydiorganosiloxane polyurea segmented copolymers and a process for making same
WO1996034028A1 (en) 1995-04-25 1996-10-31 Minnesota Mining And Manufacturing Company Tackified polydiorganosiloxane oligourea segmented copolymers and a process for making same
AU9476598A (en) 1997-09-11 1999-03-29 Seq, Ltd. Method to make fluorescent nucleotide photoproducts for dna sequencing and analysis
US6007914A (en) 1997-12-01 1999-12-28 3M Innovative Properties Company Fibers of polydiorganosiloxane polyurea copolymers
US20010005718A1 (en) 1999-04-16 2001-06-28 Yang Wen-Tung Apparatus and process for rapid hybridization
WO2000068336A1 (en) 1999-05-05 2000-11-16 3M Innovative Properties Company Silicone adhesives, articles, and methods
NL1012737C2 (nl) * 1999-07-29 2001-01-30 Antoinette De Groot Inrichting voor het tegen zonnestraling beschermen van ogen.
WO2001032930A1 (en) 1999-11-04 2001-05-10 California Institute Of Technology Methods and apparatuses for analyzing polynucleotide sequences
WO2001037958A2 (en) 1999-11-04 2001-05-31 Princeton University Electrodeless dielectrophoresis for polarizable particles
AU2001247195A1 (en) * 2000-01-31 2001-08-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Method and system for collecting and transmitting chemical information
CN1184331C (zh) 2001-02-09 2005-01-12 中国科学院电子学研究所 Dna－pcr生物芯片及使用该芯片的微型热循环器
CA2440754A1 (en) 2001-03-12 2002-09-19 Stephen Quake Methods and apparatus for analyzing polynucleotide sequences by asynchronous base extension
JP4013671B2 (ja) * 2002-07-05 2007-11-28 松下電器産業株式会社 ポリメラーゼ連鎖反応容器及びその製造方法
WO2004034436A2 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Cellectricon Ab Method for interfacing macroscale components to microscale devices
CN100439515C (zh) * 2003-03-03 2008-12-03 清华大学 一种核酸分析芯片实验室系统与应用
JP4581380B2 (ja) 2003-11-17 2010-11-17 パナソニック株式会社 核酸増幅反応容器およびその製造方法
WO2005094981A1 (en) 2004-03-29 2005-10-13 Agilent Technologies, Inc. Cyclic pcr system
DE102004022263A1 (de) 2004-05-06 2005-12-15 Clondiag Chip Technologies Gmbh Vorrichtung und Verfahren zum Nachweis von molekularen Wechselwirkungen
US20060088844A1 (en) * 2004-10-22 2006-04-27 Honeywell International Inc. Real-time PCR microarray based on evanescent wave biosensor
US8703445B2 (en) 2005-12-29 2014-04-22 Abbott Point Of Care Inc. Molecular diagnostics amplification system and methods
EP1935496A1 (en) 2006-12-22 2008-06-25 Eppendorf Array Technologies SA Device and/or method for the detection of amplified nucleotides sequences on micro-arrays
WO2009059447A1 (en) 2007-11-05 2009-05-14 Honeywell International Inc. A quantitative method for oligonucleotide microarray
EP2227537A4 (en) 2007-12-24 2014-05-07 Honeywell Int Inc REACTOR FOR THE QUANTITATIVE ANALYSIS OF NUCLEIC ACIDS
US9101931B2 (en) 2007-12-28 2015-08-11 Intel Corporation Controlled fluid delivery in a microelectronic package
US8741815B2 (en) 2008-02-19 2014-06-03 Intelligent Bio Systems, Inc. Methods and devices for amplification of nucleic acid
US9539571B2 (en) 2010-01-20 2017-01-10 Honeywell International Inc. Method to increase detection efficiency of real time PCR microarray by quartz material

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EP2227537A4 (en) 2014-05-07
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US9480982B2 (en) 2016-11-01
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US20080301846A1 (en) 2008-12-11

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