CN101801412A - 水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(vlp)和抗原 - Google Patents

Abstract

本发明公开了新的水痘带状疱疹病毒(VZV)病毒样颗粒(VLP)，其包含VZV的糖蛋白E。本发明还公开了VZV-VLP的疫苗配制剂和在受试者中诱导免疫应答的方法。

Description

水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(VLP)和抗原

                      相关申请

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                      发明背景

水痘带状疱疹病毒(VZV)(也称为人疱疹病毒3(HHV-3))是病毒疱疹病毒科(Herpesviridae)的α疱疹病毒亚科(alphaherpesvirus subfamily)的成员。VZV是一种有包膜病毒，具有约125,000个核苷酸的线性双链DNA基因组。它的基因组被二十面体核壳体装入。位于核壳体和病毒包膜间间隔的间层是由病毒编码的蛋白质和酶构成的结构。病毒包膜是从宿主细胞膜获得的，并且含有病毒编码的糖蛋白。

人疱疹病毒中最小的VZV基因组编码至少70个可读框，其中8个编码推定的糖蛋白(gE、gI、gB、gH、gK、gL、gC、和gM)，它们在病毒复制周期的不同步骤中发挥功能。糖蛋白E(gE，也称为ORF 68)对于病毒复制是必要的(Mallory等(1997)J.Virol.71：8279-8288；Mo等(2002)Virology 304：176-186)，并且是受感染细胞以及成熟病毒体中存在的最丰富的糖蛋白(Grose，2002，The predominant varicella-zoster virus gE and gI glycoproteincomplex，In Structure-function relationships of human pathogenic viruses，Holzenburg和Bogner(编)，Kluwer Academic/Plenum Publishers，New York，NY)。糖蛋白I(gI，也称为ORF 67)在受感染的细胞中与gE形成复合物，这便于两种糖蛋白质的胞吞，并将它们引导至反式高尔基体(trans-Golgi)，在那里获得最终的病毒包膜(Olson和Grose(1998)J.Virol.72：1542-1551)。糖蛋白B(gB，也称为ORF 31)(认为其在病毒进入中发挥作用)结合中和性抗体，并且是第二普遍的糖蛋白(综述于Arvin(1996)Clin.Microbiol.Rev.9：361-381)。认为糖蛋白H(gH)具有便于病毒的细胞间传播的融合功能。针对gE、gB、和gH的抗体在天然感染后和疫苗接种后是普遍的，并且已经显示了在体外中和病毒感染性(Keller等(1984)J.Virol.52：293-297；Arvin等(1986)J.Immunol.137：1346-1351；Vafai等(1988)J.Virol.62：2544-2551；Forghani等(1990)J.Clin.Microbiol.28：2500-2506)。

用VZV的初次感染引起禽痘(水痘)，其特征在于主要在面部和躯干上发生的极端传染性的皮疹。初始感染后，病毒DNA可以整合入宿主神经元细胞的基因组中，并保持潜伏达数年。病毒可以再活化，并在成人中引起疾病带状疱疹(shingles，herpes zoster)。带状疱疹产生的皮疹不同于初次感染过程中产生的。皮疹与严重的疼痛有关，并且可以导致更严重的疾患，诸如疱疹后神经痛(post-herpetic neuralgia)。

水痘疫苗(Varivax)是公众可获得的，并且已经在数个国家(包括美国)被添加至推荐的儿童疫苗接种日程表。更浓的水痘疫苗(Zostavax)配制剂已得到食品药品管理局(Food and Drug Administration)批准用于在人群的老年成员中预防带状疱疹。虽然已经证明了水痘疫苗是安全的，但是有一些如下的证据，即由疫苗赋予的对VAV感染的免疫随时间而减弱(Chaves等(2007)N.Engl.J.Med.356：1121-1129)。因此，经过疫苗接种的个体仍会对带状疱疹，即由VZV引起的更为严重的疾患易感。另外，疫苗是由活的减毒病毒制成的，这产生从疫苗接种形成禽痘或带状疱疹的个体的可能性。实际上，已经有数例报告的似乎由疫苗中使用的毒株所引起的带状疱疹病例(Matsubara等(1995).Acta Paediatr Jpn 37：648-50；Hammerschlag等(1989).J Infect Dis.160：535-7)。疫苗中存在的活的减毒病毒还限制了疫苗在无免疫应答的个体中的应用。

病毒样颗粒(virus like particle；VLP)在结构上类似于成熟的病毒体，但是缺乏病毒基因组而使其不可能发生病毒复制。VLP含有类似完整病毒的抗原性蛋白质，诸如壳体和病毒包膜蛋白，并且也可以进行构建以在其表面上表达外来结构蛋白。因此，VLP可以作为免疫原性组合物(例如疫苗)安全施用。此外，因为VLP类似天然病毒，而且是多价颗粒结构，所以VLP可以比可溶性抗原更有效地诱导中和性抗体。

先前已经从不同疱疹病毒科成员生成了表达糖蛋白或间层蛋白的VLP。由有包膜的间层蛋白构成的轻颗粒(L颗粒)已经获自用单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、马疱疹病毒1型(EHV-1)、或假狂犬病病毒感染的细胞(McLauchlan和Rixon(1992)J.Gen.Virol.73：269-276；美国专利号5,384,122)。可以通过在存在病毒DNA复制抑制剂的情况中用HSV-1感染细胞来生成不同类型的VLP，其称作病毒DNA复制前包膜颗粒(PREP)。PREP在结构上类似L颗粒，但是含有不同的蛋白质组成(Dargan等(1995)J.Virol.69：4924-4932；美国专利号5,994,116)。已经通过使用由酵母Ty反转录转座子编码的蛋白p1进行的技术来生成表达来自VZV的gE蛋白的片段的杂合VLP(Garcia-Valcarcel等(1997)Vaccine 15：709-719；Welsh等(1999)J.Med.Virol.59：78-83；美国专利号6,060,064)。本发明描述了自VZV衍生的新型抗原和VLP，其不需要酵母Ty蛋白的表达，也不需要用病毒自身进行感染。这些新的VLP作为抗原性配制剂或疫苗制剂是有用的。

                        发明概述

本发明包含一种纯化的来自水痘带状疱疹病毒(VZV)的病毒样颗粒(VLP)，其包含VZV gE蛋白，但是不包含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。

本发明还包括一种纯化的VZV-VLP，其包含VZV gE蛋白和另外的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白(tegument protein)。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。

本发明还提供一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所述宿主细胞不包含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是禽类细胞。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是两栖动物细胞。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是酵母细胞。在一个优选的实施方案中，所述宿主细胞是昆虫细胞。在另一个优选的实施方案中，所述昆虫细胞是Sf9细胞。

本发明还包括一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所述宿主细胞不包含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸，且其中所述VLP进一步包含另外的VZV蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。

本发明还包含一种抗原性配制剂，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述抗原性配制剂进一步包含佐剂。

本发明还包含一种抗原性配制剂，其包含如下的VZV-VLP，所述VZV-VLP包含VZV gE蛋白和另外的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。

本发明还包括一种疫苗，其包含VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含VZVgE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述疫苗进一步包含佐剂。

本发明还包括一种疫苗，其包含如下的VZV-VLP，其包含VZV gE蛋白和另外的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。

本发明还包括一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述人或动物施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。在一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自病毒。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自真菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自寄生物。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质来自细菌。在另一个实施方案中，所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。

本发明还包括一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述人或动物施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE和另外的VZV蛋白，但是不含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP进一步包含来自感染原的另外的蛋白质。

                        附图简述

图1描绘了VZV表达构建体的SDS PAGE和两次Western印迹。

图2描绘了对gE VLP S400凝胶过滤的颗粒分析。

图3描绘了(A)含有在AcMNPV杆状病毒多角体蛋白启动子(PolH)的转录控制下的IE62(ICP4)间层基因的pFastBac1质粒的图示。(B)描绘了用考马斯蓝染色的SDS-PAGE(左侧小图)和针对抗IE62单克隆抗体的Western印迹(右侧小图)。第1道.表达重组IE62的总体受感染的Sf9细胞的样品，第2道.匀浆化并通过离心除去细胞碎片后的细胞溶胞物，第3道.TMAE离子交换柱的流过物，第4道和第5道.含有IE62的TMAE级分，第6道.加载至Fractogel阳离子交换硫酸盐(SO₃)柱上的样品，第7道.SO3-柱流过物，第8道.纯化的IE62洗脱物。

图4描绘了(A)用于构建在Sf9细胞中表达VZV gE和gI的串联重组杆状病毒的pFastBac1转移载体。gE和gI基因在杆状病毒多角体蛋白启动子(PolH)的转录控制下。gI具有其天然的、可切割的信号肽，而gE用来自杆状病毒包膜糖蛋白GP64的信号序列替换。(B)描绘了用考马斯蓝染色的SDS-PAGE凝胶(左侧小图)和针对抗gE的Western印迹(中间小图)、或针对抗完整病毒VZV的Western印迹(右侧小图)。第1道.S200凝胶过滤柱的加载物和第2道.出S200柱的最终的纯化的gE/gI异二聚物。抗gE识别分泌的gE，其中主要的蛋白质是预测质量为约60KDa的gE(中间小图)，并且多克隆抗体与30KDa gI起反应(右侧小图)。

图5描绘了(A)含有C末端截短的VZV gE基因的pcDNA3.1质粒(Invitrogen)。(B)描绘了用考马斯蓝染色的SDS-PAGE(左侧小图)和针对抗gE单克隆抗体的Western印迹(右侧小图)。在第1道中的是蛋白质大小标志物，第2道是加载的来自用质粒DNA转染后4天的HEK293细胞的2μl组织培养物上清液，而凝胶的第3道是出凝集素亲和柱的4μl纯化的gE。

                        发明详述

本发明的VLP和制备VLP的方法

如本文中所使用的，术语“病毒样颗粒”(VLP)指在至少一种属性上类似病毒但是已经证明其没有感染性的结构。依照本发明的病毒样颗粒不携带编码所述病毒样颗粒的蛋白质的遗传信息。一般而言，病毒样颗粒缺乏病毒基因组，并且不能复制。另外，病毒样颗粒通常可以通过异源表达来大量生产，而且可以容易地纯化。该术语还指通过下文所描述的方法生成的任何亚病毒颗粒。此术语包括可以通过下文所描述的或本领域中已知的任何方法纯化的蛋白质聚集物。

如本文中所使用的，术语“抗原性配制剂”或“抗原性组合物”指在给脊椎动物(例如哺乳动物)施用时会诱导免疫应答的制备物。

如本文中所使用的，术语“纯化的VLP”指本发明的VLP制备物，其至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更大地不含混合物中其它分子(不包括溶剂在内)。例如，本发明的VLP可以基本上没有与制备本发明的VLP有关的其它病毒、蛋白质、脂质、和碳水化合物。该术语还涵盖已经从具有污染的VZV基因组DNA或其部分的VLP分离的VLP。

如本文中所使用的，术语“嵌合VLP”指含有来自至少两种不同感染原的蛋白质(异源蛋白质)或其部分的VLP。通常，所述蛋白质之一衍生自可以驱动VLP自宿主细胞形成的病毒(例如VZV gE)，而另一种蛋白质来自异源感染原。

术语“感染原”指在脊椎动物中引起感染的微生物。感染原可以是病毒、真菌、细菌和/或寄生物。可以在VZV VLP的表面上表达的蛋白质可以源自病毒、真菌、细菌和/或寄生物。源自病毒、真菌、细菌和/或寄生物的蛋白质可以在脊椎动物中诱导免疫应答(细胞的和/或体液的)，其会在所述脊椎动物中预防、治疗、控制(manage)和/或改善传染病。

如本文中所使用的，术语“疫苗”指含有本发明VLP的配制剂，其处于能够向脊椎动物施用的形式，而且其诱导的保护性免疫应答足以诱导免疫以预防和/或改善感染和/或减轻至少一种感染症状和/或增强另一剂VLP的功效。

如本文中所使用的，术语“有效量”指实现想要的生物学效应所必需的或足以实现想要的生物学效应的VLP的量。组合物的有效量将是达到选定结果的量，并且该量可以由本领域技术人员作为常规事项确定。例如，用于预防、治疗和/或改善感染的有效量可以是引起免疫系统活化所必需的量，其导致在暴露于本发明VLP时形成抗原特异性免疫应答。该术语也是“足够量”的同义词。

如本文中所使用的，术语“保护性免疫”或“保护性免疫应答”指由脊椎动物(例如人)展现出的针对感染原的免疫或引发针对感染原的免疫应答，其阻止或改善感染或减少至少一种其症状。

如本文中所使用的，术语“脊椎动物”或“受试者”或“患者”指脊椎动物亚门(subphylum cordata)的任何成员，包括但不限于人和其它灵长类，包括非人灵长类，诸如黑猩猩(cgunoabzee)和其它猿类(apes)和猴物种(monkey species)。家畜(farm animal)(诸如牛、绵羊、猪、山羊和马)；家养哺乳动物(domestic mammal)(诸如狗和猫)；实验动物(包括啮齿动物，诸如小鼠、大鼠(包括棉鼠)和豚鼠)；鸟类(包括家禽、野鸟和猎禽，诸如鸡、火鸡及其它鹑鸡类鸟类、鸭、鹅)等也是非限制性例子。该定义中包括术语“哺乳动物”和“动物”。意图涵盖成体和新生个体两者。

发明人已经发现了，在细胞中表达VZV gE蛋白诱导VLP形成。如此，本发明包含通过表达VZV gE形成的VZV VLP。发明人还已经开发了来自表达gE和至少一种另外的VZV蛋白的宿主细胞的新型VLP。另外，这些VLP还可以表达来自其它感染原的抗原性蛋白质。本发明还涵盖制备和施用由本发明的VZV VLP构成的“抗原性配制剂”的方法。本发明还涵盖制备和施用由本发明的VZV VLP构成的疫苗的方法。此新型疫苗配制剂克服了使用目前可用的由活的减毒病毒制成的疫苗遇到的一些问题和忧虑。

本发明包含包含VZV gE的VZV VLP，其中所述VZV VLP不包含VZV核酸或酵母Ty蛋白。在另一个实施方案中，本发明的VLP基本上由gE蛋白组成。在另一个实施方案中，所述VZV VLP不包含VZV壳体蛋白(例如ORF 20、ORF40、ORF 41)。在另一个实施方案中，本发明的VLP包含至少一种掺入VLP中的另外的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI(ORF 67)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(ORF 50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含至少一种间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。

本发明的另一个实施方案包含嵌合VZV VLP，其包含VZV gE蛋白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

另一种类型的本发明嵌合VLP还包含如下的VLP，其包含VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

可以衍生所述感染原蛋白质的病毒的非限制性例子如下：流感(甲型和乙型，例如HA和/或NA)、冠状病毒(例如SARS)、甲型、乙型、丙型、丁型和戊3型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、疱疹病毒1、2、6和7，巨细胞病毒、水痘带状疱疹、乳头瘤病毒、埃巴病毒(Epstein Barr virus)、腺病毒、布尼亚病毒(bunya virus)(例如汉坦病毒(hanta virus))、柯萨奇病毒(coxsakievirus)、小RNA病毒(picoma virus)、轮状病毒、鼻病毒、风疹病毒(rubella virus)、腮腺炎病毒、麻疹病毒(measles virus)、风疹病毒(Rubella virus)、脊髓灰质炎病毒(多种类型)、腺病毒(多种类型)、副流感病毒(多种类型)、禽流感(各种类型)、运输热病毒(shipping fever virus)、西方和东方马脑脊髓炎(Western andEastern equine encephalomyelitis)、日本脑脊髓炎(Japanese encephalomyelitis)、禽痘、狂犬病病毒、脑慢病毒(slow brain virus)、劳斯肉瘤病毒(rous sarcomavirus)、乳多空病毒科(Papovaviridae)、细小病毒科(Parvoviridae)、小RNA病毒科(Picomaviridae)、痘病毒科(Poxviridae)(诸如天花(Smallpox)或牛痘(Vaccinia))、呼肠孤病毒科(Reoviridae)(例如轮状病毒)、逆转录病毒科(Retroviridae)(HTLV-I、HTLV-II、慢病毒属(Lentivirus))、披膜病毒科(Togaviridae)(例如风疹病毒属(Rubivirus))、新城疫病毒、西尼罗河热病毒(West Nile fever virus)、蜱媒脑炎(Tick borne encephalitis)、黄热病、屈曲病毒(chikungunya virus)、呼吸道合胞病毒、和登革病毒(所有血清型)。

在另一个实施方案中，来自病毒的特定蛋白质可以包含：来自流感病毒(包括禽流感病毒)的HA和/或NA、来自冠状病毒的S蛋白、来自HIV的gp160、gp140和/或gp41，来自呼吸道合胞病毒的F或G蛋白、来自黄热病毒、登革病毒(所有血清型)或任何黄病毒(flavivirus)的E和preM/M。还包括的是能在脊椎动物中诱导免疫应答(细胞的和/或体液的)的来自病毒的任何蛋白质，其可以预防、治疗、控制和/或改善所述脊椎动物中的传染病。

可以从中衍生所述感染原蛋白质的细菌的非限制性例子可以从下列各项衍生：百日咳杆菌(B.pertussis)、波摩那钩端螺旋体(Leptospira Pomona)、甲型和乙型副伤寒沙门氏菌(S.paratyphi A and B)、白喉棒杆菌(C.diphtheriae)、破伤风梭菌(C.tetani)、肉毒梭菌(C.botulinum)、产气荚膜梭菌(C.perfringens)、费氏梭菌(C.feseri)及其它气性坏疽细菌，炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)、鼠疫巴斯德氏菌(P.pestis)、多杀巴斯德氏菌(P.multocida)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseria meningitides)、淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrheae)、流感嗜血菌(Hemophilus influenzae)、放线菌属(Actinomyces)(例如诺卡氏菌属(Norcardia))、不动杆菌属(Acinetobacter)、芽胞杆菌科(Bacillaceae)(例如炭疽杆菌(Bacillus anthracis))、拟杆菌属(Bacteroides)(例如脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis))、芽生菌病(Blastomycosis)、博德特氏菌属(Bordetella)、疏螺旋体属(Borrelia)(例如布氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi))、布鲁氏菌属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、球孢子菌属(Coccidioides)、棒杆菌属(Corynebacterium)(例如白喉棒杆菌(Corynebacterium diptheriae))、大肠杆菌(E.coli)(例如肠产毒性大肠杆菌和肠出血性大肠杆菌)、肠杆菌属(Enterobacter)(例如产气肠杆菌(Enterobacteraerogenes))、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)(克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙门氏菌属(Salmonella)(例如伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis))、沙雷氏菌属(Serratia)、耶尔森菌属(Yersinia)、志贺氏菌属(Shigella))、丹毒丝菌属(Erysipelothrix)、嗜血杆菌属(Haemophilus)(例如乙型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type B))、螺杆菌属(Helicobacter)、军团菌属(Legionella)(例如侵肺军团菌(Legionellapneumophila))、钩端螺旋体属(Leptospira)、利斯特菌属(Listeria)(例如单核细胞增生利斯特菌(Listeria monocytogenes))、支原体属(Mycoplasma)、分枝杆菌属(Mycobacterium)(例如麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis))、弧菌属(Vibrio)(例如霍乱弧菌(Vibriocholerae))、巴斯德氏菌属(Pasteurellacea)、变形菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)(例如铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))、立克次氏体科(Rickettsiaceae)、螺体属(Spirochetes)(例如密螺旋体(Treponema spp.)、钩端螺旋体(Leptospira spp.)、疏螺旋体(Borrelia spp.))、志贺氏菌(Shigella spp.)、脑膜炎球菌属(Meningiococcus)、肺炎球菌属(Pneumococcus)和链球菌属(Streptococcus)(例如肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)和A组、B组、和C组链球菌)、尿枝原体属(Ureaplasmas)、苍白密螺旋体(Treponemapollidum)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、溶血巴斯德氏菌(Pasteurellahaemolytica)、白喉棒杆菌类毒素(Corynebacterium diptheriae toxoid)、脑膜炎球菌多糖(Meningococcal polysaccharide)、百日咳博德特氏菌(Bordetellapertusis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、破伤风梭菌类毒素(Clostridium tetani toxoid)、和牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)。

可以从中衍生所述感染原蛋白质的寄生物的非限制性例子如下：利什曼病(leishmaniasis)(墨西哥热带利什曼原虫(Leishmania tropica mexicana)、热带利什曼原虫(Leishmania tropica)、硕大利什曼原虫(Leishmania major)、埃塞俄比亚利什曼原虫(Leishmania aethiopica)、巴西利什曼原虫(Leishmaniabraziliensis)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、婴儿利什曼原虫(Leishmania infantum)、恰氏利什曼原虫(Leishmania chagasi))、锥虫病(trypanosomiasis)(冈比亚布氏锥虫(Trypanosoma brucei gambiense)、罗得西亚布氏锥虫(Trypanosoma brucei rhodesiense))、弓形体病(toxoplasmosis)(刚地弓形体(Toxoplasma gondii))、血吸虫病(schistosomiasis)(埃及血吸虫(Schistosomahaematobium)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、曼森氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、湄公血吸虫(Schistosoma mekongi)、间插血吸虫(Schistosoma intercalatum))、疟疾(间日疟原虫(Plasmodium virax)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparium)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)和卵形疟原虫(Plasmodium ovale))、阿米巴病(溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica))、巴贝西虫病(Babesiosis)(田鼠巴贝西虫(Babesiosis microti))、隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)(微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum))、双核阿米巴病(Dientamoebiasis)(脆弱双核阿米巴(Dientamoeba fragilis))、贾第虫病(Giardiasis)(兰氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblis))、蠕虫病(Helminthiasis)和毛滴虫属(Trichomonas)(阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis))。

可以衍生所述感染原蛋白质的真菌的非限制性例子来自下组：犁头霉属(Absidia)(例如伞状犁头霉(Absidia corymbifera))、阿耶罗菌属(Ajellomyces)(例如荚膜阿耶罗菌(Ajellomyces capsulatus)、皮炎组织胞浆菌(Ajellomycesdermatitidis))、节皮菌属(Arthroderma)(例如苯黑末节皮菌(Arthrodermabenhamiae)、粉节皮菌(Arthroderma fulvum)、石膏样节皮菌(Arthrodermagypseum)、内弯节皮菌(Arthroderma incurvatum)、太田节皮菌(Arthrodermaotae)、万博节皮菌(Arthroderma vanbreuseghemii))、曲霉属(Aspergillus)(例如烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger))、念珠菌属(Candida)(例如白念珠菌(Candida albicans)、白念珠菌星状变体(Candida albicans var.stellatoidea)、都柏林念珠菌(Candida dublinensis)、光滑念珠菌(Candidaglabrata)、吉利蒙念珠菌(Candida guilliermondii)(季也蒙毕赤酵母(Pichiaguilliermondii))、克鲁斯念珠菌(Candida krusei)(东方伊萨酵母(Issatschenkiaorientalis))、近平滑念珠菌(Candida parapsilosis)、菌膜滑念珠菌(Candidapelliculosa)(异常毕赤酵母(Pichia anomala))、热带念珠菌(Candidatropicalis))、球孢子菌属(Coccidioides)(例如粗球孢子菌(Coccidioidesimmitis))、隐球菌属(Cryptococcus)(例如新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)(新型线黑粉菌(Filobasidiella neoformans))、组织胞浆菌属(Histoplasma)(例如夹膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)(荚膜阿耶罗菌)、小孢子菌属(Microsporum)(例如犬小孢子菌(Microsporum canis)(太田节皮菌)、黄褐色小孢子菌(Microsporum fulvum)(粉节皮菌)、石膏样小孢子菌(Microsporumgypseum)、毕赤酵母属(Genus Pichia)(例如异常毕赤酵母、季也蒙毕赤酵母)、肺囊虫(Pneumocystis)(例如耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jirovecii))、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、糠秕马拉色菌(Malassezia furfur)、副球孢子菌(Paracoccidiodes)。上文的目录意图是例示性的，并且决不意图将发明限制于那些具体的细菌、病毒、真菌或寄生物生物体。

本发明还涵盖本发明VLP之上或之中所表达的所述糖蛋白(或蛋白质)的变体(包括所述嵌合物)。所述变体可以含有在组分蛋白质的氨基酸序列中的变化。术语“变体”就多肽而言指相对于参照序列改变了一个或多个氨基酸的氨基酸序列。变体可以具有“保守的”变化，其中用于替代的氨基酸具有类似的结构或化学特性，例如用异亮氨酸替换亮氨酸。或者，变体可以具有“非保守的”变化，例如用色氨酸替换甘氨酸。类似的次要变化还可以包括氨基酸缺失和/或插入。使用本领域公知的计算机程序，例如DNASTAR软件，可以找到确定哪些氨基酸残基可供取代、插入或缺失而不消除生物学活性或免疫学活性的指导。

描述可应用于本发明的分子生物学技术(诸如克隆、突变、细胞培养等)的通用教科书包括Berger和Kimmel，Guide to Molecular Cloning Techniques，Methods于Enzymology卷152Academic Press，Inc.，San Diego，Calif.(Berger)；Sambrook等，Molecular Cloning-A Laboratory Manual(第3版)，卷1-3，ColdSpring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor，N.Y.，2000(“Sambrook”)和Current Protocols in Molecular Biology，F.M.Ausubel等编，Current Protocols，ajoint venture between Greene Publishing Associates，Inc.and John Wiley & Sons，Inc.，(“Ausubel”)。这些教科书描述了诱变、载体的应用、启动子和许多其它相关的主题，所述主题涉及例如VZV的gE、gI、gM、gH、gB或间层蛋白的克隆和突变等。如此，本发明还涵盖使用已知的蛋白质工程和重组DNA技术的方法来改进或改变在本发明VLP之上或之中表达的蛋白质的特性。可以使用多种类型的诱变来产生和/或分离编码蛋白质分子的变体核酸和/或进一步修饰/突变本发明VLP之中或之上的蛋白质。它们包括但不限于定点诱变、随机点诱变、同源重组(DNA改组)、使用含尿嘧啶模板进行的诱变、寡核苷酸指导的诱变(oligonucleotide-directed mutagenesis)、硫代磷酸酯修饰的DNA诱变、使用缺口双链体DNA的诱变等。其它合适的方法包括点错配修复(pointmismatch repair)、使用修复缺陷的宿主株的诱变，限制选择和限制纯化、缺失诱变、通过全基因合成的诱变、双链断裂修复等。

克隆本发明VZV蛋白的方法是本领域已知的。例如，可以从感染了VZV病毒的细胞提取多聚腺苷酸化mRNA，通过RT-PCR从中分离出编码特定VZV蛋白的基因。所得的产物基因可以作为DNA插入物克隆入载体中。术语“载体”指可用于扩增(propagate)核酸和/或在生物体、细胞、或细胞组分之间转移核酸的手段。载体包括自主复制或可整合入宿主细胞的染色体中的质粒、病毒、噬菌体、原病毒、噬菌粒、转座子、人工染色体等。载体还可以是非自主复制性的裸RNA多核苷酸、裸DNA多核苷酸、在同一条链内由DNA和RNA两者组成的多核苷酸、聚赖氨酸缀合的DNA或RNA、肽缀合的DNA或RNA、脂质体缀合的DNA等。在许多但不是所有的常见实施方案中，本发明的载体是质粒。

如此，本发明包括克隆入表达载体的编码蛋白质的核苷酸，所述载体可在细胞中表达，诱导本发明嵌合VLP的形成。“表达载体”是能够促进掺入其中的核酸的表达以及复制的载体，诸如质粒。通常，要表达的核酸与启动子和/或增强子“可操作连接”，并受该启动子和/或增强子的转录调节控制。在一个实施方案中，所述核苷酸编码VZV gE(ORF 68)蛋白。在另一个实施方案中，所述载体包含如下的核苷酸，其编码VZV gE和至少一种另外的来自感染源的蛋白。在另一个实施方案中，所述载体包含如下的核苷酸，其编码VZV gE蛋白和gI(ORF 67)、gM(ORF 50)、gH、gB和/或间层VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述表达载体是杆状病毒载体。

在本发明的一些实施方案中，蛋白质可以包含含有如下变化的突变，所述变化产生沉默的取代、添加或缺失，但是不改变所编码蛋白质的特性或活性或者生成所述蛋白质的方式。可以出于多种原因而产生核苷酸变体，例如为了针对特定宿主优化密码子表达(将人mRNA中的密码子改变为昆虫细胞诸如Sf9细胞优选的那些密码子)。

另外，可对核苷酸测序以确保正确的编码区得到克隆，且不含有任何不想要的突变。可以将所述核苷酸亚克隆入表达载体(例如杆状病毒)中用于在任意细胞中表达。上文仅仅是如何能够克隆VZV病毒蛋白的一个例子。本发明技术人员应当理解的是，其它方法也是可用和可能的。

本发明还提供了如下的构建体和/或载体，其包含编码VZV蛋白(包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白、或其部分)的VZV核苷酸。所述载体可以是例如噬菌体、质粒、病毒、或逆转录病毒载体。包含VZV基因(包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白、或其部分)的构建体和/或载体应当与合适的启动子可操作连接，诸如AcMNPV多角体蛋白启动子(或其它杆状病毒)、λ噬菌体PL启动子、大肠杆菌lac、phoA和tac启动子、SV40早期和晚期启动子、和逆转录病毒LTR的启动子是非限制性例子。根据想要的宿主细胞和/或表达率，本领域技术人员会知道其它合适的启动子。表达构建体将进一步含有转录起始位点、终止位点、以及被转录区中用于翻译的核糖体结合位点。所述构建体所表达的转录物的编码部分优选在要翻译的多肽的起始处包含翻译起始密码子，而在该多肽末尾处的合适位置上含有终止密码子。

表达载体将优选包含至少一种选择标志物。此类标志物包括用于真核细胞培养的二氢叶酸还原酶、G418或新霉素抗性，以及用于培养大肠杆菌和其它细菌的四环素、卡那霉素或氨苄青霉素抗性基因。优选的载体包括病毒载体，诸如杆状病毒、痘病毒(例如牛痘病毒、禽痘病毒(avipox virus)、金丝雀痘病毒、禽痘病毒(fowlpox virus)、浣熊痘病毒、猪痘病毒等)、腺病毒(例如犬腺病毒)、疱疹病毒和逆转录病毒。可与本发明一起使用的其它载体包括用于细菌的载体，包括pQE70、pQE60和pQE-9，pBluescript载体、Phagescript载体、pNH8A、pNH16a、pNH18A、pNH46A、ptrc99a、pKK223-3、pKK233-3、pDR540、pRIT5。优选的真核载体是pFastBacl pWINEO、pSV2CAT、pOG44、pXT1和pSG、pSVK3、pBPV、pMSG、和pSVL。其它合适的载体会是本领域技术人员显而易见的。

接下来，上文所提及的重组构建体可以用来转染、感染、或转化入真核细胞和/或原核细胞中，并且可以表达VZV蛋白，包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。如此，本发明提供了包含载体(或多个载体)的宿主细胞，所述载体含有的核酸编码VZV蛋白，包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分，并且允许在容许形成VLP的条件下在所述宿主细胞中表达VZV基因，包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。

真核宿主细胞包括酵母、昆虫、两栖动物、禽类、植物、秀丽隐杆线虫(C.elegans)(或线虫)和哺乳动物宿主细胞。昆虫细胞的非限制性例子有：草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)(Sf)细胞、例如Sf9、Sf21，粉纹夜蛾(Trichoplusiani)细胞，例如High Five细胞，和果蝇(Drosophila)S2细胞。真菌(包括酵母)宿主细胞的例子有酿酒酵母(S.cerevisiae)、乳克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis；K.lactis)、假丝酵母属(Candida)菌种包括白色假丝酵母(C.albicans)和光滑假丝酵母(C.glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe；S.pombe)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、和解脂西洋蓍霉(Yarrowia lipolytica)。哺乳动物细胞的例子有COS细胞、幼仓鼠肾细胞、小鼠L细胞、LNCaP细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾(HEK)细胞和非洲绿猴细胞、CV1细胞、HeLa细胞、MDCK细胞、Vero和Hep-2细胞。非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞，或两栖动物来源的其它细胞也可以使用。原核宿主细胞包括细菌细胞，例如大肠杆菌、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)和分枝杆菌。

可以依照本领域公知的方法将载体，例如包含VZV gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分的多核苷酸的载体转染入宿主细胞中。例如，可以通过磷酸钙共沉淀、电穿孔、显微注射、脂转染、和采用多胺转染试剂的转染来将核酸导入真核细胞中。在一个实施方案中，所述载体是重组杆状病毒。在另一个实施方案中，所述重组杆状病毒被转染入真核细胞中。在一个优选的实施方案中，所述细胞是昆虫细胞。在另一个实施方案中，所述昆虫细胞是Sf9细胞。

在另一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞包含如下的核苷酸，所述核苷酸编码VZV蛋白gE、或其部分。在另一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞基本上由编码VZV蛋白gE、或其部分的核苷酸组成。在又一个实施方案中，所述载体和/或宿主细胞包含如下的核苷酸，其编码嵌合VZV蛋白gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分。上文所描述的载体和/或宿主细胞含有VZV gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白、或其部分，和任选地任何来自感染源的另外的蛋白质，并且可以含有另外的细胞组分，诸如细胞蛋白、杆状病毒蛋白、脂质、碳水化合物等，但是不含Ty转座子或任何由Ty转座子编码的蛋白质。

本发明还提供了生成VLP的方法，所述方法包括在容许VLP形成的条件下表达VZV基因(包括gE、gI、gM、gH、gB、间层蛋白或其部分)和任选地来自感染原的任何另外的蛋白质。根据所选的表达系统和宿主细胞，在表达重组蛋白和形成VLP的条件下通过培养用表达载体转化的宿主细胞来生成VLP。在一个实施方案中，本发明包含生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并在容许VLP形成的条件下表达所述VZV gE蛋白。在另一个实施方案中，所述真核细胞选自由酵母细胞、昆虫细胞、两栖动物细胞、禽类细胞或哺乳动物细胞组成的组。合适的培养条件的选择在本领域普通技术人员的技术之内。

培养经过工程化改造而生成本发明VLP的细胞的方法包括但不限于分批、分批补料、连续和灌注(perfusion)细胞培养技术。细胞培养意思是在生物反应器(发酵室)中使细胞生长和增殖，细胞在生物反应器中增殖并表达蛋白(例如重组蛋白)以供纯化和分离用。典型地，细胞培养在生物反应器中无菌、受控的温度和大气条件下进行。生物反应器是用于培养细胞的腔室(chamber)，其中可以监控环境条件诸如温度、大气、搅拌和/或pH。

然后使用保持VLP完整性的方法来分离VLP，诸如通过梯度离心，例如氯化铯、蔗糖和碘克沙醇(iodixanol)梯度离心，以及标准纯化技术，包括例如离子交换和凝胶过滤层析。在一个实施方案中，本发明包含本发明的纯化的VLP。在另一个实施方案中，本发明的所述VLP至少50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多地没有混合物中存在的其它分子(不包括溶剂在内)。在另一个实施方案中，本发明的所述VLP基本上没有与制备本发明的VLP有关的其它病毒、蛋白质、脂质、和碳水化合物。以下是可以如何制备、分离和纯化本发明的VLP的一个例子。通常，VLP是由重组细胞系生成的，所述细胞系经过工程化改造从而当所述细胞在细胞培养(见上文)中生长时产生VLP。本领域技术人员应当理解的是，可以使用其它的方法来制备和纯化本发明的VLP，如此本发明不限于所述的方法。

本发明VLP的生产可首先将Sf9细胞(未感染的)接种到摇瓶中，使细胞随着细胞生长繁殖而膨胀和规模放大(例如从125ml烧瓶到50L Wave袋)。培养细胞所用的培养基是为合适的细胞系配制的(优选无血清培养基，例如昆虫培养基ExCell-420，JRH)。接着，用重组杆状病毒以效率最高的感染复数(例如每个细胞约1个到约3个噬斑形成单位)感染所述细胞。一旦发生感染，VZV gE和/或其它蛋白质自装配成VLP，并在感染后大约24到72小时从细胞分泌。通常，在细胞处于生长的对数中期(mid-log phase)(4-8x10⁶个细胞/ml)且至少约90％存活时，感染效率最高。

可以在感染后大约48到96小时，在细胞培养基中VLP水平接近最大值但在广泛的细胞溶解之前收获本发明的VLP。收获时的Sf9细胞密度和生存力可以为：约0.5x10⁶个细胞/ml至约1.5x10⁶个细胞/ml，生存力至少为20％，如染料排除测定法所示。接着，取出培养基并将其澄清。可以向培养基添加NaCl至浓度为约0.4至约1.0M，优选至约0.5M，以避免VLP聚集。可利用一次性使用的预灭菌中空纤维0.5或1.00μm筒式滤器或类似的装置，通过切向流过滤(TFF)来实现从含有本发明VLP的细胞培养基中除去细胞和细胞碎片。

接着，可以使用一次性的、预灭菌的500,000分子量截留中空纤维筒通过超滤来浓缩经过澄清的培养基中的VLP。可以将经过浓缩的VLP对10倍体积的含0.5M NaCl的pH 7.0至8.0的磷酸盐缓冲盐水(PBS)进行渗滤(diafiltrate)来除去残余的培养基成分。可以将经过浓缩、渗滤的VLP在含0.5M NaCl的pH7.2PBS缓冲液中20％-60％不连续蔗糖梯度上，于约4℃至约10℃以6,500xg离心18小时来进一步纯化。通常，VLP将在约30％至约40％蔗糖之间或者在界面上(在20％和60％的分步梯度中)形成显著可见的条带，可从该梯度中收集该条带并保存。可稀释该产物使其包含200mM NaCl，以准备纯化过程的下一步。该产物含有VLP，并可能含有完整的杆状病毒颗粒。

可以通过阴离子交换层析或者44％等密度蔗糖垫层(cushion)离心来实现VLP的进一步纯化。在阴离子交换层析中，将来自蔗糖梯度(见上文)的样品上样入含有带阴离子的介质(例如Matrix Fractogel EMD TMAE)的柱中，并经由盐梯度(从约0.2M至约1.0M NaCl)洗脱，该梯度可以将VLP与其它杂质(例如杆状病毒和DNA/RNA)分开。在蔗糖垫层方法中，将包含VLP的样品添加到44％蔗糖垫层，并在30,000g离心约18小时。VLP在44％蔗糖的顶部形成条带，而杆状病毒沉淀于底部，其它污染蛋白停留在顶部的0％蔗糖层中。收集VLP峰或VLP带。

若想要的话，可以将完整的杆状病毒灭活。可以通过化学方法，例如甲醛或β-丙内酯(BPL)灭活。还可以使用本领域已知的选择性沉淀和层析方法，如上文例示的，来大部分实现完整杆状病毒的除去和/或灭活。灭活方法包括将含有VLP的样品在0.2％BPL中于约25℃至约27℃温育3小时。还可以通过将含有VLP的样品在0.05％BPL于4℃温育3天，然后在37℃温育1小时，来灭活杆状病毒。

灭活/除去步骤后，可使含有VLP的产物运行经过另一渗滤步骤以除去任何来自灭活步骤的试剂和/或任何残余的蔗糖，并将VLP置入期望的缓冲液(例如PBS)中。包含VLP的溶液可以通过本领域已知的方法(例如无菌过滤)灭菌，并保存在冰箱或冷冻箱中。

上文的技术可以在多种规模上实施。例如，T形瓶(T-flasks)、摇瓶、转瓶(spinner bottle)、乃至工业尺寸的生物反应器。生物反应器可包括不锈钢罐或预灭菌的塑料袋(例如，Wave Biotech，Bridgewater，NJ出售的系统)。本领域技术人员会知道用于其目的的最佳选择。

药物或疫苗配制剂和施用

本文中有用的药物组合物含有本发明的VLP和药学可接受载体(包括任何合适的稀释剂或赋形剂)，所述药学可接受载体包括本身不诱导产生对接受该组合物的脊椎动物有害的免疫应答、并且可以不带有异常毒性地(without undue toxicity)施用的任何药剂。如本文中所使用的，术语“药学可接受的”指获得联邦或州政府监管部门批准，或者在美国药典、欧洲药典或其它公认的药典中列出的用于哺乳动物，更具体地用于人类中。这些组合物可以用作疫苗和/或抗原性配制剂，用于在脊椎动物中诱导保护性免疫应答。本发明涵盖抗原性配制剂，其包含如下的VLP，所述VLP包含VZV gE蛋白，但不包括VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述抗原性配置及包含基本上由gE蛋白组成的VLP。在另一个实施方案中，所述抗原性配制剂包含如下的VLP，其包含至少一种另外的掺入VLP中的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI(ORF 67)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(ORF 50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。在另一个实施方案中，所述VZV VLP不包含VZV壳体蛋白(例如ORF 20、ORF 40、ORF 41)。

本发明还包括抗原性配制剂，其包含如下的嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

本发明还提供抗原性配制剂，其包含纯化的嵌合VLP，所述纯化的嵌合VLP包含VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gM(ORF50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

通常，疫苗包含本发明组合物悬浮或溶解于其中的常规盐水或缓冲的水溶液介质。处于这种形式，便可以方便地使用本发明的组合物以预防、改善或以其它方式治疗感染。导入宿主中后，疫苗能够刺激免疫应答，包括但不限于抗体和/或细胞因子的生成和/或细胞毒性T细胞、抗原呈递细胞、辅助T细胞、树突细胞的活化和/或其它细胞应答。

本发明还包括疫苗配制剂，其包含如下的VLP，所述VLP包含VZV gE蛋白，但不包括VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述疫苗配制剂包含基本上由gE蛋白组成的VLP。在另一个实施方案中，所述疫苗配制剂包含如下的VLP，其包含至少一种另外的掺入VLP中的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI(ORF 67)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(ORF 50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。在另一个实施方案中，所述嵌合VZV VLP不包含VZV壳体蛋白(例如ORF 20、ORF40、ORF 41)。

本发明还包括疫苗配制剂，其包含如下的嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

本发明还提供疫苗配制剂，其包含嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

本发明的所述抗原性和疫苗配制剂包含如上文所描述的本发明的VLP和药学可接受载体或赋形剂。药学可接受载体包括但不限于盐水、缓冲盐水、葡萄糖(dextrose)、水、甘油、无菌等渗缓冲水溶液，和它们的组合。对药学可接受载体、稀释剂和其它赋形剂的全面讨论呈现于Remington’sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.N.J.current edition)中。配制剂应当适合施用模式。在一个优选的实施方案中，配制剂适于给人施用，优选是无菌、非颗粒性(non-particulate)和/或非热原性的。

若想要的话，药学组合物还可以含有小量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。组合物可以是固体形式，诸如适于重构的冻干粉末；液体溶液；悬液；乳液；片剂；丸剂；胶囊；持续释放配制剂；或粉剂。口服配制剂可包括标准的载体，诸如药品级的甘露糖醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。

本发明提供了VLP配制剂包装在标示组合物量的密封容器诸如安瓿或小药囊(sachette)中。在一个实施方案中，所述VLP组合物作为液体提供，在另一个实施方案中，作为密封容器中的干燥无菌冻干粉末或无水浓缩物提供，并且可以用例如水或盐水重构为用于向受试者施用的合适浓度。

在一个可选的实施方案中，在标示VLP组合物的量和浓度的密封容器中以液体形式提供VLP组合物。优选地，在密封容器中以至少约50μg/ml、更优选至少约100μg/ml、至少约200μg/ml、至少500μg/ml、或至少1mg/ml提供液体形式的VLP组合物。

一般而言，本发明的VZV VLP以足以刺激针对一种或多种VZV毒株的免疫应答的有效量或数量施用。优选地，施用本发明的VLP引发针对VZV的免疫。典型地，可以根据例如年龄、身体健康状况(physical condition)、体重、性别、饮食、施用时间和其它临床因素，在该范围内调节该剂量。预防性疫苗配制剂是全身施用的，例如通过使用针头和注射器或无针头注射装置进行皮下或肌内注射来施用。或者，疫苗配制剂是鼻内施用的，通过滴剂、大颗粒气溶胶(大于约10微米)、或喷雾入上呼吸道中。虽然上文的任何递送途径均导致免疫应答，但鼻内施用还带来额外的益处，即在许多病毒(包括VZV)进入的部位引发粘膜免疫。

如此，本发明还包括诱导哺乳动物中针对感染或其至少一种症状的免疫的疫苗或抗原性组合物的配制方法，包括向所述配制剂添加有效剂量的VZVVLP。在一个实施方案中，所述感染是VZV感染。“有效剂量”一般指足以诱导免疫、预防和/或改善感染或减轻至少一种感染症状、和/或增强另一剂VLP的功效的本发明VLP的量。有效剂量可以指足以延迟感染发作或使之最小化的VLP的量。有效剂量还可以指在感染的治疗或控制中提供治疗益处的VLP的量。此外，有效剂量是就单独的或与其它疗法组合在感染的治疗或控制中提供治疗益处的本发明VLP而言的量。有效剂量还可以是足以增强受试者(例如人)自己针对后来向感染原暴露的免疫应答的量。免疫水平可以通过例如测量中和性分泌抗体和/或血清抗体的量来加以监测，所述测量例如通过噬斑中和(plaque neutralization)、补体结合(complement fixation)、酶联免疫吸附、或微中和(microneutralization)测定法来进行。在疫苗的情况中，“有效剂量”是预防疾病和/或降低症状严重性的剂量。

虽然优选用单剂刺激免疫，但是可以通过相同或不同路径施用额外的剂量，以达到想要的效果。例如在新生儿和婴儿中，可能需要多次施用来引发足够的免疫水平。按照维持足够水平的抗感染(例如VZV感染)保护的需要，可以在整个儿童期以一定间隔继续进行施用。类似地，特别容易受到反复或严重的感染的成年人，例如卫生保健工作者、日间护理工作者、幼儿的家人、老年人、以及心肺功能受损的个体等，可能需要进行多次免疫来建立和/或维持保护性免疫应答。可以通过例如测量中和性分泌和血清抗体的量来监测诱导产生的免疫的水平，并按照引发和维持期望的保护水平的需要来调整剂量或重复接种。

包含VLP的组合物(疫苗和/或抗原性配制剂)的施用方法包括，但不限于，胃肠外施用(例如皮内、肌内、静脉内和皮下)、硬膜外、和粘膜(例如鼻内和口腔或肺途径或通过栓剂)。在一个具体实施方案中，本发明的组合物通过口服、皮内、鼻内、肌内、腹膜内、静脉内或皮下施用。组合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或推注，通过经由上皮或粘膜皮肤衬里(例如口腔粘膜、结肠、结膜、鼻咽、口咽、阴道、尿道、膀胱和肠粘膜等)的吸收，并且可以与其它生物学活性剂一起施用。在一些实施方案中，含本发明VLP的组合物的鼻内或其它粘膜施用途径可以诱导显著高于其它施用途径的抗体或其它免疫应答。在另一个实施方案中，含本发明VLP的组合物的鼻内或其它粘膜施用途径可诱导这样的抗体或其它免疫应答，所述抗体或其它免疫应答会诱导针对其它VZV毒株的交叉保护。施用可以是全身性的或者是局部的。

本发明的疫苗和/或抗原性配制剂还可以按照剂量日程表(dosageschedule)来施用，例如用疫苗组合物进行初次施用，随后进行加强施用。在具体的实施方案中，第二剂组合物在初次施用后大约两周至一年的任何时间，优选约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月到约6个月施用。另外，可以在第二剂之后，且在距初次施用后约3个月至约两年甚至更长时间，优选约4个月、约5个月、或者约6个月、或者约7个月至约1年施用第三剂。在第二剂后在受试者的血清和/或尿或者粘膜分泌物中没有检测到或者检测到低水平的特异性免疫球蛋白时，可任选地施用第三剂。在一个优选的实施方案中，第二剂在第一次施用后约1个月施用，而第三剂在第一次施用后约6个月施用。在另一个实施方案中，第二剂在第一次施用后约6个月施用。在另一个实施方案中，所述本发明的VLP可以作为联合疗法的一部分施用。例如，本发明的VLP可以与其它免疫原性组合物、抗病毒剂和/或抗生素一起配制。

技术人员可以容易地确定药物配制剂的剂量，例如通过首先鉴定有效引发预防性或治疗性免疫应答的剂量，例如通过测量病毒特异性免疫球蛋白的血清效价或通过测量血清样品或尿样品或粘膜分泌物中抗体的抑制比。所述剂量可以由动物研究确定。用于研究疫苗功效的动物的非限制性目录包括豚鼠、仓鼠、雪貂(ferret)、灰鼠(chinchilla)、小鼠和棉鼠。大多数动物不是感染原的天然宿主，但仍可用于该疾病的各个方面的研究。例如，可以对任何上文的动物定量给予疫苗候选物，例如本发明的VLP，以部分地表征所诱发的免疫应答，和/或确定是否生成了任何中和性抗体。例如，已经在小鼠模型中进行了许多研究，因为小鼠体型小，而且它们的成本低使得研究者可以进行更大规模研究。

另外，技术人员可以进行人体临床研究来确定用于人的优选有效剂量。这样的临床研究是常规的，且为本领域公知。要使用的确切剂量还将依赖于施用途径。可以从源自体外或动物试验系统的剂量-应答曲线外推得到有效剂量。

如本领域中还公知的，可以使用免疫应答的非特异性刺激物来增强特定组合物的免疫原性，这样的刺激物称为佐剂。术语“佐剂”指这样的化合物，在其与特定的免疫原(例如VLP)在配制剂中组合使用时，会增进或以其它方式改变或修饰由此所致的免疫应答。对免疫应答的修饰包括对抗体和/或细胞免疫应答的强化或使其特异性增宽。对免疫应答的修饰还可以意味着降低或抑制某些抗原特异性免疫应答。实验上已经使用佐剂来促进针对未知抗原的免疫的普遍增加(例如美国专利号4,877,611)。免疫规程使用佐剂来刺激应答已有多年，因此，本领域普通技术人员对佐剂是熟知的。有些佐剂影响抗原呈递的方式。例如，在蛋白抗原被明矾沉淀时，免疫应答增加。抗原的乳化也延长抗原呈递的持续时间。本发明的范围意图涵盖Vogel等，“ACompendium of Vaccine Adjuvants and Excipients(第2版)，”(本文通过提述收录该文献全部内容用于所有目的)中所述任何佐剂。

例示性的佐剂包括完全弗氏佐剂(一种免疫应答的非特异性刺激物，含有已杀死的结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis))、不完全弗氏佐剂和氢氧化铝佐剂。其它佐剂包括GMCSP、BCG、氢氧化铝、MDP化合物诸如thur-MDP和nor-MDP、CGP(MTP-PE)、脂质A和单磷酰脂质A(MPL)。还设想使用RIBI，其在2％角鲨烯/Tween 80乳剂中含有从细菌提取的3种成分：MPL、海藻糖二霉菌酸(TDM)和细胞壁骨架(CWS)。还可以使用MF-59、NovasomesMHC抗原。

在本发明的一个实施方案中，所述佐剂是少片层(paucilamellar)脂质小泡，其具有大约2到10个双层，它们排列成多个基本呈球形的壳的形式，其由水性层隔开，所述水性层围绕着不含脂质双层的无定形中心大空腔。少片层脂质小泡可以通过数种方式起作用来刺激免疫应答：作为非特异性刺激物、作为抗原的载体、作为其它佐剂的载体，以及这些方式的组合。例如，在通过混合抗原与预先形成的小泡，使得抗原相对于小泡保持在胞外的方法制备疫苗时，少片层脂质小泡起非特异性免疫刺激物的作用。通过将抗原包囊在小泡的中心空腔中，小泡起到免疫刺激物和抗原载体两方面的作用。在另一个实施方案中，小泡主要由非磷脂小泡构成。在其它实施方案中，小泡是Novasomes

Novasomes是约100nm到约500nm范围的少片层非磷脂小泡。它们包含Brij 72、胆固醇、油酸和角鲨烯。Novasomes已被证明是流感抗原的有效佐剂(参见美国专利5,629,021、6,387,373和4,911,928，本文通过提述收录它们的全部内容用于所有目的)。

本发明的VLP还可以与“免疫刺激物”一起配制。术语“免疫刺激物”指经由身体自身的化学信使(细胞因子)增强免疫应答的化合物。这些分子包括具有免疫刺激、免疫强化和促炎症活性的各种细胞因子、淋巴因子和趋化因子，诸如白介素(例如IL-I、IL-2、IL-3、IL-4、IL-12、IL-13)；生长因子(例如粒细胞-巨噬细胞(GM)集落刺激因子(CSF))；及其它免疫刺激分子，诸如巨噬细胞炎性因子、Flt3配体、B7.1；B7.2等。免疫刺激物分子可以在与本发明VLP相同的配制剂中施用，或者可以分开施用。可以施用蛋白质或编码该蛋白质的表达载体来产生免疫刺激效应。如此，在一个实施方案中，本发明包含包含佐剂和/或免疫刺激物的抗原性和疫苗配制剂。

刺激免疫应答的方法

本发明的VLP可用于制备刺激赋予针对感染原的免疫或实质免疫(substantial immunity)的免疫应答的组合物。粘膜和细胞免疫两者可以促成针对感染原和疾病的免疫。上呼吸道中局部分泌的抗体是抗天然感染的主要因子。分泌性免疫球蛋白A(sIgA)牵涉对上呼吸道的保护，而血清IgG牵涉对下呼吸道的保护。对呼吸道的保护在VZV感染的情况下是重要的，因为不像其它疱疹病毒，VZV可经由呼吸系统传染。由感染诱导的免疫应答针对用相同病毒或在抗原方面类似的病毒株的再次感染进行保护。

本发明的VLP可以刺激抗体的生成，所述抗体能例如中和感染原、阻断感染原进入细胞、阻断所述感染原的复制、和/或保护宿主免于感染和破坏。所述术语还指如下的免疫应答，其由针对感染原的T淋巴细胞和/或其它白细胞介导，由脊椎动物(例如人)展现，预防或改善VZV感染或减轻它的至少一种症状。

本发明包括在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，其包括给所述受试者施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含VZV gE蛋白，但是不包括VZV核酸或酵母Ty蛋白。在一个实施方案中，所述感染是由病毒引起的。在另一个实施方案中，所述感染是由真菌引起的。在另一个实施方案中，所述感染是由寄生物引起的。在另一个实施方案中，所述感染是由细菌引起的。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP基本上由VZV gE蛋白组成。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP源自包含克隆的VZVgE的重组表达系统。在另一个实施方案中，所述VZV-VLP包含至少一种掺入VLP中的另外的VZV蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI(ORF 67)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gM(ORF50)蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含间层蛋白。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白包含gI、gM、gH、gB或间层蛋白的组合。

本发明的另一个实施方案包括在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，其包括给所述受试者施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

本发明还提供在受试者中诱导针对感染的保护性免疫的方法，包括向所述受试者施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VZV-VLP包含嵌合VLP，所述嵌合VLP包含VZV gE蛋白、至少一种来自VZV的其它蛋白质、和至少一种来自另一种感染原的蛋白质。在一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gI(ORF 67)。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是gM(ORF 50)。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gH。在另一个实施方案中，所述另外的VZV蛋白是gB。在另一个实施方案中，所述来自VZV的其它蛋白质是间层蛋白。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是病毒蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是细菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是真菌蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质是来自寄生物的蛋白质。在另一个实施方案中，所述来自另一种感染原的蛋白质在VLP的表面上表达。

如上文所提及的，本发明的VLP预防或减少受试者中VZV感染的至少一种症状。由VZV感染引起的两种疾病的症状是本领域公知的。由初次VZV感染产生的禽痘(水痘)的症状包括发热、不适、头痛、腹痛、疲劳、食欲缺乏、和主要在头皮、面部、和躯干上发生的皮肤损伤(skin lesion)。源自于潜伏VZV的再活化的带状疱疹的特征在于下列症状：通常在胸部生皮节单侧出现的皮疹、急性神经炎痛(neuritic pain)、和超敏感性。如此，本发明的方法包括预防或减轻与VZV感染有关的至少一种症状。症状的减轻可以主观地或者客观地确定，例如通过受试者的自我评估、由内科医生评估、或通过实施合适的测定或测量(例如体温)，包括例如生活质量评价、VZV感染或其它症状的进展减慢、VZV症状的严重程度降低或者合适的测定法(例如抗体效价和/或T细胞活化测定法)。客观评价包括动物和人的评价。

通过下面的实施例进一步例示本发明，这些实施例不应解释为限制性的。本文通过提述收录本申请中引用的所有参考文献、专利和已公开的专利申请，以及附图的内容用于所有目的。

实施例

实施例1

细胞、病毒、和构建体

将草地夜蛾Sf9昆虫细胞(ATCC CRL-1711)于28℃作为HyQ-SFX昆虫无血清培养基(HyClone，Logan，UT)中的悬浮培养物维持。将Bac-to-Bac(细菌至细菌)杆状病毒表达系统(Invitrogen，Carlsbad，CA)与大肠杆菌DH10Bac细胞中的pFastBacl转移载体一起使用以产生表达流感基因的重组杆状病毒载体。

VZV基因基于GenBank序列NC_001348。对编码蛋白质(参见下文)的基因进行密码子优化以在Sf9细胞中高水平的表达，并于GeneArt(Regensburg，Germany)合成。将合成的基因转移入pFastBac1中，在AcMNPV多角体蛋白启动子的下游，如先前关于流感病毒所详细描述的(Pushko等，2005.)。

如下产生重组杆状病毒，即将含有感兴趣的VZV基因的转移质粒转化入大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中后进行位点特异性同源重组，所述大肠杆菌DH10Bac感受态细胞含有AcMNPV杆状病毒基因组(Invitrogen)。从大肠杆菌细胞提取重组杆粒(bacmid)DNA，并使用CellFectin(Invitrogen)转染入Sf9细胞中。回收重组杆状病毒，进行噬斑纯化、扩增，并通过使用Sf9细胞进行的琼脂糖噬斑测定法来测定重组杆状病毒储液(stock)的效价。

以下是在rBV载体中克隆和表达并针对VLP形成进行评估的VZV蛋白和基因序列的列表：

ORF50 3型包膜糖蛋白MMGTQKKGPRSEKVSPYDTTTPEVEALDHQMDTLNWRIWIIQVMMFTLGAVMLLATLIAASSEYTGIPCFYAAVVDYELFNATLDGGVWSGNRGGYSAPVLFLEPHSVVAFTYYTALTAMAMAVYTLITAAIIHRETKNQRVRQSSGVAWLVVDPTTLFWGLLSLWLLNAVVLLLAYKQIGVAATLYLGHFATSVIFTTYFCGRGKLDETNIKAVANLRQQSVFLYRLAGPTRAVFVNLMAALMAICILFVSLMLELVVANHLHTGLWSSVSVAMSTFSTLSVVYLIVSELILAHYIHVLIGPSLGTLVACATLGTAAHSYMDRLYDPISVQSPRLIPTTRGTLACLAVFSVVMLLLRLMRAYVYHRQKRSRFYGAVRRVPERVRGYIRKVKPAHRNSRRTNYPSQGYGYVYENDSTYETDREDELLYERSNSGWE(SEQID NO：1)

ORF62转录调节子ICP4MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARVVTSSQPDDLLFGENGVMVGREHEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAREPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQREDQRSIPRQTTRGNSPGLPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGVVLQKTQRPAQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPRKHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSSWGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSISGPDPRIRKTKRLAGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRVRFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDPIAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHAAAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQAPDPQPSAAARSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHVVSKAKRRVSEPVTITSGPVVDPPAVITMPLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIARLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIAARRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDPEDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSVVLAALSNRLCLPSTHAWAGNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDGPALSQYHVYVRAPARPDAQAVVRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLYPGEQPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRQYVLPGFDGCKDLARQSRGLGLGAADFVDEAAHSHRAANRWGLGAALRPVFLPEGRRPGAAGPEAGDVPTWARVFCRHALLEPDPAAEPLVLPPVAGRSVALYASADEARNALPPIPRVMWPPGFGAAETVLEGSDGTRFVFGHHGGSERPSETQAGRQRRTADDREHALELDDWEVGCEDAWDSEEGGGDDGDAPGSSFGVSIVSVAPGVLRDRRVGLRPAVKVELLSSSSSSEDEDDVWGGRGGRSPPQSRG(SEQID NO：2)

ORF63调节蛋白ICP22MFCTSPATRGDSSESKPGASVDVNGKMEYGSAPGPLNGRDTSRGPGAFCTPGWEIHPARLVEDINRVFLCIAQSSGRVTRDSRRLRRICLDFYLMGRTRQRPTLACWEELLQLQPTQTQCLRATLMEVSHRPPRGEDGFIEAPNVPLHRSALECDVSDDGGEDDSDDDGSTPSDVIEFRDSDAESSDGEDFIVEEESEESTDSCEPDGVPGDCYRDGDGCNTPSPKRPQRAIERYAGAETAEYTAAKALTALGEGGVDWKRRRHEAPRRHDIPPPHGV(SEQ ID NO：3)

Orf9间层蛋白VP22MASSDGDRLCRSNAVRRKTTPSYSGQYRTARRSVVVGPPDDSDDSLGYITTVGADSPSPVYADLYFEHKNTTPRVHQPNDSSGSEDDFEDIDEVVAAFREARLRHELVEDAVYENPLSVEKPSRSFTKNAAVKPKLEDSPKRAPPGAGAIASGRPISFSTAPKTATSSWCGPTPSYNKRVFCEAVRRVAAMQAQKAAEAAWNSNPPRNNAELDRLLTGAVIRITVHEGLNLIQAANEADLGEGASVSKRGHNRKTGDLQGGMGNEPMYAQVRKPKSRTDTQTTGRITNRSRARSASRTDTRK(SEQID NO：4)

Orf10间层蛋白VP16MECNLGTEHPSTDTWNRSKTEQAVVDAFDESLFGDVASDIGFETSLYSHAVKTAPSPPWVASPKILYQQLIRDLDFSEGPRLLSCLETWNEDLFSCFPINEDLYSDMMVLSPDPDDVISTVSTKDHVEMFNLTTRGSVRLPSPPKQPTGLPAYVQEVQDSFTVELRAREEAYTKLLVTYCKSIIRYLQGTAKRTTIGLNIQNPDQKAYTQLRQSILLRYYREVASLARLLYLHLYLTVTREFSWRLYASQSAHPDVFAALKFTWTERRQFTCAFHPVLCNHGIVLLEGKPLTASALREINYRRRELGLPLVRCGLVEENKSPLVQQPSFSVHLPRSVGFLTHHIKRKLDAYAVKHPQEPRHVRADHPYAKVVENRNYGSSIEAMILAPPSPSEILPGDPPRPPTCGFLTR(SEQ ID NO：5)

Orf68E 1型包膜糖蛋白E(gE)MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHTDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLLRYAAWTGGLAAVVLLCLVIFLICTAKRMRVKAYRVDKSPYNQSMYYAGLPVDDFEDSESTDTEEEFGNAIGGSHGGSSYTVYIDKTR(SEQ IDNO：6)

gE的Orf68TCM变体；用甲型流感/Fujian TM域和COOH替换gE的跨膜(TM)域和COOH(标示下划线的)MGTVNKPVVGVLMGFGIITGTLRITNPVRASVLRYDDFHTDEDKLDTNSVYEPYYHSDHAESSWVNRGESSRKAYDHNSPYIWPRNDYDGFLENAHEHHGVYNQGRGIDSGERLMQPTQMSAQEDLGDDTGIHVIPTLNGDDRHKIVNVDQRQYGDVFKGDLNPKPQGQRLIEVSVEENHPFTLRAPIQRIYGVRYTETWSFLPSLTCTGDAAPAIQHICLKHTTCFQDVVVDVDCAENTKEDQLAEISYRFQGKKEADQPWIVVNTSTLFDELELDPPEIEPGVLKVLRTEKQYLGVYIWNMRGSDGTSTYATFLVTWKGDEKTRNPTPAVTPQPRGAEFHMWNYHSHVFSVGDTFSLAMHLQYKIHEAPFDLLLEWLYVPIDPTCQPMRLYSTCLYHPNAPQCLSHMNSGCTFTSPHLAQRVASTVYQNCEHADNYTAYCLGISHMEPSFGLILHDGGTTLKFVDTPESLSGLYVFVVYFNGHVEAVAYTVVSTVDHFVNAIEERGFPPTAGQPPATTKPKEITPVNPGTSPLLRDWILWISFAISCFLLCVALLGFIMWACQKG NIRCNICI(SEQ ID NO：7)

针对昆虫细胞进行过密码子优化的VZV DNA序列进入杆状病毒载体中，并评估VLP的装配。

ORF37糖蛋白H(gH)MFALVLAVVILPLWTTANKSYVTPTPATRSIGHMSALLREYSDRNMSLKLEAFYPTGFDEELIKSLHWGNDRKHVFLVIVKVNPTTHEGDVGLVIFPKYLLSPYHFKAEHRAPFPAGRFGFLSHPVTPDVSFFDSSFAPYLTTQHLVAFTTFPPNPLVWHLERAETAATAERPFGVSLLPARPTVPKNTILEHKAHFATWDALARHTFFSAEAIITNSTLRIHVPLFGSVWPIRYWATGSVLLTSDSGRVEVNIGVGFMSSLISLSSGPPIELIVVPHTVKLNAVTSDTTWFQLNPPGPDPGPSYRVYLLGRGLDMNFSKHATVDICAYPEESLDYRYHLSMAHTEALRMTTKADQHDINEESYYHIAARIATSIFALSEMGRTTEYFLLDEIVDVQYQLKFLNYILMRIGAGAHPNTISGTSDLIFADPSQLHDELSLLFGQVKPANVDYFISYDEARDQLKTAYALSRGQDHVNALSLARRVIMSIYKGLLVKQNLNATERQALFFASMILLNFREGLENSSRVLDGRTTLLLMTSMCTAAHATQAALNIQEGLAYLNPSKHMFTIPNVYSPCMGSLRTDLTEEIHVMNLLSAIPTRPGLNEVLHTQLDESEIFDAAFKTMMIFTTWTAKDLHILHTHVPEVFTCQDAAARNGEYVLILPAVQGHSYVITRNKPQRGLVYSLADVDVYNPISVVYLSRDTCVSEHGVIETVALPHPDNLKECLYCGSVFLRYLTTGAIMDIIIIDSKDTERQLAAMGNSTIPPFNPDMHGDDSKAVLLFPNGTVVTLLGFERRQAIRMSGQYLGASLGGAFLAVVGFGIIGWMLCGNSRLREYNKIPLT(SEQ ID NO：8)

ORF67糖蛋白I(gI)MFLIQCLISAVIFYIQVTNALIFKGDHVSLQVNSSLTSILIPMQNDNYTEIKGQLVFIGEQLPTGTNYSGTLELLYADTVAFCFRSVQVIRYDGCPRIRTSAFISCRYKHSWHYGNSTDRISTEPDAGVMLKITKPGINDAGVYVLLVRLDHSRSTDGFILGVNVYTAGSHHNIHGVIYTSPSLQNGYSTRALFQQARLCDLPATPKGSGTSLFQHMLDLRAGKSLEDNPWLHEDVVTTETKSVVKEGIENHVYPTDMSTLPEKSLNDPPENLLIIIPIVASVMILTAMVIVIVISVKRRRIKKHPIYRPNTKTRRGIQNATPESDVMLEAAIAQLATIREESPPHSVVNPFVK(SEQ ID NO：9)

ORF31糖蛋白B(gB)MFVTAVVSVSPSSFYESLQVEPTQSEDITRSAHLGDGDEIREAIHKSQDAETKPTFYVCPPPTGSTIVRLEPTRTCPDYHLGKNFTEGIAVVYKENIAAYKFKATVYYKDVIVSTAWAGSSYTQITNRYADRVPIPVSEITDTIDKFGKCSSKATYVRNNHKVEAFNEDKNPQDMPLIASKYNSVGSKAWHTTNDTYMVAGTPGTYRTGTSVNCIIEEVEARSIFPYDSFGLSTGDIIYMSPFFGLRDGAYREHSNYAMDRFHQFEGYRQRDLDTRALLEPAARNFLVTPHLTVGWNWKPKRTEVCSLVKWREVEDVVRDEYAHNFRFTMKTLSTTFISETNEFNLNQIHLSQCVKEEARAIINRIYTTRYNSSHVRTGDIQTYLARGGFVVVFQPLLSNSLARLYLQELVRENTNHSPQKHPTRNTRSRRSVPVELRANRTITTTSSVEFAMLQFTYDHIQEHVNEMLARISSSWCQLQNRERALWSGLFPINPSALASTILDQRVKARILGDVISVSNCPELGSDTRIILQNSMRVSGSTTRCYSRPLISIVSLNGSGTVEGQLGTDNELIMSRDLLEPCVANHKRYFLFGHHYVYYEDYRYVREIAVHDVGMISTYVDLNLTLLKDREFMPLQVYTRDELRDTGLLDYSEIQRRNQMHSLRFYDIDKVVQYDSGTAIMQGMAQFFQGLGTAGQAVGHVVLGATGALLSTVHGFTTFLSNPFGALAVGLLVLAGLVAAFFAYRYVLKLKTSPMKALYPLTTKGLKQLPEGMDPFAEKPNATDTPIEEIGDSQNTEPSVNSGFDPDKFREAQEMIKYMTLVSAAERQESKARKKNKTSALLTSRLTGLALRNRRGYSRVRTENVTGV(SEQ ID NO：10)

经过密码子优化并克隆入杆状病毒表达载体中的VZV gE基因序列。

Orf68 gEATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGTTTCGGTATCATCACCGGCACCCTGCGTATCACCAACCCCGTGCGTGCTTCCGTGCTGCGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACTACCACTCCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCGTAAGGCTTACGACCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGCACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCGTGGTATCGACTCCGGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGTATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGTGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGTCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGTGCTCCCATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGGTCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCACCGGTGACGCTGCTCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCTGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCTCCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGTGTCCTGAAGGTGCTGCGTACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGTGGTTCCGACGGCACCTCCACCTACGCTACCTTCCTCGTGACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGTAACCCCACCCCCGCTGTGACCCCCCAGCCCCGTGGTGCTGAATTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGTGACACCTTCTCCCTGGCTATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCTCCCTTCGACCTGCTGCTCGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGTCCCACATGAACTCCGGTTGCACCTTCACCTCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTGGCTTCCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCTGACAACTACACCGCTTACTGCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCACGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTACACCGTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCCCTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCCTCTGCTGCGCTACGCTGCTTGGACCGGTGGTCTGGCTGCTGTGGTGCTGCTGTGCCTGGTGATCTTCCTGATCTGCACCGCTAAGAGGATGCGTGTGAAGGCTTACCGTGTGGACAAGTCCCCTTACAACCAGTCCATGTACTACGCTGGTCTGCCCGTCGACGACTTCGAGGACTCCGAGTCCACCGACACCGAGGAGGAGTTCGGTAACGCTATCGGTGGTTCCCACGGTGGTTCCTCCTACACCGTGTACATCGACAAGACCCGCTAA(SEQ ID NO：11)

Orf68TCM的经过密码子优化的序列，标示下划线的起始和终止密码子ATGGGCACCGTGAACAAGCCCGTGGTGGGCGTGCTGATGGGTTTCGGTATCATCACCGGCACCCTGCGTATCACCAACCCCGTGCGTGCTTCCGTGCTGCGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACTACCACTCCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCGTAAGGCTTACGACCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGCACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCGTGGTATCGACTCCGGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGTATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGTGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGTCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGTGCTCCCATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGGTCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCACCGGTGACGCTGCTCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCTGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCTCCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGTGTCCTGAAGGTGCTGCGTACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGTGGTTCCGACGGCACCTCCACCTACGCTACCTTCCTCGTGACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGTAACCCCACCCCCGCTGTGACCCCCCAGCCCCGTGGTGCTGAATTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGTGACACCTTCTCCCTGGCTATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCTCCCTTCGACCTGCTGCTCGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGTCCCACATGAACTCCGGTTGCACCTTCACCTCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTGGCTTCCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCTGACAACTACACCGCTTACTGCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCACGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTACACCGTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCCCTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCCTCTGCTGCGCGACTGGATCTTGTGGATCTCCTTCGCTATCTCCTGCTTCCTGCTGTGCGTGGCTCTGCTGGGTTTCATCATGTGGGCTTGCCAGAAGGGTAACATCCGTTGCAACATCTGCATCTAA(SEQ ID NO：12)

来自GenBank NC_001348(VZV Dumas株)的ORF62蛋白与来自GenBankAB097933(VZV Oka亲本株)的ORF62蛋白的比对

查询1-Oka亲本株

查询2-Dumas株

同一性＝(99％)

查询1      MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARVVTSSQPDDLLFGENGVMVGRE 60

           MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARVVTSSQPDDLLFGENGVMVGRE

Sbjct 1    MDTPPMQRSTPQRAGSPDTLELMDLLDAAAAAAEHRARVVTSSQPDDLLFGENGVMVGRE 60

查询61     HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAR 120

           HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAR

Sbjct 61   HEIVSIPSVSGLQPEPRTEDVGEELTQDDYVCEDGQDLMGSPVIPLAEVFHTRFSEAGAR 120

查询121    EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQ 180

           EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQ

Sbjct 121  EPTGADRSLETVSLGTKLARSPKPPMNDGETGRGTTPPFPQAFSPVSPASPVGDAAGNDQ 180

查询181    REDQRSIPRQTTRGNSPGLPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGVVLQKTQRP 240

           REDQRSIPRQTTRGNSPGLPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGVVLQKTQRP

Sbjct 181  REDQRSIPRQTTRGNSPGLPSVVHRDRQTQSISGKKPGDEQAGHAHASGDGVVLQKTQRP 240

查询241    AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPR 300

           AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPR

Sbjct 241  AQGKSPKKKTLKVKVPLPARKPGGPVPGPVEQLYHVLSDSVPAKGAKADLPFETDDTRPR 300

查询301    KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSS 360

           KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSS

Sbjct 301  KHDARGITPRVPGRSSGGKPRAFLALPGRSHAPDPIEDDSPVEKKPKSREFVSSSSSSSS 360

查询361    WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSIS 420

           WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSIS

Sbjct 361  WGSSSEDEDDEPRRVSVGSETTGSRSGREHAPSPSNSDDSDSNDGGSTKQNIQPGYRSIS 420

查询421    GPDPRIRKTKRLAGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRV 480

           GPDPRIRKTKRLAGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRV

Sbjct 421  GPDPRIRKTKRLAGEPGRQRQKSFSLPRSRTPIIPPVSGPLMMPDGSPWPGSAPLPSNRV 480

查询481    RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDP 540

           RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDP

Sbjct 481  RFGPSGETREGHWEDEAVRAARARYEASTEPVPLYVPELGDPARQYRALINLIYCPDRDP 540

查询541    IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHA 600

           IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHA

Sbjct 541  IAWLQNPKLTGVNSALNQFYQKLLPPGRAGTAVTGSVASPVPHVGEAMATGEALWALPHA 600

查询601    AAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQTPDP 660

           AAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQ PDP

Sbjct 601  AAAVAMSRRYDRAQKHFILQSLRRAFASMAYPEATGSSPAARISRGHPSPTTPATQAPDP  660

查询661    QPSAAARSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHVVSKAKRR  720

           QPSAAARSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHVVSKAKRR

Sbjct 661  QPSAAARSLSVCPPDDRLRTPRKRKSQPVESRSLLDKIRETPVADARVADDHVVSKAKRR  720

查询721    VSEPVTITSGPVVDPPAVITMPLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIA  780

           VSEPVTITSGPVVDPPAVITMPLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIA

Sbjct 721  VSEPVTITSGPVVDPPAVITMPLDGPAPNGGFRRIPRGALHTPVPSDQARKAYCTPETIA  780

查询781    RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIAARRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDP  840

           RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIAARRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDP

Sbjct 781  RLVDDPLFPTAWRPALSFDPGALAEIAARRPGGGDRRFGPPSGVEALRRRCAWMRQIPDP  840

查询841    EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSVVLAALSNRLCLPSTHAWA  900

           EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSVVLAALSNRLCLPSTHAWA

Sbjct 841  EDVRLLIIYDPLPGEDINGPLESTLATDPGPSWSPSRGGLSVVLAALSNRLCLPSTHAWA  900

查询901    GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDG  960

           GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDG

Sbjct 901  GNWTGPPDVSALNARGVLLLSTRDLAFAGAVEYLGSRLASARRRLLVLDAVALERWPRDG  960

查询961    PALSQYHVYVRAPARPDAQAVVRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY  1020

           PALSQYHVYVRAPARPDAQAVVRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY

Sbjct 961  PALSQYHVYVRAPARPDAQAVVRWPDSAVTEGLARAVFASSRTFGPASFARIETAFANLY  1020

查询1021   PGEQPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRQYVLPGFDGCKDLARQSRGLGLGA  1080

           PGEQPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRQYVLPGFDGCKDLARQSRGLGLGA

Sbjct 1021 PGEQPLCLCRGGNVAYTVCTRAGPKTRVPLSPREYRQYVLPGFDGCKDLARQSRGLGLGA  1080

查询1081   ADFVDEAAHSHRAANRWGLGAALRPVFLPEGRRPGAAGPEAGDVPTWARVFCRHALLEPD  1140

           ADFVDEAAHSHRAANRWGLGAALRPVFLPEGRRPGAAGPEAGDVPTWARVFCRHALLEPD

Sbjct 1081 ADFVDEAAHSHRAANRWGLGAALRPVFLPEGRRPGAAGPEAGDVPTWARVFCRHALLEPD  1140

查询1141   PAAEPLVLPPVAGRSVALYASADEARNALPPIPRVMWPPGFGAAETVLEGSDGTRFVFGH  1200

           PAAEPLVLPPVAGRSVALYASADEARNALPPIPRVMWPPGFGAAETVLEGSDGTRFVFGH

Sbjct 1141 PAAEPLVLPPVAGRSVALYASADEARNALPPIPRVMWPPGFGAAETVLEGSDGTRFVFGH  1200

查询1201   HGGSERPAETQAGRQRRTADDREHALEPDDWEVGCEDAWDSEEGGGDDGDAPGSSFGVSI  1260

           HGGSERP+ETQAGRQRRTADDREHALE DDWEVGCEDAWDSEEGGGDDGDAPGSSFGVSI

Sbjct 1201 HGGSERPSETQAGRQRRTADDREHALELDDWEVGCEDAWDSEEGGGDDGDAPGSSFGVSI  1260

查询1261   VSVAPGVLRDRRVGLRPAVKVELLSSSSSSEDEDDVWGGRGGRSPPQSRG(SEQ ID NO：13)

           VSVAPGVLRDRRVGLRPAVKVELLSSSSSSEDEDDVWGGRGGRSPPQSRG(SEQ ID NO：14)

Sbjct 1261 VSVAPGVLRDRRVGLRPAVKVELLSSSSSSEDEDDVWGGRGGRSPPQSRG(SEQ ID NO：15)

实施例2

单独的VZV gE蛋白的表达形成VLP

在SF9细胞中表达仅含有VZV gE的杆状病毒构建体，并依照上文的规程进行分析。使用上文所描述的方法经由20％-60％蔗糖密度梯度步骤从用BV-VZV gE载体感染的Sf9细胞纯化颗粒。凝胶和Western印迹证实，在蔗糖梯度的颗粒级分中回收了VZV gE。在SDS凝胶上运行样品(图1A)，并对分离的上清液的Western印迹探查VZV gE(图1B)或流感基质蛋白(图1C)。如图1B的第2道和第3道中所显示的，单独的VZV gE蛋白表达导致VZV-VLP的形成。

另外，实施对梯度纯化的颗粒的分析，通过在Sephacryl S-400凝胶渗透层析柱上进行的大小分级来分析。大部分gE蛋白大于6,000kDa，这与此为VLP相符合(图2)。如此，单独的VZV gE的表达足以形成病毒样颗粒。另外，作为对照，单独表达或与嵌合gE(与流感HA的跨膜域和胞质域融合的gE)一起表达流感M1。这些对照显示，有通过流感M1的表达和M1与嵌合VZV gE蛋白一起的表达所产生的VLP形成。

实施例3

IE62的表达

IE62是主要的VZV间层蛋白。免疫接种诱导特异性抗体和细胞介导的免疫(CMI)，其在用VZV攻击时保护豚鼠。所描述的是克隆入杆状病毒表达载体中的全长VZV IE62基因(图3A)、在Sf9昆虫细胞中生成的重组IE62、和用于提取和纯化胞内IE62的非变性方法。

方法。对杆状病毒进行工程化改造以表达全长、经过密码子优化的来自VZV Oka株的IE62基因。合成该基因(GeneArt，Germany)，并克隆入pFastBac1载体中，在杆状病毒多角体蛋白启动子(Invitrogen)的控制下。将此基因转移至AcMNPV杆状病毒杆粒(Invitrogen)，使用杆粒DNA来转染Sf9昆虫细胞。对所得的重组杆状病毒进行噬斑纯化，并在Sf9细胞中制备病毒储液。

Orf IE62 ICP4全长。ATGGACACCCCCCCCATGCAGCGTTCCACCCCCCAGCGTGCTGGTTCCCCCGACACCCTCGAGCTGATGGACCTGCTGGACGCTGCTGCTGCCGCTGCCGAGCACCGTGCTCGTGTGGTGACCTCCTCCCAGCCCGACGACCTGCTGTTCGGCGAGAACGGTGTCATGGTCGGTCGTGAGCACGAGATCGTGTCCATCCCTTCCGTGTCCGGTCTGCAGCCCGAGCCCCGTACCGAGGACGTGGGCGAAGAGCTGACCCAGGACGACTACGTGTGCGAGGACGGCCAGGACCTGATGGGTTCCCCCGTGATCCCCCTGGCTGAGGTGTTCCACACCCGTTTCTCCGAGGCTGGTGCTCGTGAGCCCACCGGTGCTGACCGTTCCCTCGAGACCGTGTCCCTGGGCACCAAGCTGGCTCGTTCCCCCAAGCCCCCCATGAACGACGGCGAGACCGGTCGTGGCACCACCCCCCCCTTCCCTCAGGCTTTCTCCCCTGTGTCCCCCGCTTCCCCCGTGGGTGACGCTGCTGGTAACGACCAGCGTGAGGACCAGCGTTCCATCCCTCGTCAGACCACCCGTGGTAACTCCCCCGGTCTGCCCTCCGTGGTGCACCGTGACCGTCAGACCCAGTCCATCTCCGGCAAGAAGCCCGGCGACGAGCAGGCTGGTCACGCTCACGCTTCCGGTGACGGTGTTGTGCTGCAAAAAACCCAACGTCCCGCCCAGGGAAAGTCTCCCAAGAAGAAAACCCTGAAGGTCAAGGTGCCCCTGCCCGCTCGTAAGCCCGGTGGTCCCGTGCCCGGTCCCGTGGAGCAGCTGTACCACGTGCTGTCCGACTCCGTGCCCGCTAAGGGTGCTAAGGCTGACCTGCCTTTCGAGACCGACGACACCCGTCCCCGTAAGCATGACGCTAGGGGCATCACTCCTCGTGTGCCCGGTCGTTCCTCCGGTGGCAAGCCCCGTGCTTTCCTGGCTCTGCCTGGTCGTTCCCACGCTCCCGACCCCATCGAGGACGACTCCCCCGTGGAGAAGAAGCCCAAGTCCCGCGAGTTCGTGTCCTCCTCCTCCAGCTCCTCCTCCTGGGGTTCCAGCTCCGAGGACGAGGACGACGAGCCCCGTCGTGTGTCCGTGGGTTCCGAGACCACCGGTTCCCGTTCCGGTCGCGAGCACGCCCCCTCCCCATCCAACTCTGACGACTCCGACTCCAACGACGGTGGTTCCACCAAGCAGAACATCCAGCCCGGCTACCGTTCCATTTCTGGTCCCGACCCCCGTATCCGTAAGACCAAGCGTCTGGCTGGCGAACCAGGCCGTCAGCGTCAGAAGTCCTTCTCCCTGCCCCGTTCCCGTACCCCTATCATCCCTCCTGTCTCCGGCCCTCTGATGATGCCCGACGGTTCCCCCTGGCCCGGTTCCGCTCCCCTGCCCTCCAACCGTGTGCGTTTCGGTCCCTCCGGCGAGACCCGTGAGGGCCACTGGGAGGACGAGGCTGTGCGTGCTGCTCGTGCTCGTTACGAGGCTTCCACCGAGCCCGTGCCCCTGTACGTGCCCGAACTGGGTGACCCTGCCCGTCAGTACCGTGCTCTGATCAACCTGATCTACTGCCCCGACCGTGACCCCATCGCTTGGCTGCAGAACCCCAAGCTGACCGGTGTCAACTCCGCTCTGAACCAGTTCTACCAGAAGCTGCTGCCCCCTGGTCGTGCTGGCACCGCTGTGACCGGTTCCGTGGCTTCCCCTGTGCCCCACGTGGGAGAGGCTATGGCTACCGGCGAGGCTCTGTGGGCTCTGCCTCACGCTGCCGCCGCTGTGGCTATGTCCCGTCGTTACGACCGTGCTCAGAAGCACTTCATCCTGCAGTCCCTGCGTCGTGCTTTCGCTTCCATGGCTTACCCCGAGGCTACCGGTTCCTCCCCCGCTGCTCGTATCTCCCGTGGTCACCCCTCCCCCACCACCCCCGCTACCCAGGCTCCAGACCCCCAACCCTCTGCTGCTGCTCGTTCCCTGTCCGTGTGCCCCCCTGACGACCGTCTGCGTACCCCCCGTAAGCGCAAGTCCCAGCCCGTGGAGTCCCGTTCCCTGCTGGACAAGATCCGTGAGACCCCAGTGGCTGACGCTCGCGTGGCTGACGACCACGTCGTGTCCAAGGCTAAGAGGCGCGTGTCCGAGCCTGTGACCATCACCTCCGGTCCTGTGGTGGACCCCCCTGCTGTGATCACCATGCCCCTGGACGGTCCCGCTCCCAACGGTGGTTTCCGTCGTATCCCTCGTGGTGCTCTGCACACCCCCGTGCCCTCCGACCAGGCTCGTAAGGCTTACTGCACCCCCGAGACCATCGCTCGTCTGGTGGACGACCCCCTGTTCCCCACCGCTTGGCGTCCTGCTCTGTCCTTCGACCCCGGTGCTCTGGCTGAGATCGCTGCTCGCCGTCCCGGTGGCGGTGATCGTCGCTTCGGTCCTCCCTCCGGTGTCGAGGCTCTGCGTCGTCGTTGCGCTTGGATGCGTCAGATCCCCGACCCTGAGGACGTGCGCCTGCTGATCATCTACGACCCTCTGCCCGGCGAGGACATCAACGGTCCTCTCGAGTCCACCCTGGCTACCGACCCCGGTCCCTCCTGGTCCCCCTCCCGTGGTGGTCTGTCCGTGGTGCTGGCTGCCCTGTCCAACCGTCTGTGCCTGCCTTCCACCCACGCTTGGGCTGGTAACTGGACCGGTCCCCCCGACGTGTCCGCCCTGAACGCTCGCGGTGTCTTGCTCCTGTCCACCCGTGATCTGGCTTTCGCTGGTGCTGTGGAGTACCTGGGTTCCCGTCTGGCTTCCGCTCGTCGTCGTCTGCTGGTCCTGGACGCTGTGGCTCTCGAGCGTTGGCCCCGTGACGGTCCAGCCCTGTCTCAATACCACGTGTACGTGCGCGCTCCCGCTCGTCCCGACGCTCAGGCTGTGGTGCGCTGGCCCGACTCCGCTGTCACCGAGGGTCTGGCTCGTGCTGTGTTCGCTTCCTCCCGTACCTTCGGTCCCGCTTCCTTCGCTCGTATCGAGACCGCTTTCGCTAACCTGTACCCCGGCGAGCAGCCCCTGTGCCTGTGCCGTGGTGGTAACGTGGCTTACACCGTGTGCACCCGTGCTGGTCCCAAGACCCGTGTGCCTCTGTCCCCCCGTGAGTACCGCCAGTACGTGCTGCCCGGTTTCGACGGTTGCAAGGACCTGGCTCGTCAGTCCCGCGGTCTGGGTCTGGGTGCTGCTGACTTCGTCGACGAGGCTGCTCACTCCCACCGTGCTGCTAACCGTTGGGGCCTGGGCGCTGCTCTGCGTCCCGTGTTCCTGCCCGAGGGTCGTCGTCCTGGTGCTGCTGGTCCCGAGGCTGGCGACGTGCCCACCTGGGCTCGTGTGTTCTGCCGTCACGCTCTGCTCGAGCCCGACCCTGCTGCCGAGCCTCTGGTGCTGCCCCCCGTGGCTGGTCGTTCTGTGGCTCTGTACGCTTCCGCCGACGAGGCTCGCAACGCTCTGCCCCCCATCCCCCGTGTGATGTGGCCCCCTGGTTTCGGCGCTGCTGAGACCGTCCTCGAGGGTTCCGACGGCACCCGTTTCGTGTTCGGTCACCACGGCGGTTCCGAGCGTCCCTCCGAGACCCAGGCTGGTCGCCAGCGCCGTACCGCTGACGACCGTGAGCACGCTCTCGAGCTGGACGACTGGGAGGTCGGCTGCGAGGACGCTTGGGACTCCGAAGAGGGTGGTGGCGACGACGGTGACGCTCCCGGCTCCTCCTTCGGTGTCTCCATCGTGTCCGTGGCTCCCGGTGTCCTGCGTGACCGTCGTGTGGGTCTGCGTCCTGCTGTGAAGGTGGAGCTGCTGTCCTCCTCTTCCTCTTCTGAGGATGAGGATGACGTGTGGGGTGGTCGTGGTGGTCGCTCCCCCCCTCAGTCCCGTGGTTAA(SEQ ID NO：16)

用表达IE62的重组杆状病毒以每个细胞1-3个感染性颗粒(pfu)的感染复数(MOI)感染约800ml Sf9细胞(在1L摇瓶中约2x10⁶个细胞/ml)，于27℃在不断摇动的情况中温育，然后在感染后约64小时时收获。通过低速离心来除去培养基，并通过6000rpm高剪切匀浆化(Silverson L4RT-A匀浆器)在25mMTrisCl pH 7.5，250mM NaCl中溶解细胞。离心后，将细胞溶胞物加载至阴离子交换柱(Fractogel TMAE，Merck KGaA，Germany)，并用25mM TrisCl pH 7.5，500mM NaCl洗脱。用Sephadex G25(GE Healthcare)层析柱对洗脱液进行缓冲液交换，交换成25mM NaPi pH 7.5，375mM NaCl。在阳离子交换柱(FractogelSO3-，Merck KGaA，Germany)上加载来自G25柱的流过级分，并用25mM NaPipH 7.5，625mM NaCl洗脱。来自SO3-柱的洗脱液变成最终产物，即纯化的IE62(图3B；第8道)。

结果。纯化的重组IE62具有大于90％的纯度(90％prure)，并且含有全长(150KDa)和约6KDa的小蛋白质(p6)两者。IE62和p6没有通过大小排阻层析分开并以近似相等的摩尔量存在。IE62和p6可以形成异二聚物或其它稳定的复合物。

实施例4

gE/gI的表达和纯化

描述了重组VZV gE/gI受体异二聚物自Sf9昆虫细胞的表达和新的纯化方法。gE和gI是表面糖蛋白，并在人和经过免疫接种的动物中引发针对VZV的中和性抗体。开发如在Sf9昆虫细胞中所生成的gE/gI异二聚物的可溶形式和纯化方法以分开分泌的蛋白质复合物与宿主细胞和杆状病毒污染物。

方法。对杆状病毒进行工程化改造以表达截短的、经过密码子优化的来自VZV Oka株的gE和gI的基因(参见下文)。gE和gI两者都被除去了它们的跨膜域和羧基端域。使用天然的gI信号肽来制备gI，并用杆状病毒GP64信号肽替换gE信号肽序列。合成该基因(GeneArt，Germany)，并串联地克隆入pFastBac1载体中，其中每个基因在杆状病毒多角体蛋白启动子的控制下(图4A)。将串联的基因盒(gene cassette)转移至AcMNPV杆状病毒杆粒(Invitrogen)，然后纯化杆粒DNA，并用于转染Sf9昆虫细胞。对所得的重组杆状病毒进行噬斑纯化，并在Sf9细胞中制备病毒储液。gE DeltaTMCTATGGTGTCCGCTATCGTGCTGTACGTGCTGCTGGCTGCTGCTGCTCACTCCGCTTTCGCTCGTATCACCAACCCCGTGCGTGCTTCCGTGCTGCGTTACGACGACTTCCACACCGACGAGGACAAGCTGGACACCAACTCCGTGTACGAGCCCTACTACCACTCCGACCACGCTGAGTCCTCTTGGGTGAACCGTGGCGAGTCCTCCCGTAAGGCTTACGACCACAACTCCCCCTACATCTGGCCCCGTAACGACTACGACGGTTTCCTCGAGAACGCTCACGAGCACCACGGTGTCTACAACCAGGGTCGTGGTATCGACTCCGGCGAGCGTCTGATGCAGCCCACCCAGATGTCCGCTCAGGAGGACCTGGGCGACGACACCGGTATCCACGTGATCCCCACCCTGAACGGTGACGACCGTCACAAGATCGTGAACGTGGACCAGCGCCAGTACGGTGACGTGTTCAAGGGTGACCTGAACCCCAAGCCCCAGGGCCAGCGTCTGATCGAGGTGTCCGTGGAGGAGAACCACCCCTTCACCCTGCGTGCTCCCATCCAGCGTATCTACGGTGTCCGTTACACCGAGACCTGGTCCTTCCTCCCCTCCCTGACCTGCACCGGTGACGCTGCTCCCGCTATCCAGCACATCTGCCTGAAGCACACCACCTGCTTCCAGGACGTGGTGGTGGACGTGGACTGCGCTGAGAACACCAAGGAGGACCAGCTGGCTGAGATCTCCTACAGGTTCCAGGGCAAGAAGGAGGCTGACCAGCCCTGGATCGTGGTGAACACCTCCACCCTGTTCGACGAGCTGGAGCTGGACCCCCCCGAGATCGAGCCCGGTGTCCTGAAGGTGCTGCGTACCGAGAAGCAGTACCTGGGCGTGTACATCTGGAACATGCGTGGTTCCGACGGCACCTCCACCTACGCTACCTTCCTCGTGACCTGGAAGGGTGACGAAAAGACCCGTAACCCCACCCCCGCTGTGACCCCCCAGCCCCGTGGTGCTGAATTCCATATGTGGAACTACCACTCTCACGTGTTCTCCGTGGGTGACACCTTCTCCCTGGCTATGCACCTGCAGTACAAGATCCACGAGGCTCCCTTCGACCTGCTGCTCGAGTGGCTGTACGTGCCCATCGACCCCACCTGCCAGCCCATGCGCCTGTACTCCACCTGCCTGTACCACCCCAACGCTCCCCAGTGCCTGTCCCACATGAACTCCGGTTGCACCTTCACCTCCCCCCACCTGGCCCAGCGTGTGGCTTCCACCGTGTACCAGAACTGCGAGCACGCTGACAACTACACCGCTTACTGCCTGGGTATCAGCCACATGGAGCCTTCCTTCGGTCTGATCCTGCACGACGGTGGCACCACCCTGAAGTTCGTGGACACCCCCGAGTCCCTGTCCGGTCTGTACGTGTTCGTGGTGTACTTCAACGGTCACGTGGAGGCTGTCGCTTACACCGTGGTGTCCACCGTGGACCACTTCGTGAACGCTATCGAGGAGCGTGGTTTCCCCCCCACCGCTGGCCAGCCCCCTGCTACCACCAAGCCCAAGGAGATCACCCCCGTCAACCCCGGCACCTCCCCTCTGCTGCGCTAA(SEQ ID NO：17)gE DeltaTMCTMVSAIVLYVL LAAAAHSAFA RITNPVRASV LRYDDFHTDE DKLDTNSVYEPYYHSDHAES SWVNRGESSR KAYDHNSPYI WPRNDYDGFL ENAHEHHGVYNQGRGIDSGE RLMQPTQMSA QEDLGDDTGI HVIPTLNGDD RHKIVNVDQRQYGDVFKGDL NPKPQGQRLI EVSVEENHPF TLRAPIQRIY GVRYTETWSFLPSLTCTGDA APAIQHICLK HTTCFQDVVV DVDCAENTKE DQLAEISYRFQGKKEADQPW IVVNTSTLFD ELELDPPEIE PGVLKVLRTE KQYLGVYIWNMRGSDGTSTY ATFLVTWKGD EKTRNPTPAV TPQPRGAEFH MWNYHSHVFSVGDTFSLAMH LQYKIHEAPF DLLLEWLYVP IDPTCQPMRL YSTCLYH PNAPQCLSHMNSG CTFTSPHLAQ RVASTVYQNC EHADNYTAYC LGISHMEPSFGLILHDGGTT LKFVDTPESL SGLYVFVVYF NGHVEAVAYT VVSTVDHFVNAIEERGFPPT AGQPPATTKP KEITPVNPGT SPLLR(SEQ ID NO：18)gI DeltaTMCTATGTTCCTCATCCAGTGCCTGATCTCCGCTGTGATCTTCTACATCCAAGTGACCAACGCTCTGATCTTCAAGGGTGACCACGTGTCCCTGCAGGTCAACTCCTCCCTGACCTCCATCCTGATCCCCATGCAGAACGACAACTACACCGAGATCAAGGGCCAGCTGGTGTTCATCGGCGAGCAGCTGCCCACCGGCACCAACTACTCCGGCACCCTCGAGCTGCTGTACGCTGACACCGTCGCTTTCTGCTTCCGTTCCGTGCAGGTGATCCGTTACGACGGTTGCCCCCGTATCCGTACCTCCGCTTTCATCTCCTGCCGTTACAAGCACTCCTGGCACTACGGTAACTCCACCGACCGTATCTCCACCGAGCCCGACGCTGGTGTCATGCTGAAGATCACCAAGCCCGGTATCAACGACGCTGGCGTGTACGTGCTGCTGGTCCGTCTGGACCACTCCCGTTCCACCGACGGTTTCATCCTGGGTGTCAACGTGTACACCGCTGGTTCCCACCACAACATCCACGGTGTCATCTACACCTCCCCCTCCCTGCAGAACGGTTACTCCACCCGTGCTCTGTTCCAGCAGGCTCGTCTGTGCGACCTGCCCGCTACCCCCAAGGGTTCCGGCACCTCCCTCTTCCAGCACATGCTGGACCTGCGTGCTGGCAAGTCCCTCGAGGACAACCCCTGGCTGCACGAGGACGTGGTGACCACCGAGACCAAGTCCGTGGTGAAGGAAGGTATCGAGAACCACGTGTACCCCACCGACATGTCCACCCTGCCCGAGAAGTCCCTGAACGACCCCCCCGAGTAA(SEQ ID NO：19)gI DeltaTMCTMFLIQCLISA VIFYIQVTNA LIFKGDHVSL QVNSSLTSIL IPMQNDNYTEIKGQLVFIGE QLPTGTNYSG TLELLYADTV AFCFRSVQVI RYDGCPRIRTSAFISCRYKH SWHYGNSTDR ISTEPDAGVM LKITKPGIND AGVYVLLVRLDHSRSTDGFI LGVNVYTAGS HHNIHGVIYT SPSLQNGYST RALFQQARLCDLPATPKGSG TSLFQHMLDL RAGKSLEDNP WLHEDVVTTE TKSVVKEGIENHVYPTDMST LPEKSLNDPP E(SEQ ID NO：20)

用表达C末端截短的gE和gI基因的重组杆状病毒以每ml 1-3个感染性颗粒(pfu)的感染复数(MOI)感染约800ml Sf9细胞(在1L摇瓶中约2x10⁶个细胞/ml)，于27℃在不断摇动的情况中温育，然后在感染后64小时时收获。通过低速离心来除去细胞，并收集培养基。将培养基中的gE/gI二聚物加载至扁豆凝集素亲和柱，并用500mM甲基-α-D-甘露吡喃糖苷(Mannopyranoside)洗脱糖蛋白。用Sephadex G25柱对来自凝集素柱的洗脱液进行缓冲液交换，交换成25mM TrisCl pH 8.0 50mM NaCl。在用相同缓冲液平衡的Fractogel TMAE离子交换柱上加载G25层析蛋白质峰。gE/gI结合该柱，并用线性NaCl梯度将它们洗脱。用Amicon Ultra 10kDa滤器浓缩后，在Sephacryl S200大小排阻柱上加载所述材料以除去高分子量的污染物。通过SDS-PAGE和Western印迹分析来分析最终的产物(图4B)。

结果。在Sf9昆虫细胞中表达的全长gE不是糖基化的，并且不结合扁豆凝集素亲和树脂，是不溶性的，而且保持与细胞结合。C末端胞内域(endodomain)和跨膜序列的截短导致非糖基化的，且可能为变性形式的抗原的分泌(未显示)。重组gE和gI在Sf9细胞中的共表达产生gE/gI异二聚物，其由于gI的糖基化而结合凝集素亲和柱层析，并可以通过凝集素亲和柱层析来纯化。此可溶性VZV糖蛋白复合物可以诱导中和性和保护性抗体，并且是VZV疫苗的一种成分。另外，此异二聚物可以与IE62一起配制以得到卓越的疫苗或抗原性配制剂。

实施例5

gE在HEK293细胞中的表达

描述了分泌型VZV gE糖蛋白在人HEK293细胞中的表达。也可以在人或其它哺乳动物细胞或禽类细胞系中表达VZV糖蛋白(例如gE、gI或gE/gI、gB)，并且预期其是完全糖基化的。可以使用纯化的糖蛋白作为例如与昆虫细胞中制备的重组IE62混合的VZV疫苗的一种成分。

方法。经由Bam HI和Hind III位点(Invitrogen)将具有GP64信号肽但除去跨膜/羧基末端域的VZV gE的编码序列插入pcDNA3.1质粒中(图5A)。使用最终的质粒来转染HEK293自由式细胞(freestyle cell)(Invitrogen和如所描述的)。转染后96小时收获HEK 293自由式细胞培养物培养基。将所述培养基加载在扁豆凝集素亲和柱上并用500mM甲基-α-D-甘露吡喃糖苷洗脱。来自单一扁豆凝集素柱的gE具有大于90％的纯度。

结果。gE蛋白被分泌入培养基中，因为其跨膜域被除去(图5B)。哺乳动物细胞中表达的gE蛋白具有真实的糖基化模式。自HEK293细胞表达的可溶性gE(约70kDa)与自昆虫细胞表达的非糖基化gE(约60kDa)相比是重度糖基化的。

本文通过提及而收录所有专利、出版物和专利申请，其程度就像明确且单独指明通过提及而收录每篇单独的专利、出版物或所引用的专利申请一样。

仅为了理解的清楚而提供了上述详细的说明书，并且不应当将此理解成不必要的限制，因为各种修饰形式对于本领域技术人员会是显而易见的。并不承认本文中所提供的任何信息都是现有技术或与目前要求保护的发明有关，或者明确或隐含提及的任何出版物都是现有技术。

除非另有定义，本文中所使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属技术领域的普通技术人员一般理解的相同的含义。

虽然已经描述了本发明以及其具体的实施方案，但是可理解的是，其能够进一步进行修饰，并且本申请意图覆盖本发明的任何变化、用途、或改编，它们一般遵循本发明的原理，并且包括对本公开内容在本发明所属领域内的已知或习惯实践之内的、且可适用于上文所列出的和所附权利要求书的范围内的本质特征的偏离。

序列表

<110>诺瓦瓦克斯股份有限公司(Novavax，Inc.)

 

<120>水痘带状疱疹病毒-病毒样颗粒(VLP)和抗原

 

<130>NOVV-019/01WO

 

<150>US 60/950,707

<151>2007-07-19

 

<160>20

 

<170>PatentIn version 3.5

 

<210>1

<211>435

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒(Varicella Zoster Virus)

 

<400>1

Met Gly Thr Gln Lys Lys Gly Pro Arg Ser Glu Lys Val Ser Pro Tyr

1               5                   10                  15

Asp Thr Thr Thr Pro Glu Val Glu Ala Leu Asp His Gln Met Asp Thr

            20                  25                  30

Leu Asn Trp Arg Ile Trp Ile Ile Gln Val Met Met Phe Thr Leu Gly

        35                  40                  45

Ala Val Met Leu Leu Ala Thr Leu Ile Ala Ala Ser Ser Glu Tyr Thr

    50                  55                  60

Gly Ile Pro Cys Phe Tyr Ala Ala Val Val Asp Tyr Glu Leu Phe Asn

65                  70                  75                  80

Ala Thr Leu Asp Gly Gly Val Trp Ser Gly Asn Arg Gly Gly Tyr Ser

                85                  90                  95

Ala Pro Val Leu Phe Leu Glu Pro His Ser Val Val Ala Phe Thr Tyr

            100                 105                 110

Tyr Thr Ala Leu Thr Ala Met Ala Met Ala Val Tyr Thr Leu Ile Thr

        115                  120                  125

Ala Ala Ile Ile His Arg Glu Thr Lys Asn Gln Arg Val Arg Gln Ser

    130                 135                 140

Ser Gly Val Ala Trp Leu Val Val Asp Pro Thr Thr Leu Phe Trp Gly

145                 150                 155                 160

Leu Leu Ser Leu Trp Leu Leu Asn Ala Val Val Leu Leu Leu Ala Tyr

                165                 170                 175

Lys Gln Ile Gly Val Ala Ala Thr Leu Tyr Leu Gly His Phe Ala Thr

            180                 185                 190

Ser Val Ile Phe Thr Thr Tyr Phe Cys Gly Arg Gly Lys Leu Asp Glu

        195                 200                 205

Thr Asn Ile Lys Ala Val Ala Asn Leu Arg Gln Gln Ser Val Phe Leu

    210                 215                 220

Tyr Arg Leu Ala Gly Pro Thr Arg Ala Val Phe Val Asn Leu Met Ala

225                 230                 235                 240

Ala Leu Met Ala Ile Cys Ile Leu Phe Val Ser Leu Met Leu Glu Leu

                245                 250                 255

Val Val Ala Asn His Leu His Thr Gly Leu Trp Ser Ser Val Ser Val

            260                 265                 270

Ala Met Ser Thr Phe Ser Thr Leu Ser Val ValTyr Leu Ile Val Ser

        275                 280                 285

Glu Leu Ile Leu Ala His Tyr Ile His Val Leu Ile Gly Pro Ser Leu

    290                 295                 300

Gly Thr Leu Val Ala Cys Ala Thr Leu Gly Thr Ala Ala His Ser Tyr

305                 310                 315                 320

Met Asp Arg Leu Tyr Asp Pro Ile Ser Val Gln Ser Pro Arg Leu Ile

                325                 330                 335

Pro Thr Thr Arg Gly Thr Leu Ala Cys Leu Ala Val Phe Ser Val Val

            340                 345                 350

Met Leu Leu Leu Arg Leu Met Arg Ala Tyr Val Tyr His Arg Gln Lys

        355                 360                 365

Arg Ser Arg Phe Tyr Gly Ala Val Arg Arg Val Pro Glu Arg Val Arg

    370                 375                 380

Gly Tyr Ile Arg Lys Val Lys Pro Ala His Arg Asn Ser Arg Arg Thr

385                 390                 395                 400

Asn Tyr Pro Ser Gln Gly Tyr Gly Tyr Val Tyr Glu Asn Asp Ser Thr

                405                 410                 415

Tyr Glu Thr Asp Arg Glu Asp Glu Leu Leu Tyr Glu Arg Ser Asn Ser

            420                 425                 430

Gly Trp Glu

        435

 

<210>2

<211>1310

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

<400>2

Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser

1               5                   10                  15

Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu

        35                  40                  45

Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val

    50                  55                  60

Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp

65                  70                  75                  80

Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln

                85                  90                  95

Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr

            100                 105                 110

Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser

        115                 120                 125

Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro

    130                 135                 140

Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro

145                 150                 155                 160

Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala

                165                 170                 175

Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr

            180                 185                 190

Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln

        195                 200                 205

Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His

    210                 215                 220

Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro

225                 230                 235                 240

Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro

                245                 250                 255

Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln

            260                 265                 270

Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala

        275                 280                 285

Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala

    290                 295                 300

Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro

305                 310                 315                 320

Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile

                325                 330                 335

Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val

            340                 345                 350

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu

        355                 360                 365

Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser

    370                 375                 380

Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser

385                 390                 395                 400

Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr

                405                 410                 415

Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu

            420                 425                 430

Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg

        435                 440                 445

Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro

    450                 455                 460

Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val

465                 470                 475                 480

Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu

                485                 490                 495

Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val

            500                 505                 510

Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala

        515                 520                 525

Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu

    530                 535                 540

Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr

545                 550                 555                 560

Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser

                565                 570                 575

Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu

            580                 585                 590

Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg

        595                 600                 605

Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg

    610                 615                 620

Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala

625                 630                 635                 640

Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln

                645                 650                 655

Ala Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys

            660                 665                 670

Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro

        675                 680                 685

Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala

    690                 695                 700

Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg

705                 710                 715                 720

Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro

                725                 730                 735

Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe

            740                 745                 750

Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln

        755                 760                 765

Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp

    770                 775                 780

Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro

785                 790                 795                 800

Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg

                805                 810                 815

Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala

            820                 825                 830

Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile

        835                 840                 845

Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr

    850                 855                 860

Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu

865                 870                 875                 880

Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr

                885                 890                 895

His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu

            900                 905                 910

Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala

        915                 920                 925

Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg

    930                 935                 940

Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly

945                 950                 955                 960

Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro

                965                 970                 975

Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly

            980                 985                 990

Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser Ser Arg Thr Phe Gly Pro Ala Ser

        995                 1000                1005

Phe Ala  Arg Ile Glu Thr Ala  Phe Ala Asn Leu Tyr  Pro Gly Glu

    1010                 1015                 1020

Gln Pro  Leu Cys Leu Cys Arg  Gly Gly Asn Val Ala  Tyr Thr Val

    1025                 1030                 1035

Cys Thr  Arg Ala Gly Pro Lys  Thr Arg Val Pro Leu  Ser Pro Arg

    1040                 1045                 1050

Glu Tyr  Arg Gln Tyr Val Leu  Pro Gly Phe Asp Gly  Cys Lys Asp

    1055                 1060                 1065

Leu Ala  Arg Gln Ser Arg Gly  Leu Gly Leu Gly Ala  Ala Asp Phe

    1070                 1075                 1080

Val Asp  Glu Ala Ala His Ser  His Arg Ala Ala Asn  Arg Trp Gly

    1085                 1090                 1095

Leu Gly  Ala Ala Leu Arg Pro  Val Phe Leu Pro Glu  Gly Arg Arg

    1100                 1105                 1110

Pro Gly  Ala Ala Gly Pro Glu  Ala Gly Asp Val Pro  Thr Trp Ala

    1115                 1120                 1125

Arg Val  Phe Cys Arg His Ala  Leu Leu Glu Pro Asp  Pro Ala Ala

    1130                 1135                 1140

Glu Pro  Leu Val Leu Pro Pro  Val Ala Gly Arg Ser  Val Ala Leu

    1145                 1150                 1155

Tyr Ala  Ser Ala Asp Glu Ala  Arg Asn Ala Leu Pro  Pro Ile Pro

    1160                 1165                 1170

Arg Val  Met Trp Pro Pro Gly  Phe Gly Ala Ala Glu  Thr Val Leu

    1175                 1180                 1185

Glu Gly  Ser Asp Gly Thr Arg  Phe Val Phe Gly His  His Gly Gly

    1190                 1195                 1200

Ser Glu  Arg Pro Ser Glu Thr  Gln Ala Gly Arg Gln  Arg Arg Thr

    1205                 1210                 1215

Ala Asp  Asp Arg Glu His Ala  Leu Glu Leu Asp Asp  Trp Glu Val

    1220                 1225                 1230

Gly Cys  Glu Asp Ala Trp Asp  Ser Glu Glu Gly Gly  Gly Asp Asp

    1235                 1240                 1245

Gly Asp  Ala Pro Gly Ser Ser  Phe Gly Val Ser Ile  Val Ser Val

    1250                 1255                 1260

Ala Pro  Gly Val Leu Arg Asp  Arg Arg Val Gly Leu  Arg Pro Ala

    1265                 1270                 1275

Val Lys  Val Glu Leu Leu Ser  Ser Ser Ser Ser Ser  Glu Asp Glu

    1280                 1285                 1290

Asp Asp  Val Trp Gly Gly Arg  Gly Gly Arg Ser Pro  Pro Gln Ser

    1295                 1300                 1305

Arg Gly

    1310

 

<210>3

<211>278

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>3

Met Phe Cys Thr Ser Pro Ala Thr Arg Gly Asp Ser Ser Glu Ser Lys

1               5                   10                  15

Pro Gly Ala Ser Val Asp Val Asn Gly Lys Met Glu Tyr Gly Ser Ala

            20                  25                  30

Pro Gly Pro Leu Asn Gly Arg Asp Thr Ser Arg Gly Pro Gly Ala Phe

        35                  40                  45

Cys Thr Pro Gly Trp Glu Ile His Pro Ala Arg Leu Val Glu Asp Ile

    50                  55                  60

Asn Arg Val Phe Leu Cys Ile Ala Gln Ser Ser Gly Arg Val Thr Arg

65                  70                  75                  80

Asp Ser Arg Arg Leu Arg Arg Ile Cys Leu Asp Phe Tyr Leu Met Gly

                85                  90                  95

Arg Thr Arg Gln Arg Pro Thr Leu Ala Cys Trp Glu Glu Leu Leu Gln

            100                 105                 110

Leu Gln Pro Thr Gln Thr Gln Cys Leu Arg Ala Thr Leu Met Glu Val

        115                 120                 125

Ser His Arg Pro Pro Arg Gly Glu Asp Gly Phe Ile Glu Ala Pro Asn

    130                 135                 140

Val Pro Leu His Arg Ser Ala Leu Glu Cys Asp Val Ser Asp Asp Gly

145                 150                 155                 160

Gly Glu Asp Asp Ser Asp Asp Asp Gly Ser Thr Pro Ser Asp Val Ile

                165                 170                 175

Glu Phe Arg Asp Ser Asp Ala Glu Ser Ser Asp Gly Glu Asp Phe Ile

            180                 185                 190

Val Glu Glu Glu Ser Glu Glu Ser Thr Asp Ser Cys Glu Pro Asp Gly

        195                 200                 205

Val Pro Gly Asp Cys Tyr Arg Asp Gly Asp Gly Cys Asn Thr Pro Ser

    210                 215                 220

Pro Lys Arg Pro Gln Arg Ala Ile Glu Arg Tyr Ala Gly Ala Glu Thr

225                 230                 235                 240

Ala Glu Tyr Thr Ala Ala Lys Ala Leu Thr Ala Leu Gly Glu Gly Gly

                245                 250                 255

Val Asp Trp Lys Arg Arg Arg His Glu Ala Pro Arg Arg His Asp Ile

            260                 265                 270

Pro Pro Pro His Gly Val

        275

 

<210>4

<211>302

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>4

Met Ala Ser Ser Asp Gly Asp Arg Leu Cys Arg Ser Asn Ala Val Arg

1               5                   10                  15

Arg Lys Thr Thr Pro Ser Tyr Ser Gly Gln Tyr Arg Thr Ala Arg Arg

            20                  25                  30

Ser Val Val Val Gly Pro Pro Asp Asp Ser Asp Asp Ser Leu Gly Tyr

        35                  40                  45

Ile Thr Thr Val Gly Ala Asp Ser Pro Ser Pro Val Tyr Ala Asp Leu

    50                  55                  60

Tyr Phe Glu His Lys Asn Thr Thr Pro Arg Val His Gln Pro Asn Asp

65                  70                  75                  80

Ser Ser Gly Ser Glu Asp Asp Phe Glu Asp Ile Asp Glu Val Val Ala

                85                  90                  95

Ala Phe Arg Glu Ala Arg Leu Arg His Glu Leu Val Glu Asp Ala Val

            100                 105                 110

Tyr Glu Asn Pro Leu Ser Val Glu Lys Pro Ser Arg Ser Phe Thr Lys

        115                 120                 125

Asn Ala Ala Val Lys Pro Lys Leu Glu Asp Ser Pro Lys Arg Ala Pro

    130                 135                 140

Pro Gly Ala Gly Ala Ile Ala Ser Gly Arg Pro Ile Ser Phe Ser Thr

145                 150                 155                 160

Ala Pro Lys Thr Ala Thr Ser Ser Trp Cys Gly Pro Thr Pro Ser Tyr

                165                 170                 175

Asn Lys Arg Val Phe Cys Glu Ala Val Arg Arg Val Ala Ala Met Gln

            180                 185                 190

Ala Gln Lys Ala Ala Glu Ala Ala Trp Asn Ser Asn Pro Pro Arg Asn

        195                 200                 205

Asn Ala Glu Leu Asp Arg Leu Leu Thr Gly Ala Val Ile Arg Ile Thr

    210                 215                 220

Val His Glu Gly Leu Asn Leu Ile Gln Ala Ala Asn Glu Ala Asp Leu

225                 230                 235                 240

Gly Glu Gly Ala Ser Val Ser Lys Arg Gly His Asn Arg Lys Thr Gly

                245                 250                 255

Asp Leu Gln Gly Gly Met Gly Asn Glu Pro Met Tyr Ala Gln Val Arg

            260                 265                 270

Lys Pro Lys Ser Arg Thr Asp Thr Gln Thr Thr Gly Arg Ile Thr Asn

        275                 280                 285

Arg Ser Arg Ala Arg Ser Ala Ser Arg Thr Asp Thr Arg Lys

    290                 295                 300

 

<210>5

<211>410

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>5

Met Glu Cys Asn Leu Gly Thr Glu His Pro Ser Thr Asp Thr Trp Asn

1               5                   10                  15

Arg Ser Lys Thr Glu Gln Ala Val Val Asp Ala Phe Asp Glu Ser Leu

            20                  25                  30

Phe Gly Asp Val Ala Ser Asp Ile Gly Phe Glu Thr Ser Leu Tyr Ser

        35                  40                  45

His Ala Val Lys Thr Ala Pro Ser Pro Pro Trp Val Ala Ser Pro Lys

    50                  55                  60

Ile Leu Tyr Gln Gln Leu Ile Arg Asp Leu Asp Phe Ser Glu Gly Pro

65                  70                  75                  80

Arg Leu Leu Ser Cys Leu Glu Thr Trp Asn Glu Asp Leu Phe Ser Cys

                85                  90                  95

Phe Pro Ile Asn Glu Asp Leu Tyr Ser Asp Met Met Val Leu Ser Pro

            100                 105                 110

Asp Pro Asp Asp Val Ile Ser Thr Val Ser Thr Lys Asp His Val Glu

        115                 120                 125

Met Phe Asn Leu Thr Thr Arg Gly Ser Val Arg Leu Pro Ser Pro Pro

    130                 135                 140

Lys Gln Pro Thr Gly Leu Pro Ala Tyr Val Gln Glu Val Gln Asp Ser

145                 150                 155                 160

Phe Thr Val Glu Leu Arg Ala Arg Glu Glu Ala Tyr Thr Lys Leu Leu

                165                 170                 175

Val Thr Tyr Cys Lys Ser Ile Ile Arg Tyr Leu Gln Gly Thr Ala Lys

            180                 185                 190

Arg Thr Thr Ile Gly Leu Asn Ile Gln Asn Pro Asp Gln Lys Ala Tyr

        195                 200                 205

Thr Gln Leu Arg Gln Ser Ile Leu Leu Arg Tyr Tyr Arg Glu Val Ala

    210                 215                 220

Ser Leu Ala Arg Leu Leu Tyr Leu His Leu Tyr Leu Thr Val Thr Arg

225                 230                 235                 240

Glu Phe Ser Trp Arg Leu Tyr Ala Ser Gln Ser Ala His Pro Asp Val

                245                 250                 255

Phe Ala Ala Leu Lys Phe Thr Trp Thr Glu Arg Arg Gln Phe Thr Cys

            260                 265                 270

Ala Phe His Pro Val Leu Cys Asn His Gly Ile Val Leu Leu Glu Gly

        275                 280                 285

Lys Pro Leu Thr Ala Ser Ala Leu Arg Glu Ile Asn Tyr Arg Arg Arg

    290                 295                 300

Glu Leu Gly Leu Pro Leu Val Arg Cys Gly Leu Val Glu Glu Asn Lys

305                 310                 315                 320

Ser Pro Leu Val Gln Gln Pro Ser Phe Ser Val His Leu Pro Arg Ser

                325                 330                 335

Val Gly Phe Leu Thr His His Ile Lys Arg Lys Leu Asp Ala Tyr Ala

            340                 345                 350

Val Lys His Pro Gln Glu Pro Arg His Val Arg Ala Asp His Pro Tyr

        355                 360                 365

Ala Lys Val Val Glu Asn Arg Asn Tyr Gly Ser Ser Ile Glu Ala Met

    370                 375                 380

Ile Leu Ala Pro Pro Ser Pro Ser Glu Ile Leu Pro Gly Asp Pro Pro

385                 390                 395                 400

Arg Pro Pro Thr Cys Gly Phe Leu Thr Arg

                405                 410

 

<210>6

<211>623

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>6

Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly

1               5                   10                  15

Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val

            20                  25                  30

Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn

        35                  40                  45

Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp

    50                  55                  60

Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His

                85                  90                  95

Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu

            100                 105                 110

Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp

        115                 120                 125

Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His

    130                 135                 140

Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly

145                 150                 155                 160

Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val

                165                 170                 175

Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr

            180                 185                 190

Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys

        195                 200                 205

Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr

    210                 215                 220

Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr

225                 230                 235                 240

Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys

                245                 250                 255

Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp

            260                 265                 270

Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val

        275                 280                 285

Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg

    290                 295                 300

Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys

305                 310                 315                 320

Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro

                325                 330                 335

Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser

            340                 345                 350

Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His

        355                 360                 365

Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp

    370                 375                 380

Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro

385                 390                 395                 400

Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr

                405                 410                 415

Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys

            420                 425                 430

Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met

        435                 440                 445

Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys

    450                 455                 460

Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val

465                 470                 475                 480

Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr

                485                 490                 495

Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr

            500                 505                 510

Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val

        515                 520                 525

Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Tyr Ala Ala Trp Thr Gly Gly

    530                 535                 540

Leu Ala Ala Val Val Leu Leu Cys Leu Val Ile Phe Leu Ile Cys Thr

545                 550                 555                 560

Ala Lys Arg Met Arg Val Lys Ala Tyr Arg Val Asp Lys Ser Pro Tyr

                565                 570                 575

Asn Gln Ser Met Tyr Tyr Ala Gly Leu Pro Val Asp Asp Phe Glu Asp

            580                 585                 590

Ser Glu Ser Thr Asp Thr Glu Glu Glu Phe Gly Asn Ala Ile Gly Gly

        595                 600                 605

Ser His Gly Gly Ser Ser Tyr Thr Val Tyr Ile Asp Lys Thr Arg

    610                 615                 620

 

<210>7

<211>575

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<223>gE的Orf68TCM变体；用甲型流感/Fujian TM域替换的gE的跨膜(TM)域和COOH

 

<400>7

Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly

1               5                   10                  15

Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val

            20                  25                  30

Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn

        35                  40                  45

Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp

    50                  55                  60

Val Asn Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His

                85                  90                  95

Glu His His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu

            100                 105                 110

Arg Leu Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp

        115                 120                 125

Asp Thr Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His

    130                 135                 140

Lys Ile Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly

145                 150                 155                 160

Asp Leu Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val

                165                 170                 175

Glu Glu Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr

                 180                 185                 190

Gly Val Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys

           195                 200                 205

Thr Gly Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr

    210                 215                 220

Thr Cys Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr

225                 230                 235                 240

Lys Glu Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys

                245                 250                 255

Glu Ala Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp

            260                 265                 270

Glu Leu Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val

        275                 280                 285

Leu Arg Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg

    290                 295                 300

Gly Ser Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys

305                 310                 315                 320

Gly Asp Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro

                325                 330                 335

Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser

            340                 345                 350

Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His

        355                 360                 365

Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp

    370                 375                 380

Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro

385                 390                 395                 400

Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr

                405                 410                 415

Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys

            420                 425                 430

Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met

        435                 440                 445

Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys

    450                 455                 460

Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val

465                 470                 475                 480

Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala ValAla Tyr Thr Val Val Ser Thr

                485                 490                 495

Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr

            500                 505                 510

Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val

        515                 520                 525

Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser

    530                 535                 540

Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Leu Cys Val Ala Leu Leu Gly Phe Ile

545                 550                 555                 560

Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys Ile

                565                 570                 575

 

<210>8

<211>841

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>8

Met Phe Ala Leu Val Leu Ala Val Val Ile Leu Pro Leu Trp Thr Thr

1               5                   10                  15

Ala Asn Lys Ser Tyr Val Thr Pro Thr Pro Ala Thr Arg Ser Ile Gly

            20                  25                  30

His Met Ser Ala Leu Leu Arg Glu Tyr Ser Asp Arg Asn Met Ser Leu

        35                  40                  45

Lys Leu Glu Ala Phe Tyr Pro Thr Gly Phe Asp Glu Glu Leu Ile Lys

    50                  55                  60

Ser Leu His Trp Gly Asn Asp Arg Lys His Val Phe Leu Val Ile Val

65                  70                  75                  80

Lys Val Asn Pro Thr Thr His Glu Gly Asp Val Gly Leu Val Ile Phe

                85                  90                  95

Pro Lys Tyr Leu Leu Ser Pro Tyr His Phe Lys Ala Glu His Arg Ala

            100                 105                 110

Pro Phe Pro Ala Gly Arg Phe Gly Phe Leu Ser His Pro Val Thr Pro

        115                 120                 125

Asp Val Ser Phe Phe Asp Ser Ser Phe Ala Pro Tyr Leu Thr Thr Gln

    130                 135                 140

His Leu Val Ala Phe Thr Thr Phe Pro Pro Asn Pro Leu Val Trp His

145                 150                 155                 160

Leu Glu Arg Ala Glu Thr Ala Ala Thr Ala Glu Arg Pro Phe Gly Val

                165                 170                 175

Ser Leu Leu Pro Ala Arg Pro Thr Val Pro Lys Asn Thr Ile Leu Glu

            180                 185                 190

His Lys Ala His Phe Ala Thr Trp Asp Ala Leu Ala Arg His Thr Phe

        195                 200                 205

Phe Ser Ala Glu Ala Ile Ile Thr Asn Ser Thr Leu Arg Ile His Val

    210                 215                 220

Pro Leu Phe Gly Ser Val Trp Pro Ile Arg Tyr Trp Ala Thr Gly Ser

225                 230                 235                 240

Val Leu Leu Thr Ser Asp Ser Gly Arg Val Glu Val Asn Ile Gly Val

                245                 250                 255

Gly Phe Met Ser Ser Leu Ile Ser Leu Ser Ser Gly Pro Pro Ile Glu

            260                 265                 270

Leu Ile Val Val Pro His Thr Val Lys Leu Asn Ala Val Thr Ser Asp

        275                 280                 285

Thr Thr Trp Phe Gln Leu Asn Pro Pro Gly Pro Asp Pro Gly Pro Ser

    290                 295                 300

Tyr Arg Val Tyr Leu Leu Gly Arg Gly Leu Asp Met Asn Phe Ser Lys

305                 310                 315                 320

His Ala Thr Val Asp Ile Cys Ala Tyr Pro Glu Glu Ser Leu Asp Tyr

                325                 330                 335

Arg Tyr His Leu Ser Met Ala His Thr Glu Ala Leu Arg Met Thr Thr

            340                 345                 350

Lys Ala Asp Gln His Asp Ile Asn Glu Glu Ser Tyr Tyr His Ile Ala

        355                 360                 365

Ala Arg Ile Ala Thr Ser Ile Phe Ala Leu Ser Glu Met Gly Arg Thr

    370                 375                 380

Thr Glu Tyr Phe Leu Leu Asp Glu Ile Val Asp Val Gln Tyr Gln Leu

385                 390                 395                 400

Lys Phe Leu Asn Tyr Ile Leu Met Arg Ile Gly Ala Gly Ala His Pro

                405                 410                 415

Asn Thr Ile Ser Gly Thr Ser Asp Leu Ile Phe Ala Asp Pro Ser Gln

            420                 425                 430

Leu His Asp Glu Leu Ser Leu Leu Phe Gly Gln Val Lys Pro Ala Asn

        435                 440                 445

Val Asp Tyr Phe Ile Ser Tyr Asp Glu Ala Arg Asp Gln Leu Lys Thr

    450                 455                 460

Ala Tyr Ala Leu Ser Arg Gly Gln Asp His Val Asn Ala Leu Ser Leu

465                 470                 475                 480

Ala Arg Arg Val Ile Met Ser Ile Tyr Lys Gly Leu Leu Val Lys Gln

                485                 490                 495

Asn Leu Asn Ala Thr Glu Arg Gln Ala Leu Phe Phe Ala Ser Met Ile

            500                 505                 510

Leu Leu Asn Phe Arg Glu Gly Leu Glu Asn Ser Ser Arg Val Leu Asp

        515                 520                 525

Gly Arg Thr Thr Leu Leu Leu Met Thr Ser Met Cys Thr Ala Ala His

    530                 535                 540

Ala Thr Gln Ala Ala Leu Asn Ile Gln Glu Gly Leu Ala Tyr Leu Asn

545                 550                 555                 560

Pro Ser Lys His Met Phe Thr Ile Pro Asn Val Tyr Ser Pro Cys Met

                565                 570                 575

Gly Ser Leu Arg Thr Asp Leu Thr Glu Glu Ile His Val Met Asn Leu

            580                 585                 590

Leu Ser Ala Ile Pro Thr Arg Pro Gly Leu Asn Glu Val Leu His Thr

        595                 600                 605

Gln Leu Asp Glu Ser Glu Ile Phe Asp Ala Ala Phe Lys Thr Met Met

    610                 615                 620

Ile Phe Thr Thr Trp Thr Ala Lys Asp Leu His Ile Leu His Thr His

625                 630                 635                 640

Val Pro Glu Val Phe Thr Cys Gln Asp Ala Ala Ala Arg Asn Gly Glu

                645                 650                 655

Tyr Val Leu Ile Leu Pro Ala Val Gln Gly His Ser Tyr Val Ile Thr

            660                 665                 670

Arg Asn Lys Pro Gln Arg Gly Leu Val Tyr Ser Leu Ala Asp Val Asp

        675                 680                 685

Val Tyr Asn Pro Ile Ser Val Val Tyr Leu Ser Arg Asp Thr Cys Val

    690                 695                 700

Ser Glu His Gly Val Ile Glu Thr Val Ala Leu Pro His Pro Asp Asn

705                 710                 715                 720

Leu Lys Glu Cys Leu Tyr Cys Gly Ser Val Phe Leu Arg Tyr Leu Thr

                725                 730                 735

Thr Gly Ala Ile Met Asp Ile Ile Ile Ile Asp Ser Lys Asp Thr Glu

            740                 745                 750

Arg Gln Leu Ala Ala Met Gly Asn Ser Thr Ile Pro Pro Phe Asn Pro

        755                 760                 765

Asp Met His Gly Asp Asp Ser Lys Ala Val Leu Leu Phe Pro Asn Gly

    770                 775                 780

Thr Val ValThr Leu Leu Gly Phe Glu Arg Arg Gln Ala Ile Arg Met

785                 790                 795                 800

Ser Gly Gln Tyr Leu Gly Ala Ser Leu Gly Gly Ala Phe Leu Ala Val

                805                 810                 815

Val Gly Phe Gly Ile Ile Gly Trp Met Leu Cys Gly Asn Ser Arg Leu

            820                 825                 830

Arg Glu Tyr Asn Lys Ile Pro Leu Thr

        835                 840

 

<210>9

<211>354

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>9

Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln

1               5                   10                  15

Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val

            20                  25                  30

Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr

        35                  40                  45

Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr

    50                  55                  60

Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val

65                  70                  75                  80

Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro

                85                  90                  95

Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp

            100                 105                 110

His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly

        115                 120                 125

Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr

    130                 135                 140

Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile

145                 150                 155                 160

Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly

                165                 170                 175

Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala

            180                 185                 190

Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly

        195                 200                 205

Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys

    210                 215                 220

Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu

225                 230                 235                 240

Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr

                245                 250                 255

Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu Asn

            260                 265                 270

Leu Leu Ile Ile Ile Pro Ile Val Ala Ser Val Met Ile Leu Thr Ala

        275                 280                 285

Met Val Ile Val Ile Val Ile Ser Val Lys Arg Arg Arg Ile Lys Lys

    290                 295                 300

His Pro Ile Tyr Arg Pro Asn Thr Lys Thr Arg Arg Gly Ile Gln Asn

305                 310                 315                 320

Ala Thr Pro Glu Ser Asp Val Met Leu Glu Ala Ala Ile Ala Gln Leu

                325                 330                 335

Ala Thr Ile Arg Glu Glu Ser Pro Pro His Ser Val Val Asn Pro Phe

            340                 345                 350

Val Lys

 

<210>10

<211>868

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>10

Met Phe Val Thr Ala Val Val Ser Val Ser Pro Ser Ser Phe Tyr Glu

1               5                   10                  15

Ser Leu Gln Val Glu Pro Thr Gln Ser Glu Asp Ile Thr ArgSer Ala

            20                  25                  30

His Leu Gly Asp Gly Asp Glu Ile Arg Glu Ala Ile His Lys Ser Gln

        35                  40                  45

Asp Ala Glu Thr Lys Pro Thr Phe Tyr Val Cys Pro Pro Pro Thr Gly

    50                  55                  60

Ser Thr Ile Val Arg Leu Glu Pro Thr Arg Thr Cys Pro Asp Tyr His

65                  70                  75                  80

Leu Gly Lys Asn Phe Thr Glu Gly Ile Ala Val Val Tyr Lys Glu Asn

                85                  90                  95

Ile Ala Ala Tyr Lys Phe Lys Ala Thr Val Tyr Tyr Lys Asp Val Ile

            100                 105                 110

Val Ser Thr Ala Trp Ala Gly Ser Ser Tyr Thr Gln Ile Thr Asn Arg

        115                 120                 125

Tyr Ala Asp Arg Val Pro Ile Pro Val Ser Glu Ile Thr Asp Thr Ile

    130                 135                 140

Asp Lys Phe Gly Lys Cys Ser Ser Lys Ala Thr Tyr Val Arg Asn Asn

145                 150                 155                 160

His Lys Val Glu Ala Phe Asn Glu Asp Lys Asn Pro Gln Asp Met Pro

                165                 170                 175

Leu Ile Ala Ser Lys Tyr Asn Ser Val Gly Ser Lys Ala Trp His Thr

            180                 185                 190

Thr Asn Asp Thr Tyr Met Val Ala Gly Thr Pro Gly Thr Tyr Arg Thr

        195                 200                 205

Gly Thr Ser Val Asn Cys Ile Ile Glu Glu Val Glu Ala Arg Ser Ile

    210                 215                 220

Phe Pro Tyr Asp Ser Phe Gly Leu Ser Thr Gly Asp Ile Ile Tyr Met

225                 230                 235                 240

Ser Pro Phe Phe Gly Leu Arg Asp Gly Ala Tyr Arg Glu His Ser Asn

                245                 250                 255

Tyr Ala Met Asp Arg Phe His Gln Phe Glu Gly Tyr Arg Gln Arg Asp

            260                 265                 270

Leu Asp Thr Arg Ala Leu Leu Glu Pro Ala Ala Arg Asn Phe Leu Val

        275                 280                 285

Thr Pro His Leu Thr Val Gly Trp Asn Trp Lys Pro Lys Arg Thr Glu

    290                 295                 300

Val Cys Ser Leu Val Lys Trp Arg Glu Val Glu Asp Val Val Arg Asp

305                 310                 315                 320

Glu Tyr Ala His Asn Phe Arg Phe Thr Met Lys Thr Leu Ser Thr Thr

                325                 330                 335

Phe Ile Ser Glu Thr Asn Glu Phe Asn Leu Asn Gln Ile His Leu Ser

            340                 345                 350

Gln Cys Val Lys Glu Glu Ala Arg Ala Ile Ile Asn Arg Ile Tyr Thr

        355                 360                 365

Thr Arg Tyr Asn Ser Ser His Val Arg Thr Gly Asp Ile Gln Thr Tyr

    370                 375                 380

Leu Ala Arg Gly Gly Phe Val Val Val Phe Gln Pro Leu Leu Ser Asn

385                 390                 395                 400

Ser Leu Ala Arg Leu Tyr Leu Gln Glu Leu Val Arg Glu Asn Thr Asn

                405                 410                 415

His Ser Pro Gln Lys His Pro Thr Arg Asn Thr Arg Ser Arg Arg Ser

            420                 425                 430

Val Pro Val Glu Leu Arg Ala Asn Arg Thr Ile Thr Thr Thr Ser Ser

        435                 440                 445

Val Glu Phe Ala Met Leu Gln Phe Thr Tyr Asp His Ile Gln Glu His

    450                 455                 460

Val Asn Glu Met Leu Ala Arg Ile Ser Ser Ser Trp Cys Gln Leu Gln

465                 470                 475                 480

Asn Arg Glu Arg Ala Leu Trp Ser Gly Leu Phe Pro Ile Asn Pro Ser

                485                 490                 495

Ala Leu Ala Ser Thr Ile Leu Asp Gln Arg Val Lys Ala Arg Ile Leu

            500                 505                 510

Gly Asp Val Ile Ser Val Ser Asn Cys Pro Glu Leu Gly Ser Asp Thr

        515                 520                 525

Arg Ile Ile Leu Gln Asn Ser Met Arg Val Ser Gly Ser Thr Thr Arg

    530                 535                 540

Cys Tyr Ser Arg Pro Leu Ile Ser Ile Val Ser Leu Asn Gly Ser Gly

545                 550                 555                 560

Thr Val Glu Gly Gln Leu Gly Thr Asp Asn Glu Leu Ile Met Ser Arg

                565                 570                 575

Asp Leu Leu Glu Pro Cys Val Ala Asn His Lys Arg Tyr Phe Leu Phe

            580                 585                 590

Gly His His Tyr Val Tyr Tyr Glu Asp Tyr Arg Tyr Val Arg Glu Ile

        595                 600                 605

Ala Val His Asp Val Gly Met Ile Ser Thr Tyr Val Asp Leu Asn Leu

    610                 615                 620

Thr Leu Leu Lys Asp Arg Glu Phe Met Pro Leu Gln Val Tyr Thr Arg

625                 630                 635                 640

Asp Glu Leu Arg Asp Thr Gly Leu Leu Asp Tyr Ser Glu Ile Gln Arg

                645                 650                 655

Arg Asn Gln Met His Ser Leu Arg Phe Tyr Asp Ile Asp Lys Val Val

            660                 665                 670

Gln Tyr Asp Ser Gly Thr Ala Ile Met Gln Gly Met Ala Gln Phe Phe

        675                 680                 685

Gln Gly Leu Gly Thr Ala Gly Gln Ala Val Gly His Val Val Leu Gly

    690                 695                 700

Ala Thr Gly Ala Leu Leu Ser Thr Val His Gly Phe Thr Thr Phe Leu

705                 710                 715                 720

Ser Asn Pro Phe Gly Ala Leu Ala Val Gly Leu Leu Val Leu Ala Gly

                725                 730                 735

Leu Val Ala Ala Phe Phe Ala Tyr Arg Tyr Val Leu Lys Leu Lys Thr

            740                 745                 750

Ser Pro Met Lys Ala Leu Tyr Pro Leu Thr Thr Lys Gly Leu Lys Gln

        755                 760                 765

Leu Pro Glu Gly Met Asp Pro Phe Ala Glu Lys Pro Asn Ala Thr Asp

    770                 775                 780

Thr Pro Ile Glu Glu Ile Gly Asp Ser Gln Asn Thr Glu Pro Ser Val

785                 790                 795                 800

Asn Ser Gly Phe Asp Pro Asp Lys Phe Arg Glu Ala Gln Glu Met Ile

                805                 810                 815

Lys Tyr Met Thr Leu Val Ser Ala Ala Glu Arg Gln Glu Ser Lys Ala

            820                 825                 830

Arg Lys Lys Asn Lys Thr Ser Ala Leu Leu Thr Ser Arg Leu Thr Gly

        835                 840                 845

Leu Ala Leu Arg Asn Arg Arg Gly Tyr Ser Arg Val Arg Thr Glu Asn

    850                 855                 860

Val Thr Gly Val

865

 

<210>11

<211>1872

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>为了在昆虫细胞中的表达而经密码子优化的VZV Orf68gE

 

<400>11

atgggcaccg tgaacaagcc cgtggtgggc gtgctgatgg gtttcggtat catcaccggc       60

accctgcgta tcaccaaccc cgtgcgtgct tccgtgctgc gttacgacga cttccacacc      120

gacgaggaca agctggacac caactccgtg tacgagccct actaccactc cgaccacgct      180

gagtcctctt gggtgaaccg tggcgagtcc tcccgtaagg cttacgacca caactccccc      240

tacatctggc cccgtaacga ctacgacggt ttcctcgaga acgctcacga gcaccacggt      300

gtctacaacc agggtcgtgg tatcgactcc ggcgagcgtc tgatgcagcc cacccagatg      360

tccgctcagg aggacctggg cgacgacacc ggtatccacg tgatccccac cctgaacggt      420

gacgaccgtc acaagatcgt gaacgtggac cagcgccagt acggtgacgt gttcaagggt      480

gacctgaacc ccaagcccca gggccagcgt ctgatcgagg tgtccgtgga ggagaaccac      540

cccttcaccc tgcgtgctcc catccagcgt atctacggtg tccgttacac cgagacctgg      600

tccttcctcc cctccctgac ctgcaccggt gacgctgctc ccgctatcca gcacatctgc      660

ctgaagcaca ccacctgctt ccaggacgtg gtggtggacg tggactgcgc tgagaacacc      720

aaggaggacc agctggctga gatctcctac aggttccagg gcaagaagga ggctgaccag      780

ccctggatcg tggtgaacac ctccaccctg ttcgacgagc tggagctgga cccccccgag      840

atcgagcccg gtgtcctgaa ggtgctgcgt accgagaagc agtacctggg cgtgtacatc      900

tggaacatgc gtggttccga cggcacctcc acctacgcta ccttcctcgt gacctggaag      960

ggtgacgaaa agacccgtaa ccccaccccc gctgtgaccc cccagccccg tggtgctgaa     1020

ttccatatgt ggaactacca ctctcacgtg ttctccgtgg gtgacacctt ctccctggct     1080

atgcacctgc agtacaagat ccacgaggct cccttcgacc tgctgctcga gtggctgtac     1140

gtgcccatcg accccacctg ccagcccatg cgcctgtact ccacctgcct gtaccacccc     1200

aacgctcccc agtgcctgtc ccacatgaac tccggttgca ccttcacctc cccccacctg     1260

gcccagcgtg tggcttccac cgtgtaccag aactgcgagc acgctgacaa ctacaccgct     1320

tactgcctgg gtatcagcca catggagcct tccttcggtc tgatcctgca cgacggtggc     1380

accaccctga agttcgtgga cacccccgag tccctgtccg gtctgtacgt gttcgtggtg     1440

tacttcaacg gtcacgtgga ggctgtcgct tacaccgtgg tgtccaccgt ggaccacttc     1500

gtgaacgcta tcgaggagcg tggtttcccc cccaccgctg gccagccccc tgctaccacc     1560

aagcccaagg agatcacccc cgtcaacccc ggcacctccc ctctgctgcg ctacgctgct     1620

tggaccggtg gtctggctgc tgtggtgctg ctgtgcctgg tgatcttcct gatctgcacc     1680

gctaagagga tgcgtgtgaa ggcttaccgt gtggacaagt ccccttacaa ccagtccatg     1740

tactacgctg gtctgcccgt cgacgacttc gaggactccg agtccaccga caccgaggag     1800

gagttcggta acgctatcgg tggttcccac ggtggttcct cctacaccgt gtacatcgac     1860

aagacccgct aa                                                         1872

 

<210>12

<211>1728

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>为了在昆虫细胞中的表达而经密码子优化的VZV Orf68TCM

 

<400>12

atgggcaccg tgaacaagcc cgtggtgggc gtgctgatgg gtttcggtat catcaccggc       60

accctgcgta tcaccaaccc cgtgcgtgct tccgtgctgc gttacgacga cttccacacc      120

gacgaggaca agctggacac caactccgtg tacgagccct actaccactc cgaccacgct      180

gagtcctctt gggtgaaccg tggcgagtcc tcccgtaagg cttacgacca caactccccc      240

tacatctggc cccgtaacga ctacgacggt ttcctcgaga acgctcacga gcaccacggt      300

gtctacaacc agggtcgtgg tatcgactcc ggcgagcgtc tgatgcagcc cacccagatg      360

tccgctcagg aggacctggg cgacgacacc ggtatccacg tgatccccac cctgaacggt      420

gacgaccgtc acaagatcgt gaacgtggac cagcgccagt acggtgacgt gttcaagggt      480

gacctgaacc ccaagcccca gggccagcgt ctgatcgagg tgtccgtgga ggagaaccac      540

cccttcaccc tgcgtgctcc catccagcgt atctacggtg tccgttacac cgagacctgg      600

tccttcctcc cctccctgac ctgcaccggt gacgctgctc ccgctatcca gcacatctgc      660

ctgaagcaca ccacctgctt ccaggacgtg gtggtggacg tggactgcgc tgagaacacc      720

aaggaggacc agctggctga gatctcctac aggttccagg gcaagaagga ggctgaccag      780

ccctggatcg tggtgaacac ctccaccctg ttcgacgagc tggagctgga cccccccgag      840

atcgagcccg gtgtcctgaa ggtgctgcgt accgagaagc agtacctggg cgtgtacatc      900

tggaacatgc gtggttccga cggcacctcc acctacgcta ccttcctcgt gacctggaag     960

ggtgacgaaa agacccgtaa ccccaccccc gctgtgaccc cccagccccg tggtgctgaa     1020

ttccatatgt ggaactacca ctctcacgtg ttctccgtgg gtgacacctt ctccctggct     1080

atgcacctgc agtacaagat ccacgaggct cccttcgacc tgctgctcga gtggctgtac     1140

gtgcccatcg accccacctg ccagcccatg cgcctgtact ccacctgcct gtaccacccc     1200

aacgctcccc agtgcctgtc ccacatgaac tccggttgca ccttcacctc cccccacctg     1260

gcccagcgtg tggcttccac cgtgtaccag aactgcgagc acgctgacaa ctacaccgct     1320

tactgcctgg gtatcagcca catggagcct tccttcggtc tgatcctgca cgacggtggc     1380

accaccctga agttcgtgga cacccccgag tccctgtccg gtctgtacgt gttcgtggtg     1440

tacttcaacg gtcacgtgga ggctgtcgct tacaccgtgg tgtccaccgt ggaccacttc     1500

gtgaacgcta tcgaggagcg tggtttcccc cccaccgctg gccagccccc tgctaccacc     1560

aagcccaagg agatcacccc cgtcaacccc ggcacctccc ctctgctgcg cgactggatc     1620

ttgtggatct ccttcgctat ctcctgcttc ctgctgtgcg tggctctgct gggtttcatc     1680

atgtgggctt gccagaaggg taacatccgt tgcaacatct gcatctaa                  1728

 

<210>13

<211>1310

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>13

Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser

1               5                   10                  15

Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu

        35                  40                  45

Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val

    50                  55                  60

Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp

65                  70                  75                  80

Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln

                85                  90                  95

Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr

            100                 105                 110

Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser

        115                 120                 125

Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro

    130                 135                 140

Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro

145                 150                 155                 160

Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala

                165                 170                 175

Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr

            180                 185                 190

Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln

        195                 200                 205

Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His

    210                 215                 220

Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro

225                 230                 235                 240

Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro

                245                 250                 255

Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln

            260                 265                 270

Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala

        275                 280                 285

Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala

    290                 295                 300

Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro

305                 310                 315                 320

Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile

                325                 330                 335

Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val

            340                 345                 350

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu

        355                 360                 365

Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser

    370                 375                 380

Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser

385                 390                 395                 400

Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr

                405                 410                 415

Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu

            420                 425                 430

Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg

        435                 440                 445

Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro

    450                 455                 460

Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val

465                 470                 475                 480

Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu

                485                 490                 495

Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val

            500                 505                 510

Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala

        515                 520                 525

Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu

    530                 535                 540

Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr

545                 550                 555                 560

Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser

                565                 570                 575

Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu

            580                 585                 590

Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg

        595                 600                 605

Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg

    610                 615                 620

Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala

625                 630                 635                 640

Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln

                645                 650                 655

Thr Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys

            660                 665                 670

Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro

        675                 680                 685

Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala

    690                 695                 700

Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg

705                 710                 715                 720

Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro

                725                 730                 735

Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe

            740                 745                 750

Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln

        755                 760                 765

Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp

    770                 775                 780

Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro

785                 790                 795                 800

Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg

                805                 810                 815

Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala

            820                 825                 830

Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile

        835                 840                 845

Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr

    850                 855                 860

Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu

865                 870                 875                 880

Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr

                885                 890                 895

His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu

            900                 905                 910

Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala

        915                 920                 925

Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg

    930                 935                 940

Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly

945                 950                 955                 960

Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro

                965                 970                 975

Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly

            980                 985                 990

Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser  Ser Arg Thr Phe Gly  Pro Ala Ser

        995                 1000                 1005

Phe Ala  Arg Ile Glu Thr Ala  Phe Ala Asn Leu Tyr  Pro Gly Glu

    1010                 1015                 1020

Gln Pro  Leu Cys Leu Cys Arg  Gly Gly Asn Val Ala  Tyr Thr Val

    1025                 1030                 1035

Cys Thr  Arg Ala Gly Pro Lys  Thr Arg Val Pro Leu  Ser Pro Arg

    1040                 1045                 1050

Glu Tyr  Arg Gln Tyr Val Leu  Pro Gly Phe Asp Gly  Cys Lys Asp

    1055                 1060                 1065

Leu Ala  Arg Gln Ser Arg Gly  Leu Gly Leu Gly Ala  Ala Asp Phe

    1070                 1075                 1080

Val Asp  Glu Ala Ala His Ser  His Arg Ala Ala Asn  Arg Trp Gly

    1085                 1090                 1095

Leu Gly  Ala Ala Leu Arg Pro  Val Phe Leu Pro Glu  Gly Arg Arg

    1100                 1105                 1110

Pro Gly  Ala Ala Gly Pro Glu  Ala Gly Asp Val Pro  Thr Trp Ala

    1115                 1120                 1125

Arg Val  Phe Cys Arg His Ala  Leu Leu Glu Pro Asp  Pro Ala Ala

    1130                 1135                 1140

Glu Pro  Leu Val Leu Pro Pro  Val Ala Gly Arg Ser  Val Ala Leu

    1145                 1150                 1155

Tyr Ala  Ser Ala Asp Glu Ala  Arg Asn Ala Leu Pro  Pro Ile Pro

    1160                 1165                 1170

Arg Val  Met Trp Pro Pro Gly  Phe Gly Ala Ala Glu  Thr Val Leu

    1175                 1180                 1185

Glu Gly  Ser Asp Gly Thr Arg  Phe Val Phe Gly His  His Gly Gly

    1190                 1195                 1200

Ser Glu  Arg Pro Ala Glu Thr  Gln Ala Gly Arg Gln  Arg Arg Thr

    1205                 1210                 1215

Ala Asp  Asp Arg Glu His Ala  Leu Glu Pro Asp Asp  Trp Glu Val

    1220                 1225                 1230

Gly Cys  Glu Asp Ala Trp Asp  Ser Glu Glu Gly Gly  Gly Asp Asp

    1235                 1240                 1245

Gly Asp  Ala Pro Gly Ser Ser  Phe Gly Val Ser Ile  Val Ser Val

    1250                 1255                 1260

Ala Pro  Gly Val Leu Arg Asp  Arg Arg Val Gly Leu  Arg Pro Ala

    1265                 1270                 1275

Val Lys  Val Glu Leu Leu Ser  Ser Ser Ser Ser Ser  Glu Asp Glu

    1280                 1285                 1290

Asp Asp  Val Trp Gly Gly Arg  Gly Gly Arg Ser Pro  Pro Gln Ser

    1295                 1300                 1305

Arg Gly

    1310

 

<210>14

<211>1310

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(657)..(657)

<223>Xaa可以是Thr或Ala

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1208)..(1208)

<223>Xaa可以是Ala或Ser

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1228)..(1228)

<223>Xaa可以是Pro或Leu

 

<400>14

Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser

1                5                  10                  15

Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu

        35                  40                  45

Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His Glu Ile Val

    50                  55                  60

Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp

65                  70                  75                  80

Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln

                85                  90                  95

Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr

            100                 105                 110

Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser

        115                 120                 125

Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro

    130                 135                 140

Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro

145                 150                 155                 160

Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala

                165                 170                 175

Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr

            180                 185                 190

Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln

        195                 200                 205

Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His

    210                 215                 220

Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro

225                 230                 235                 240

Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro

                245                 250                 255

Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln

            260                 265                 270

Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala

        275                 280                 285

Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala

    290                 295                 300

Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro

305                 310                 315                 320

Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile

                325                 330                 335

Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val

            340                 345                 350

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu

        355                 360                 365

Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser

    370                 375                 380

Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser

385                 390                 395                 400

Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr

                405                 410                 415

Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu

            420                 425                 430

Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg

        435                 440                 445

Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro

    450                 455                 460

Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val

465                 470                 475                 480

Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu

                485                 490                 495

Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val

            500                 505                 510

Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala

        515                 520                 525

Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu

    530                 535                 540

Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr

545                 550                 555                 560

Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser

                565                 570                 575

Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu

            580                 585                 590

Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg

        595                 600                 605

Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg

    610                 615                 620

Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala

625                 630                 635                 640

Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln

                645                 650                 655

Xaa Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys

            660                 665                 670

Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro

        675                 680                 685

Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala

    690                 695                 700

Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg

705                 710                 715                 720

Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro

                725                 730                 735

Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe

            740                 745                 750

Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln

        755                 760                 765

Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp

    770                 775                 780

Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro

785                 790                 795                 800

Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg

                805                 810                 815

Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala

            820                 825                 830

Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile

        835                 840                 845

Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr

    850                 855                 860

Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu

865                 870                 875                 880

Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr

                885                 890                 895

His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu

            900                 905                 910

Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala

        915                 920                 925

Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg

    930                 935                 940

Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly

945                 950                 955                 960

Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro

                965                 970                 975

Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly

            980                 985                 990

Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser  Ser Arg Thr Phe Gly  Pro Ala Ser

        995                 1000                 1005

Phe Ala  Arg Ile Glu Thr Ala  Phe Ala Asn Leu Tyr  Pro Gly Glu

    1010                 1015                 1020

Gln Pro  Leu Cys Leu Cys Arg  Gly Gly Asn Val Ala  Tyr Thr Val

    1025                 1030                 1035

Cys Thr  Arg Ala Gly Pro Lys  Thr Arg Val Pro Leu  Ser Pro Arg

    1040                 1045                 1050

Glu Tyr  Arg Gln Tyr Val Leu  Pro Gly Phe Asp Gly  Cys Lys Asp

    1055                 1060                 1065

Leu Ala  Arg Gln Ser Arg Gly  Leu Gly Leu Gly Ala  Ala Asp Phe

    1070                 1075                 1080

Val Asp  Glu Ala Ala His Ser  His Arg Ala Ala Asn  Arg Trp Gly

    1085                 1090                 1095

Leu Gly  Ala Ala Leu Arg Pro  Val Phe Leu Pro Glu  Gly Arg Arg

    1100                 1105                 1110

Pro Gly  Ala Ala Gly Pro Glu  Ala Gly Asp Val Pro  Thr Trp Ala

    1115                 1120                 1125

Arg Val  Phe Cys Arg His Ala  Leu Leu Glu Pro Asp  Pro Ala Ala

    1130                 1135                 1140

Glu Pro  Leu Val Leu Pro Pro  Val Ala Gly Arg Ser  Val Ala Leu

    1145                 1150                 1155

Tyr Ala  Ser Ala Asp Glu Ala  Arg Asn Ala Leu Pro  Pro Ile Pro

    1160                 1165                 1170

Arg Val  Met Trp Pro Pro Gly  Phe Gly Ala Ala Glu  Thr Val Leu

    1175                 1180                 1185

Glu Gly  Ser Asp Gly Thr Arg  Phe Val Phe Gly His  His Gly Gly

    1190                 1195                 1200

Ser Glu  Arg Pro Xaa Glu Thr  Gln Ala Gly Arg Gln  Arg Arg Thr

    1205                 1210                 1215

Ala Asp  Asp Arg Glu His Ala  Leu Glu Xaa Asp Asp  Trp Glu Val

    1220                 1225                 1230

Gly Cys  Glu Asp Ala Trp Asp  Ser Glu Glu Gly Gly  Gly Asp Asp

    1235                 1240                 1245

Gly Asp  Ala Pro Gly Ser Ser  Phe Gly Val Ser Ile  Val Ser Val

    1250                 1255                 1260

Ala Pro  Gly Val Leu Arg Asp  Arg Arg Val Gly Leu  Arg Pro Ala

    1265                 1270                 1275

Val Lys  Val Glu Leu Leu Ser  Ser Ser Ser Ser Ser  Glu Asp Glu

    1280                 1285                 1290

Asp Asp  Val Trp Gly Gly Arg  Gly Gly Arg Ser Pro  Pro Gln Ser

    1295                 1300                 1305

Arg Gly

    1310

 

<210>15

<211>1310

<212>PRT

<213>水痘带状疱疹病毒

 

<400>15

Met Asp Thr Pro Pro Met Gln Arg Ser Thr Pro Gln Arg Ala Gly Ser

1               5                   10                  15

Pro Asp Thr Leu Glu Leu Met Asp Leu Leu Asp Ala Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Glu His Arg Ala Arg Val Val Thr Ser Ser Gln Pro Asp Asp Leu

        35                  40                  45

Leu Phe Gly Glu Asn Gly Val Met Val Gly Arg Glu His GluIle Val

    50                  55                  60

Ser Ile Pro Ser Val Ser Gly Leu Gln Pro Glu Pro Arg Thr Glu Asp

65                  70                  75                  80

Val Gly Glu Glu Leu Thr Gln Asp Asp Tyr Val Cys Glu Asp Gly Gln

                85                  90                  95

Asp Leu Met Gly Ser Pro Val Ile Pro Leu Ala Glu Val Phe His Thr

            100                 105                 110

Arg Phe Ser Glu Ala Gly Ala Arg Glu Pro Thr Gly Ala Asp Arg Ser

        115                 120                 125

Leu Glu Thr Val Ser Leu Gly Thr Lys Leu Ala Arg Ser Pro Lys Pro

    130                 135                 140

Pro Met Asn Asp Gly Glu Thr Gly Arg Gly Thr Thr Pro Pro Phe Pro

145                 150                 155                 160

Gln Ala Phe Ser Pro Val Ser Pro Ala Ser Pro Val Gly Asp Ala Ala

                165                 170                 175

Gly Asn Asp Gln Arg Glu Asp Gln Arg Ser Ile Pro Arg Gln Thr Thr

            180                 185                 190

Arg Gly Asn Ser Pro Gly Leu Pro Ser Val Val His Arg Asp Arg Gln

        195                 200                 205

Thr Gln Ser Ile Ser Gly Lys Lys Pro Gly Asp Glu Gln Ala Gly His

    210                 215                 220

Ala His Ala Ser Gly Asp Gly Val Val Leu Gln Lys Thr Gln Arg Pro

225                 230                 235                 240

Ala Gln Gly Lys Ser Pro Lys Lys Lys Thr Leu Lys Val Lys Val Pro

                245                 250                 255

Leu Pro Ala Arg Lys Pro Gly Gly Pro Val Pro Gly Pro Val Glu Gln

            260                 265                 270

Leu Tyr His Val Leu Ser Asp Ser Val Pro Ala Lys Gly Ala Lys Ala

        275                 280                 285

Asp Leu Pro Phe Glu Thr Asp Asp Thr Arg Pro Arg Lys His Asp Ala

    290                 295                 300

Arg Gly Ile Thr Pro Arg Val Pro Gly Arg Ser Ser Gly Gly Lys Pro

305                 310                 315                 320

Arg Ala Phe Leu Ala Leu Pro Gly Arg Ser His Ala Pro Asp Pro Ile

                325                 330                 335

Glu Asp Asp Ser Pro Val Glu Lys Lys Pro Lys Ser Arg Glu Phe Val

            340                 345                 350

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Gly Ser Ser Ser Glu Asp Glu

        355                 360                 365

Asp Asp Glu Pro Arg Arg Val Ser Val Gly Ser Glu Thr Thr Gly Ser

    370                 375                 380

Arg Ser Gly Arg Glu His Ala Pro Ser Pro Ser Asn Ser Asp Asp Ser

385                 390                 395                 400

Asp Ser Asn Asp Gly Gly Ser Thr Lys Gln Asn Ile Gln Pro Gly Tyr

                405                 410                 415

Arg Ser Ile Ser Gly Pro Asp Pro Arg Ile Arg Lys Thr Lys Arg Leu

            420                 425                 430

Ala Gly Glu Pro Gly Arg Gln Arg Gln Lys Ser Phe Ser Leu Pro Arg

        435                 440                 445

Ser Arg Thr Pro Ile Ile Pro Pro Val Ser Gly Pro Leu Met Met Pro

    450                 455                 460

Asp Gly Ser Pro Trp Pro Gly Ser Ala Pro Leu Pro Ser Asn Arg Val

465                 470                 475                 480

Arg Phe Gly Pro Ser Gly Glu Thr Arg Glu Gly His Trp Glu Asp Glu

                485                 490                 495

Ala Val Arg Ala Ala Arg Ala Arg Tyr Glu Ala Ser Thr Glu Pro Val

            500                 505                 510

Pro Leu Tyr Val Pro Glu Leu Gly Asp Pro Ala Arg Gln Tyr Arg Ala

        515                 520                 525

Leu Ile Asn Leu Ile Tyr Cys Pro Asp Arg Asp Pro Ile Ala Trp Leu

    530                 535                 540

Gln Asn Pro Lys Leu Thr Gly Val Asn Ser Ala Leu Asn Gln Phe Tyr

545                 550                 555                 560

Gln Lys Leu Leu Pro Pro Gly Arg Ala Gly Thr Ala Val Thr Gly Ser

                565                 570                 575

Val Ala Ser Pro Val Pro His Val Gly Glu Ala Met Ala Thr Gly Glu

            580                 585                 590

Ala Leu Trp Ala Leu Pro His Ala Ala Ala Ala Val Ala Met Ser Arg

        595                 600                 605

Arg Tyr Asp Arg Ala Gln Lys His Phe Ile Leu Gln Ser Leu Arg Arg

    610                 615                 620

Ala Phe Ala Ser Met Ala Tyr Pro Glu Ala Thr Gly Ser Ser Pro Ala

625                 630                 635                 640

Ala Arg Ile Ser Arg Gly His Pro Ser Pro Thr Thr Pro Ala Thr Gln

                645                 650                 655

Ala Pro Asp Pro Gln Pro Ser Ala Ala Ala Arg Ser Leu Ser Val Cys

            660                 665                 670

Pro Pro Asp Asp Arg Leu Arg Thr Pro Arg Lys Arg Lys Ser Gln Pro

        675                 680                 685

Val Glu Ser Arg Ser Leu Leu Asp Lys Ile Arg Glu Thr Pro Val Ala

    690                 695                 700

Asp Ala Arg Val Ala Asp Asp His Val Val Ser Lys Ala Lys Arg Arg

705                 710                 715                 720

Val Ser Glu Pro Val Thr Ile Thr Ser Gly Pro Val Val Asp Pro Pro

                725                 730                 735

Ala Val Ile Thr Met Pro Leu Asp Gly Pro Ala Pro Asn Gly Gly Phe

            740                 745                 750

Arg Arg Ile Pro Arg Gly Ala Leu His Thr Pro Val Pro Ser Asp Gln

        755                 760                 765

Ala Arg Lys Ala Tyr Cys Thr Pro Glu Thr Ile Ala Arg Leu Val Asp

    770                 775                 780

Asp Pro Leu Phe Pro Thr Ala Trp Arg Pro Ala Leu Ser Phe Asp Pro

785                 790                 795                 800

Gly Ala Leu Ala Glu Ile Ala Ala Arg Arg Pro Gly Gly Gly Asp Arg

                805                 810                 815

Arg Phe Gly Pro Pro Ser Gly Val Glu Ala Leu Arg Arg Arg Cys Ala

            820                 825                 830

Trp Met Arg Gln Ile Pro Asp Pro Glu Asp Val Arg Leu Leu Ile Ile

        835                 840                 845

Tyr Asp Pro Leu Pro Gly Glu Asp Ile Asn Gly Pro Leu Glu Ser Thr

    850                 855                 860

Leu Ala Thr Asp Pro Gly Pro Ser Trp Ser Pro Ser Arg Gly Gly Leu

865                 870                 875                 880

Ser Val Val Leu Ala Ala Leu Ser Asn Arg Leu Cys Leu Pro Ser Thr

                885                 890                 895

His Ala Trp Ala Gly Asn Trp Thr Gly Pro Pro Asp Val Ser Ala Leu

            900                 905                 910

Asn Ala Arg Gly Val Leu Leu Leu Ser Thr Arg Asp Leu Ala Phe Ala

        915                 920                 925

Gly Ala Val Glu Tyr Leu Gly Ser Arg Leu Ala Ser Ala Arg Arg Arg

    930                 935                 940

Leu Leu Val Leu Asp Ala Val Ala Leu Glu Arg Trp Pro Arg Asp Gly

945                 950                 955                 960

Pro Ala Leu Ser Gln Tyr His Val Tyr Val Arg Ala Pro Ala Arg Pro

                965                 970                 975

Asp Ala Gln Ala Val Val Arg Trp Pro Asp Ser Ala Val Thr Glu Gly

            980                 985                 990

Leu Ala Arg Ala Val Phe Ala Ser  Ser Arg Thr Phe Gly  Pro Ala Ser

        995                 1000                 1005

Phe Ala  Arg Ile Glu Thr Ala  Phe Ala Asn Leu Tyr  Pro Gly Glu

    1010                 1015                 1020

Gln Pro  Leu Cys Leu Cys Arg  Gly Gly Asn Val Ala  Tyr Thr Val

    1025                 1030                 1035

Cys Thr  Arg Ala Gly Pro Lys  Thr Arg Val Pro Leu  Ser Pro Arg

    1040                 1045                 1050

Glu Tyr  Arg Gln Tyr Val Leu  Pro Gly Phe Asp Gly  Cys Lys Asp

    1055                 1060                 1065

Leu Ala  Arg Gln Ser Arg Gly  Leu Gly Leu Gly Ala  Ala Asp Phe

    1070                 1075                 1080

Val Asp  Glu Ala Ala His Ser  His Arg Ala Ala Asn  Arg Trp Gly

    1085                 1090                 1095

Leu Gly  Ala Ala Leu Arg Pro  Val Phe Leu Pro Glu  Gly Arg Arg

    1100                 1105                 1110

Pro Gly  Ala Ala Gly Pro Glu  Ala Gly Asp Val Pro  Thr Trp Ala

    1115                 1120                 1125

Arg Val  Phe Cys Arg His Ala  Leu Leu Glu Pro Asp  Pro Ala Ala

    1130                 1135                 1140

Glu Pro  Leu Val Leu Pro Pro  Val Ala Gly Arg Ser  Val Ala Leu

    1145                 1150                 1155

Tyr Ala  Ser Ala Asp Glu Ala  Arg Asn Ala Leu Pro  Pro Ile Pro

    1160                 1165                 1170

Arg Val  Met Trp Pro Pro Gly  Phe Gly Ala Ala Glu  Thr Val Leu

    1175                 1180                 1185

Glu Gly  Ser Asp Gly Thr Arg  Phe Val Phe Gly His  His Gly Gly

    1190                 1195                 1200

Ser Glu  Arg Pro Ser Glu Thr  Gln Ala Gly Arg Gln  Arg Arg Thr

    12051                 210                 1215

Ala Asp  Asp Arg Glu His Ala  Leu Glu Leu Asp Asp  Trp Glu Val

    1220                 1225                 1230

Gly Cys  Glu Asp Ala Trp Asp  Ser Glu Glu Gly Gly  Gly Asp Asp

    1235                 1240                 1245

Gly Asp  Ala Pro Gly Ser Ser  Phe Gly Val Ser Ile  Val Ser Val

    1250                 1255                 1260

Ala Pro  Gly Val Leu Arg Asp  Arg Arg Val Gly Leu  Arg Pro Ala

    1265                 1270                 1275

Val Lys  Val Glu Leu Leu Ser  Ser Ser Ser Ser Ser  Glu Asp Glu

    1280                 1285                 1290

Asp Asp  Val Trp Gly Gly Arg  Gly Gly Arg Ser Pro  Pro Gln Ser

    1295                 1300                 1305

Arg Gly

    1310

 

<210>16

<211>3933

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>为了在昆虫细胞中的表达而经密码子优化的VZV Orf IE62

 

<400>16

atggacaccc cccccatgca gcgttccacc ccccagcgtg ctggttcccc cgacaccctc      60

gagctgatgg acctgctgga cgctgctgct gccgctgccg agcaccgtgc tcgtgtggtg      120

acctcctccc agcccgacga cctgctgttc ggcgagaacg gtgtcatggt cggtcgtgag      180

cacgagatcg tgtccatccc ttccgtgtcc ggtctgcagc ccgagccccg taccgaggac      240

gtgggcgaag agctgaccca ggacgactac gtgtgcgagg acggccagga cctgatgggt      300

tcccccgtga tccccctggc tgaggtgttc cacacccgtt tctccgaggc tggtgctcgt      360

gagcccaccg gtgctgaccg ttccctcgag accgtgtccc tgggcaccaa gctggctcgt      420

tcccccaagc cccccatgaa cgacggcgag accggtcgtg gcaccacccc ccccttccct      480

caggctttct cccctgtgtc ccccgcttcc cccgtgggtg acgctgctgg taacgaccag      540

cgtgaggacc agcgttccat ccctcgtcag accacccgtg gtaactcccc cggtctgccc      600

tccgtggtgc accgtgaccg tcagacccag tccatctccg gcaagaagcc cggcgacgag      660

caggctggtc acgctcacgc ttccggtgac ggtgttgtgc tgcaaaaaac ccaacgtccc      720

gcccagggaa agtctcccaa gaagaaaacc ctgaaggtca aggtgcccct gcccgctcgt      780

aagcccggtg gtcccgtgcc cggtcccgtg gagcagctgt accacgtgct gtccgactcc      840

gtgcccgcta agggtgctaa ggctgacctg cctttcgaga ccgacgacac ccgtccccgt      900

aagcatgacg ctaggggcat cactcctcgt gtgcccggtc gttcctccgg tggcaagccc      960

cgtgctttcc tggctctgcc tggtcgttcc cacgctcccg accccatcga ggacgactcc      1020

cccgtggaga agaagcccaa gtcccgcgag ttcgtgtcct cctcctccag ctcctcctcc      1080

tggggttcca gctccgagga cgaggacgac gagccccgtc gtgtgtccgt gggttccgag      1140

accaccggtt cccgttccgg tcgcgagcac gccccctccc catccaactc tgacgactcc      1200

gactccaacg acggtggttc caccaagcag aacatccagc ccggctaccg ttccatttct      1260

ggtcccgacc cccgtatccg taagaccaag cgtctggctg gcgaaccagg ccgtcagcgt      1320

cagaagtcct tctccctgcc ccgttcccgt acccctatca tccctcctgt ctccggccct      1380

ctgatgatgc ccgacggttc cccctggccc ggttccgctc ccctgccctc caaccgtgtg      1440

cgtttcggtc cctccggcga gacccgtgag ggccactggg aggacgaggc tgtgcgtgct      1500

gctcgtgctc gttacgaggc ttccaccgag cccgtgcccc tgtacgtgcc cgaactgggt      1560

gaccctgccc gtcagtaccg tgctctgatc aacctgatct actgccccga ccgtgacccc      1620

atcgcttggc tgcagaaccc caagctgacc ggtgtcaact ccgctctgaa ccagttctac      1680

cagaagctgc tgccccctgg tcgtgctggc accgctgtga ccggttccgt ggcttcccct      1740

gtgccccacg tgggagaggc tatggctacc ggcgaggctc tgtgggctct gcctcacgct      1800

gccgccgctg tggctatgtc ccgtcgttac gaccgtgctc agaagcactt catcctgcag      1860

tccctgcgtc gtgctttcgc ttccatggct taccccgagg ctaccggttc ctcccccgct      1920

gctcgtatct cccgtggtca cccctccccc accacccccg ctacccaggc tccagacccc      1980

caaccctctg ctgctgctcg ttccctgtcc gtgtgccccc ctgacgaccg tctgcgtacc      2040

ccccgtaagc gcaagtccca gcccgtggag tcccgttccc tgctggacaa gatccgtgag      2100

accccagtgg ctgacgctcg cgtggctgac gaccacgtcg tgtccaaggc taagaggcgc      2160

gtgtccgagc ctgtgaccat cacctccggt cctgtggtgg acccccctgc tgtgatcacc      2220

atgcccctgg acggtcccgc tcccaacggt ggtttccgtc gtatccctcg tggtgctctg      2280

cacacccccg tgccctccga ccaggctcgt aaggcttact gcacccccga gaccatcgct      2340

cgtctggtgg acgaccccct gttccccacc gcttggcgtc ctgctctgtc cttcgacccc      2400

ggtgctctgg ctgagatcgc tgctcgccgt cccggtggcg gtgatcgtcg cttcggtcct      2460

ccctccggtg tcgaggctct gcgtcgtcgt tgcgcttgga tgcgtcagat ccccgaccct      2520

gaggacgtgc gcctgctgat catctacgac cctctgcccg gcgaggacat caacggtcct      2580

ctcgagtcca ccctggctac cgaccccggt ccctcctggt ccccctcccg tggtggtctg      2640

tccgtggtgc tggctgccct gtccaaccgt ctgtgcctgc cttccaccca cgcttgggct      2700

ggtaactgga ccggtccccc cgacgtgtcc gccctgaacg ctcgcggtgt cttgctcctg     2760

tccacccgtg atctggcttt cgctggtgct gtggagtacc tgggttcccg tctggcttcc     2820

gctcgtcgtc gtctgctggt cctggacgct gtggctctcg agcgttggcc ccgtgacggt     2880

ccagccctgt ctcaatacca cgtgtacgtg cgcgctcccg ctcgtcccga cgctcaggct     2940

gtggtgcgct ggcccgactc cgctgtcacc gagggtctgg ctcgtgctgt gttcgcttcc     3000

tcccgtacct tcggtcccgc ttccttcgct cgtatcgaga ccgctttcgc taacctgtac     3060

cccggcgagc agcccctgtg cctgtgccgt ggtggtaacg tggcttacac cgtgtgcacc     3120

cgtgctggtc ccaagacccg tgtgcctctg tccccccgtg agtaccgcca gtacgtgctg     3180

cccggtttcg acggttgcaa ggacctggct cgtcagtccc gcggtctggg tctgggtgct     3240

gctgacttcg tcgacgaggc tgctcactcc caccgtgctg ctaaccgttg gggcctgggc     3300

gctgctctgc gtcccgtgtt cctgcccgag ggtcgtcgtc ctggtgctgc tggtcccgag     3360

gctggcgacg tgcccacctg ggctcgtgtg ttctgccgtc acgctctgct cgagcccgac     3420

cctgctgccg agcctctggt gctgcccccc gtggctggtc gttctgtggc tctgtacgct     3480

tccgccgacg aggctcgcaa cgctctgccc cccatccccc gtgtgatgtg gccccctggt     3540

ttcggcgctg ctgagaccgt cctcgagggt tccgacggca cccgtttcgt gttcggtcac     3600

cacggcggtt ccgagcgtcc ctccgagacc caggctggtc gccagcgccg taccgctgac     3660

gaccgtgagc acgctctcga gctggacgac tgggaggtcg gctgcgagga cgcttgggac     3720

tccgaagagg gtggtggcga cgacggtgac gctcccggct cctccttcgg tgtctccatc     3780

gtgtccgtgg ctcccggtgt cctgcgtgac cgtcgtgtgg gtctgcgtcc tgctgtgaag     3840

gtggagctgc tgtcctcctc ttcctcttct gaggatgagg atgacgtgtg gggtggtcgt     3900

ggtggtcgct ccccccctca gtcccgtggt taa                                  3933

 

<210>17

<211>1608

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>为了在昆虫细胞中的表达而经密码子优化的VZV gE Del taTMCT

 

<400>17

atggtgtccg ctatcgtgct gtacgtgctg ctggctgctg ctgctcactc cgctttcgct      60

cgtatcacca accccgtgcg tgcttccgtg ctgcgttacg acgacttcca caccgacgag      120

gacaagctgg acaccaactc cgtgtacgag ccctactacc actccgacca cgctgagtcc      180

tcttgggtga accgtggcga gtcctcccgt aaggcttacg accacaactc cccctacatc      240

tggccccgta acgactacga cggtttcctc gagaacgctc acgagcacca cggtgtctac      300

aaccagggtc gtggtatcga ctccggcgag cgtctgatgc agcccaccca gatgtccgct      360

caggaggacc tgggcgacga caccggtatc cacgtgatcc ccaccctgaa cggtgacgac      420

cgtcacaaga tcgtgaacgt ggaccagcgc cagtacggtg acgtgttcaa gggtgacctg      480

aaccccaagc cccagggcca gcgtctgatc gaggtgtccg tggaggagaa ccaccccttc      540

accctgcgtg ctcccatcca gcgtatctac ggtgtccgtt acaccgagac ctggtccttc      600

ctcccctccc tgacctgcac cggtgacgct gctcccgcta tccagcacat ctgcctgaag      660

cacaccacct gcttccagga cgtggtggtg gacgtggact gcgctgagaa caccaaggag      720

gaccagctgg ctgagatctc ctacaggttc cagggcaaga aggaggctga ccagccctgg      780

atcgtggtga acacctccac cctgttcgac gagctggagc tggacccccc cgagatcgag      840

cccggtgtcc tgaaggtgct gcgtaccgag aagcagtacc tgggcgtgta catctggaac      900

atgcgtggtt ccgacggcac ctccacctac gctaccttcc tcgtgacctg gaagggtgac      960

gaaaagaccc gtaaccccac ccccgctgtg accccccagc cccgtggtgc tgaattccat      1020

atgtggaact accactctca cgtgttctcc gtgggtgaca ccttctccct ggctatgcac      1080

ctgcagtaca agatccacga ggctcccttc gacctgctgc tcgagtggct gtacgtgccc      1140

atcgacccca cctgccagcc catgcgcctg tactccacct gcctgtacca ccccaacgct      1200

ccccagtgcc tgtcccacat gaactccggt tgcaccttca cctcccccca cctggcccag      1260

cgtgtggctt ccaccgtgta ccagaactgc gagcacgctg acaactacac cgcttactgc      1320

ctgggtatca gccacatgga gccttccttc ggtctgatcc tgcacgacgg tggcaccacc      1380

ctgaagttcg tggacacccc cgagtccctg tccggtctgt acgtgttcgt ggtgtacttc      1440

aacggtcacg tggaggctgt cgcttacacc gtggtgtcca ccgtggacca cttcgtgaac      1500

gctatcgagg agcgtggttt cccccccacc gctggccagc cccctgctac caccaagccc      1560

aaggagatca cccccgtcaa ccccggcacc tcccctctgc tgcgctaa                   1608

 

<210>18

<211>535

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<223>VZV gE DeltaTMCT

 

<400>18

Met Val Ser Ala Ile Val Leu Tyr Val Leu Leu Ala Ala Ala Ala His

1               5                   10                  15

Ser Ala Phe Ala Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val Leu Arg

            20                  25                  30

Tyr Asp Asp Phe His Thr Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn Ser Val

        35                  40                  45

Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His Ala Glu Ser Ser Trp Val Asn

    50                  55                  60

Arg Gly Glu Ser Ser Arg Lys Ala Tyr Asp His Asn Ser Pro Tyr Ile

65                  70                  75                  80

Trp Pro Arg Asn Asp Tyr Asp Gly Phe Leu Glu Asn Ala His Glu His

                85                  90                  95

His Gly Val Tyr Asn Gln Gly Arg Gly Ile Asp Ser Gly Glu Arg Leu

            100                 105                 110

Met Gln Pro Thr Gln Met Ser Ala Gln Glu Asp Leu Gly Asp Asp Thr

        115                 120                 125

Gly Ile His Val Ile Pro Thr Leu Asn Gly Asp Asp Arg His Lys Ile

    130                 135                 140

Val Asn Val Asp Gln Arg Gln Tyr Gly Asp Val Phe Lys Gly Asp Leu

145                 150                 155                 160

Asn Pro Lys Pro Gln Gly Gln Arg Leu Ile Glu Val Ser Val Glu Glu

                165                 170                 175

Asn His Pro Phe Thr Leu Arg Ala Pro Ile Gln Arg Ile Tyr Gly Val

            180                 185                 190

Arg Tyr Thr Glu Thr Trp Ser Phe Leu Pro Ser Leu Thr Cys Thr Gly

        195                 200                 205

Asp Ala Ala Pro Ala Ile Gln His Ile Cys Leu Lys His Thr Thr Cys

    210                 215                 220

Phe Gln Asp Val Val Val Asp Val Asp Cys Ala Glu Asn Thr Lys Glu

225                 230                 235                 240

Asp Gln Leu Ala Glu Ile Ser Tyr Arg Phe Gln Gly Lys Lys Glu Ala

                245                 250                 255

Asp Gln Pro Trp Ile Val Val Asn Thr Ser Thr Leu Phe Asp Glu Leu

            260                 265                 270

Glu Leu Asp Pro Pro Glu Ile Glu Pro Gly Val Leu Lys Val Leu Arg

        275                 280                 285

Thr Glu Lys Gln Tyr Leu Gly Val Tyr Ile Trp Asn Met Arg Gly Ser

    290                 295                 300

Asp Gly Thr Ser Thr Tyr Ala Thr Phe Leu Val Thr Trp Lys Gly Asp

305                 310                 315                 320

Glu Lys Thr Arg Asn Pro Thr Pro Ala Val Thr Pro Gln Pro Arg Gly

                325                 330                 335

Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser Val Gly

            340                 345                 350

Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His Glu Ala

        355                 360                 365

Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp Pro Thr

    370                 375                 380

Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro Asn Ala

385                 390                 395                 400

Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr Ser Pro

                405                 410                 415

His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys Glu His

            420                 425                 430

Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met Glu Pro

        435                 440                 445

Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys Phe Val

    450                 455                 460

Asp Thr Pro Glu Sar Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val Tyr Phe

465                 470                 475                 480

Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr Val Asp

                485                 490                 495

His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr Ala Gly

            500                 505                 510

Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val Asn Pro

        515                 520                 525

Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg

    530                 535

 

<210>19

<211>816

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>为了在昆虫细胞中的表达而经密码子优化的VZV gI DeltaTMCT

 

<400>19

atgttcctca tccagtgcct gatctccgct gtgatcttct acatccaagt gaccaacgct       60

ctgatcttca agggtgacca cgtgtccctg caggtcaact cctccctgac ctccatcctg      120

atccccatgc agaacgacaa ctacaccgag atcaagggcc agctggtgtt catcggcgag      180

cagctgccca ccggcaccaa ctactccggc accctcgagc tgctgtacgc tgacaccgtc      240

gctttctgct tccgttccgt gcaggtgatc cgttacgacg gttgcccccg tatccgtacc      300

tccgctttca tctcctgccg ttacaagcac tcctggcact acggtaactc caccgaccgt      360

atctccaccg agcccgacgc tggtgtcatg ctgaagatca ccaagcccgg tatcaacgac      420

gctggcgtgt acgtgctgct ggtccgtctg gaccactccc gttccaccga cggtttcatc      480

ctgggtgtca acgtgtacac cgctggttcc caccacaaca tccacggtgt catctacacc      540

tccccctccc tgcagaacgg ttactccacc cgtgctctgt tccagcaggc tcgtctgtgc      600

gacctgcccg ctacccccaa gggttccggc acctccctct tccagcacat gctggacctg      660

cgtgctggca agtccctcga ggacaacccc tggctgcacg aggacgtggt gaccaccgag      720

accaagtccg tggtgaagga aggtatcgag aaccacgtgt accccaccga catgtccacc      780

ctgcccgaga agtccctgaa cgaccccccc gagtaa                                816

 

<210>20

<211>271

<212>PRT

<213>人工序列

 

<220>

<223>VZV gI Delta TMCT

 

<400>20

Met Phe Leu Ile Gln Cys Leu Ile Ser Ala Val Ile Phe Tyr Ile Gln

1               5                   10                  15

Val Thr Asn Ala Leu Ile Phe Lys Gly Asp His Val Ser Leu Gln Val

            20                  25                  30

Asn Ser Ser Leu Thr Ser Ile Leu Ile Pro Met Gln Asn Asp Asn Tyr

        35                  40                  45

Thr Glu Ile Lys Gly Gln Leu Val Phe Ile Gly Glu Gln Leu Pro Thr

    50                  55                  60

Gly Thr Asn Tyr Ser Gly Thr Leu Glu Leu Leu Tyr Ala Asp Thr Val

65                  70                  75                  80

Ala Phe Cys Phe Arg Ser Val Gln Val Ile Arg Tyr Asp Gly Cys Pro

                85                  90                  95

Arg Ile Arg Thr Ser Ala Phe Ile Ser Cys Arg Tyr Lys His Ser Trp

            100                 105                 110

His Tyr Gly Asn Ser Thr Asp Arg Ile Ser Thr Glu Pro Asp Ala Gly

        115                 120                 125

Val Met Leu Lys Ile Thr Lys Pro Gly Ile Asn Asp Ala Gly Val Tyr

    130                 135                 140

Val Leu Leu Val Arg Leu Asp His Ser Arg Ser Thr Asp Gly Phe Ile

145                 150                 155                 160

Leu Gly Val Asn Val Tyr Thr Ala Gly Ser His His Asn Ile His Gly

                165                 170                 175

Val Ile Tyr Thr Ser Pro Ser Leu Gln Asn Gly Tyr Ser Thr Arg Ala

            180                 185                 190

Leu Phe Gln Gln Ala Arg Leu Cys Asp Leu Pro Ala Thr Pro Lys Gly

        195                 200                 205

Ser Gly Thr Ser Leu Phe Gln His Met Leu Asp Leu Arg Ala Gly Lys

    210                 215                 220

Ser Leu Glu Asp Asn Pro Trp Leu His Glu Asp Val Val Thr Thr Glu

225                 230                 235                 240

Thr Lys Ser Val Val Lys Glu Gly Ile Glu Asn His Val Tyr Pro Thr

                245                 250                 255

Asp Met Ser Thr Leu Pro Glu Lys Ser Leu Asn Asp Pro Pro Glu

            260                 265                 270

Claims (50)

1.一种纯化的水痘带状疱疹病毒(VZV)病毒样颗粒(VLP)，其包含VZV gE，其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。

2.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。

3.权利要求2的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合。

4.权利要求3的VZV-VLP，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。

5.权利要求2的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。

6.权利要求4的VZV-VLP，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组：gI(ORF67)、gM(ORF50)、gH、gB和间层或其组合。

7.权利要求6的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。

8.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VLP基本上由gE组成。

9.权利要求1的VZV-VLP，其中所述VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。

10.一种生成VLP的方法，包括将编码VZV gE蛋白的载体转染入合适的宿主细胞中，并在容许形成、分离和/或纯化VLP的条件下表达所述VZV gE蛋白，其中所述宿主细胞不包含酵母Ty蛋白，并且所述VLP不包含VZV核酸。

11.权利要求10的方法，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。

12.权利要求11的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合。

13.权利要求12的方法，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。

14.权利要求11的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。

15.权利要求13的方法，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组：gI(ORF67)、gM(ORF50)、gH、gB和间层或其组合。

16.权利要求15的方法，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。

17.权利要求10的方法，其中所述VLP基本上由gE组成。

18.权利要求10的方法，其中所述宿主细胞选自下组：酵母、昆虫、两栖动物、禽类或哺乳动物细胞。

19.权利要求18的方法，其中所述宿主细胞是昆虫细胞。

20.权利要求18的方法，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。

21.一种抗原性配制剂，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。

22.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。

23.权利要求22的抗原性配制剂，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合。

24.权利要求23的抗原性配制剂，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。

25.权利要求22的抗原性配制剂，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。

26.权利要求24的抗原性配制剂，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组：gI(ORF67)、gM(ORF50)、gH、gB和间层或其组合。

27.权利要求26的抗原性配制剂，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。

28.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述VLP基本上由gE组成。

29.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述抗原性配制剂包含佐剂或免疫刺激剂。

30.权利要求21的抗原性配制剂，其中所述配制剂是通过口服、皮内、鼻内、肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下向脊椎动物施用的。

31.一种疫苗，其包含VZV-VLP，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。

32.权利要求31的疫苗，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。

33.权利要求32的疫苗，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合。

34.权利要求33的疫苗，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。

35.权利要求32的疫苗，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。

36.权利要求34的疫苗配制剂，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组：gI(ORF67)、gM(ORF50)、gH、gB和间层或其组合。

37.权利要求36的疫苗，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。

38.权利要求31的疫苗，其中所述VLP基本上由gE组成。

39.权利要求32的疫苗，其中所述疫苗是与佐剂或免疫刺激剂一起配制的。

40.权利要求31的疫苗，其中所述疫苗是通过口服、皮内、鼻内、肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下向脊椎动物施用的。

41.一种在人或动物中引发针对感染的保护性免疫的方法，包括给所述人或动物施用包含VZV-VLP的抗原性配制剂或疫苗，其中所述VLP-VLP包含VZV gE且其中所述VLP不包含酵母Ty蛋白，并且不包含VZV核酸。

42.权利要求41的方法，其中所述感染是由病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合引起的。

43.权利要求41的方法，其中所述VZV-VLP包含至少一种来自感染原的另外的蛋白质。

44.权利要求43的方法，其中所述来自感染原的另外的蛋白质衍生自病毒、真菌、寄生物或细菌或其组合。

45.权利要求44的VZV-VLP，其中所述病毒蛋白质衍生自流感病毒、登革病毒、黄热病毒、单纯疱疹病毒I或II、副流感病毒、水痘带状疱疹病毒、呼吸道合胞病毒、狂犬病毒、人免疫缺陷病毒、冠状病毒或肝炎病毒。

46.权利要求43的VZV-VLP，其中所述来自感染原的另外的蛋白质在所述VZV-VLP的表面上表达。

47.权利要求45的VZV-VLP，其中所述来自VZV的蛋白质选自下组：gI(ORF67)、gM(ORF50)、gH、gB和间层或其组合。

48.权利要求47的VZV-VLP，其中所述VZV-VLP包含来自感染原的另外的蛋白质。

49.权利要求41的VZV-VLP，其中所述VLP基本上由gE组成。

50.权利要求41的VZV-VLP，其中所述VLP衍生自包含克隆的gE VZV的重组表达系统。

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