CN101717827B - 一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 - Google Patents
一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101717827B CN101717827B CN2009102414509A CN200910241450A CN101717827B CN 101717827 B CN101717827 B CN 101717827B CN 2009102414509 A CN2009102414509 A CN 2009102414509A CN 200910241450 A CN200910241450 A CN 200910241450A CN 101717827 B CN101717827 B CN 101717827B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- colloidal gold
- dna
- modification
- aunp
- radioactive colloidal
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 63
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 title claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 title claims abstract description 24
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 title claims abstract description 24
- 239000011616 biotin Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 24
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 18
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 18
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000004332 silver Substances 0.000 claims description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 12
- 230000008836 DNA modification Effects 0.000 claims description 10
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 claims description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 5
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 claims description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000012447 hatching Effects 0.000 claims description 4
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 claims description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 claims description 3
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L chromic acid Substances O[Cr](O)(=O)=O KRVSOGSZCMJSLX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 3
- AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N furo[3,4-b]pyrazine-5,7-dione Chemical compound C1=CN=C2C(=O)OC(=O)C2=N1 AWJWCTOOIBYHON-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 3
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 3
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000007447 staining method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 abstract 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 8
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000012538 light obscuration Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
一种基于不同修饰的胶体金聚集和银染信号扩增的DNA测定方法，属于分析生物化学技术领域。该发明主要内容是使两种修饰不同生物分子的胶体金发生结合，将DNA信号放大。首先将生物素标记的单链DNA通过共价交联固定到基片表面上，再加入链霉亲和素修饰的胶体金，使之结合到生物素标记的单链DNA上，然后加入生物素修饰的胶体金，使两种修饰不同生物分子的胶体金发生结合，重复这一过程，将DNA信号放大，最后，利用银染方法进一步放大信号。通过使用该方法，发现在一定的物质的量范围内，点样处生成的灰度值与物质的量的对数值具有较好的线性关系。该方法是一种灵敏度高，特异性好的可视化检测DNA的方法，在诸多领域有应用潜力。
Description
技术领域
一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集检测生物素标记的DNA的方法，属于分析生物化学技术领域。
背景技术
纳米材料在生物分析中的应用成为一个快速发展的领域，胶体金以其独特的光学、电学性质以及生物亲和效应，在催化、传感器和DNA分析检测等方面表现出很多潜在的应用价值，受到了化学、物理及生命科学等相关领域的广泛关注。1996年，Mirkin等首次报道了胶体金在DNA的交联作用下的聚集现象，用来对生物大分子进行检测分析，之后，相关方面的研究逐渐增多。但大多数利用胶体金检测DNA的方法是利用生物分子修饰的胶体金与固定在固相表面的生物分子相互作用的单层结合，或是不同DNA修饰的胶体金在液相发生空间上聚集。本方法先将biotin修饰的ssDNA固定到醛基基片上，然后，将链霉亲和素修饰的胶体金以及连接上5’biotin修饰的DNA的胶体金依次加入到反应体系中，并重复这一过程，利用biotin与链霉亲和素的相互作用，使两种修饰不同生物分子的胶体金发生结合，发生聚集，将DNA信号放大，实现在基片表面的空间上对DNA信号进行放大，最后，利用银染方法进一步放大信号。实验结果表明发现在1×100.5fmol(约为3.162fmol)至1×103.0fmol物质的量范围内，灰度值与物质的量的对数值具有良好的线性的线性关系和精密度。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集的检测生物素标记的DNA的方法，这种方法具有较宽的线性范围、较低的检测限以及较高的精密度。
本发明的技术方案：一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集的检测生物素标记的DNA的方法，步骤为(1)胶体金的制备；(2)DNA修饰的胶体金的制备；(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备；(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验；(5)扫描及数据分析。
(1)胶体金的制备：利用Frens法制备13nm的胶体金；
所用的玻璃仪器使用铬酸洗液浸泡后，双蒸水清洗，烘干备用；制备时向500mL烧杯中加入1％氯化金溶液7.5mL，再加入超纯水(电阻率≥18.2MΩ·cm)至250mL，加热。将溶液加热至沸腾后，立即加入6.25mL1％柠檬酸三钠溶液，继续加热，搅拌，沸腾15分钟后，停止加热。这一过程中可观察到溶液的颜色由黄色变为深紫色，进而变为透明的深红色。冷却至室温后， 将胶体金用0.22μm的微孔滤膜进行过滤，4℃保存。
(2)biotin标记的DNA修饰的胶体金的制备：利用巯基与胶体金的相互作用，将biotin标记的DNA修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP(pH＝7.0)中加入30μL100μM的5’巯基修饰的ssDNA，避光摇16h，然后向溶液中加入10.8μL0.5M的磷酸缓冲液和一定量2M的NaCl溶液使其Na+浓度递增，当Na+浓度升至0.1M，8h后停止反应，再加入0.3mL10％小牛血清白蛋白，1h后离心，20000g，4℃，1h。离心结束后，弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBST中。然后向溶液中加入30μL100μM的5’biotin修饰的ssDNA，避光摇16h后离心，20000g，4℃，1h。弃上清，沉淀溶解于PBS中。
(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备：利用蛋白质与胶体金的静电吸附作用将链霉亲和素修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP(pH＝9.0)中加入40μL0.5μg/μL的链霉亲和素(SA)，避光摇16h，向溶液中加入一定量的2M的NaCl溶液使其Na+浓度递增，升至0.1M 8h后，加入0.3mL10％BSA，1h后离心，20000g，4℃，60min。弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBS缓冲液中。
(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验：利用生物素与链霉亲和素的相互作用，使两种不同修饰的胶体金发生聚集，使信号放大，然后进行银染进一步增强信号；
将5’biotin修饰的ssDNA稀释成1×103.0nM，1×102.5nM，1×102.0nM，1×101.5nM，1×101.0nM，1×100.5nM分别取1μL点于醛基基片上，对照组使用无修饰的ssDNA。将基片置于37℃，恒湿环境中，16h。然后将基片置于10μg/mL的鲑精DNA封闭液中，室温封闭24h。封闭结束后用0.5％PBST洗三次，每次10min。向反应池中加入一定量的SA-AuNP，孵育3h。之后用PBST洗三次，每次10min。再向反应池中加入一定量的DNA-AuNP，孵育3h。之后用PBST洗三次，每次10min。重复上述孵育过程，孵育结束后对基片进行银染。其他3组分别仅使用AuNP，DNA-AuNP和SA-AuNP孵育。由于5’biotin-ssDNA具有大量的碱性基团，当其被点到醛基基片上后碱性基团会与醛基反应，从而将biotin标记的ssDNA固定到基片上。当反应中依次加入SA-AuNP和DNA-AuNP后，点样处出现了红色圆点。说明当用SA-AuNP孵育时，其上面的SA会与基片上ssDNA的biotin结合，这样就将SA-AuNP固定到基片上，再加入DNA-AuNP，DNA-AuNP上的DNA带有biotin，它会与SA-AuNP上的SA相互结合，重复这一过程，更多的SA-AuNP和DNA-AuNP会聚集到点样处，形成建立在SA与biotin相互作用基础上的多层次的网络结构，从而实现对信号的放大，达到肉眼可见的程度。从而实现了对信号的放大。如果反应中，仅加入没有任何修饰的AuNP，点样处没有出现红色圆点，但出现了较高的红色背景，这是由于没有包被的AuNP与基片上的封闭剂鲑精DNA相互作用，AuNP 被吸附到基片上，从而产生了较深的红色的背景。当反应中只加入DNA-AuNP，也没有出现红色圆点。当反应中只加入SA-AuNP，理论上应该结合上一层SA-AuNP，但由于密度过低，无法观察到。仅加入SA-AuNP或DNA-AuNP都不会形成基于SA与biotin相互作用的两种不同修饰的AuNP的聚集。在所有基片上，对照组(点样处为未修饰的ssDNA)均未出现红色圆点。
(5)扫描及数据分析；
将银染后的基片进行扫描，使用ImageJ软件分析其灰度值，使用oringe6.0软件分析其线性相关系数及相对标准偏差。实验结果证明在1×100.5fmol(约为3.162fmol)至1×103.0fmol物质的量范围内，点样处生成的灰度值与物质的量的对数值具有较好的线性关系，经分析其线性相关系数为0.99218，相对标准偏差为1.732％(n＝6)。该方法是一种灵敏度高，特异性好的可视化检测DNA的方法。
附图说明
图1胶体金的电子显微镜图片。
图2胶体金的紫外可见吸光光谱图。
图3AuNP，DNA-AuNP及SA-AuNP的紫外可见吸光光谱图。
图4基片实验结果(对照组点样处为未修饰的ssDNA)。A组仅使用AuNP孵育，B组仅使用DNA-AuNP孵育，C组仅使用SA-AuNP孵育，D组交替使用DNA-AuNP和SA-AuNP孵育。
图5银染后的基片反相图片。
图6基片上5′biotin-ssDNA物质的量取对数值后与灰度值的线性关系标准曲线。
具体实施方式
(1)胶体金的制备：利用Frens法制备13nm的胶体金；
所用的玻璃仪器使用铬酸洗液浸泡后，双蒸水清洗，烘干备用；制备时向500mL烧杯中加入1％氯化金溶液7.5mL，再加入超纯水(电阻率≥18.2MΩ·cm)至250mL，加热。将溶液加热至沸腾后，立即加入6.25mL1％柠檬酸三钠溶液，继续加热，搅拌，沸腾15分钟后，停止加热。这一过程中可观察到溶液的颜色由黄色变为深紫色，进而变为透明的深红色。冷却至室温后，将胶体金用0.22μm的微孔滤膜进行过滤，4℃保存。
(2)biotin标记的DNA修饰的胶体金的制备：利用巯基与胶体金的相互作用，将biotin标记的DNA修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP(pH＝7.0)中加入30μL100μM的5’巯基修饰的ssDNA，避光摇16h，然后向溶液中加入10.8μL0.5M的磷酸缓冲液和一定量2M的NaCl溶液使其 Na+浓度递增，当Na+浓度升至0.1M，8h后停止反应，再加入0.3mL10％小牛血清白蛋白，1h后离心，20000g，4℃，1h。离心结束后，弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBST中。然后向溶液中加入30μL100μM的5’biotin修饰的ssDNA，避光摇16h后离心，20000g，4℃，1h。弃上清，沉淀溶解于PBS中。
(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备：利用蛋白质与胶体金的静电吸附作用将链霉亲和素修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP(pH＝9.0)中加入40μL0.5μg/μL的链霉亲和素(SA)，避光摇16h，向溶液中加入一定量的2M的NaCl溶液使其Na+浓度递增，升至0.1M 8h后，加入0.3mL10％小牛血清白蛋白，1h后离心，20000g，4℃，60min。弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBS缓冲液中。
(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验：利用生物素与链霉亲和素的相互作用，使两种不同修饰的胶体金发生聚集，使信号放大，然后进行银染进一步增强信号；
将5’biotin修饰的ssDNA稀释成1×103.0nM，1×102.5nM，1×102.0nM，1×101.5nM，1×101.0nM，1×100.5nM分别取1μL点于醛基基片上。将基片置于37℃，恒湿环境中，16h。然后将基片置于10μg/mL的鲑精DNA封闭液中，室温封闭24h。封闭结束后用0.5％PBST洗三次，每次10min。向反应池中加入一定量的SA-AuNP，孵育3h。之后用PBST洗三次，每次10min。再向反应池中加入一定量的DNA-AuNP，孵育3h。之后用PBST洗三次，每次10min。重复上述孵育过程，孵育结束后对基片进行银染。
(5)扫描及数据分析；
将银染后的基片进行扫描，使用ImageJ软件分析其灰度值，使用oringe6.0软件分析其线性相关系数及相对标准偏差。
Claims (1)
1.一种基于不同生物分子修饰的胶体金相互聚集的检测生物素标记的DNA的方法，其特征是步骤为：(1)胶体金的制备；(2)DNA修饰的胶体金的制备；(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备；(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验；(5)扫描及数据分析；
(1)胶体金的制备：利用Frens法制备13nm的胶体金；
所用的玻璃仪器使用铬酸洗液浸泡后，双蒸水清洗，烘干备用；制备时向500mL烧杯中加入1％氯化金溶液7.5mL，再加入超纯水至250mL，加热；将溶液加热至沸腾后，立即加入6.25mL1％柠檬酸三钠溶液，继续加热，搅拌，沸腾15分钟后，停止加热；这一过程中可观察到溶液的颜色由黄色变为深紫色，进而变为透明的深红色；冷却至室温后，将胶体金用微孔滤膜进行过滤，4℃保存；
(2)biotin标记的DNA修饰的胶体金的制备：利用巯基与胶体金的相互作用，将biotin标记的DNA修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP中加入30μL100μM的5’巯基修饰的ssDNA，避光摇一段时间，然后向溶液中加入10.8μL 0.5M的磷酸缓冲液和2M的NaCl溶液使其Na+浓度递增，当Na+浓度升至0.1M，停止反应，再加入小牛血清白蛋白封闭，1h后离心；离心结束后，弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBST中；然后向溶液中加入30μL100μM的5’biotin修饰的ssDNA，16h后离心，弃上清，沉淀溶解于PBS中；
(3)链霉亲和素修饰的胶体金的制备：利用蛋白质与胶体金的静电吸附作用将链霉亲和素修饰到胶体金表面；
向1mL的AuNP中加入40μL 0.5μg/μL的链霉亲和素(SA)，避光摇一段时间，向溶液中加入2M的NaCl溶液使其Na+浓度递增，升至0.1M后，加入小牛血清白蛋白封闭，1h后离心；弃上清，将红色油状沉淀溶解于PBS缓冲液中；
(4)不同生物分子修饰的胶体金相互聚集及银染实验：利用生物素与链霉亲和素的相互作用，使两种不同修饰的胶体金发生聚集，使信号放大，然后进行银染进一步增强信号；
将5’biotin修饰的ssDNA稀释成1×103.0nM，1×102.5nM，1×102.0nM，1×101.5nM，1×101.0nM，1×100.5nM，，分别取1μL点于醛基基片上，对照组使用无修饰的ssDNA；将基片置于恒温恒湿环境中反应16h；然后将基片置于鲑精DNA封闭液中封闭；封闭结束后用PBST洗三次；向反应池中加入1ml的链霉亲和素修饰的胶体金(SA-AuNP)，孵育2h；之后用PBST洗三次；再向反应池中加入1ml的biotin标记的DNA修饰的胶体金(DNA-AuNP)，孵育2h；之后用PBST洗三次；重复上述孵育过程，孵育结束后对基片进行银染；对照组分别仅使用AuNP，DNA-AuNP和SA-AuNP孵育；
(5)扫描及数据分析；
将银染后的基片进行扫描，使用ImageJ软件分析其灰度值，使用oringe6.0软件分析其线性相关系数及相对标准偏差。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102414509A CN101717827B (zh) | 2009-12-09 | 2009-12-09 | 一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009102414509A CN101717827B (zh) | 2009-12-09 | 2009-12-09 | 一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101717827A CN101717827A (zh) | 2010-06-02 |
| CN101717827B true CN101717827B (zh) | 2012-02-15 |
Family
ID=42432466
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009102414509A Expired - Fee Related CN101717827B (zh) | 2009-12-09 | 2009-12-09 | 一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101717827B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2657702A4 (en) * | 2010-12-24 | 2014-12-03 | Nec Solution Innovators Ltd | ANALYSIS DEVICE AND ANALYSIS PROCEDURE |
| CN103267854B (zh) * | 2013-05-03 | 2015-08-05 | 西安交通大学 | 一种增强试纸检测信号的方法 |
| CN105695571A (zh) * | 2016-01-29 | 2016-06-22 | 苏州金唯智生物科技有限公司 | 一种基于滚环扩增的dna定量方法 |
| CN109884294B (zh) * | 2019-04-03 | 2022-09-13 | 深圳无微华斯生物科技有限公司 | 一种具有高精密度的荧光免疫试纸条制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1249432A (zh) * | 1999-08-23 | 2000-04-05 | 谢佐福 | 一种基因快速诊断金标试条及其制备方法 |
-
2009
- 2009-12-09 CN CN2009102414509A patent/CN101717827B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1249432A (zh) * | 1999-08-23 | 2000-04-05 | 谢佐福 | 一种基因快速诊断金标试条及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101717827A (zh) | 2010-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zong et al. | Chemiluminescence imaging immunoassay of multiple tumor markers for cancer screening | |
| Pischel et al. | Information processing with molecules—Quo vadis? | |
| Herland et al. | Conjugated polymers as optical probes for protein interactions and protein conformations | |
| Mohd Yazid et al. | Detection of Sn (II) ions via quenching of the fluorescence of carbon nanodots | |
| Cosnier | Recent advances in biological sensors based on electrogenerated polymers: A review | |
| Zuo et al. | An integrated platform for label-free fluorescence detection and inactivation of bacteria based on boric acid functionalized Zr-MOF | |
| CN101717827B (zh) | 一种利用胶体金相互聚集检测生物素标记的dna的方法 | |
| Sun et al. | Construction of biomass carbon dots@ molecularly imprinted polymer fluorescent sensor array for accurate identification of 5-nitroimidazole antibiotics | |
| Wang et al. | The emerging use of quantum dots in analysis | |
| Yao et al. | pH-responsive DNA hydrogels with ratiometric fluorescence for accurate detection of miRNA-21 | |
| Komatsu et al. | Protein nanotubes with an enzyme interior surface | |
| CN105938095B (zh) | 基于激子-等离子激元能量相互作用检测蛋白激酶的传感器及其制备方法、应用 | |
| Zhou et al. | Enhanced Iridium Complex Electrochemiluminescence Cytosensing and Dynamic Evaluation of Cell‐Surface Carbohydrate Expression | |
| Takayose et al. | Colorimetric detection of perfluorooctanoic acid (PFOA) utilizing polystyrene-modified gold nanoparticles | |
| Guo et al. | A concise detection strategy of Staphylococcus aureus using N-Succinyl-Chitosan-dopped bacteria-imprinted composite film and AIE fluorescence sensor | |
| Sun et al. | Gold nanoparticles-based electrochemical method for the detection of protein kinase with a peptide-like inhibitor as the bioreceptor | |
| Aylott et al. | Optical biosensing of gaseous nitric oxide using spin-coated sol− gel thin films | |
| Hu et al. | The identification nanoparticle sensor using back propagation neural network optimized by genetic algorithm | |
| Tchekwagep et al. | A critical review on the use of molecular imprinting for trace heavy metal and micropollutant detection | |
| CN106124585B (zh) | 一种基于PPy/CdS/g‑C3N4光电适配体传感器的制备方法及应用 | |
| Hasaneen et al. | Surface molecularly imprinted polymer-based sensors for antibiotic detection | |
| Liu et al. | A novel pH-responsive electrochemiluminescence immunosensor for ALV-J detection based on hollow MnO2 encapsulating Ru (bpy) 3Cl2 | |
| Wei et al. | [Ru (bpy) 3] 2+‐Doped Silica Nanoparticles within Layer‐by‐Layer Biomolecular Coatings and Their Application as a Biocompatible Electrochemiluminescent Tag Material | |
| Wang et al. | A capillary electrophoresis method to explore the self‐assembly of a novel polypeptide ligand with quantum dots | |
| Chen et al. | Novel electrochemical sensor modified with molecularly imprinted polymers for determination of enrofloxacin in marine environment |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120215 Termination date: 20121209 |