CN101610781A - 用于诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答的多肽 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含与SEQ ID NO：1结构上相关的氨基酸序列的多肽和此种多肽的用途。SEQ ID NO：1是全长表皮葡萄球菌多肽的截短的衍生物。全长天然存在的多肽在本文中称为全长ORF1319e。发现SEQ ID NO：1的加His标签的衍生物产生针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答。

Description

用于诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答的多肽
与相关申请的交叉参照
本申请要求于2007年1月24日提交的美国临时申请号60/897,150的利益，所述专利引入本文作为参考。
发明背景
本申请自始至终引用的参考文献并非承认是本发明的现有技术。
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)已特别在医院和无免疫应答的患者中作为病原体出现。(Ziebuhr等人，International Journalof Antimicrobial Agents 28S：S14-S20，2006)凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)，主要是表皮葡萄球菌，是与诊断或治疗操作中使用的异物相关的最常分离的微生物感染。(Heilmann和Peters，Biology andPathogenicity of Staphylococcus epidermidis，In：Gram Positive Pathogens，Eds.Fischetti等人，American Society for Microbiology，Washington D.C.2000和The Staphylococci in Human Disease，Crossley和Archer(编辑)，Churchill Livingstone Inc.1997.)
来自表皮葡萄球菌的核酸已进行测序，以获得核酸序列信息并且进行关于可读框和潜在多肽的预测。(Doucette-Stamm等人，美国专利号6,380,370和Doucette-Stamm等人，美国专利号7,060,458.)
技术例如涉及展示技术的那些和来自受感染患者的血清可以在鉴定编码潜在抗原的基因的努力中使用。(Meinke等人，国际公开号WO02/059148，Meinke等人，国际公开号WO 04/087746.)
发明概述
本发明涉及包含与SEQ ID NO：1结构上相关的氨基酸序列的多肽和此种多肽的用途。SEQ ID NO：1是全长表皮葡萄球菌多肽的截短的衍生物。全长天然存在的多肽在本文中称为全长ORF1319e。发现SEQ IDNO：1的加His标签的衍生物产生针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答。
提及“保护性”免疫或免疫应答指针对表皮葡萄球菌感染的可检测保护水平。提及“免疫原”指提供保护性免疫的能力。
因此，本发明的第一个方面描述包含与SEQ ID NO：1至少85％等同的氨基酸序列的多肽免疫原，其中多肽不具有SEQ ID NOs：3或4的氨基酸序列。在一个实施方案中，多肽不包含由SEQ ID NO：3的氨基酸1-93提供的氨基末端。
提及包含与SEQ ID NO：1至少85％等同的氨基酸序列指存在SEQID NO：1相关区域，并且可能存在另外的多肽区域。在一个实施方案中，如果存在另外的区域，那么多肽没有由SEQ ID NO：3的氨基酸1-93提供的氨基末端。
与参考序列的百分比同一性(也称为百分比相同)通过使多肽序列与参考序列比对，然后测定相应区域中的相同氨基酸数目进行测定。使这个数目除以参考序列(例如，SEQ ID NO：1)中的氨基酸总数目，然后乘以100并且四舍五入至最近整数。
本发明的另一个方面描述了包含氨基酸序列以及在羧基末端或氨基末端处与序列共价连接的一个或多个另外区域或部分的免疫原，所述氨基酸序列提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一个下述性质的区域或部分：增强免疫应答，促进纯化，或促进多肽稳定性。
提及“另外的区域或部分”指不同于ORF1319e区域的区域或部分。另外的区域或部分可以是例如另外的多肽区域或非肽区域。
本发明的另一个方面描述了能够在患者中诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的组合物。组合物包含药学上可接受的载体和免疫学有效量的免疫原，所述免疫原提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫。
免疫学有效量是足以提供针对表皮葡萄球菌感染的保护性免疫的量。量应足以显著阻止表皮葡萄球菌感染的可能性或严重程度。
本发明的另一个方面描述了包含编码多肽的重组基因的核酸，所述多肽提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫。重组基因包含编码多肽的重组核酸连同用于正确转录和加工的调节元件(其可以包括翻译和翻译后元件)。重组基因可以独立于宿主基因组而存在，或可以是宿主基因组的部分。
重组核酸是由于其序列和/或形式而在自然界中不存在的核酸。重组核酸的例子包括纯化的核酸，组合在一起提供与自然界中发现的不同的核酸的2个或更多核酸区域，以及彼此天然结合的一个或多个核酸区域(例如，上游或下游区域)的不存在。
本发明的另一个方面描述了重组细胞。该细胞包含编码提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的多肽的重组基因。优选地，细胞在体外进行生长。
本发明的另一个方面描述了制备提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的多肽的方法。该方法涉及培养包含编码多肽的重组核酸的重组细胞，并且纯化多肽。
本发明的另一个方面描述了通过下述方法制备的提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的多肽，包括在宿主中培养包含编码多肽的重组核酸的重组细胞，并且纯化多肽的步骤。可以使用不同的宿主细胞。
本发明的另一个方面描述了在患者中诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答的方法。该方法包括给患者施用免疫学有效量的免疫原的步骤，所述免疫原提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫。
除非具体术语是互相排斥的，提及“或”指任一或两种可能性。偶然地短语例如“和/或”用于突出任一或两种可能性。
提及开放式术语例如“包含”允许另外的元件或步骤。偶然地短语例如“一个或多个”连同或不连同开放式术语使用，以突出另外的元件或步骤的可能性。
除非明确说明，提及术语例如“一个(a)”或“一种(an)”并不限于一个。例如，“一个细胞”不排除“多个细胞”。偶然地短语例如一个或多个用于突出多个的可能存在。
本发明的其他特征和优点由于本文提供的另外描述包括不同实施例是显而易见的。所提供的实施例举例说明用于实践本发明的不同组分和方法。实施例并不限制本发明。基于本公开内容，技术人员可以鉴定且采用其他组分和方法用于实践本发明。
附图简述
图1举例说明了SEQ ID NO：2的氨基酸序列。SEQ ID NO：2是SEQ ID NO：1的His-标签衍生物。SEQ ID NO：1区域以粗体显示。
图2A和2B举例说明了SEQ ID NO：3的全长ORF1319e(图2A)和编码核酸(图2B，SEQ ID NO：5)。SEQ ID NO：1区域在图2A中以粗体显示。SEQ ID NO：1编码区域在图2B中以粗体显示。
图3举例说明了SEQ ID NO：4的氨基酸序列。
发明详述
SEQ ID NO：1相关多肽提供保护性免疫的能力使用SEQ ID NO：2在下文提供的实施例中举例说明。SEQ ID NO：2是SEQ ID NO：1的His-标签衍生物。His-标签促进多肽纯化和鉴定。图1举例说明了SEQ IDNO：2，其中SEQ ID NO：1区域以粗体显示。
SEQ ID NO：1是全长ORF1319e表皮葡萄球菌多肽的衍生物。SEQID NO：1包含ORF1319e序列(SEQ ID NO：3)的氨基酸94-557。氨基酸1-93预期包含信号序列。SEQ ID NO：3的全长序列是557个氨基酸。图2A和2B举例说明SEQ ID NO：3和编码核酸序列，其中SEQ IDNO：1区域以粗体显示。
ORF1319e序列
ORF1319e相关序列的例子在Gen-Bank登记号Q8CPQ5和Q5HQC5中提供。Gen-Bank登记号Q5HQC5对应于SEQ ID NO：3。Gen-Bank登记号Q5HQC5参考Gill等人，J Bacteriol.187(7)：2426-2438，2005。Gen-Bank登记号Q8CPQ5(SEQ ID NO：4)通过在氨基酸42中具有丙氨酸代替缬氨酸而不同于SEQ ID NO：3。Gen-Bank登记号Q8CPQ5参考Zhang等人，Mol.Microbiol.49(6)：1577-1593，2003。
其他天然存在的ORF1319e序列可以基于与已知ORF1319e序列相比较的高度序列相似性或邻接氨基酸的存在进行鉴定。邻接氨基酸提供特征标签。在不同实施方案中，天然存在的ORF1319e序列是在葡萄球菌属物种(Staphylococcus sp)优选表皮葡萄球菌中发现的序列，具有如在SEQ ID NO：1中的至少20个、至少30个或至少50个邻接氨基酸；和/或与SEQ ID NO：1具有至少85％序列相似性或同一性。
序列相似性可以通过本领域众所周知的不同算法和技术进行测定。一般地，序列相似性通过技术进行测定，所述技术比对2个序列以获得最大氨基酸同一性，允许序列之一中的缺口、添加和置换。
序列相似性可以例如使用局部比对工具进行测定，其中利用程序lalign(由Huang和Miller，Adv.Appl.Math.12：337-357，1991开发，用于《sim》程序)。选项和环境变量是：-f#缺口中第一个残基的罚分(缺省-14)；-g#缺口中每个另外的残基的罚分(缺省-4)-s str(SMATRIX)可替代的评分矩阵文件的文件名。对于蛋白质序列，通过缺省-w#(LINLEN)序列比对的输出线长度(60)使用PAM250。
SEQ ID NO：1相关多肽
与SEQ ID NO：1结构上相关的多肽包括包含在不同表皮葡萄球菌菌株中存在的相应区域和天然存在的区域的衍生物的多肽。SEQ ID NO：1相关多肽包含与SEQ ID NO：1至少85％等同的氨基酸序列。提及“多肽”不提供最低限度或最大限度尺寸限制。
与SEQ ID NO：1至少85％等同的多肽包含来自SEQ ID NO：1的至多约70个氨基酸改变。每个氨基酸改变独立地是氨基酸置换、缺失或添加。改变可以在SEQ ID NO：1区域内或加入SEQ ID NO：1区域。在不同实施方案中，SEQ ID NO：1相关多肽与SEQ ID NO：1至少90％、至少94％或至少99％等同；与SEQ ID NO：1相差0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸改变；或基本上由SEQ ID NO：1组成。
提及“基本上由所示氨基酸组成”指存在所提及的氨基酸，并且可能存在另外的氨基酸。另外的氨基酸可以在羧基或氨基末端处。在不同实施方案中，存在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个另外的氨基酸。优选的另外氨基酸是氨基末端甲硫氨酸。
可以对SEQ ID NO：1进行改变，以获得可以诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的衍生物。可以进行改变，例如以获得保留诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫的能力的衍生物，或获得除提供保护性免疫外，还具有可以实现特定目的的区域的衍生物。
可以考虑不同ORF1319e序列和氨基酸的已知性质来实施改变。一般地，在置换不同氨基酸以保留活性方面，优选交换具有相似性质的氨基酸。对于氨基酸置换可以考虑的因素包括氨基酸大小、电荷、极性和疏水性。不同氨基酸R基对氨基酸性质的影响是本领域众所周知的。(参见，例如，Ausubel，Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley，1987-2002，Appendix 1C.)
在交换氨基酸以维持活性方面，替换氨基酸应具有一种或多种相似性质，例如大约相同的电荷和/或大小和/或极性和/或疏水性。例如，用缬氨酸置换亮氨酸、用精氨酸置换赖氨酸、和用天冬酰胺置换谷氨酰胺是良好候选方案，因为不引起多肽功能中的改变。
实现特定目的的改变包括设计为促进多肽的生产或功效；或编码核酸的克隆的那些。多肽生产可以通过使用适合于重组表达的起始密码子(例如编码甲硫氨酸)得到促进。甲硫氨酸可以稍后在细胞加工过程中去除。克隆可以通过例如引入限制位点得到促进，这可以伴随氨基酸添加或改变。
多肽诱导免疫应答的功效可以通过表位增强而得到增强。表位增强可以使用不同技术来进行，例如涉及锚定残基的改变以改善对于MHC分子的肽亲和力的那些，和增加肽-MHC复合物对于T细胞受体的亲和力的那些。(Berzofsky等人，Nature Review1：209-219，2001.)
优选地，多肽是纯化的多肽。“纯化的多肽”存在于缺乏与之天然结合的一种或多种其他多肽的环境中，和/或由至少约10％存在的总蛋白质表示。在不同实施方案中，纯化的多肽代表样品或制剂中的至少约50％、至少约75％或至少约95％的总蛋白质。
在一个实施方案中，多肽是“基本上纯化的”。基本上纯化的多肽存在于缺乏所有或大部分所述多肽与之天然结合的其他多肽的环境中。例如，基本上纯化的表皮葡萄球菌多肽存在于缺乏所有或大部分其他表皮葡萄球菌多肽的环境中。环境可以是例如样品或制剂。
提及“纯化的”或“基本上纯化的”不需要多肽经历任何纯化，并且可以包括例如尚未纯化的化学合成的多肽。
多肽稳定性可以通过修饰多肽羧基或氨基末端而得到增强。可能的修饰的例子包括氨基末端保护基团例如乙酰基、丙基、琥珀酰基、苄基、苄氧羰基或叔丁氧羰基；和羧基末端保护基团例如酰胺、甲酰胺(methylamide)和乙酰胺(ethylamide)。
在本发明的实施方案中，多肽免疫原是包含在羧基末端或氨基末端处与多肽共价连接的一个或多个另外区域或部分的免疫原的部分，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一个下述性质的区域或部分：增强免疫应答，促进纯化，或促进多肽稳定性。多肽稳定性可以例如使用基团例如聚乙二醇得到增强，所述基团可以存在于氨基或羧基末端上。
多肽纯化可以通过将基团加入羧基或氨基末端以促进纯化而得到增强。可以用于促进纯化的基团的例子包括提供亲和标记物的多肽。亲和标记物的例子包括6-组氨酸标签、trpE、谷胱甘肽和麦芽糖结合蛋白。
多肽产生免疫应答的能力可以使用一般增强免疫应答的基团而得到增强。可以与多肽连接以增强针对多肽的免疫应答的基团的例子包括细胞因子例如IL-2。(Buchan等人，2000.Molecular Immunology 37：545-552.)
多肽生产
多肽可以使用标准技术来产生，包括涉及化学合成的那些，和涉及从产生多肽的细胞中纯化的那些。用于多肽的化学合成的技术是本领域众所周知的。(参见例如，Vincent，Peptide and Protein Drug Delivery，New York，N.Y.，Decker，1990.)用于重组多肽生产和纯化的技术也是本领域众所周知的。(参见例如，Ausubel，Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley，1987-2002.)
使用重组核酸技术促进从细胞获得多肽，以产生多肽。用于产生多肽的重组核酸技术涉及在细胞中引入或生产编码多肽的重组基因，且表达多肽。
重组基因包含编码多肽的核酸连同用于多肽表达的调节元件。重组基因可以存在于细胞基因组中，或可以是表达载体的部分。
可以作为重组基因的部分存在的调节元件包括与多肽编码序列天然结合的那些，和不与多肽编码序列天然结合的外源调节元件。外源调节元件例如外源启动子可以用于在特定宿主中表达重组基因或增加表达水平。一般地，存在于重组基因中的调节元件包括转录启动子、核糖体结合位点、终止子和任选存在的操纵基因。用于在真核细胞中加工的优选元件是多腺苷酸化信号。
重组基因在细胞中的表达通过使用表达载体得到促进。优选地，除重组基因外，表达载体还包含用于在宿主细胞中自主复制的复制起点、选择标记、有限数目的有用限制酶位点、和用于高拷贝数的潜力。表达载体的例子是克隆载体、修饰的克隆载体、特别设计的质粒和病毒。
由于遗传密码的简并性，大量不同的编码核酸序列可以用于编码特定多肽。遗传密码的简并性因为几乎所有氨基酸都由核苷酸三联体或“密码子”的不同组合编码而出现。氨基酸如下由密码子编码：
A＝Ala＝丙氨酸：密码子GCA、GCC、GCG、GCU
C＝Cys＝半胱氨酸：密码子UGC、UGU
D＝Asp＝天冬氨酸：密码子GAC、GAU
E＝Glu＝谷氨酸：密码子GAA、GAG
F＝Phe＝苯丙氨酸：密码子UUC、UUU
G＝Gly＝甘氨酸：密码子GGA、GGC、GGG、GGU
H＝His＝组氨酸：密码子CAC、CAU
I＝Ile＝异亮氨酸：密码子AUA、AUC、AUU
K＝Lys＝赖氨酸：密码子AAA、AAG
L＝Leu＝亮氨酸：密码子UUA、UUG、CUA、CUC、CUG、CUU
M＝Met＝甲硫氨酸：密码子AUG
N＝Asn＝天冬酰胺：密码子AAC、AAU
P＝Pro＝脯氨酸：密码子CCA、CCC、CCG、CCU
Q＝Gln＝谷氨酰胺：密码子CAA、CAG
R＝Arg＝精氨酸：密码子AGA、AGG、CGA、CGC、CGG、CGU
S＝Ser＝丝氨酸：密码子AGC、AGU、UCA、UCC、UCG、UCU
T＝Thr＝苏氨酸：密码子ACA、ACC、ACG、ACU
V＝Val＝缬氨酸：密码子GUA、GUC、GUG、GUU
W＝Trp＝色氨酸：密码子UGG
Y＝Tyr＝酪氨酸：密码子UAC、UAU
用于SEQ ID NO：1相关多肽的重组核酸表达的合适细胞是原核生物和真核生物。原核细胞的例子包括大肠杆菌(E.coli)；葡萄球菌属成员，例如表皮葡萄球菌；乳杆菌属(Lactobacillus)成员，例如植物乳杆菌(L.plantarum)；乳球菌属(Lactococcus)成员，例如乳酸乳球菌(L.lactis)；芽孢杆菌属(Bacillus)成员，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)；棒杆菌属(Corynebacterium)成员，例如谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)；和假单胞菌属(pseudomonas genus)成员，例如荧光假单胞菌(Ps.fluorescens)。真核细胞的例子包括哺乳动物细胞；昆虫细胞；酵母细胞例如糖酵母属(Saccharomyces)成员(例如，啤酒糖酵母(S.cerevisiae))、毕赤氏酵母属(Pichia)成员(例如，巴斯德毕赤氏酵母(P.pastoris))、汉逊氏酵母属(Hansenula)成员(例如，多形汉逊氏酵母(H.polymorpha))、克鲁维氏酵母属(Kluyveromyces)成员(例如，乳酸克鲁维氏酵母(K.lactis)或脆壁克鲁维氏酵母(K.fragilis))、和裂殖糖酵母属(Schizosaccharomyces)成员(例如，粟酒裂殖糖酵母(S.pombe))。
用于重组基因生产、引入细胞内和重组基因表达的技术是本领域众所周知的。此种技术的例子在参考文献例如Ausubel，Current Protocolsin Molecular Biology，John Wiley，1987-2002，和Sambrook等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989中提供。
若需要，则在特定宿主中的表达可以通过密码子最优化得到增强。密码子最优化包括更优选密码子的使用。用于不同宿主中的密码子最优化的技术是本领域众所周知的。
SEQ ID NO：1相关多肽可以包含翻译后修饰，例如N-联糖基化、O-联糖基化或乙酰化。提及“多肽”或多肽的“氨基酸”序列包括包含具有来自宿主细胞例如酵母宿主的翻译后修饰的结构的一种或多种氨基酸的多肽。
翻译后修饰可以用化学方法或通过利用合适的宿主来产生。例如，在啤酒糖酵母中，倒数第二位的氨基酸的性质看起来决定N末端甲硫氨酸是否被去除。此外，倒数第二位的氨基酸的性质还决定N末端氨基酸是否是Nα-乙酰化的(Huang等人，Biochemistry 26：8242-8246，1987)。另一个例子包括由于分泌前导区(信号肽)的存在靶向用于分泌的多肽，在其中蛋白质通过N-联或O-联糖基化进行修饰。(Kukuruzinska等人，Ann.Rev.Biochem.56：915-944，1987.)
佐剂
佐剂是可以帮助免疫原产生免疫应答的物质。佐剂可以通过不同机制起作用，例如下述中的一种或多种：增加抗原生物学或免疫学半衰期；改善对抗原呈递细胞的抗原递送；改善经由抗原呈递细胞的抗原加工和呈递；和诱导免疫调谐细胞因子的产生。(Vogel，Clinical InfectiousDiseases 30(suppl.3)：S266-270，2000.)在一个实施方案中，使用佐剂。
多种不同类型的佐剂可以用于帮助产生免疫应答。具体佐剂的例子包括氢氧化铝、磷酸铝、或其他铝盐、磷酸钙、DNA CpG基序、单磷酰脂质A、霍乱毒素、大肠杆菌不耐热毒素、百日咳毒素、胞壁酰二肽、弗氏不完全佐剂、MF59、SAF、免疫刺激复合物、脂质体、生物可降解小球体、皂苷、非离子型嵌段共聚物、胞壁酰肽类似物、聚膦腈、合成多核苷酸、IFN-γ、IL-2、IL-12和ISCOMS。(Vogel Clinical InfectiousDiseases 30(suppl 3)：S266-270，2000，Klein等人，Journal ofPharmaceutical Sciences 89：311-321，2000，Rimmelzwaan等人，Vaccine 19：1180-1187，2001，Kersten Vaccine 21：915-920，2003，O’Hagen Curr.Drug Target Infect.Disord.，1：273-286，2001.)
用于诱导保护性免疫的患者
“患者”指能够被表皮葡萄球菌感染的哺乳动物。患者可以预防上或治疗上进行处理。预防处理提供足够的保护性免疫，以减少表皮葡萄球菌感染的可能性或严重程度。可以执行治疗处理，以减少表皮葡萄球菌感染的严重程度。
预防处理可以使用包含本文描述的免疫原的疫苗来进行。此种处理优选对人进行。疫苗可以施用于一般群体或处于增加的表皮葡萄球菌感染危险中的那些人。
具有增加的表皮葡萄球菌感染危险的人包括卫生保健工作者；住院患者；具有减弱的免疫系统的患者；经历外科手术的患者；接受异物植入例如导管或血管设备的患者；面临导致减弱的免疫的治疗的患者；经历涉及异物的诊断程序的患者，和具有增加的烧伤或创伤损害危险的职业中的人。
在诊断或治疗程序中使用的异物包括留置导管或植入的聚合物设备。异物相关的表皮葡萄球菌感染的例子包括败血症(stepticemia)/心内膜炎(例如血管内导管、人工血管、起搏器电极、除纤颤器系统、人工心瓣膜、和左心室辅助设备)；腹膜炎(例如脑室腹膜脑脊髓液(CSF)分流和持续不卧床腹膜透析导管系统)；室炎(例如内和外CSF分流)；和慢性聚合物相关综合征(例如假关节(髋关节)松动、在用硅氧烷假体隆乳后的纤维囊挛缩综合征和在白内障外科手术后植入人工晶状体之后的迟发性眼内炎(endophtalmisis)。(Heilmann和Peters，Biologyand Pathogenicity of Staphylococcus epidermidis，In：Gram PositivePathogens，Eds.Fischetti等人，American Society for Microbiology，Washington D.C.2000.)
可以被表皮葡萄球菌感染的非人患者包括牛、猪、绵羊、山羊、兔、马、犬、猫和小鼠。非人患者的治疗在保护宠物和家畜中有用，并且在评估特定处理的功效中有用。
在一个实施方案中，患者与涉及异物的治疗或医学程序结合预防地处理。在另外的实施方案中，患者在程序前约1个月、约2个月或约2-6个月时进行免疫接种。
组合疫苗
SEQ ID NO：1相关多肽可以单独使用，或与其他免疫原组合使用，以诱导免疫应答。可以存在的另外免疫原包括一种或多种另外的表皮葡萄球菌免疫原，靶向一种或多种其他葡萄球菌属生物例如金黄色葡萄球菌(S.aureus)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、沃氏葡萄球菌(S.warneri)、或路邓葡萄球菌(S.lugunensi)的一种或多种免疫原，和/或靶向其他感染生物的一种或多种免疫原。
一种或多种另外的免疫原的例子包括ORF0657n相关多肽(Anderson等人，国际公开号WO 05/009379)；ORF0657/ORF0190杂种多肽(Anderson等人，国际公开号WO 05/009378)；sai-1相关多肽(Anderson等人，国际公开号WO 05/79315)；ORF0594相关多肽(Anderson等人，国际公开号WO 05/086663)；ORF0826相关多肽(Anderson等人，国际公开号WO 05/115113)；PBP4相关多肽(Anderson等人，国际公开号WO 06/033918)；AhpC相关多肽和AhpC-AhpF组合物(Kelly等人国际公开号WO 06/078680)；金黄色葡萄球菌5型和8型荚膜多糖(Shinefield等人，N.Eng.J.Med.346：491-496，2002)；胶原粘附素、纤维蛋白原结合蛋白和聚集因子(Mamo等人，FEMSImmunology and Medical Microbiology 10：47-54，1994，Nilsson等人，J.Clin.Invest.101：2640-2649，1998，Josefsson等人，The Journal ofInfectious Diseases 184：1572-1580，2001)和多糖细胞间粘附素及其片段(Joyce等人，Carbohydrate Research 338：903-922，2003)。
施用
免疫原可以使用本文提供的指导连同本领域众所周知的技术进行配制和施用于患者。用于一般而言的药物施用的指导在例如Vaccines编辑Plotkin和Orenstein，W.B.Sanders Company，1999；Remington′sPharmaceutical Sciences第20版，编辑Gennaro，Mack Publishing，2000；和Modern Pharmaceutics第2版，编辑Banker和Rhodes，Marcel Dekker，Inc.，1990中提供。
药学上可接受的载体促进免疫原的贮存和对患者的施用。药学上可接受的载体可以包含不同组分例如缓冲液、无菌注射用水、生理盐水或磷酸缓冲盐水、蔗糖、组氨酸、盐和聚山梨醇酯。
免疫原可以通过不同途径例如皮下、肌内或粘膜进行施用。皮下和肌内施用可以使用例如针或喷射注射器来进行。
合适的给药方案优选考虑本领域众所周知的因素来决定，包括患者的年龄、重量、性别和医学状况；施用途径；所需作用；和采用的具体化合物。免疫原可以以多剂疫苗形式使用。预期剂量将由1.0μg-1.0mg总多肽组成。在不同实施方案中，范围是5.0μg-500μg、0.01mg-1.0mg和0.1mg-1.0mg。
剂量的时间控制依赖于本领域众所周知的因素。最初施用后，可以随后施用一个或多个加强剂量，以维持或加强抗体滴度。给药方案的例子将是第1天，1个月，在4、6或12个月时的第三剂，以及需要时在遥远时候的另外加强剂量。
抗体的产生
SEQ ID NO：1相关多肽可以用于产生与多肽或与表皮葡萄球菌结合的抗体和抗体片段。此种抗体和抗体片段具有不同用途，包括在多肽纯化中、表皮葡萄球菌鉴定、或在针对表皮葡萄球菌感染的治疗或预防处理中的用途。
抗体可以是多克隆或单克隆的。用于产生和使用抗体包括人抗体的技术是本领域众所周知的。(Ausubel，Current Protocols in MolecularBiology，John Wiley，1987-2002，Harlow等人，Antibodies，A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory，1988，Kohler等人，Nature 256：495-497，1975，Azzazy等人，Clinical Biochemistry 35：425-445，2002，Berger等人，Am.J.Med.Sci.324(1)：14-40，2002.)
正确的糖基化对于抗体功能可以是重要的(Yoo等人，Journal ofImmunological Methods 261：1-20，2002，Li等人，NatureBiotechnology 24(2)：210-215，2006.)天然存在的抗体包含与重链附着的至少一种N-联碳水化合物。(Yoo等人，Journal of ImmunologicalMethods 261：1-20，2002.)可以存在另外的N-联碳水化合物和O-联碳水化合物，并且其对于抗体功能可能是重要的。(同上)
不同类型的宿主细胞可以用于提供有效的翻译后修饰，包括哺乳动物宿主细胞和非哺乳动物细胞。哺乳动物宿主细胞的例子包括中国仓鼠卵巢(Cho)、HeLa、C6、PC12和黑素瘤细胞。(Yoo等人，Journal ofImmunological Methods 261：1-20，2002，Persic等人，Gene 187：9-18，1997.)非哺乳动物细胞可以进行修饰以复制人糖基化。(Li等人，NatureBiotechnology 24(2)：210-215，2006.)糖工程改造的(Glycoenginnered)巴斯德毕赤氏酵母是此种修饰的非哺乳动物细胞的例子(Li等人，NatureBiotechnology 24(2)：210-215，2006.)。
核酸疫苗
编码SEQ ID NO：1相关多肽的核酸可以使用适合于治疗施用的载体引入患者内。合适的载体可以将核酸递送到靶细胞内而不引起不可接受的副作用。可以使用的载体的例子包括质粒载体和基于病毒的载体。(Barouch J.Pathol.208：283-289，2006，Emini等人，国际公开号WO03/031588.)
细胞表达使用编码所需多肽的基因表达盒来实现。基因表达盒包含用于在靶细胞内产生和加工足够量的核酸的调节元件，以实现有利作用。
病毒载体的例子包括第一代和第二代腺病毒载体(adenovector)、依赖于辅助病毒的腺病毒载体、腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体、甲病毒载体、委内瑞拉马脑炎病毒载体和质粒载体。(Hitt，等人，Advancesin Pharmacology 40：137-206，1997，Johnston等人，美国专利号6,156,588，Johnston等人，国际公开号WO 95/32733，Barouch J.Pathol.208：283-289，2006，Emini等人，国际公开号WO 03/031588.)
腺病毒载体可以基于不同的腺病毒血清型，例如在人或动物中发现的那些。动物腺病毒的例子包括牛、猪、黑猩猩、鼠类、犬和禽类的(CELO)。(Emini等人，国际公开号WO 03/031588，Colloca等人，国际公开号WO 05/071093.)人腺病毒包括B、C、D或E组血清型例如2(“Ad2”)、4(“Ad4”)、5(“Ad5”)、6(“Ad6”)、24(“Ad24”)、26(“Ad26”)、34(“Ad34”)和35(“Ad35”)型。
核酸疫苗可以使用不同技术和给药方案进行施用。(Emini等人，国际公开号WO 03/031588.)例如，疫苗可以通过包括或不包括一次或多次电脉冲通过注射进行肌内施用。电介导的转移可以通过刺激体液和细胞免疫应答帮助基因免疫接种。给药方案包括初始(prime)-加强和异源初始-加强方法。(Emini等人，国际公开号WO 03/031588.)
实施例
下文提供实施例进一步举例说明本发明的不同特征。实施例还举例说明用于实践本发明的有用方法。这些实施例不限制本发明。
实施例1：保护性免疫原生产、纯化和配制
SEQ ID NO：2在下文描述的实施例中使用，以举例说明SEQ IDNO：1相关多肽提供保护性免疫的能力。SEQ ID NO：2是SEQ ID NO：1的加His-标签的衍生物。
ORF1319e克隆和表达和修饰
ORF1319e DNA序列使用Vector NTI软件进行翻译，并且分析所得到的557氨基酸序列。设计PCR引物，以扩增在氨基酸94处开始且在末端L残基处的终止密码子前结束的基因。这些PCR引物还具有位于正向引物上的另外的HIS标签，以帮助纯化。
蛋白质设计为由pETBlue-1载体表达，所述载体具有经由插入片段编码的氨基末端His残基和由载体编码的终止密码子。此外，将甘氨酸残基在甲硫氨酸起始子后加入蛋白质中。所得到的扩增的(1419bp)核酸编码SEQ ID NO：2的473(包括起始密码子)氨基酸序列。
使用TA克隆将PCR扩增的序列直接连接到pETBlue-1载体(Novagen)内。载体通过热激引入大肠杆菌Novablue(Novagen)内。选择菌落，在具有100μg/mL氨苄青霉素的LB中生长，进行DNA小量制备(Qiagen)，并且通过限制酶切消化和PCR测定插入片段完整性。测序具有正确插入片段大小的小量制备。选择不包含来自所需序列的DNA改变的克隆。
大肠杆菌TunerTM(DE3)pLacI(Novagen)进行转化，并且在包含氨苄青霉素(100ug/ml)的LB上生长；选择3个菌落用于表达测试。液体LB(氨苄青霉素)培养物在37℃、250rpm下进行温育，直至A600为0.6-1.0，随后通过添加IPTG至0.4mM的终浓度进行诱导，随后进一步温育3小时。培养物(1.5ml)通过在14000rpm下于4℃离心1分钟进行收获。将细胞重悬浮于300μl裂解缓冲液(Bug Buster，具有蛋白酶抑制剂，Novagen)中，并且超声处理15秒，进行3次。在使样品于90℃加热5分钟前，加入等体积的加样缓冲液(补加有β-巯基乙醇至2％终体积)。提取物在Novex 4-20％Tris-甘氨酸凝胶上运行，并且就蛋白质进行测定(考马斯蓝染色)，并且印迹到硝酸纤维素上，并且用抗-HIS6抗体(Zymedd)进行探测。
SEQ ID NO：2纯化
使冷冻的重组大肠杆菌细胞糊解冻，并且重悬浮于2体积的裂解缓冲液(50mM磷酸钠，pH 7.4、0.5M NaCl、2mM氯化镁、10mM咪唑、0.1％Tween-80、250单位/mL的Benzonase(EM#1.01697.0002)和蛋白酶抑制剂混合物(CompleteTM，无EDTA，Roche#1873580)-1片/50mL。用微流化床装置(microfluidizer)制备裂解物。裂解物通过在10,000x g下于4℃离心45分钟进行澄清。弃去上清液，并且用洗涤缓冲液(50mM磷酸钠，pH 7.4，0.5M NaCl、2mM氯化镁、10mM咪唑和0.1％Tween-80)将包括内含体的沉淀洗涤5次。使洗涤的内含体溶解于8M盐酸胍+1mM EDTA中，并且溶液通过在10,000x g下于4℃离心1小时进行澄清。上清液通过尺寸排阻层析进行分级分离，其中使用Sephacryl S-30026/60柱以1ml/分钟的流速。运行缓冲液是8MGd-HCl+1mM EDTA。合并峰SEC级分，并且透析到8M尿素内。尿素可溶性产物进行无菌过滤，并且吸附至0.2mg/ml终浓度的羟基磷酸铝佐剂。残留尿素通过用盐水充分洗涤铝结合产物得到去除(多个离心和重悬浮循环)。
实施例2：大鼠留置导管模型(多次免疫接种)
SEQ ID NO：2和大鼠留置导管模型用于评估使用SEQ ID NO：1相关多肽的主动免疫接种是否可以抑制植入设备的葡萄球菌感染。包含SEQ ID NO：2的疫苗如实施例1中所述获得。
大鼠在3-4周时购买，并且在第0、14和21天时用在氢氧化铝磷酸盐(aluminum hydroxide phosphate)(“AHP”)(Klein等人，Journalof Pharmaceutical Sciences 89：311-321，2000)上的免疫原进行IP免疫接种，或用单独的佐剂进行模拟免疫接种。在第35天时，动物已进行外科手术，以在颈静脉中放入留置导管。动物在外科手术后休息约10天，在这时IV给予表皮葡萄球菌菌株RP62A的亚致死攻击(5-7X109CFU)。大鼠在攻击后24小时处死，并且取出导管。
在导管上细菌的存在通过在甘露糖醇盐琼脂板上培养整个导管进行评估。如果在板上观察到任何长出迹象，那么导管评分为培养物阳性(表1)。假免疫接种的动物具有＞80％定居的导管。对于被视为保护性的免疫原，＜50％的导管由攻击菌株定居。
表1：使用大鼠留置导管模型的主动免疫接种实验
  疫苗   受感染导管#(24小时)   受感染导管％(24小时)
  AHP对照   10/10   100
  SEQ ID NO：2-AHP   0/10   0
实施例3：大鼠留置导管模型(单次免疫接种)
为了评估针对葡萄球菌疫苗候选物的主动免疫接种在单剂后是否可以预防植入设备的葡萄球菌感染，使用大鼠留置导管模型。这次插管的大鼠(6周)用在AHP上的单剂(20μg)的SEQ ID NO：2进行免疫接种(IP或IM)，或在AHP上的BSA的模拟疫苗进行免疫接种(20μg，IP)，并且在第15天时用表皮葡萄球菌RP62A(7.0x109CFU/大鼠)进行攻击。对于SEQ ID NO：2接种疫苗的动物观察到100％的导管清除率(表2)。
表2：使用大鼠留置导管模型的主动免疫接种实验
  疫苗   免疫滴度(几何平均值)  受感染导管#(24小时)   受感染导管％(24小时)
  BSA-MAA对照   400   4/4   100
  SEQ ID NO：2-AHP IP   144,815   0/4   0
  SEQ ID NO：2-AHP IM   204,800   0/4   0
实施例4：抗体依赖性应答
为了证实来自留置导管的细菌的清除是抗体依赖性的，而不是先天免疫系统潜在隐藏刺激的结果，进行其中插管的大鼠(6周)用SEQ IDNO：2-AHP或BSA-AHP(20μg，IP)、或单独的AHP(IP)进行单次免疫接种的实验。一半大鼠各在第5天或第14天时被处死。在第5天时，主动免疫系统无法预期产生抗体，而先天免疫系统可以被潜在刺激。在第14天时，主动免疫系统可以被刺激，并且产生特异性抗体。
来自SEQ ID NO：2免疫接种动物的导管无一在第5天时是阴性的，而来自SEQ ID NO：2免疫接种动物的导管一半在第14天时是阴性的(参见表3)。
表3：在第5天和第14天时受感染的导管
  疫苗   受感染导管#(受感染导管％)第5天   受感染导管#(受感染导管％)第14天
  SEQ ID NO：2-AHP   4/4(100％)   2/4(50％)
  BSA-AHP   2/2(100％)   2/2(100％)
  AHP   4/4(100％)   4/4(100％)
其他实施方案在下述权利要求内。尽管已显示且描述了几个实施方案，但可以在不背离本发明的精神和范围的情况下进行各种修饰。
序列表
<110>Merck&Co.，Inc.
<120>用于诱导针对表皮葡萄球菌的保护性免疫应答的多肽
<130>22192 PCT
<140>未知
<141>
<150>60/897,150
<151>2007-01-24
<160>5
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
<210>1
<211>464
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>截短的ORF1319e
<400>1
Ser Gln Ile Ser Arg Leu Pro Leu Val Val Leu Thr Ser Asp Arg Pro
 1               5                  10                  15
His Glu Leu Arg Ser Val Gly Ala Pro Gln Ala Ile Asn Gln Val Asn
            20                  25                  30
Met Phe Ser Asn Tyr Val Asn Phe Gln Phe Asp Leu Pro Ile Ala Asp
        35                  40                  45
Gly Ser Glu His Thr Ile Asp Thr Ile Asn Tyr Gln Met Gln Ile Ala
    50                  55                  60
Ser Gln Tyr Leu Tyr Gly Pro His Arg Gly Pro Ile His Phe Asn Leu
65                  70                  75                  80
Pro Phe Arg Glu Pro Leu Thr Pro Asp Leu Asp Arg Val Asp Leu Leu
                85                  90                  95
Thr Ser Val Thr Lys Thr Leu Pro His Tyr Gln Lys Ser Ile Ser Val
            100                 105                 110
Asp Asp Ile Lys Asp Ile Leu Gln Glu Lys Asn Gly Leu Ile Ile Val
        115                 120                 125
Gly Asp Met Gln His Gln Ala Val Asp Gln Ile Leu Thr Tyr Ser Thr
    130                 135                 140
Ile Tyr Asp Leu Pro Ile Leu Ala Asp Pro Leu Ser Gln Leu Arg Lys
145                 150                 155                 160
Glu Lys His Pro Asn Val Ile Thr Thr Tyr Asp Leu Leu Tyr Arg Ala
                165                 170                 175
Gly Leu Asn Leu Glu Val Asp Tyr Val Ile Arg Val Gly Lys Pro Val
            180                 185                 190
Ile Ser Lys Lys Leu Asn Gln Trp Leu Lys Lys Thr Asp Ala Tyr Gln
        195                 200                 205
Ile Ile Val Gln Asn Asn Asp Gln Ile Asp Val Phe Pro Thr Pro Pro
    210                 215                 220
His Ile Ser Tyr Glu Ile Ser Ala Asn Asp Phe Phe Arg Ser Leu Met
225                 230                 235                 240
Glu Glu Pro Leu Val Glu Arg Lys Lys Trp Leu Gln Gln Trp Gln Ser
                245                 250                 255
Leu Glu Gln Gln Ala Arg Ile Glu Ile Ser Asp Tyr Leu Lys His Ala
            260                 265                 270
Thr Asp Glu Ala Ala Tyr Val Gly Ser Leu Ile Gln Lys Leu Thr Lys
        275                 280                 285
Glu Asp Thr Leu Phe Val Gly Asn Ser Met Pro Ile Arg Asp Val Asp
    290                 295                 300
Asn Leu Leu Phe Asp Ser Glu Ala Ser Val Tyr Ala Asn Arg Gly Ala
305                 310                 315                 320
Asn Gly Ile Asp Gly Val Val Ser Thr Ala Leu Gly Met Ala Ala His
                325                 330                 335
Lys Asn Val Thr Leu Leu Ile Gly Asp Leu Ser Phe Tyr His Asp Met
            340                 345                 350
Asn Gly Leu Leu Met Ala Lys Leu Asn Glu Leu His Ile Asn Ile Val
        355                 360                 365
Leu Val Asn Asn Asn Gly Gly Gly Ile Phe Ser Tyr Leu Pro Gln Lys
    370                 375                 380
Arg Ser Ala Thr Lys Tyr Phe Glu Arg Leu Phe Gly Thr Pro Thr Gly
385                 390                 395                 400
Leu Asn Phe Glu Tyr Thr Ala Leu Leu Tyr Asp Phe Thr Phe Lys Arg
                405                 410                 415
Phe Asp Asn Leu Thr Asp Phe Lys Tyr Ala Glu Leu Ser Lys Met Gly
            420                 425                 430
Ser His Met Tyr Glu Val Ile Thr Asn Arg Asp Glu Asn Leu His Gln
        435                 440                 445
His Gln Asn Leu Tyr Gln Lys Leu Ser Glu Ile Val Asn Val Thr Leu
    450                 455                 460
<210>2
<211>472
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>截短的ORF1319e的His-标签衍生物
<400>2
Met Gly His His His His His His Ser Gln Ile Ser Arg Leu Pro Leu
 1               5                  10                  15
Val Val Leu Thr Ser Asp Arg Pro His Glu Leu Arg Ser Val Gly Ala
            20                  25                  30
Pro Gln Ala Ile Asn Gln Val Asn Met Phe Ser Asn Tyr Val Asn Phe
        35                  40                  45
Gln Phe Asp Leu Pro Ile Ala Asp Gly Ser Glu His Thr Ile Asp Thr
    50                  55                  60
Ile Asn Tyr Gln Met Gln Ile Ala Ser Gln Tyr Leu Tyr Gly Pro His
65                  70                  75                  80
Arg Gly Pro Ile His Phe Asn Leu Pro Phe Arg Glu Pro Leu Thr Pro
                85                  90                  95
Asp Leu Asp Arg Val Asp Leu Leu Thr Ser Val Thr Lys Thr Leu Pro
            100                 105                 110
His Tyr Gln Lys Ser Ile Ser Val Asp Asp Ile Lys Asp Ile Leu Gln
        115                 120                 125
Glu Lys Asn Gly Leu Ile Ile Val Gly Asp Met Gln His Gln Ala Val
    130                 135                 140
Asp Gln Ile Leu Thr Tyr Ser Thr Ile Tyr Asp Leu Pro Ile Leu Ala
145                 150                 155                 160
Asp Pro Leu Ser Gln Leu Arg Lys Glu Lys His Pro Asn Val Ile Thr
                165                 170                 175
Thr Tyr Asp Leu Leu Tyr Arg Ala Gly Leu Asn Leu Glu Val Asp Tyr
            180                 185                 190
Val Ile Arg Val Gly Lys Pro Val Ile Ser Lys Lys Leu Asn Gln Trp
        195                 200                 205
Leu Lys Lys Thr Asp Ala Tyr Gln Ile Ile Val Gln Asn Asn Asp Gln
    210                 215                 220
Ile Asp Val Phe Pro Thr Pro Pro His Ile Ser Tyr Glu Ile Ser Ala
225                 230                 235                 240
Asn Asp Phe Phe Arg Ser Leu Met Glu Glu Pro Leu Val Glu Arg Lys
                245                 250                 255
Lys Trp Leu Gln Gln Trp Gln Ser Leu Glu Gln Gln Ala Arg Ile Glu
            260                 265                 270
Ile Ser Asp Tyr Leu Lys His Ala Thr Asp Glu Ala Ala Tyr Val Gly
        275                 280                 285
Ser Leu Ile Gln Lys Leu Thr Lys Glu Asp Thr Leu Phe Val Gly Asn
    290                 295                 300
Ser Met Pro Ile Arg Asp Val Asp Asn Leu Leu Phe Asp Ser Glu Ala
305                 310                 315                 320
Ser Val Tyr Ala Asn Arg Gly Ala Asn Gly Ile Asp Gly Val Val Ser
                325                 330                 335
Thr Ala Leu Gly Met Ala Ala His Lys Asn Val Thr Leu Leu Ile Gly
            340                 345                 350
Asp Leu Ser Phe Tyr His Asp Met Asn Gly Leu Leu Met Ala Lys Leu
        355                 360                 365
Asn Glu Leu His Ile Asn Ile Val Leu Val Asn Asn Asn Gly Gly Gly
    370                 375                 380
Ile Phe Ser Tyr Leu Pro Gln Lys Arg Ser Ala Thr Lys Tyr Phe Glu
385                 390                 395                 400
Arg Leu Phe Gly Thr Pro Thr Gly Leu Asn Phe Glu Tyr Thr Ala Leu
                405                 410                 415
Leu Tyr Asp Phe Thr Phe Lys Arg Phe Asp Asn Leu Thr Asp Phe Lys
            420                 425                 430
Tyr Ala Glu Leu Ser Lys Met Gly Ser His Met Tyr Glu Val Ile Thr
        435                 440                 445
Asn Arg Asp Glu Asn Leu His Gln His Gln Asn Leu Tyr Gln Lys Leu
    450                 455                 460
Ser Glu Ile Val Asn Val Thr Leu
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<210>3
<211>557
<212>PRT
<213>表皮葡萄球菌
<400>3
Met Met Asn His Ser Glu Ala Leu Thr Glu Gln Val Phe Ser Phe Ala
 1               5                  10                  15
Ser Glu Leu Tyr Ala Tyr Gly Val Arg Glu Val Val Ile Ser Pro Gly
            20                  25                  30
Ser Arg Ser Thr Pro Leu Ala Leu Val Phe Glu Ala His Pro Asn Ile
        35                  40                  45
Lys Thr Trp Ile His Pro Asp Glu Arg Ser Ala Ala Phe Phe Ala Leu
    50                  55                  60
Gly Leu Ile Lys Gly Ser Glu Lys Pro Val Ala Ile Leu Cys Thr Ser
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Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Thr Pro Ala Ile Ala Glu Ser Gln Ile
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Ser Arg Leu Pro Leu Val Val Leu Thr Ser Asp Arg Pro His Glu Leu
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Arg Ser Val Gly Ala Pro Gln Ala Ile Asn Gln Val Asn Met Phe Ser
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Leu Tyr Gly Pro His Arg Gly Pro Ile His Phe Asn Leu Pro Phe Arg
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Thr Lys Thr Leu Pro His Tyr Gln Lys Ser Ile Ser Val Asp Asp Ile
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<210>4
<211>557
<212>PRT
<213>表皮葡萄球菌
<400>4
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 1               5                  10                  15
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Ser Arg Ser Thr Pro Leu Ala Leu Ala Phe Glu Ala His Pro Asn Ile
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Gly Thr Ala Ala Ala Asn Tyr Thr Pro Ala Ile Ala Glu Ser Gln Ile
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Glu Pro Leu Thr Pro Asp Leu Asp Arg Val Asp Leu Leu Thr Ser Val
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Gln Ala Arg Ile Glu Ile Ser Asp Tyr Leu Lys His Ala Thr Asp Glu
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Leu Phe Val Gly Asn Ser Met Pro Ile Arg Asp Val Asp Asn Leu Leu
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<211>1674
<212>DNA
<213>表皮葡萄球菌
<400>5
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gcttatggtg taagagaagt agtaattagt ccaggttcac gttcaacacc attagcactt  120
gttttcgaag cacatccaaa tattaaaaca tggattcacc ctgatgagcg aagtgctgca  180
ttttttgctt taggtcttat taaaggtagc gaaaaacctg tagcaattct ttgtacatct  240
ggaacagccg ctgcgaacta cacacccgct atagctgaaa gtcaaattag tcgtttgcct  300
ctcgttgttt taacgagcga cagaccgcat gaactgcgca gtgtgggtgc acctcaagca  360
atcaatcagg taaatatgtt tagtaattat gtgaactttc aatttgattt gccgattgct  420
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tttgatagtg aggcatctgt atacgctaat cggggtgcca atggaataga cggagtagtt 1260
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ttatctaaaa tgggttctca catgtatgaa gttataacca atagagacga aaatttgcat 1620
caacaccaaa atttatatca gaaattgagt gagattgtta atgttacatt ataa       1674

Claims (16)

1.一种包含与SEQ ID NO：1至少85％等同的氨基酸序列的多肽免疫原，其中所述多肽提供针对表皮葡萄球菌的保护性免疫，并且所述多肽没有由SEQ ID NOs：3或4提供的氨基酸序列。
2.权利要求1的多肽，其中所述多肽由与SEQ ID NO：1至少94％等同的氨基酸序列组成。
3.权利要求2的多肽，其中所述多肽基本上由SEQ ID NO：1组成。
4.权利要求3的多肽，其中所述多肽由SEQ ID NO：1或甲硫氨酸-SEQ ID NO：1的氨基酸序列组成。
5.权利要求4的多肽，其中所述多肽是基本上纯化的。
6.一种包含氨基酸序列以及在羧基末端或氨基末端处与所述氨基酸序列共价连接的一个或多个另外区域或部分的免疫原，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1至少85％等同，其中每个区域或部分独立地选自具有至少一个下述性质的区域或部分：增强免疫应答，促进纯化，或促进多肽稳定性。
7.一种能够在患者中诱导保护性免疫应答的组合物，其包含免疫学有效量的权利要求1-6中任一项的免疫原和药学上可接受的载体。
8.权利要求7的组合物，其中所述组合物进一步包含佐剂。
9.一种包含重组基因的核酸，所述重组基因包含编码权利要求1-4中任一项的多肽的核苷酸序列。
10.权利要求9的核酸，其中所述核酸是表达载体。
11.一种重组细胞，其包含权利要求9的核酸。
12.一种制备提供保护性免疫的表皮葡萄球菌多肽的方法，其包括下述步骤：
(a)在其中表达多肽的条件下培养权利要求11的重组细胞；和
(b)基本上纯化所述多肽。
13.一种在患者中诱导保护性免疫应答的方法，其包括给所述患者施用免疫学有效量的免疫原的步骤，所述免疫原包含与SEQ ID NO：1至少85％等同的氨基酸序列。
14.权利要求13的方法，其中所述患者是人。
15.权利要求13的方法，其中所述患者针对表皮葡萄球菌感染预防地处理。
16.一种在患者中诱导保护性免疫应答的方法，其包括给所述患者施用免疫学有效量的通过权利要求12的方法制备的多肽的步骤。
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